Post on 15-Jul-2022
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
1
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
ESCUELA DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
¨VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO PARA LA DETERMINACIÓN DE
GRUPO SANGUÍNEO Y FACTOR RH, EN EL ÁREA DE HEMATOLOGIA DEL
LABORATORIO QUINTANILLA S.R.L.¨
INFORME DE PRACTICAS PRE-PROFESIONALES
PARA OPTAR EL TITULO PROFESIONAL DE
QUIMICO FARMACEUTICO
Autora: Br. Pesantes Moreno, Lisbeth Karen
Asesor: Dr. Pedro Alva Plasencia
TRUJILLO – PERU
2011
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
2
DEDICATORIA
Gracias Señor:
Por el inmenso amor que me brindas,
apoyándome en mis momentos difíciles,
ayudándome a superar los obstáculos
y por las grandes oportunidades que me ofreces,
por haber permitido la culminación
de mi informe , con el cual podré sacar mi título.
Lisbeth
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
3
A mis queridos padres, y amigos incondicionales:
Eugenia Moreno y Fidel Pesantes
Y las dos personas que siempre me ayudan y
son como mis segundos padres:
William Lara y Caridad Moreno
A los cuatro por la confianza, cariño que siempre me
brindan, por incentivarme a luchar por lo que quiero lograr en la
vida, y gracias a ellos el culminar mi carrera.
Lisbeth
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
4
AGRADECIMIENTO
A mi Asesor
Un agradecimiento muy especial a mi
maestro, guía y asesor:
Dr. Q.F. Pedro Alva Plasencia
Por su asesoramiento y valiosa orientación
en la realización de mi informe
de prácticas pre-profesionales.
Lisbeth
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
5
A mi amiga incondicional:
Viky Pinillos Pozo
Por su apoyo, y ayuda,
En la culminación de mi informe de internado
Lisbeth
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
6
JURADO DICTAMINADOR
Dr. Q.F. Jesús Gallardo Melendez (Presidente)
Dr. Q.F. Alva Plasencia, Pedro (Miembro)
Dr. Q.F. Yuri Curo Vallejos (Miembro)
Lisbeth Karen Pesantes Moreno
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
7
PRESENTACIÓN
Señores Miembros del Jurado Dictaminador:
Dado cumplimiento a lo establecido por el reglamento de grado y
título de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de
Trujillo, sometemos a vuestra consideración y criterio profesional el presente
informe intitulado:
“VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO PARA LA
DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS Y FACTOR RH, EN EL
ÁREA DE HEMATOLOGÍA DEL LABORATORIO QUINTANILLA S.R.L”
Es propicia esta oportunidad para manifestar mi más sincero
reconocimiento a nuestra alma mater y toda su plana docente, que con su
capacidad y buena voluntad contribuyen a nuestra formación profesional.
Dejo a vuestro criterio señores del jurado dictaminador la calificación del
presente informe de prácticas pre-profesionales.
Trujillo 28 de Octubre del 2011
____________________________
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
8
RESUMEN
Es bien conocida la necesidad de validar los métodos de análisis y, en concreto,
este informe aborda la validación de la determinación de grupos sanguíneos y
factor Rh con los métodos de análisis cualitativos, clasificados por la USP XXX;
utilizando el manual de DIAGAST, siendo sus reactivos preparados a partir de
anticuerpos producidos por DIAGAST, provenientes del sobrenadante de
cultivos in vitro de hibridomas de origen murino o humano.
Se utilizó los parámetros de avidez (tiempo que media entre la mezcla del
reactivo con los eritrocitos y la aparición de la aglutinación), especificidad y
sensibilidad (es la capacidad o habilidad de detectar muestras negativas y
positivas respectivamente cuando realmente lo son), especificidad (la capacidad
del producto para identificar correctamente las muestras carentes del antígeno
en cuestión) y robustez (medida de la capacidad de un procedimiento analítico
de permanecer inafectado por pequeñas pero deliberadas variaciones en los
parámetros del método); haciendo uso de tablas de contingencia, y tablas con
respuestas utilizando solamente la percepción como; aglutinación ausencia: (-),
aglutinación presencia baja: (+), aglutinación presencia media: (++),
aglutinación presencia alta: (+++).
