Post on 16-Jul-2022
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA
INTEGRANTES:
ALIAGA VERA, Amalia
ALTAMIRANO VALLEJO, Enma
ARGOMEDO LLAPO, Juan Carlos
CANCHACHI ALFARO, Hector
CONTRERAS VELASQUEZ, Meliza
Flores Castañeda, Ana María
GAMBOA GRADOS, Ana Iris
GARCÍA COSTANTINO, David
LEÓN YNTI, Wiecer
LUJAN PARDO, Ricardo
DOCENTE: Dra. ROSA A. SALCEDO DÁVALOS
TRUJILLO- PERÚ
2010
TESIS
Efecto antibacteriano in vitro del aceite esencial
de Origanum vulgare “orégano” sobre
Streptococcus Pyogenes.
PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE:
MÉDICO CIRUJANO
AUTOR: Delgado Nicolás, Héctor Diego
ASESORA:
Dra. Mejía Delgado, Elva Manuela
CO-ASESORA:
Dra. Soto Vásquez, Marilú Roxana
TRUJILLO- PERÚ
2018
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
DEDICATORIA
A Dios, por haberme dado la fuerza necesaria durante
estos 6 años para seguir adelante y superar mis obstáculos
A mis padres, por haber guiado mi camino y ser mí soporte,
por enseñarme a diferenciar entre lo bueno y lo malo e
inculcarme los cimientos necesarios para seguir adelante
A mis hermanas, porque son mi referente y ejemplo a seguir
desde pequeño y porque hoy en día son una de las principales
razones por las que sigo esforzándome
A todos esas grandes personas que he conocido en mi preciada
facultad y con las que he compartido grandes momentos,
gracias por su confianza y comprensión
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
AGRADECIMIENTOS
A la Dra. Elva Mejía Delgado, mi asesora de tesis, por brindarme su apoyo desinteresado,
orientación y ayuda durante la realización de la presente investigación.
Al personal técnico del Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina de la UNT,
especialmente a la Sra. Tania Mendoza por su gran apoyo y servicio durante la ejecución de la
investigación.
A la Dra. Marilú Soto Vásquez, por su apoyo en el Laboratorio de Farmacognosia-
Farmacobotánica de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la UNT
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
ÍNDICE
I. INTRODUCCIÓN… ............................................................................... 1
1.1. Antecedentes… ...................................................................................... 1
1.2. Justificación ........................................................................................... 5
1.3. Problema… ............................................................................................ 5
1.4. Hipótesis ................................................................................................. 5
1.5. Objetivos… ............................................................................................ 5
II. MATERIAL Y MÉTODOS .....................................................................6
2.1. Material de estudios: ............................................................................. 6
2.2. Métodos y Técnicas ............................................................................... 8
2.3. Instrumento de Recolección de Datos… ............................................. 13
2.4. Operacionalización de variables. ......................................................... 14
2.5. Definición conceptual de variables… .................................................. 14
2.6. Análisis estadístico e interpretación de la información ..................... 15
2.7. Aspectos éticos… ................................................................................... 15
2.8. Diseño Experimental… ......................................................................... 17
III. RESULTADOS ........................................................................................ 18
IV. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN… ................................................................. 26
V. CONCLUSIONES ................................................................................... 29
VI. RECOMENDACIONES ......................................................................... 30
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .................................................. 31
VIII. ANEXOS .................................................................................................. 36
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
RESUMEN
OBJETIVO: Evaluar el efecto antibacteriano in vitro del aceite esencial de
Origanum vulgare (AEOV) sobre Streptococcus pyogenes. MATERIAL Y
METODOS: Estudio de tipo experimental del efecto antibacteriano de las
concentraciones al 25%, 50%, 75% y 100% del AEOV sobre Streptococcus
pyogenes; se utilizó como control positivo Penicilina G Benzatina y como control
negativo Tween80. Se empleó el método de Kirby Bauer y la concentración mínima
inhibitoria (CIM) para evaluar la actividad antibacteriana. Se utilizó el cálculo de
la desviación de estándar, se evaluó los coeficientes de variación y la prueba de
comparaciones múltiples utilizando subconjuntos homogéneos; todas con un nivel
de significancia del 0,05 (P< 0,05). RESULTADOS: La susceptibilidad de
Streptococcus pyogenes frente al AEOV fue de 15.17mm, 15.33mm, 16.08mm y
18.75mm al 25%, 50%, 75% y 100% respectivamente y la CIM de AEOV fue la de
25% (230.81mg/mL). Asimismo, las cepas de Streptococcus pyogenes mostraron
“sensibilidad media” a los grupos de AEOV de 75% y 100% en un 100% y a los
grupos de AEOV de 25% y 50% en un 83% y 92% respectivamente.
CONCLUSION: Existe efecto antibacteriano del AEOV sobre Streptococcus
pyogenes aislada de hisopado faríngeo.
