Post on 11-Oct-2020
Laboratorio Nacional de ReferenciaServicio Bacteriología Clínica -
INEI -
ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”Buenos Aires –
Argentinacslara@anlis.gov.ar
Avances en el Diagnóstico de Coqueluche
Latin
American
Regional Pertussis Workshop20‐21 de Febrero de 2019
Buenos AiresArgentina
Red de Meningitis e IRAs bacterianas
Coqueluche
‐134
laboratorios
distribuidos
por
todo el país.
‐Todas
las
provincias
notifican
los
casos de Coqueluche al SNVS 2.0
INEI-A
NLIS-M
albrán
Coqueluche
Coquelucheuche
Niños,
adolescentes y
adultos
Adolescentes y
adultosIN
EI-ANLIS
-Malb
rán
5
Aspirado
Nasofaríngeo
Hisopado
NasofaríngeoHisopo de Dacrón
ó
Nylon.
NO ALGODÓN, NI
ALGINATO CALCIO. Refrigerar a 4ºC.
ó
Ficha
Epidemiológica
Medio de Transporte: Entre
2
– 24
hs:
solución
de
Casaminoácidos
al
0.5 ‐ 1
%
suplementado
con
carbón
activado
en
concentración
(4g/l
)
ó Regan
Lowe
al 50%.Si
excede
las
6
horas,
refrigerar
a
4ºC.
CoquelucheMuestras para el diagnóstico por métodos directos
INEI-A
NLIS-M
albrán
Coqueluche
Coqueluche-IS481
‐pIS1001‐hIS1001
‐ptxS1
‐rnasaP
Ct for IS481:
<35: Positivo35‐40: Indeterminado≥40: Negativo
Multiplex
PCR
Single PCR
Diagnóstico molecular: PCR en Tiempo Real
A novel multi‐target real time PCR assay for the rapid diagnosis of Bordetella
species in clinical
specimens. Tatti
K., Sparks K., Boney K., Tondella M.L. J Clin
Microbiol. 2011 Sep 21.IN
EI-ANLIS
-Malb
rán
Coqueluche
90 muestras de ANF + 4 muestras de un Programa Externo de la Calidad.52 B. pertussis, 2 B. holmesii, 2
B. parapertussis, 2 co‐infecciones Bp/Bpp, 4 Indeterminados y 32
Negativos.
Ensayo de Referencia (ES): ‐
Extracción de ADN con QIAamp
DNA kit‐
AB TaqMan™
Gene Expression
Master Mix‐
Primers y sondas (según Tatti
et al)
Ensayo en BD MAX Open
System
(OS): ‐
Extracción automatizada de ADN con BDMAX™
ExK™
DNA‐1 kit
(200μL de ANF + 550μL agua
calidad PCR colocados en el BDMAX™
Sample
Buffer Tube)‐
DNA MMK‐SPC Master Mix‐
Primers y sondas (según Tatti
et al)La evaluación del Bias
se realizó
de acuerdo al documento EP09‐A3 de la CLSI.
Evaluación de PCR Real Time para diagnóstico de Coqueluche en la plataforma
BD MAX – Sistema Abierto
INEI-A
NLIS-M
albrán
Coqueluche
Resultados:
Evaluación de PCR Real Time para diagnóstico de Coqueluche en la plataforma
BD MAX – Sistema Abierto
OPA PPA NPA Coef. kappa Median Bias%
IS481 100%
(95% CI: 96‐100) 100%
(95% CI: 93‐100) 100%
(95% CI:89‐
100)1 ‐8.05. (‐10.32 ; ‐3.51)
ptxS1 94%
(95% CI: 87‐97) 94%
(95% CI: 83‐98) 94%
(95% CI: 81‐98) 0,88 ‐8.96. (‐12.90 ; ‐6.26)
Con BDMAX OS se detectaron 2 B. parapertussis, 2 B. holmesii, 2 co‐infecciones Bp/Bpp.
2/4 muestras fueron Indeterminados por ER (IS481: 35‐40 y ptxS1
negativo) y negativos por BDMAX OS.
Jonathan Zintgraff
, Lucía Irazu, Marcelo Rodríguez, Maite Arias, Gabriela Weltman, Claudia S. Lara (2018). Evaluation of BDMAX real‐time PCR as
an open platform for detection of whooping cough. 28th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases – Madrid, Spain.
INEI-A
NLIS-M
albrán
CoquelucheDetección de Anticuerpos IgG
anti
Toxina Pertussis (ELISA)
Sólo para adolescentes y adultos
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
<49 UI/ml: Negativo
49‐93 UI/ml: Indeterminado
≥94 UI/ml: Positivo
Baughman
AL, Bisgard
KM, Edwards
KM, et al. Establishment
of
diagnostic
cutoff
points
for levels
of
serum
antibodies
to
pertussis toxin, filamentous
hemagglutinin, and fimbriae
in adolescents
and adults
in the
United
States.
Clin
Diagn
Lab
Immunol. 2004;11(6):1045‐53.IN
EI-ANLIS
-Malb
rán
Coqueluche
Casos con resultado positivo 33
Indeterminado 5
Detección de Anticuerpos anti
Toxina Pertussis (ELISA)
Se estudiaron 94 casos (12‐78 años)
Media días de tos: 29 días (14‐64)
Concentración de IgG
anti
TP: 104 y ˃480 UI/ml
Síntomas‐signos prevalentes: paroxismos (82%), vómitos pos‐tusivos
(57%), síntomas catarrales (53%), apnea (46%) y estridor (29%).
Tres casos presentaron neumonía.
INEI-A
NLIS-M
albrán
‐
Puede producir cuadros leves y también severos indistinguibles clínicamente de B. pertussis.
‐
Co‐circula junto a B. pertussis
y pueden observarse co‐infecciones.
‐
En nuestro laboratorio, desde 2013 a la actualidad se detectaron
18 casos.
Coqueluche
Nº
casos Edad ó Grupo etario
Casos co‐infección Bp‐Bpp
4 < 6 meses 1 2 años 1 4 años1 8 años
Casos Bpp
8 < 6 meses 1 10 meses1 2 años 1 5 años
Otras especies de Bordetella: B. parapertussis
INEI-A
NLIS-M
albrán
Coqueluche•La
terapia
antimicrobiana
de
elección
son
los
macrólidos
y
en
segundo
lugar
trimetoprima‐
sulfametoxazol.
La resistencia de B. pertussis
a los macrólidos
es inusual, aunque se han descripto algunos casos
en EE.UU, Francia e Irán.
•En
China
se
ha
registrado
un
aumento
significativo
de
aislados
que
presentan
resistencia
a
macrólidos.
•La resistencia de alto nivel a macrólidos
se asocia a la mutación A2047G en 23S rRNA.
En Argentina:
B. pertussis
(n=104)
‐
Eritromicina CIM50/CIM90= 0.03/0.25 µg/ml
‐
Azitromicina CIM 50/CIM90= 0,016/0,03µg/mlINEI-A
NLIS-M
albrán
Servicio Bacteriología Clínica -
INEI -
ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”Laboratorio Nacional de Referencia de coqueluche, enfermedad invasiva
por S. pneumoniae, N. meningitidis, H. influenzae, psitacosis, difteria y enfermedad causada por M. pneumoniae
y C. pneumoniae.
Mabel Regueira
María Estela Cadario
Adriana Efron
Mauricio Santos
Daniela Nápoli
María Alicia Moscoloni
Gustavo Ayala
Jonathan Zintgraff
Mariano Tristán
Claudia Lara