Para todos los parámetros cumplió con los requisitos de validación, verificando
la utilización de los métodos analíticos correspondientes para determinar los
grupos sanguíneos y factor Rh.
Palabras claves: avidez, especificidad, sensibilidad, repetitibilidad y robuste
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
9
ABSTRACT
It is well known the need to validate methods of analysis and, specifically, this
report addresses the validation of blood grouping and Rh factor of qualitative
analysis methods, classified by the USP XXX, using the manual DIAGAST being
their reagents prepared from antibodies produced by DIAGAST, the supernatant
from in vitro culture of murine hybridoma or human.
We used the parameters of avidity (time between the reagent mixture of
erythrocytes and the onset of agglutination), specificity and sensitivity (the
capacity or ability to detect positive and negative samples, respectively, when
really they are), specificity (the product's ability to correctly identify the samples
lacking the antigen in question) and strength (a measure of the ability of an
analytical procedure to remain unaffected by small but deliberate variations in
method parameters) using contingency tables, and tables with responses using
only the perception as; agglutination absence (-), low presence aggregation: (+),
average presence agglutination: agglutination (++), high presence: (+++).
Keywords: avidity, specificity, sensitivity, repeatability and robustness
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
10
ÍNDICE
PAGINAS PRELIMINARES Pag.
Dedicatoria……………………………………..………………….……....i
Agradecimiento…………………………………………………………..iii
Jurado Dictaminador…………………………………………………….v
Presentación……………………………………………………….…….vi
Resumen………………………………………………………….……..vii
Abstract............................................................................................viii
I. INTRODUCCIÓN…………………………………………………………1
II. MATERIAL Y MÉTODOS ……………………………………….……...6
III. RESULTADOS……………………………….......................................14
IV. DISCUSIÓN……………………………………………………………...19
V. CONCLUSIONES……………………………………………………….22
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………………………….23
VII. ANEXOS
ILUSTRACIÓN
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
11
I. INTRODUCCIÓN
La introducción de métodos de control de calidad es cada vez más
frecuente en los laboratorios de análisis clínicos, generando respuestas más
de tipo cualitativo que cuantitativo, por lo cual se debe conocer sus
características de rendimiento, vigilando de modo constante su control de
calidad, para así no tener consecuencias inadecuadas en los resultados de
los pacientes(1),(2).
La calidad de los servicios debe presentar confiabilidad y uniformidad en
las mediciones, cuyo fundamento está establecido en la evaluación de las
mismas. Según las normas del ISO 15189, si se utilizan procedimientos
desarrollados por el laboratorio, estos deben validarse apropiadamente para
el uso al que están destinados en forma documentada y reconocer su
competencia para realizar ensayos. Así la validación, la confirmación
mediante el suministro de evidencia objetiva, que un sistema, un equipo y un
proceso de producción; cumplan con los requisitos para su utilización o
aplicación específica (3) (4) (5) (6).
Para la demostración de la validación de los procedimientos durante la
evaluación de la competencia técnica de los laboratorios de análisis clínicos
se requiere aplicar criterios uniformes y consistentes que además signifique
un valioso ahorro en tiempo y dinero, ya que así se minimizan los riesgos de
errores generados durante el proceso, siguiendo sus actividades tal y cómo
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
12
están descritas, y que pueden obtener un producto con los requisitos
especificados, ya que cada una de las etapas del proceso es diseñada y
controlada para tener la máxima seguridad que el resultado cumple con las
especificaciones (4) (5).
Los resultados en la validación recopilan datos cuya evaluación
constituye una función importante, en donde sus pruebas de control de
calidad se verifican frente a los requisitos de eficacia y determinando su
eficiencia en un proceso (6).
Estas pruebas se realizan para determinar las especificaciones mínimas
que deben tener los sueros hemoclasificadores ABO y Rh. La determinación
de grupos sanguíneos es de gran importancia por las repercusiones que
puede haber al realizar una transfusión sanguínea. El sistema ABO es el más
relevante, seguido del Rh por su potencia inmunogénica. Sin embargo en
muchos laboratorios al ser una prueba rápida, con material y equipo mínimos
se realiza la validación del procedimiento interno y menos frecuente el
externo. Al llevar a cabo esta validación, específicamente de los reactivos
como parte del proceso de tipificación, se corrobora que cumplan con las
especificaciones de la norma (código de color, aspecto, especificidad y avidez
en cada rutina y potencia en cada cambio de lote), para su aceptación y uso.
