ASOCIACIÓN ENTRE MUTACIONES SOMÁTICAS EN EL GEN PTEN E HIPERMETILACIÓN DE LOS GENES

hMLH1, hMSH2 y hMSH6 EN CARCINOMA DE ENDOMETRIO

Amores Martín, M.A.; Cieza Borrella, Clara; González Valero, J.M.; Núñez Lozano M ; Sancho de Salas M ; García Hernández J L ;Núñez Lozano, M.; Sancho de Salas, M.; García Hernández, J.L.; García Iglesias, A.; Rodríguez Sánchez, C.A.; González Sarmiento, R.; Cruz Hernández, J.J.

Introducción

‐ 15‐20 casos por cada 100.000 mujeres/año.

Tumor de endometrio

‐ 75% de los casos en mujeres postmenopaúsicas.

‐ Buen pronóstico por detección precoz (80% en 

estadío I).Endometrioide Seroso Células claras

‐ 95% esporádicos Clasificación clínico‐patológicaTipo I Tipo II

Incidencia 80% >20%

Edad Pre‐postmenopáusica >60 años

Histología Endometrioide Serosos, células claras

Diferenciación Bajo grado Alto grado

Lesión precursora Hiperplasia Atrofia

Estimulación estrogénica Alta Ausente

Comportamiento clínico Indolente Agresivo

IntroducciónClasificación molecular

Tipo I Tipo IIPTEN

Mutaciones somáticas PTEN, KRAS, CTNNB1 p53, CDH1, p16

Otras alteraciones MSI, alteraciones en MMR LOH

IntroducciónMMR

hMLH1

hMSH2hMSH2

hMSH6

MutSα: MSH2-MSH6

MutSβ: MSH2-MSH3

MutLα: MLH1-PMS2

Objetivosj

‐ Analizar la organización del gen PTEN.Analizar la organización del gen PTEN.

‐ Estudiar patrones de metilación alterados enlos promotores de los genes hMLH1, hMSH6 yhMSH2.

Pacientes y Métodos 28 endometrioidesy‐ 42 muestras de carcinoma endometrial esporádico(69±10 años). 11 muestras de sangre periférica.

5 serosos

1 células claras( ) g p

2 mixtos

6 sarcomas‐ Extracción de DNA, RNA y proteínas.

PCR y electroforesis

CSGE‐Heterodúplex

Control sin digestión de HhaI

‐ Análisis de mutacionesSecuenciación directa

Pertenencia alélica PolyPhen PSIPRED

Control con digestión de HhaI

en PTEN Pérdida de heterocigosidad

Expresión de proteínas

PolyPhenSNPS3DPmutSIFT

PSIPREDmicroRNAESEfinder

Paciente sin digestión de HhaI

Análisis de la metilación de hMLH1 hMSH6 y hMSH2

Estudios “in sílico”

MS MLPA

Panther Paciente con digestión de HhaIMethylation

‐ Análisis de la metilación de hMLH1, hMSH6 y hMSH2 MS‐MLPA

ResultadosPTEN

‐22 casos con mutaciones patogénicas, todas ellas exónicas (52.38% de los casos).

‐Todas en pacientes con tumores con componente tipo I (endometrioides, mixtos y

)

PTENMMR

Con mutaciónpatogénica

Sin mutaciónpatogénica

Ausencia decarcinosarcomas) y en el sarcoma del estroma .

‐Dentro de los endometrioides la incidencia de mutaciones en el gen PTEN aumenta a un

67 8%

Ausencia de hipermetilación

9 14

Hipermetilación en 1 componente

6 267.8%.

MMR

1 componente

Hipermetilación en 2 componentes

3 2

‐ 38 1% de los casos con hipermetilación de hMLH1 21 4% en hMSH2 y 26 2% en hMSH6

‐ 23 casos sin hipermetilación.Hipermetilación en 3 componentes

4 2

38.1% de los casos con hipermetilación de hMLH1, 21.4% en hMSH2 y 26.2% en hMSH6.

‐ 6 casos con hipermetilación de los 3, 3 casos con hipermetilación de hMLH1 y hMSH2 y

2 casos con hipermetilación en hMLH1 y hMSH62 casos con hipermetilación en hMLH1 y hMSH6.

Conclusión

Mutaciones en el gen PTEN se asocian sobre todo con hipermetilación gde los promotores (no con mutaciones en genes reparadores de DNA

o inestabilidad de microsatélites).

M i á i d l L hi il ió d lMutaciones somáticas de los genes reparadores se producirían de manera simultánea a las mutaciones en otros genes como el gen PTEN

La hipermetilación de los promotores de genes reparadores favorecería las mutaciones secundarias en otros loci, principalmente en el gen PTENgenes como el gen PTEN.  principalmente en el gen PTEN. 

¡Muchas Gracias!¡Muchas Gracias!

Cl Ci B ll l b@ lClara Cieza Borrella: claracb@usal.esUnidad de Medicina Molecular, Departamento de Medicina

Universidad de SalamancaUniversidad de Salamanca