PALABRAS CLAVE: Efecto antibacteriano, Origanum vulgare, Streptococcus
pyogenes.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
ABSTRACT
OBJECTIVE: To evaluate the in vitro antibacterial effect of the essential oil of
Origanum vulgare (EOOV) on Streptococcus pyogenes. MATERIAL AND
METHODS: Experimental study of the antibacterial effect of the concentrations at
25%, 50%, 75% and 100% of the EOOV on Streptococcus pyogenes; Penicillin G
Benzathine is used as a positive control and Tween80 as a negative control. The
Kirby Bauer method and the minimum inhibitory concentration (MIC) were used
to evaluate the antibacterial activity. The calculation of the standard deviation was
used, the coefficients of variation were evaluated and the multiple comparisons test
was used using homogeneous subsets; all with a level of significance of 0.05 (P
<0.05). RESULTS: The susceptibility of Streptococcus pyogenes to EOOV was
15.17mm, 15.33mm, 16.08mm and 18.75mm at 25%, 50%, 75% and 100%
respectively and the MIC of EOOV was 25% (230.81mg / mL). Likewise, strains
of Streptococcus pyogenes showed "average sensitivity" to the AEOV groups of
75% and 100% in 100% and to the EOOV groups of 25% and 50% in 83% and 92%
respectively. CONCLUSION: There is an antibacterial effect of EOOV on
Streptococcus pyogenes isolated from pharyngeal swab.
KEY WORDS: Antibacterial effect, Origanum vulgare, Streptococcus pyogenes
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
1
I. INTRODUCCIÓN
1.1 ANTECEDENTES
El Estreptococo ß-hemolítico del grupo A (EGA) o Streptococcus pyogenes, es uno
de los patógenos más frecuentes en la edad pediátrica y responsable de producir
enfermedades tales como la faringoamigdalitis aguda (FAA), una infección de la
orofaringe o nasofaringe que constituye una de las principales causas de consulta
médica en la atención ambulatoria, en aproximadamente 1/3 parte de los casos1,2.
La mayor incidencia de esta enfermedad suele ser en las estaciones de invierno y
primavera y el mecanismo de transmisión suele producirse por vía respiratoria a
través de las pequeñas gotas de saliva que se expelen al toser, estornudar o
simplemente hablar desde una persona infectada a un huésped susceptible y tocando
las llagas de las infecciones por EGA en la piel3.
El 25-40% de las amigdalitis infantiles y el 10-25% de las formas adultas son de
origen estreptocócico. Aproximadamente el EGA es responsable del 30-40% de las
FAA que se observan en niños de 3-13 años, del 5-10% en niños entre los 2 y 3
años y solo el 3-7% en menores de 2 años; además, aunque ocurran, las FAA por
EGA son muy raras en niños menores de 2 años, e insólitas en los menores de 18
meses4,5.
Asimismo, la FAA por EGA produce 2 tipos de complicaciones: Supurativas y no
supurativas; las primeras por diseminación de EGA a estructuras adyacentes a la
faringe (flemón y absceso periamigdalino, absceso retrofaríngeo, otitis media
aguda, sinusitis, mastoiditis, adenitis cervical supurativa), y las segundas, como
secuelas de la respuesta inmunológica (fiebre reumática aguda y la
glomerulonefritis postestreptocócica)1,6
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
2
Se recomienda administrar el tratamiento antibacteriano durante 10 días. Basado en
su estrecho espectro de actividad, la infrecuencia de reacciones adversas, y el costo
modesto, la penicilina (penicilina G benzatina IM en dosis única en personas con
peso mayor a 25 kg 1.200.000 UI, mientras que por debajo de ese peso la dosis es
de 600.000 UI) o la amoxicilina (VO 500 mg/12 h) es el fármaco de elección
preferido para aquellos no alérgicos a estos agentes. Si hay alergia confirmada a la
penicilina se aconseja utilizar una cefalosporina de primera generación (para
aquellos que no son anafilácticamente sensibles) durante 10 días, clindamicina o
claritromicina durante 10 días o azitromicina durante 5 días7,8.
Pese a que los estreptococos causantes de FAA mantienen hasta la fecha
sensibilidad a las penicilinas y a otros antibióticos β-lactámicos (No se ha descrito
ninguna cepa resistente a la penicilina) se sabe que la prevalencia de alergia a
betalactámicos auto-reportada en niños varía entre 1,7 y 5,2% de los cuales la
amoxicilina como etiología representa el 1.4 %, otras penicilinas el 1.2 % y la
cefalosporinas el 0.7 %; esto es debido a que al metabolizarse la penicilina se
liberan determinantes alergénicos como el benzilpeniciloil, que constituye la causa
principal de la mayor parte de reacciones alérgicas tales como las de tipo I o
inmediatas (en menos de 1 h: urticaria y anafilaxia), de tipo II o citotóxicas y tipo
III o por inmunocomplejos (mediadas por anticuerpos: anemia hemolítica y
enfermedad del suero, y de tipo IV (entre las 24 a 48 h, inducidas por linfocitos T:
exantema maculo- papular)3,9.
Por las razones antes mencionadas además de la baja inmunidad en las células
huésped y la capacidad de las bacterias para desarrollar biofilms asociados a la
resistencia a los medicamentos han llevado a los investigadores a explorar nuevas
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
3
alternativas contra las cepas de EGA. En este sentido, los aceites esenciales de
plantas y sus principales constituyentes químicos son candidatos potenciales como
agentes antibacterianos. Se ha descrito que varios tipos de aceites esenciales
(canela, clavo, pimiento, orégano, romero, etc) y sus principales constituyentes
químicos poseen una amplia gama de potenciales inhibidores bacterianos10.
