Universidad de Panamá Facultad de Medicina

Departamento de MicrobiologíaCentro de Documentación e Información Médica

Club de Informática Médica y TelemedicinaEditora del atlas: Carla Donado Stefani

Este atlas ha sido creado basado en el plan de estudio del curso de Microbiología Médica de la carrera de Dr. en Medicina de la Facultad de Medicina de la Universidad de Panamá. El mismo pretende llevar al estudiante, médico u otro profesional de la salud, las técnicas básicas microbiológicas utilizadas en el diagnóstico clínico.

Contenido por temas:

● TÉCNICAS BACTERIOLÓGICAS: Morfología bacteriana usando tinciones especiales Efectos de los agentes químicos sobre las bacterias

● BACTERIAS DE IMPORTANCIA MÉDICA:

Flora normal del cuerpo humano Cocos Gram positivos (piógenos) Bacilos Gram positivos aerobios Microorganismos transmitidos sexualmente Bacilos gram negativos fermentadores y no fermentadores (temporalmente inhabilitado)* Microbiología de agua y alimentos (temporalmente inhabilitado)* Microorganismos anaerobios Mycobacterias

● DIAGNÓSTICO VIROLÓGICO

●

mailto:carlad@telmeds.org

MORFOLOGÍA BACTERIANA USANDO TINCIONES ESPECIALES

Atlas Virtual de Microbiología Médica

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Morfología Bacteriana

Tinciones especiales

Tinción de Gram: bacterias Gram positivas de color púrpura, y bacterias Gram negativas de color rojo.

¿Qué ocurre en la tinción de Gram?

Gram positivos Gram negativos

Diferencias estructurales entre la pared celular bacteriana gram positiva y la gram negativa

Tinción de Moeller para esporas: resalta de color rojo la espora bacteriana, y de color morado el bacilo.

Bacillus subtilis

Tinción de Anthony para cápsulas: la leche litmus actúa como contraste para crear un fondo rosa oscuro y la cápsula blanca.

Klebsiella pneumoniae

EFECTOS DE LOS AGENTES QUÍMICOS SOBRE LAS BACTERIAS

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Prueba de difusión en plato: en un agar Müller-Hinton, se siembra la muestra bacteriana y luego se proceden a colocar discos antibióticos para observar el efecto de los mismos sobre las colonias.

E - TEST: es una técnica que combina las técnicas de dilución y de difusión. Se trata de una tira plastificada que por una de sus superficies contiene un gradiente determinado de concentración de un antimicrobiano, el cual al ponerse en contacto con el agar difunde de igual manera, formando un halo de inhibición tipo elipse que converge en un ángulo que determina la Concentración Inhibitoria mínima (CIM).

FLORA NORMAL DEL CUERPO HUMANO

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Significado de la flora normal

Sitios anatómicos con flora normal presente

MICROORGANISMOS TRANSMITIDOS SEXUALMENTE

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Agente etiológico de la gonorrea: se trata de un diplococo, denominado "gonococo", que es la Neisseria gonorrhoeae.

Medio de cultivo agar "chocolate", ideal para cultivar N. gonorrhoeae

Agente etiológico de la sífilis: se trata de una bacteria de morfología "espirilada", en forma de tirabuzón, la cual es el Treponema pallidum.

Agente etiológico de la candidiasis: en este caso quien actúa no es una bacteria, es una levadura denominada Candida albicans.

MICROORGANISMOS ANAEROBIOS

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Gas Pack: crea un microambiente anaerobio para el crecimiento de estas bacterias.

API para anaerobios: se observa el sistema API para las diferentes pruebas bioquímicas propias de los anaerobios, junto con el manual que indica la positividad de las mismas.

Clostridium en agar sangre

MYCOBACTERIUM Atlas Virtual de Microbiología Médica

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CULTIVO DE MYCOBACTERIUM EN LOWENSTEN-JENSEN:

● Hecho a base de huevo y posee como inhibidor para bacterias gram positivas el verde malaquita. En la fotografía se aprecia crecimiento de M. tuberculosis.

● Otros Mycobacterium en cultivo:

TINCIÓN DE ZIEL-NEELSEN:

● El azul de metileno sirve de contraste para la tinción rosada fuscia del Bacilo Alcohol Ácido Resistente (BAAR), como lo es M. tuberculosis.

DIAGNÓSTICO VIROLÓGICO

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Fotos por: Carla Donado StefaniEditado por: Carla Donado StefaniColaboración: Demetrio Serracín C.