El resto de las actividades son para los equipos y material utilizados (7)(8).
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
13
El sistema ABO es el primer sistema de grupo sanguíneo, dividido en 4
grupos: A, B, AB, O; para la tipificación ABO, la sangre se mezcla con
anticuerpos contra sangre tipo a y tipo b, y la muestra se revisa para ver si los
glóbulos sanguíneos se aglutinan. La falta de aglutinación de los glóbulos
sanguíneos indica que la persona tiene sangre tipo ab. Si dichos glóbulos se
aglutinan, eso significa que la sangre reaccionó con uno de los anticuerpos (9) (10).
Según la USP XXX (2007), las mediciones analíticas se realizan usando
métodos y equipos que han sido probados para asegurar que se ajustan al
propósito de la medición; clasificándose en dos categorías para su validación:
métodos cuantitativos y métodos cualitativos las que determinan cuatro
parámetros: avidez, especificidad, sensibilidad, y robustez; para verificar si el
método analítico para determinar los grupos sanguíneos y factor RH cumplió
con las especificaciones establecidas y sus resultados obtenidos son
confiables(11) (12).
La precisión es el grado de coincidencia obtenida bajo las mismas
condiciones del procedimiento en el mismo día en un intervalo corto de tiempo
(mismo día), por un mismo analista, en la misma muestra homogénea y en el
mismo equipo (bajo las mismas condiciones) (13).
La avidez es el tiempo que media entre la mezcla del reactivo con los
eritrocitos y la aparición de la aglutinación (14).
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
14
La especificidad es la capacidad del producto para identificar
correctamente las muestras carentes del antígeno en cuestión, evaluar
inequívocamente el analito en presencia de sustancias (impurezas, productos
de degradación, la matriz); capacidad de un anticuerpo para reconocer un
antígeno, cada antisuero se hace reaccionar con las diferentes células y no
debe existir aglutinación inespecífica (9) (13) (16).
La sensibilidad es la capacidad o habilidad de detectar muestras
positivas cuando realmente lo son.
La robustez es la medida de la capacidad de un procedimiento analítico
de permanecer inafectado por pequeñas pero deliberadas variaciones en los
parámetros del método y provee una indicación de su fiabilidad en
condiciones de uso normales (17).
El hecho de contar con los procesos validados no solo significa para el
laboratorio de análisis clínico emitir resultados exactos y precisos que
permitan garantizar seguridad y confianza por parte del paciente y el
profesional, sino también significa un valioso ahorro en tiempo y dinero, con lo
cual se hace menos necesario la verificación de un determinado resultado; así
también es importante tener la colaboración y capacitación del personal
técnico y profesional; por lo cual el personal debe estar debidamente
capacitado, entrenado y consciente que tras su trabajo tiene una gran
responsabilidad (17) (18).
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
15
Por lo anteriormente mencionado; el Químico Farmacéutico, en el área
del laboratorio de análisis clínico, es un profesional altamente capacitado para
la realización del procedimiento de validación de los procesos analíticos y es
conocedor de la importancia de estos dentro del sistema de gestión de calidad
y con esto demostrar su competencia al respecto.
Es por esto que se realizó el presente informe, para lo cual se planteó el
siguiente problema:
¿El método analítico para la determinación de Grupos Sanguíneos y el
Factor Rh, empleado en el Laboratorio Quintanilla S.R.L., cumple con los
parámetros de validación requeridos?
Objetivos:
1. Garantizar que los métodos analíticos seleccionados para la
determinación de grupos sanguíneos y factor Rh empleado en
el Laboratorio Quintanilla S.R.L.; dé resultados reproducibles y
confiables.
2. Verificación de la precisión, avidez, especificidad y sensibilidad
del método analítico para la determinación de grupos
sanguíneos y factor Rh, empleado en el Laboratorio Quintanilla S.R.L.