El Origanum vulgare "Orégano" es una planta muy versátil y aunque se ha conocido
durante mucho tiempo como una hierba culinaria en gastronomía y en la
preservación e inhibición del crecimiento de varias bacterias y hongos patógenas
transmitidas por los alimentos, también ha demostrado su uso en medicina popular
en el tratamiento de trastornos respiratorios, dispepsia, menstruación dolorosa,
artritis reumatoide, escrofulosis y trastornos del tracto urinario. Recientemente se
le ha reconocido por su potencial papel terapéutico como diaforético, carminativo,
antiespasmódico, antiséptico, antioxidante y otras propiedades. 11,12,13
Se ha demostrado que el aceite esencial de orégano se obtiene principalmente de
las hojas y que el nivel de insolación, la naturaleza de los componentes del suelo,
el régimen de lluvias y vientos determinan algunas variantes o quimiotipos en su
composición química: El quimiotipo A que es rico en compuestos terpénicos
(monoterpenos y sesquiterpenos que representan el 45 y 27%, respectivamente); el
quimiotipo B, cuyo principal componente es el carvacrol (40%) seguido de p-
cimeno (13%) y γ-terpineno (11%) y timol (11%); y el quimiotipo C que posee altos
niveles de timol (56%, seguido de p-cimeno (9%) y γ - terpineno(5%)13,14.
El aceite esencial de Origanum vulgare presentan actividad contra bacterias Gram
negativas como Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae,
Yersinia enterocolitica y Enterobacter cloacae; y Gram positivas como
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
4
Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Listeria monocytogenes y
Bacillus subtilis; además también exhiben propiedades antifungicas frente a los
patógenos humanos Malassezia, Trichophyton rubrum y beigelii Trichosporon y
hay evidencia que tienen efecto antirretroviral contra adenovirus y poliovirus10,12.
La actividad antibacterial de Origanum vulgare ha sido comprobada en diversos
estudios: Siroli y col. (2015) encontraron que el aceite esencial de orégano mostró
mayor actividad antimicrobiana contra L. monocytogenes en comparación con E.
coli. De hecho, la concentración inhibitoria mínima de L. monocytogenes osciló
entre 125 y 200 mg/l, mientras que la de E. coli varió entre 250 y 350 mg/l15.
Boskovic M y col (2015) trabajaron con plantas de orégano y tomillo, encontrando
que ambos aceites esenciales exhibieron excelente actividad antibacteriana contra
Escherichia coli, Salmonella spp y S. Enteritidis; además, aunque generalmente
estos aceites son más afectivos frente a las bacterias Gram positivas, en este estudio
ambos mostraron actividad moderadamente fuerte contra S. aureus con un valor de
CIM obtenido de 640 μg/mL y una actividad antibacteriana más fuerte contra el
MRSA16.
Magi G, Marini E y Facinelli B (2015), demostraron que los aceites esenciales de
tomillo y orégano poseen la mayor actividad antimicrobiana contra estreptococos
del grupo A resistentes a la eritromicina con una concentración mínima inhibitoria
que oscila entre 256 y 512 μg/mL. Además encontraron que el monoterpeno
fenólico carvacrol, principal componente de estos aceites podría servir
potencialmente como una nueva herramienta terapéutica17.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
5
1.2 JUSTIFICACION
En los últimos años, el número de infecciones causadas por Streptococcus pyogenes
así como sus complicaciones han aumentado en la población en general, afectando
principalmente a niños; además en algunos casos la hipersensibilidad generada por
la penicilina G Benzatina, fármaco de elección, así como la aparición de cepas
resistentes a los antibióticos alternativos comúnmente utilizados, han complicado
el tratamiento y motivan la búsqueda de nuevas alternativas que permitan disminuir
el daño causado por los microorganismos con amplio impacto epidemiológico.
Con la presente investigación, se pretende analizar las propiedades antimicrobianas
in vitro del aceite esencial de Origanum vulgare sobre las cepas de Streptococcus
pyogenes, asimismo, se intenta encontrar una alternativa terapéutica que amplié las
posibilidades de combatirlo y que sea de fácil acceso a la población, disminuyendo
también los efectos adversos de los medicamentos empleados comúnmente.
1.3 PROBLEMA
¿Tiene efecto antibacteriano “in vitro” el aceite esencial de Origanum vulgare
“orégano” sobre Streptococcus pyogenes?
1.4 HIPOTESIS
El aceite esencial de Origanum vulgare posee efecto antibacteriano “in vitro” sobre
Streptococcus pyogenes
1.5 OBJETIVOS
1.5.1. Objetivo General
Evaluar el efecto antibacteriano in vitro del aceite esencial de Origanum vulgare
(orégano) sobre Streptococcus pyogenes.
1.5.2. Objetivos específicos:
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
6
Determinar la concentración mínima inhibitoria in vitro del aceite esencial de
Origanum vulgare “orégano” sobre Streptococcus pyogenes utilizando el
método de macro dilución en caldo.
