Post on 27-Oct-2018
LLICENCIATURA: BIOTECNOLOGIA. UAB
CURS: 199912000
ASSIGNATURA: TECNIQUES D'INSTRUMENTACIÓ 1
YTE
PRO
1 TC CNTQUES CROMATOGRAFIC ció. Con
l- 1;romatomafia de repartlment sobre suport nontzontai: cromatomafia en baper i en capa nna.
2romato tografia . , , ,,., . encional.
/ "
1.4-Cromatografia de 5 en gel. de la filtració el iracterístiques de les reines.. Calibració de la columna. ~plicacions. ueterminació del pes moiecuiar. Exemples.
s. Equilibri del bescanvi Aktodes d'elució ' les). Tipus de reina. Apl . Exemples. '
. 1.6-Cromatografia hi :a. Princi giafia h ors que afecten la' ,
interacció. ,Tipus de r )licacion
1.7-~romato~ráfia d'afinitat. Principi de la crornatogifia d'afinitat. Preparació de la fase . l . . ' , I
estacionhia. Vida mitja dels cornplexo6. Mhtodes d'elució per tandes. ~ ~ l i c a c i o ~ s de . S - . 3
.. cromatogafía d'afinitat. ,Exemples. Sistema His-tag. Cromatografia d'hidroxilapatita; . . . .
l . ~ - ~ r o m a t o g r ~ f i ~ Guida d'alta resolució (~PLc). ~on&ents. instnunentació. Caricten'stiaues. , . ~ i ~ u s ' d e fases estacionañes: fase inversa, exclusió pér tarnany, bescanvi ibnic. . , ,
: gasos. :ió. Detc ,plicacic
ostratemes ae ~urificacio ae macromoleculas per tkniques cromatogr~fi~ues. btapes de ació de cada etapa. Exemples.
(UC3.
ipus. C1; icepte ge . .
ió.
na. Fona ments. ( a croma
n gel. C; . . Principi - .
:romatol nus (per
ibnic. n : bescan ) o discc
;rafia de gradent
Principi per esca icacions
ipi de la s. Exem
cromatc ples.
idro fbbi ca. Factl
nts. Instr wnentac xtors. A
, .
'purif -
icació. C
2.1-IIILIUUUGC~Ó. Moviment dels ions en un camp elkctric. El procés electroforetic.'.Suports per a l'electroforesi. T i ~ u s d'electroforesi.
2.2-~1ectrofo;esi per proteines. Suports no restrictius: Immunoelectroforesi. Suports .Tipus d'electroforesi (desnaturalitzant/nativa, contínua~discontínua, SDS-PAGE). Determinació del pes molecular en les diferents electroforesi. Tincions. Transferencia a membrana (Westem). Electroforesi bidimensional: Electroenfoc.
\
2.3-Electroforesi d'Acids nucleics. Mobilitat electroforktica del DNA. Tipus: nativa/desnaturalitzant DNA/RNA, acrilamidalagarosa. Determinació del pes molecular. Tincions. Transferencia a membrana (Southem, Northem). Electroforesi de camp pulsant.,Electroforesi en gradent termic. Electroforesi capil.lar. Electroforesi bidimensional.
niques b 2.4-Exemples de teci asades en l'analisi electroforktica. Determinació de I'estmctura terciaria de les proteines. ~niilisi conformacional de les proteines. Anhlisi de l'homogenitat i
ilisi de 1 fiagments de D' >otprinti
pure d'un
sa d'una DNA ci
prepara rcular. C
ció protc ieis de 'r
:ica. Aní etard. Fc
- NA. TOI
ra dels a nticosso ó antige
5 d'antic ossos. P reparaci
. . .
ó d'antic s. Aspec n-'anticó
tics de 1' oclonals - - .
i. Reacci -. .