3. Verificación de la robustez del método analítico para la
determinación de grupos sanguíneos, empleado en el
Laboratorio Quintanilla S.R.L.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
16
II. MATERIAL Y MÉTODO
2.1. MATERIAL
2.1.1. Muestra
La sangre recogida de los pacientes adultos con fenotipo
identificado en dos tubos con diferentes anticoagulantes: EDTA y
heparina, examinada en un plazo de 48 horas, sin ninguna señal
de hemólisis, conservada entre + 2°C y + 8°C, con grupo
sanguíneo y factor Rh definido en su historia clínica.
Se excluyó la muestra de sangre recogida de un recién nacido, ya
que no está totalmente desarrollado y puede dar resultados
débiles.
2.1.2. Material de laboratorio
20 láminas
Pipetas automáticas de precisión ajustables
Puntas
Tubos con Heparina
Tubos con EDTA
Guantes
Mezclador
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
17
2.1.3. Equipos
Balanza analítica
Microscopio
Micropipetas automáticas de precisión ajustables y validadas.
2.1.4. Reactivos
2.1.4.1. Componentes (19)
1. 1 frasco de ANTI-A
Tampón fosfatos, Azida zódica < 0,1%, color azul.
Colorante: Patet Blue.
2. 1 frasco de ANTI-B
Tampón fosfatos, Azida zódica < 0,1%, color amarillo.
Colorante: Tartrazine.
3. 1 frasco de ANTI-D
Inmunoglobulina ANTI D. 0.300 MG / 1.5 O 2 ML.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
18
2.1.4.2. Fabricante
DIAGAST
2.1.4.3. Lote
70888
2.1.4.4. Vencimiento
01/01/ 2012
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
19
2.2. MÉTODOS (5) (6) (9) (12) (19)
2.2.1. VALIDACION DE LA MICROPIPETA
Se valoró en relación al peso/volumen, con respecto a la densidad
del agua que es igual a 1.Se tomó 50 uL. de agua q/p y se colocó
sobre una lámina porta objetos limpia y tarada, pesada en balanza
analítica debidamente calibrada en 20 muestras consecutivas
indistintas, hallándose el porcentaje de exactitud de cada una.
2.2.2. MÉTODO DE LA HEMO-AGLUTINACIÓN
Se enfrentó los eritrocitos de fenotipo identificado con sus
reactivos específicos: ANTI-A, ANTI-B, ANTI-D. La aglutinación
fue indicativa de la presencia o ausencia de los correspondientes
antígenos.
2.2.2.1. Técnica en placa a temperatura ambiente
- Con ayuda de un cuentagotas del frasco, se colocó I
gota de cada reactivo antigénico (50 uL.) en una lámina
porta objetos limpia; luego se tomó 50 uL. de los
eritrocitos y se colocó al lado de cada una de las gotas
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
20
del reactivo, teniendo cuidado de que las gotas no entren
en contacto.
- Los eritrocitos con el reactivo se mezclaron, con un
movimiento en espiral, realizado con el extremo de un
agitador, deforma que se dibujó un círculo proporcionado
de 2 a 3 cm de diámetro.
- Se incubó la placa durante 30 seg. a temperatura
ambiente sin agitar y llevar a la lectura de microscopio en
30 seg., 2 min. y 5 min., respectivamente; donde se
observó la presencia de aglutinación.
2.2.3. EVALUACIÓN DE LOS MÉTODOS ANALÍTICOS(9) (12) (19)
Para el método de hematoaglutinación, se tomaron los métodos
analíticos cualitativos, según la clasificación reportada en la
USP XXX, indicados anteriormente:
1. Precisión (Técnica de lámina)
Para la lectura de las reacciones, se procesó 10 muestras de
cada grupo sanguíneo y factor Rh al 100% de muestra
sanguínea con fenotipo identificado; mezclándose los eritrocitos
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
21
con los reactivos antigénicos, en un área de 2 cm de diámetro.
Luego se inclinó la lámina para observar la presencia de
aglutinación. La reacción debe leerse antes de los 2 minutos
para evitar que los reactivos se sequen y brinden resultados
falsos positivos.