Comparar el diámetro in vitro del halo inhibitorio generado por el aceite esencial
de Origanum vulgare “orégano” al 25%, 50%, 75% y 100% frente a
Streptococcus pyogenes mediante la técnica de Kirby Bauer
Determinar la susceptibilidad bacteriana del aceite esencial de Origanum
vulgare “orégano” frente Streptococcus pyogenes
II. MATERIAL Y MÉTODOS
2.1. MATERIAL DE ESTUDIO
2.1.1. TIPO DE ESTUDIO
- Investigación de tipo aplicada y régimen libre.
- Según el periodo que capta la información: Prospectivo
- Según la evolución del fenómeno estudiado: Transversal
- Según la interferencia del investigador en el fenómeno que se analiza:
Experimental
2.1.2. POBLACION Y MUESTRA
2.1.2.1. CARACTERÍSTICAS GENERALES
Se trabajó con cepas de Streptococcus pyogenes expuestas a aceite esencial de
Origanum vulgare (oregano) en concentraciones de 25%, 50%, 75% y 100%.
2.1.2.2.CRITERIOS DE SELECCIÓN DE MUESTRA
CRITERIOS DE INCLUSIÓN
Placas con Agar Sangre con macro dilución de Streptococcus
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
7
pyogenes y la concentración de aceite esencial de Origanum
vulgare correspondiente
CRITERIOS DE EXCLUSIÓN
Placas con la macrodilución que presente algún tipo de deterioro o
daño en su estructura durante el proceso de incubación.
Placas con la macrodilución cuyo resultado en el proceso de
incubación sea dudoso.
CRITERIOS DE ELIMINACIÓN
Placas Petri con la macrodilución que sufra deterioro o daño
durante la conservación y los procedimientos, que no permitan su
medición posterior.
2.1.3. DISEÑO ESTADÍSTICO DE MUESTREO
Se calculó el número de ensayos con el programa estadístico Minitab 17,
obteniendo como tamaño de muestra 11 repeticiones como mínimo para cada
nivel. La muestra total estará constituida por 44 unidades de muestreo para los
4 grupos experimentales y 22 para los 2 grupos controles:
- GRUPO 1: 11 repeticiones utilizando aceite esencial de Origanum
vulgare (Orégano) a una concentración de 25%
- GRUPO 2: 11 repeticiones utilizando aceite esencial de Origanum
vulgare (Orégano) a una concentración de 50%
- GRUPO 3: 11 repeticiones utilizando aceite esencial de Origanum
vulgare (Orégano) a una concentración de 75%
- GRUPO 4: 11 repeticiones utilizando aceite esencial de Origanum
vulgare (Orégano) a una concentración de 100%
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
8
- GRUPO 5: 11 repeticiones utilizando discos de Penicilina G Benzatina
1.2M UI
- GRUPO 6: 11 repeticiones utilizando discos con Tween 80.
2.2. METODOS Y TECNICAS
2.2.1. DE LA APROBACION DEL PROYECTO
Para la realización del presente estudio de investigación se obtuvo el permiso
para la ejecución, mediante la aprobación del proyecto por el Comité
Permanente de Investigación Científica de la Facultad de Medicina de la
Universidad Nacional de Trujillo y la correspondiente Resolución de Decanato.
2.2.2. DE LA AUTORIZACIÓN PARA LA EJECUCIÓN
Una vez aprobado el proyecto se solicitó el permiso para poder trabajar en el
Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad
Nacional de Trujillo.
2.2.3. DE LA CERTIFICACIÓN DEL EXAMINADOR
La presente investigación se desarrolló por el investigador principal, bajo la
supervisión de su asesora.
El investigador se certificó por su asesora experta en el tema, para lo cual realizó
la lectura de 11 placas Petri para el conteo de las UFC mediante la inspección
visual de cada placa y también repitió la medición con un vernier los halos de
inhibición en milímetros entre el investigador y asesora.
2.2.4. ACEITE ESENCIAL DE Origanum vulgare (ORÉGANO) PARA
EL ESTUDIO
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
9
2.2.4.1. Recolección de Origanum vulgare (Orégano)
Las especies vegetales de Origanum vulgare (10kg) se recolectaron del
departamento de La Libertad, provincia de Otuzco, ubicada a 3350 msnm, los
cuales fueron observados a temperatura ambiente, sin desecar hasta el momento
de la extracción del aceite esencial.
2.2.4.2. Identificación de Origanum vulgare (Orégano)
Un ejemplar completo fue llevado al Herbarium Truxillensis de la Universidad
Nacional de Trujillo para su identificación y posterior verificación taxonómica
según el sistema filogenético de la especie.
2.2.4.3. Preparación de la muestra vegetal
Obtenida la muestra necesaria de Origanum vulgare, fue transportada al
laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la
Universidad Nacional de Trujillo, donde se realizó la selección y se eliminó las
hojas que no se mostraron aptas para su procesamiento. Luego, se lavó el
material vegetal con agua destilada, seguido de desinfección, utilizando
hipoclorito de sodio al 0.5 %. Posteriormente se realizó un enjuague con agua
destilada estéril, para retirar los residuos de hipoclorito18.