DIAGNÓSTICO PRESUNTIVO EN EXAMEN DIRECTO DE MUESTRAS CLÍNICAS

Efecto citopático del CitoMegaloVirus: en infección por CMV se observan células más grandes que las normales, con inclusiones intranucleares basofílicas. Dicha inclusión tiene apariencia de un "ojo de búho". El CMV es un virus de ADN, por ello su daño es a nivel nuclear.

Virus de la Rabia (Rabdovirus): en esta muestra de tejido cerebral se observa la formación de inclusiones intracitoplasmáticas conocidas como "cuerpos de Negri".

DIAGNÓSTICO ANALIZANDO CULTIVOS DE CÉLULAS

FIBROBLASTOS NORMALES EN CULTIVO DE CÉLULAS

EFECTO CITOPÁTICO DEL CMV EN FIBROBLASTOS: se ven redondeados, parecen grumos.

CÉLULAS VERO NORMALES

EFECTO CITOPÁTICO DE CMV EN CULTIVO

DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO VIRAL

Prueba de ELISA para diagnosticar Rubeola y Sarampión: se observan como positivos el color amarillo, amarillo claro. Se observa transparente como negativo. (El color lo determina el cromógeno que se utilice).

Prueba de ELISA para diagnosticar Virus Dengue y Virus del Oeste del Nilo: se observa como positivo el color verde, negativo transparente. *Nota: lo que dice normal debería ser transparente, pero producto de un "accidente" quedó verde.

DIAGNÓSTICO EN BASE A DILUCIONES

Dilución del suero del paciente: se colocan microplatos con cultivo de células, se les añade a cada uno una cantidad constante del virus y luego el suero del paciente. Si el paciente tiene anticuerpos para el virus se evitará la formación de Placas líticas (se observan como manchas transparentes en el medio azul). A mayor concentración de suero del paciente, mayor cantidad de anticuerpos y menor formación de Placas líticas.

Dilución del virus: en este caso se toma la muestra al paciente, se hace una suspensión del virus de la muestra y luego se hacen varias diluciones las cuales se añaden a este medio células cultivadas. En este caso, a mayor dilución de la suspensión viral, menor será la formación de las Placas líticas (recuerda que las placas líticas son producto del efecto del virus sobre las células).

COCOS GRAM POSITIVOS (PIÓGENOS) DE IMPORTANCIA MÉDICA

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Los cocos Gram positivos pueden ser:

Staphylococcus o Streptococcus

La principal forma de diferenciarlos es haciendo la prueba de la catalasa, para la cual, los Staphylococcus son positivos y los Streptococcus son negativos. Staphylococcus aureus

Morfologías de cocos gram positivos

Pruebas realizadas

Cultivo en Manitol Sal: se basa en observar quién fermentó el manitol sal.

1 = Enterococcus faecalis (Streptococcus) /No fermentó.2 = Staphylococcus aureus /Sí fermentó.

Prueba de hemólisis: detecta la presencia de hemolisina, enzima que permite la clasificación de los Streptococcus en alfa, beta y gamma hemolíticos. Es importante aclarar, que muchas otras bacterias, aparte de los Streptococcus pueden tener esta enzima.

En este caso, tenemos sembrado un B. megaterium, pero se usa el cultivo para demostrar el grado de hemólisis, en este caso, una hemólisis beta, en la cual se

puede observar claramente por detrás de la siembra.

Prueba de bilis esculina: la prueba positiva es de color negro, característico de la desnaturalización de la bilis esculina.

Enterococcus faecalis

BACILOS GRAM POSITIVOS AEROBIOS

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Bacillus megaterium

Pruebas realizadas

Prueba de amilasa: utilizando agar almidón, se siembra el B. megaterium en cuatro puntos equidistantes. Se deja incubar, y luego para definir si hubo o no consumo de almidón, y por ende presencia de amilasa en la bacteria, se añade yodo de Gram. La prueba positiva muestra un halo incoloro en donde hubo crecimiento.

Prueba de gelatina: permite medir la presencia de gelatinasa. Si luego de cierto tiempo de refrigeración, la gelatina sigue en estado líquido, es indicativo de que la prueba resultó positiva, y que la bacteria posee la enzima gelatinasa.

En este caso, el B. subtilis no posee la enzima gelatinasa, y por ende, el medio se solidificó en refrigeración.