2. Avidez
La avidez de los reactivos hemoclasificadores se realizó usando
la técnica en placa y a temperatura ambiente. Se mide por la
extensión y rapidez con que un anticuerpo aglutina o reacciona
con el antígeno correspondiente, el tiempo teórico para los
grupos sanguíneos es de un máximo de 2 seg. para que se
inicie la aglutinación hasta los 30 seg., esto para los grupos
sanguíneos y para el factor Rh de un máximo tiempo de
aglutinarse de 30 seg. hasta los 2 min.
3. Sensibilidad y Especificidad
Se realizó una tabla de contingencia, tanto para verificar la
especificidad y la sensibilidad del método analítico cualitativo
para la determinación de los grupos sanguíneos y factor Rh;
enfrentando las muestras con fenotipo identificado para cada
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
22
grupo sanguíneo, evaluándolas según los siguientes
parámetros:
Falso Positivo (FP): Muestras (+) por el método a probar y (-)
por el método de referencia.
Falso Negativo (FN): Muestras (-) por el método a probar y (+)
por el método de referencia.
Positivo Verdadero (VP): Muestras (+) por el método a probar y
(+) por el método de referencia.
Negativo Verdadero (VN): Muestras (-) por el método a probar y
(-) por el método de referencia.
Y posteriormente para obtener su respectivo porcentaje, se
utilizó las siguientes fórmulas, tanto para sensibilidad y
especificidad:
Sensibilidad: VP/(VP +FN)
Especifidad : 100 x VN /(FP +VN)
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
23
4. Robustez (8)
4.1. Factores en cuenta: Dos tipos de anticoagulantes y
tiempo
Se procesó 5 muestras con fenotipo identificado en
historia clínica de cada grupo sanguíneo para los dos tipos
de anticoagulantes: EDTA y heparina anotando las
lecturas observadas en microscopio a diferentes tiempos:
30 seg., 2 min., 5 min., obteniéndose su promedio
respectivo, calificando la intensidad de la aglutinación
(formación de cúmulos) de la siguiente manera:
(-) : Aglutinación ausencia
(+) : Aglutinación presencia baja
(++) : Aglutinación presencia media
(+++) : Aglutinación presencia alta
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
24
III. RESULTADOS
Tabla Nº 1
Porcentaje de exactitud de la micropipeta usada para determinar los
grupos sanguíneos y factor Rh, en el área de hematología del Laboratorio
Quintanilla S.R.L.
Nº de
muestras
X de las láminas con 50 uL de H2O
% de
exactitud
1 49,5 99 2 49,6 99,2 3 49,8 99,6 4 49,8 99,6 5 49,9 99,8 6 49,7 99,4 7 49,6 99,2 8 49,5 99 9 49,8 99,6
10 49,9 99,8 11 49,8 99,6 12 49,7 99,4 13 49,6 99,2 14 49,8 99,6 15 49,8 99,6 16 49,7 99,4 17 49,8 99,6 18 49,6 99,2 19 49,6 99,2 20 49,8 99,8 X 49,72 99,42
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
25
Tablas Nº 2
Precisión del método analítico para determinar los grupos sanguíneos y el
factor Rh, en el área de hematología del Laboratorio Quintanilla S.R.L.
Reactivo
Grupos
sanguíneos
X de la aglutinación de las 10 muestras
Anti A A Pos. Anti B B Pos.
AB Neg. O Pos.
Anti D Rh+ Pos.
Leyenda:
Pos: Positivo Neg: Negativo
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
26
Tabla Nº 3
Determinación de la avidez, del método analítico para determinar los
grupos sanguíneos y el factor Rh, en el área de hematología del
Laboratorio Quintanilla S.R.L.
Reactivo antigénico
Grupo sanguíneo de las muestras
Número de muestras evaluadas
Máximo tiempo en segundos para que
se inicie la aglutinación
Anti A A 10 5´´ Anti B B 10 8´´ Anti D Rh+ 10 35 ´´
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
27
Tabla Nº 4
Porcentaje de la sensibilidad y especificidad, del método analítico para
determinar los grupos sanguíneos y el factor Rh, en el área de
hematología del Laboratorio Quintanilla S.R.L.