2.2.4.4. Obtención del aceite esencial de Origanum vulgare19
La extracción se efectuó mediante el método por arrastre de vapor de agua
(convencional). Técnica simple y económica para obtener el aceite esencial de
este tipo de planta. Se depositó 500 g de hojas de Origanum vulgare,
previamente desecadas, en un balón de fondo redondo de 1000 mL de
capacidad. Se llenó con agua el balón destilador, previa instalación del
conducto refrigerante; el extremo superior de este balón se conectó a un
condensador que permita la circulación de agua a través del mismo.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
10
Posteriormente, se llevó a ebullición el balón destilador por un tiempo de tres
horas, periodo en el que se obtiene un líquido inmiscible conteniendo vapor de
agua condensada y el aceite vegetal. La separación de la mezcla aceite/agua se
realizó tomando en cuenta sus propiedades de inmiscibilidad y diferencia de
densidades utilizando una pera de separación de vidrio; además se deshidrató
las impurezas de agua en el aceite esencial con Na2SO4 anhidro.
Finalmente, el aceite esencial obtenido se recolectó en frascos de color ámbar
y se conservó a temperatura de refrigeración a 4°C.
2.2.5. PREPARACIÓN DE LAS CONCENTRACIONES DE ACEITE
ESENCIAL:
Se prepararon según el siguiente cuadro:
Volumen de
aceite esencial
Volumen de
Tween 80
Volumen
final
Concentración
(%)
1.25 mL 3.75 mL 5 mL 25
2.50 mL 2.50 mL 5 mL 50
3.75 mL 1.25 mL 5 mL 75
3 mL - 3 mL 100
2.2.6. RENDIMIENTO DEL ACEITE DE Origanum vulgare:
El rendimiento del aceite fue de 0.5 ml por cada 100g de hoja seca (0.5%),
obteniéndose una densidad de 0.92324 g/mL.
Las concentraciones al transformarse en mg/mL se obtienen sus respectivas
equivalencias:
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
11
Densidad del aceite
(mg/mL)
Concentración (%)
230.81 mg/mL. 25 %
461.62 mg/mL. 50 %
692.43 mg/mL. 75 %
923.24 mg/mL. 100 %
2.2.7. CEPAS BACTERIANAS PARA EL ESTUDIO
Se trabajó con cepas de Streptococcus pyogenes, obtenidas por hisopado
faríngeo de pacientes sintomáticos con faringoadmigdalitis, en el laboratorio de
Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de
Trujillo.
2.2.8. CRECIMIENTO DE CEPAS BACTERIANAS
Streptococcus pyogenes: creció a 37°C en Agar sangre con 5% de sangre de
conejo y en condiciones de microanaerobiosis.
2.2.9. ESTANDARIZACIÓN DE Streptococcus Pyogenes
Se confirmará la cepa de Streptococcus Pyogenes mediante la determinación
de β-hemolisis, coloración Gram, cultivo tioglicolato, sensibilidad a la
bacitracina y prueba de la catalasa. Para estandarizar las cepas bacterianas se
utilizó un tubo de ensayo conteniendo el medio agar Soya tripticasa, hasta
obtener una turbidez semejante al tubo N°0.5 del Nefelómetro de Mc Farland
(suspensión experimental) que corresponde a 1,5x108 UFC/mL. Los cultivos
se incubaron a 37°C por el lapso de 24 a 48 horas y fueron girados entre las
manos durante 30 segundos antes de proceder al sembrado para distribuir los
microorganismos uniformemente.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
12
2.2.10. DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN INHIBITORIA
MÍNIMA (CIM) 20,21,22
1° Se preparó 6 tubos de ensayo; 4 tubos a los cuales se añadió 0.8 mL de cada
concentración de aceite esencial de 25, 50, 75 y 100% en cada uno, un quinto
tubo corresponde al control positivo con 0,8 mL de Penicilina G Benzatina y
un sexto tubo corresponde al control negativo con 0,8 mL de Tween 80; además
a los seis tubos se le añadió 0,2 mL de la cepa.
2° Posteriormente, los tubos se mezclaron suavemente hasta uniformizarlos y
se incubarán a 37° C durante 24 horas. Luego, se determinó las cuentas viables
sembrando 0,1 mL de solución de cada uno de los tubos en 11 placas con Agar
Sangre con 5% de sangre de conejo por cada concentración y grupos controles,
utilizando el asa de drigalsky para dispersar la muestra.
3° Dichas placas se cultivaron en la estufa a 37ºC por el lapso de 24 horas,
luego se observó el crecimiento del microorganismo mediante el conteo de
Unidades Formadoras de Colonias (UFC), considerándose como CIM a la
menor concentración en la cual no se observaron UFC.
4º Todo el procedimiento se llevó a cabo dentro del diámetro de 10 cm de la
llama de un mechero bunsen y fueron 11 placas Petri por concentración.
2.2.11. DETERMINACIÓN DE EFECTO ANTIBACTERIANO
(PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD) 20,21,22
Para la prueba de susceptibilidad se utilizó el método de Difusión en discos
Kirby-Bauer.
1° Con un hisopo estéril, el cual fue embebido en el tubo del cultivo preparado
y a una distancia de 10 cm de la llama de un mechero, se sembró en placas Petri
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
13
con Agar Sangre las cepas de Streptococcus pyogenes, hisopando de forma
uniforme sobre toda la superficie.