:ns macromoleculars 1 anticossos en solució. lmrnunoprecipitacic d'antigc
antigens noelectrc lport sbl sobre si 1 .~
(sobre membrana S, N, ,al. ~ii temes enzimhtics
,3.4-~tilització d'anticossos per a la determin: ' sobre talls histolbgics). Anticossos secundari
detecció. Sistemes quimioluminiscents de de
sció de I s. Arnp tecció.
nacromc lificació
~lecules de seny
utilitzat 4.1 -1ntroducció. Tipi S 'bioquímica.
egració.
nents i n stge. Ma ; nucleic de marci lrcatge in vivo. 1 , , de proteihes. . . . . . ,
' 4.3-~etecció de les r&iacilons. Detectors d'ionitzaió. Compl '
Metodes altematius a l'autoradiografia (Phosphoimaging). : centell
d'isbtop 1s radioa 4.4-1 isbta
'roteccic ~ps radio
ctius. Si stemes c uniniscents com altemal 1
DENA DE LA POLIMERASA: PCR.
5.1-Iníroducció. Fonament de la teniica. Especificitat i rendiment. Disseny dels encebadors ,
(programes informhtics). Efecte "plateau". Factors que afecten la PCR. Optimització de la reacció.
5.2 Aplicacions clíniques: diagnosi d'infeccions vínques, detecció de RFLP i malalties hereditanes. Aplicacions legals. Aplicacions en recerca: amplificació de DNA, seqüenciació, mutagenesi, in situ PCR.
6.1 -Dihlisi i filtració molecular. L'equilibri de diilisi. . .
6.2-Tipus de filtres ranes: nitrocelulosa, acetat, fibra de vidre, nylon. Aplicacions.
7-CITOMETRIA DE FLUX
vions. Exemples tometria I de flux. , Instrurr ientació . Aplicac
rnncipi ueis mktodes potenciom~trics. bieciroues rnuicauors rnelaiics. ciecirour nbrana.
.Instruments per a ia medició dels poimiais ue pila. ~piicació de la medicio poienciome ' directa. Aplicacions de les t 1s potenc ques
\
8.3-Aplicacions. Exemples. es. Con( xes. Oxí
< I'
~CIGXS Instrumentales de Anhlisis en Bioquímica. J.M. García-Segura et al. Editc tesis. 1996
nálisis ~nstrurriental,.~.~. Skoog and J.J. Leary. ~ c ~ r a w - ~ i l l . 1994 '
- Íntroducció a la Bio'química Prhcti d T. Plurner. Publicacions Universitat de arcel lona: 1994.
' -T&niques de ~ i o ~ u í m i c a y Biologia Molecular. D. Freifelder Editorial Reverte .1991
. ' -Instru&tos y Técnicas de Bioquii 3. ~ o o p e r Editorial Re\ 84 i , r
, ' , . >
. - l . S , -~ro~atográfia i electro~oresi J.M.'Casas abata: $ al. ~arcel ina hicions UPC 1994 " , , . ,
- ~Electrophoresis, ~ h b j , Thecniquc ~iochemical anc :atiOns. 0~fo;d S'cienci - Publications. 1995.
metres. PHmetr
BIE
~ n a l Sín
ca. Davi .
mica T.(
11 Applic
Manual. Ed Har low, Da' g Harbo :S, a Lab vid Lane New York Cold Sprin, 1988
- Antibody Technology. Eryl Liddell, Ian Weeks Oxford Bios Scientific Publishers 1995
- Radioisotopes in Biology. Edited by R.J. Slater Oxford. IRL Press cop. 1990 ,
- PCR Protocols- Current Methods and Applications. Ed. B. A. White. 1993. Human Press INC,
- PCR Protocols- A Guide to Methods and Applications. Ed. M.A. Imis et al. Academic Press INC, 1990.
-Membrane Filtration. T.D. Brock, Ed. Springer-Verlag New York 1983.
- Flow Cytometry a Practica1 Approach Ed. M.G. Ormerod Oxford IRL Press cop. 1994.