Leyenda:
Reactivos antigénicos
X cualitativo de las 10 muestras de sangre hemoclasificadas para cada grupo sanguíneo
A B AB O Rh+ Rh -
Anti - A VP (10) FN (0) VP (10) FN (0) _ _
Anti - B FN (0) VP (10) VP (10) FN (0) _ _
Anti – D _ _ _ _ VP (10) FN (0)
% de Sensibilidad
100 100 100 100 0 100
% de Especificidad
100 100 100 100 0 100
Falso Positivo (FP): Muestras (+) por el método a probar y (-) por el
método de referencia.
Falso Negativo (FN): Muestras (-) por el método a probar y (+) por el método de referencia.
Positivo Verdadero (VP): Muestras (+) por el método a probar y (+) por el método de referencia.
Negativo Verdadero (VN): Muestras (-) por el método a probar y (-) por
el método de referencia.
Sensibilidad: VP/(VP +FN)
Especifidad : 100 x VN /(FP +VN)
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
28
Tabla Nº 5
Calificación y porcentaje de la robustez del método analítico en la determinación los grupos sanguíneos, en el
área de hematología del Laboratorio Quintanilla S.R.L.
Reactivo
Tipo de
anticoagulante
TIEMPO
Nº de muestras
Porcentaje
Anti A
HEPARINA
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 %
30II + + + + + + + + + + 15 2I +++ ++ ++ +++ ++ ++ +++ + ++ ++ 40 5I +++ ++ ++ +++ ++ ++ +++ ++ ++ ++ 45
EDTA
30II ++ ++ ++ + + + + ++ ++ + 20 2I +++ ++ ++ ++ ++ +++ ++ ++ ++ ++ 35 5I +++ +++ ++ +++ ++ +++ ++ +++ ++ ++
+ 45
Anti B
HEPARINA
30II + + + + + + + + + + 15 2I ++ ++ + + ++ + ++ + + ++ 40 5I +++ ++ + ++ ++ ++ ++ + ++ ++ 45
EDTA
30II + + ++ + ++ ++ ++ + ++ ++ 30 2I ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ 35 5I ++ ++ ++ ++ ++ +++ +++ ++ ++ ++ 40
Leyenda:(-) : Aglutinación ausencia
(+) : Aglutinación presencia baja (++) : Aglutinación presencia media (+++) : Aglutinación presencia alta
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
29
IV. DISCUSIÓN
La validación de un método analítico se mide con los parámetros que sean
evaluados para el proceso; estos serán dependientes directos de la naturaleza del
método y las especificaciones con las que se debe cumplir; según la USP XXX
está clasificado en método de determinación cualitativo para la determinación de
grupos sanguíneos y factor Rh, a los que corresponden evaluar especificidad,
sensibilidad, repetitividad y robustez. Antes de empezar con la validación de los
parámetros para determinar los grupos sanguíneos, se validó la calibración de las
pipetas, para que el margen de error al usarlas sea el mínimo al tomar las
muestras, valorando en relación al peso/volumen, con respecto a la densidad del
agua que es igual a 1.
La utilización de las muestras de sangre con fenotipo identificado nos permitió
detectar las anomalías en: la manipulación, los reactivos, los materiales. Cuando
se compararon los resultados de la prueba y el diagnóstico, se interpreto cuatro
posibilidades que se resumió en una tabla de contingencia en donde se observó
que:
En la tabla Nº 1: Se observó que se validó correctamente la micropipeta a usar,
ya que nos dio el 99,42 % de exactitud, calibrándola correctamente para su
posterior uso del cual depende la validación en sí de los grupos sanguíneos y
factor Rh.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
30
En la tabla Nº 2: Se presentan los resultados obtenidos de la precisión del método
analítico para la determinación de los grupos sanguíneos y factor RH, al evaluar
10 muestras para cada grupo; todos nos dieron presencia de aglutinación, con lo
que se corroboro que cada reactivo fue específico y preciso para cada grupo ya
que no existió ningún tipo de interferencias. Por precisión señalo la dispersión de
los resultados obtenidos con análisis repetidos sobre la misma muestra, sea en la
misma serie (precisión en la serie), sea en varias series (precisión entre las series)
(8)(9).