2° Se preparó discos de papel filtro estériles y se sumergió 12 discos por cada
concentración de aceite esencial. Posteriormente con la aguja estéril se
colocaron los discos sobre los cultivos de Streptococcus pyogenes en las placas
Petri preparadas previamente. Hubo 2 grupos controles: un grupo control
positivo con 12 discos de penicilina G Benzatina y un control negativo con 12
discos de Tween 80. Se colocaron 4 discos por placa de agar. Posteriormente
las placas se incubaron a 37°C durante 24 horas.
4° Finalmente la lectura de resultados se llevó a las 24 horas. Se medirán los
halos de inhibición, incluyendo el área del disco de papel de filtro con una regla
milimetrada, procediéndose de igual manera con ambos controles. La lectura
de los halos de inhibición producidos se midió en milímetros tomando en
cuenta la escala de Duraffourd.
2.3. INSTRUMENTOS DE RECOLECCIÓN DE DATOS
Se llenaron los datos obtenidos en las fichas elaboradas (ANEXO Nº1 Y N°2)
El instrumento contiene:
1. El conteo de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC)
2. Medida de halos de inhibición expresada en milímetros (mm).
2.4. OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
14
VARIABLE DIMENSIONES TIPO DE
VARIABLE
DEFINICIÓN
OPERACIONAL E
INDICADORES
ESCALA
DE
MEDICION
Aceite esencial
de Origanum
vulgare
(Variable
independiente)
Cantidad de
aceite en ml.
Cualitativa Administración de aceite
esencial de Origanum
vulgare en
concentraciones de 25,
50,75 y 100%; control
NOMINAL
Efecto Concentración
Inhibitoria
Mínima
Cuantitativa Unidades Formadoras de
Colonias (UFC) por ml
DE RAZON
antibacteriano
(Variable
dependiente) Sensibilidad
Bacteriana
Cuantitativa Escala de Duraffourd:
Diámetro en mm
DE RAZON
2.5. DEFINICIÓN CONCEPTUAL DE VARIABLES:
Aceite esencial de Origanum vulgare:
Mezcla compleja de líquidos que presentan alta volatilidad, obtenido a partir de
hojas del orégano; planta perteneciente a la familia lamiaceae y originaria del
mediterráneo14
Efecto antibacteriano “in vitro” frente a Streptococcus pyogenes:
Interacción entre el aceite esencial de Origanum vulgare sobre Streptococcus
pyogenes. Se tomó como concentración efectiva, al tener como resultados 0 UFC.
Y para determinar la sensibilidad bacteriana, se utilizó la Escala de Duraffourd,
escala utilizada para determinar cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro, según
diámetro de inhibición.
- Nula (-) para un diámetro inferior a 8 mm.
- Sensibilidad límite (sensible = +) para un diámetro comprendido entre 8 a
14 mm.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
15
- Medio (muy sensible = ++) para un diámetro entre 14 y 20 mm.
- Sumamente sensible (+++) para un diámetro superior a 20 mm.
Sensibilidad de Streptococcus pyogenes a Penicilina: Se consideró según el
diámetro de inhibición25:
- Sensible para un diámetro superior a 24 mm
- Medio y resistente: Hasta la fecha, no se ha descrito ninguna cepa de S.
pyogenes con resistencia a penicilina
2.6. ANALISIS ESTADÍSTICO E INTERPRETACIÓN DE LA
INFORMACIÓN:
Para el análisis de los halos de inhibición y de las Unidades Formadoras de Colonias
(UFC), se calculó la desviación de estándar y se evaluó los coeficientes de variación
para contrastar el supuesto de la normalidad. Se aplicó la prueba de ANOVA con
un nivel de significancia de p < 0,05 para determinar si existe diferencia
significativa entre las medias de los diámetros de halos de los tratamientos y grupos
controles. Al hallarse significancia, se realizó la prueba de comparaciones múltiples
de Duncan; en la cual se determinará qué tratamiento es el óptimo.
Una vez obtenidos los datos, estos serán introducidos en los programas IBM SPSS
Statistics 22 para aplicar las pruebas estadísticas.
2.7. ASPECTOS ETICOS:
- Constancia de Asesoría. (ANEXO N°3)
- Constancia de Co-Asesoría. (ANEXO N°4)
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
16
- Constancia de aprobación para ejecución del proyecto por el Comité Permanente
de Investigación de la Escuela Académico Profesional de Medicina de la
Universidad Nacional de Trujillo. (ANEXO N°5)
- Constancia de preparación del aceite esencial de Origanum vulgare “Orégano” en
el laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la
Universidad Nacional de Trujillo. (ANEXO N°6)
- Acta de consentimiento informado para las pruebas de hisopado faríngeo.
(ANEXO N°7)
- Para la ejecución de esta investigación, el personal investigador tomó todas las
medidas estándares de bioseguridad establecida por el Ministerio Nacional de Salud
(MINSA) antes, durante y después de cada procedimiento microbiológico.
