- 1. Evaluacin del efecto de diferentes soportes de liofilizacin
sobre la tromboplastina.Realiz: QFB Carlos Enrique Guilln
Barrios.Departamento de Nuevos Productos.Fecha: 28 FEB
2013.Resumen.Para probar el efecto que tienen diferentes soportes
de liofilizacin sobre una tromboplastina en desarrollo, se realiz
laprueba manual de tiempo de protrombina con plasma control
liofilizado. Los soportes probados fueron manitol,sorbitol, glicina
y sacarosa, en concentraciones de 0 a 4.5%. Se presentaron los
tiempos de coagulacin en cada casoencontrando que la glicina
presenta menor interferencia en el tiempo de coagulacin del plasma
control.Objetivo. alguna tendencia de disminucin o aumento del TP.
LosDeterminar la aptitud de diferentes soportes de resultados se
pueden observar en la Tabla 2 y en elliofilizacin para aplicarse en
la tromboplastina Grfico 2.liofilizada en desarrollo.Metodologa.
Soporte ConcentracinTP (s)Tromboplastina. Se prepararon 100 mL por
el mtodo0.0%12.47TRL-02.1.5%12.47Solucin de calcio 25 mM: Se prepar
una solucin de Manitol3.0%12.92Cloruro de calcio 25 mM con Azida de
sodio. Se4.5%13.27prepararon0.0%12.47Adicin de Soportes: Se
prepararon soluciones de 0.0%,1.5%12.311.5%, 3.0% y 4.5% de los
diferentes soportes de Glicina3.0%11.79manitol, sorbitol, glicina y
sacarosa pesando la cantidad 4.5%11.97necesaria de cada uno y
aforando con la solucin de 0.0%12.47calcio 25 mM. Cada una de las
soluciones de Calcio- 1.5%12.76 SacarosaSoporte se utiliz para
diluir alcuotas de 3.0%12.71tromboplastina lquida en proporcin 1:1.
4.5%12.19Plasma control: Se utiliz el plasma control
preparado0.0%12.47por el mtodo PLA-NOV.2012.1 identificado
como1.5%12.51 Sorbitol28.NOV.2012, reconstituyendo cada frasco con
1.0 mL 3.0%12.70de agua destilada.4.5%12.90Procedimiento: Se realiz
la prueba de tiempo de Tabla 1. Tiempos de protrombina
obtenidos.protrombina (PT) al plasma control evaluando cadasoporte
a diferentes concentraciones, teniendo unEvento TP (s)panel de 16
pruebas que se realizaron por triplicado. La 112.56prueba se
desarrollo a 37C agregando 200 L de212.43tromboplastina clcica a
100 L de plasma control. 3 12.1 413.11 512.23Resultados. 611.93El
tiempo promedio de coagulacin con cada soporte 711.95se muestra en
la Tabla 1 y se puede visualizar en el 811.88Grfico 1. Media
12.273La evaluacin del reactivo sin soporte (concentracinD.E.
0.416cero) se llev a cabo entre las determinaciones paraTabla 2. TP
del plasma control.cada soporte, para detectar en el plasma
control
2. Grfico 1. Tiempos de protrombina obtenidos.Faltara determinar
el efecto de los diferentes soportessobre la sensibilidad del
reactivo, mediante unacalibracin del ndice Internacional de
Sensibilidad (ISI).La evaluacin del plasma muestra una tendencia
adisminuir el tiempo de coagulacin a travs del tiempoy se observa
una probable.Conclusiones.A reserva de los resultados del ndice
Internacional de Grfico 2. TP del plasma control.Sensibilidad y de
la apariencia del producto despus dela liofilizacin, la glicina es
el soporte con mejoresresultados sobre el TP, seguida de sacarosa.
Por otrolado, no es recomendable el uso de manitol y
sorbitolAnlisis de resultadosdebido a su efecto prolongador del
tiempo deLas curvas obtenidas muestran pendientes
positivascoagulacin.para el manitol (0.30) y el sorbitol (0.17);
mientras quela pendiente es negativa en el caso de la sacarosa (-
Perspectivas en el desarrollo del producto.0.02) y la glicina
(-0.18). Esto quiere decir que,Para continuar con el desarrollo se
sugiere realizar yaparentemente, la adicin de glicina logra no solo
no evaluar formulaciones de tromboplastina liofilizadaafectar el
TP, sino disminuirlo.que incluyan glicina 1.5%, 3.0% y 4.5%.