En la tabla Nº 3: Al determinar la avidez, se observó que las diferentes
aglutinaciónes de los eritrocitos respectivos para cada grupo sanguíneo, se inicio
en el tiempo respectivo, así tenemos para el reactivo antigénico A, aglutinó a los
5´´, para el Anti B aglutinó a los 8´´ y para el Anti D aglutinó a los 35´´. La reacción
de aglutinación para el Anti D demora más tiempo porque este reactivo es menos
sensible para los pacientes con factor Rh+, para que se asi determine
correctamente algún grupo Rh – existente.
En la tabla Nº 4: Se presenta que al verificar la sensibilidad y especificidad del
método analítico cualitativo para determinar los grupos sanguíneos y factor Rh, se
detectó que para cada aglutinación de muestra correspondiente a su reactivo
antigénico dio un verdadero positivo como resultado, asegurando así una
sensibilidad al 100%; y dio un verdadero negativo para cada reacción en donde se
empleó reactivo antigénico diferente para la muestra con fenotipo identificada.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
31
Tabla Nº 5: Al determinar la robustez de la determinación de grupos sanguíneos,
la aglutinación correspondiente para cada grupo permaneció inafectado por
variaciones en sus parámetros y provee una fiabilidad en condiciones para uso
normal. Así no hubo significada alteración de las aglutinaciones al cambiar de
anticoagulante, EDTA por heparina; y al realizar la reacción de aglutinación en un
intervalo corto de tiempo (3 veces el mismo día), por un mismo analista, en la
misma muestra homogénea y en el mismo equipo (bajo las mismas condiciones),
aumenta no significativamente la presencia de aglutinación, para los diferentes
grupos sanguíneos, por lo que su precisión obtenida bajo las mismas condiciones
de operación, fue la adecuada(11)(14).
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
32
V. CONCLUSIONES
Luego de haber aplicado los parámetros establecidos de validación del método
analítico para la determinación de los grupos sanguíneos, en el Laboratorio
Quintanilla S.R.L se concluye lo siguiente:
1. La avidez de los reactivos se mantuvo dentro del rango de tiempo para que
reaccionen, siendo así el adecuado.
2. La sensibilidad para la determinación de grupos sanguíneos y el factor Rh,
fue capaz de detectar las muestras positivas.
3. Se concluyó que los reactivos para determinar los grupos sanguíneos,
tienen una especificidad del 100% respecto a los resultados esperados
4. Se demostró la especificidad para cada Grupo Sanguíneo y factor Rh;
5. Se demostró la Robustez para cada parámetro establecido.
6. Al determinar los parámetros de validación cualitativos, concluimos en dar
como validado al método analítico para la determinación de los grupos
sanguíneos en el Laboratorio Quintanilla S.R.L.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
33
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Castro, M.: Validación de Métodos analíticos. Asociación Española de
Farmacéuticos de la Industria. Sección Catalana 1º ed. Ed Farma
Internacional. España.2000. Pp: 70-74
2. Castillo, B ; González, R.: Protocolo de Validación de Métodos Analíticos
para la Cuantificación de Fármacos. Revista Cubana de Farmacia [online].
ene.-abr. 2000, vol.30, no.1. Pp: 2-4.
Disponible en:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034751519960001
00009&lng=es&nrm=iso>. ISSN 0034-7515.
Consultado: 14 de Octubre de 2011
3. Castelluci, F.: “Recomendaciones Armonizadas para la validación de
Métodos de Análisis (Informe Técnico)”. París. 2005. Pp: 5-6
4. Grupo ACMS. Determinación de métodos analíticos. Argentina. 2010.
Disponible en:
http://www.iso15189.es/informacion-iso-15189-grupo-acms.html
Consultado: 15 de Octubre de 2011
5. García, E.: Validación con base en los criterios de aplicación de la norma
nmx-ec-17025-imnc-2006 en mediciones químicas y físicas. 2009.
Disponible en:
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
34
http://www.ema.org.mx/descargas/ema_semac09/11_junio/12aplicacion17
025_11junio.pdf
Consultado: 15 de Octubre de 2011
6. Mendoza, L.: Control de calidad de sueros hemoclasificadores ABO, Rh y
suero de coombs.2009.