- Asimismo se tomó en cuenta el principio de precaución en conformidad con el
Principio 15 de la Declaración de Río sobre el Medio Ambiente y el Desarrollo26 y
el Protocolo de Cartagena sobre Seguridad de la Biotecnología del Convenio sobre
la Diversidad Biológica27, considerando los riesgos para la salud humana.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
17
2.8. DISEÑO EXPERIMENTAL: Aceite esencial de O. vulgare (AEOV)
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
18
III. RESULTADOS
A) DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN MÍNIMA
INHIBITORIA (CIM)
La TABLA N°01 muestra que la efectividad en los cuatro grupos de
concentración de AEOV así como en el grupo de penicilina fue de 100% debido
a que no se observó crecimiento de UFC en ninguna de las 12 repeticiones de
los 5 grupos mencionados.
B) DETERMINACIÓN DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN
En el GRAFICO N°01 se usó la media aritmética para obtener los promedios
de cada grupo: El mayor promedio de diámetro de inhibición de los grupos de
investigación corresponden al grupo control positivo (Penicilina G) y al grupo
de AEOV del 100% y el menor promedio de diámetro al grupo de Tween80.
En la TABLA N°02 se describe los análisis de desviación estándar de cada
grupo: La desviación estándar en la concentración del AEOV al 25% fue 0.72,
al 50% fue 0.65, al 75% fue 0.67 y al 100% fue 0.75. En el grupo de Penicilina
G la desviación estándar fue 0.79 y en el grupo Tween80 fue 0.
En la TABLA N°03 se utilizó el análisis de varianza (ANOVA), obteniéndose
como resultado que sí existe diferencia significativa entre las medias de los
diámetros de halos de los grupos de investigación dado que el valor de P de la
tabla de ANOVA es menor que 0.05. (p = 0.000).
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
19
En la TABLA N°04 se usó la prueba de DUNCAN para determinar que grupos
son estadísticamente diferentes entre sí. Se encontraron 5 grupos
estadísticamente significativos y diferentes entre sí; sin embargo no existe
diferencia significativa entre el grupo con concentración de AEOV de 25% y
el grupo con concentración de AEOV de 50%.
En la TABLA N°05 se muestra el efecto inhibitorio in vitro según diámetro de
inhibición por grupos de investigación teniendo en cuenta la escala cualitativa
de Duraffourd: Se clasifico como “sumamente sensible” al grupo de penicilina
en un 100%, “sensibilidad media” a los grupos de AEOV con concentraciones
de 75% y 100% en un 100% y a los grupos de AEOV con concentraciones de
25% y 50% en un 83% y 92% respectivamente, “sensibilidad límite” a los
grupos de AEOV con concentraciones de 25% y 50% en un 17% y 8% y
“sensibilidad nula” al grupo de Tween 80 en un 100%.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
20
TABLA Nº01: EFECTO DEL ACEITE ESENCIAL DE Origanum vulgare
SOBRE Streptococcus pyogenes (CIM)
GRUPO DE TRATAMIENTO
Placas
con
UFC
% Efectividad
Concentración del Aceite
esencial de Orégano
25% 0 100
50% 0 100
75% 0 100
100% 0 100
Control (+) Penicilina G 0 100
Control (-) Tween80 12 0
FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
21
GRÁFICO Nº01: COMPARACIÓN DEL PROMEDIO DEL DIAMETRO
DE INHIBICIÓN (DURAFFOURD) EN mm/ml ENTRE LOS GRUPOS DE
INVESTIGACION SOBRE Streptococcus pyogenes
FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018
Concentración
Penicilina
G Tween80
24.08 6
100%
18.75
75%
16.08
50%
15.33
0
25%
mm 15.17
5
10
15
20
25
30
Diá
met
ro
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
22
TABLA N°02: RESUMEN DESCRIPTIVO DEL EFECTO INHIBITORIO
in vitro SEGÚN DIÁMETRO DE INHIBICIÓN POR GRUPOS DE
INVESTIGACIÓN SOBRE Streptococcus pyogenes
GRUPOS DE
TRATAMIENTO
N
PROMEDIO
DESV.