Disponible en:
http://www.institutolicon.com.mx/cursos/d8/c_de_c_de_reactivos.pdf
Consultado: 16 de Octubre de 2011
7. Rodríguez, G.; Blanco, R.: “Aseguramiento de la calidad analítica y
norma ISO 17 025 en laboratorios químicos y clínicos”. Rev.
Costarricense de Ciencias Médicas. San José, Costa Rica. Vol. 22 (2).
2001.
Disponible en:
http://www.ia.csic.es/sea/revista/VOL36-34/03.pdf
Consultado: 16 de Octubre del 2011
8. Espinosa, G.: Métodos Basados en la unión Ag-Ac. 2009.
Disponible en:
http://www.uco.es/grupos/inmunologia-
molecular/inmunologia/tema17/etexto17.htm
Consultado: 17 de Octubre del 2011
9. Guía de Validación de Métodos Analíticos. Perú. 2009
Disponible en:
http://www.ministeriodesalud.go.cr/protocolos/guiavalidacionmetodosanalit
icos.pdf
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
35
Consultado: 17 de Octubre del 2011
10. Instituto Nacional de Estándares y la Tecnología. Líneas directivas
para evaluar y expresar incertidumbre en la medida NIST resultan ", NIST
nota técnica1297, 2001.
11. Organización Mundial de la Salud. Comité de Expertos de la OMS en
Especificaciones para las Preparaciones Farmacéuticas. 2003. 32º
Informe, Anexo 5. Ginebra.
12. The united states pharmacopea convention. The United States
Pharmacopea XXX. 30º Edition. USA. 2007. Pp: 1436-1437, 3328-3331.
13. Tapia, M.: Desarrollo y Validación de Metodologías Analíticas. Memoria
de práctica para optar al título de Químico Farmacéutico. Santiago.
Universidad de Chile.2003.
14. Lic. Batista, L.: Rev Cubana Hematol Inmunol Hemoter 1999; 15(2):137-
43.
Instituto de Hematología e Inmunología
http://bvs.sld.cu/revistas/hih/vol15_2_99/hih10299.pdf
15. Revista de divulgación científico - tecnológica del estado de morelos.
Grupos Sanguíneos A, B, O Y Su Frecuencia. 2010.
Disponible en:
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/4/47/GRUPOS_SANGUIN
EAOS_Y_SU_FRECUENCIA.pdf
Consultado: 28 de Setiembre del 2011.
16. Lovine, S.: El laboratorio en la práctica clínica. los grupos sanguíneos.
Tercera edición. 2008.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
36
Disponible en:
http://www.medicinapreventiva.com.ve/laboratorio/grupos.htm
Consultado: 28 de Setiembre del 2011.
17. IUPAC: Compendium of Chemical Terminology. 2da ed. 1997. Disponible
en:
http://www.iupac.org/goldbook/L03540.pdf
Consultado: 15 de Octubre de 2011.
18. Martínez, M: “Validación de la Metodología Analítica para la Cuantificación
de Sodio y Potasio por Fonometría de Llama,” Informe de práctica
prolongada para optar al título de Químico Farmacéutico, Universidad de
Chile,. Chile. 2004.
Disponible en:
http://www.cybertesis.cl/tesis/uchile/2004/martinez_m/sources/martinez_m.
Consultado: 16 de Octubre de 2011.
19. ICH.: Guidance for Industry. Q2B Validation of Analytical Procedures:
Methodology. Noviembre. 2003. Pp: 1 – 10.
Disponible en:
http://www.fda.gov/cder/guidance/1320fnl.pdf
Consultado 14 de Octubre de 2011.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
37
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
38
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
39
ANEXO Nº1:
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
40
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
41
ANEXO Nº2:
Especificaciones de los reactivos hemoclasificadores
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
42
ANEXO Nº3:
Calificación cualitativa de la reacción de los grupos sanguíneos observados
en el microscopio
FUENTE: Lovine-Selva: El laboratorio en la práctica clínica. Los grupos
sanguíneos.Tercera Edición. 2008
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
BIBLIO
TECA D
E FARMACIA
Y B
IOQUIM
ICA
43
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/