ESTÁNDAR
Aceite esencial de Orégano 25% 12 15.17 0.72
Aceite esencial de Orégano 50% 12 15.33 0.65
Aceite esencial de Orégano 75% 12 16.08 0.67
Aceite esencial de Orégano 100% 12 18.75 0.75
Penicilina G 12 24.08 0.79
Tween80 12 6 0
FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
23
TABLA N°03: ANALISIS DE VARIANZA PARA DETERMINAR
DIFERENCIAS SIGNIFICATIVAS EN LOS DIAMETROS DE LOS
HALOS DE INHIBICIÓN (EN mm) ENTRE LOS 6 GRUPOS DE
INVESTIGACION SOBRE Streptococcus pyogenes
F de V SC GL CM F P
Tratamientos 2087.903 5 417.581 969.8645 0.0000
Error 28.417 66 0.431
Total 2116.319 71
FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
24
TABLA N°04: PRUEBA DE DUNCAN PARA DETERMINAR GRUPOS
SIGNIFICATIVOS EN LOS DIAMETROS DE LOS HALOS DE
INHIBICIÓN (EN mm) ENTRE LOS 6 GRUPOS DE INVESTIGACION
SOBRE Streptococcus pyogenes
GRUPOS DE TRATAMIENTO
Subconjunto para α= 0.05
n 1 2 3 4 5
Tween80 12 6
Aceite esencial de Orégano 25% 12 15.2
Aceite esencial de Orégano 50% 12 15.3
Aceite esencial de Orégano 75% 12 16.1
Aceite esencial de Orégano 100% 12 18.8
Penicilina G 12 24.1
FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
25
TABLA N°05: RESUMEN DESCRIPTIVO DEL EFECTO INHIBITORIO
in vitro SEGÚN DIÁMETROS DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN (EN mm)
POR GRUPOS DE INVESTIGACION SOBRE Streptococcus pyogenes
SENSIBILIDAD
GRUPO DE INVESTIGACION
25% 50% 75% 100% Penicilina Tween80
ni % ni % ni % ni % ni % ni %
Sensibilidad
nula
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
12
100
Sensibilidad
límite
2
17
1
8
0
0
0
0
0
0
0
0
Sensibilidad
media
10
83
11
92
12
100
12
100
0
0
0
0
Sumamente
sensible
0
0
0
0
0
0
0
0
12
100
0
0
TOTAL 12 100 12 100 12 100 12 100 12 100 12 100
FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
26
IV. DISCUSION
En los últimos 15 años, a pesar de su excelente eficacia in vitro, la tasa de falla de
la penicilina ha aumentado dramáticamente desde 7% a casi 40% en algunas
regiones del mundo28. Los estudios han demostrado que las dosis recomendadas de
penicilina V oral o penicilina G Benzatina (IM) no lograron erradicar el EGA en la
faringitis de inicio agudo en el 35% de los pacientes tratados con penicilina V oral
y el 37% de los tratados con penicilina IM, esto puede ser explicado por: 1)
Persistencia intracelular de S. pyogenes por proteínas F1, debido a la escasa
penetración de la penicilina en los tejidos amigdalinos, incluidas las células
epiteliales de las amígdalas; 2) Protección de S. pyogenes por bacterias productoras
de β-lactamasa (S. aureus , Haemophilus spp., M. catarrhalis y anaerobios) que
son comúnmente parte de la microbiota oral y 3) Congregación entre M.
catarrhalis y S. pyogenes, que puede mejorar la colonización de EGA facilitando
su adherencia a las células epiteliales humanas28,29. Es por tal motivo que, con el fin
de determinar nuevas estrategias terapéuticas, ha aumentado el interés en el uso de
aceites esenciales como el AEOV y de sus agentes antimicrobianos naturales tales
como los compuestos fenólicos timol y carvacrol10.
El presente estudio evaluó el efecto antibacteriano in vitro del AEOV sobre
Streptococcus pyogenes. Mediante la prueba de crecimiento de UFC (TABLA
Nº01), se observó que en las 4 concentraciones de AEOV no hubo crecimiento
bacteriano por lo que la concentración mínima inhibitoria (CIM) fue el grupo de
menor concentración al 25% (230.81 mg/mL.). Chaftar et al30 evaluaron la CIM de
AEOV en diferentes cepas bacterianas, obteniendo que la CIM para bacterias Gram
negativas (K. pneumoniae, S. typhimurium, E. coli, P. aeruginosa y L.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
27
pneumophila) varía entre un rango de 0.12 a 0.30 mg/mL y que la CIM para
bacterias Gram positivas (B. megaterium, S. epidermidis, S. xylosus, S.
haemolyticus, S. saprophyticus, L. monoytogenes) varía entre un rango de 0.30 a
0.13 mg/mL. Además, en otro estudio realizado por Wijesundara y Rupasinghe31 se
encontró que la CIM de AEOV sobre cepas de Streptococcus pyogenes aisladas
clínicamente fue de 0.5 mg/mL; por lo que ambas investigaciones demostrarían la
gran capacidad antibacteriana del AEOV incluso a concentraciones mucho menores
del 25%. Asimismo; Magi, Marini y Facinelli17 trabajaron con cepas de
Streptococcus pyogenes aisladas clínicamente y demostraron que la CIM de
carvacrol puro (0.064 a 0.256 mg/mL), principal componente del AEOV, era mucho
menor que la CIM del AEOV (0.256 a 0.512 mg/mL), lo que demostraría el poder
antibacteriano de este componente.
En cuanto a la composición fitoquímica del AEOV, Leyva et al32 realizaron una
revisión sistémica de diversos estudios que evalúan el porcentaje de cada principio
activo del AEOV en diferentes partes del mundo (Argentina, Brasil, Chile, China,
Colombia, Grecia, Iran, Italia, España, Serbia, Algeria, entre otros), encontrando
que los componentes que más se repiten en mayor porcentaje fueron carvacrol,
timol, p-cimeno y terpinenos casi en la misma proporción; además reconocen que
los constituyentes y la concentración de los compuestos del AEOV generalmente
varían debido a una gran diversidad de factores tales como subespecie, plagas,
condiciones del suelo, temporada de cosecha, ubicación geográfica, condiciones
climáticas y de crecimiento, método de secado del orégano, técnica de extracción y
la parte anatómica de la planta utilizada para la extracción. En el Perú, Tellez y
Nolazco33 analizaron químicamente el AEOV cultivado en la ciudad de Tacna
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
28
mediante cromatografía de gases, acoplada a espectrometría de masas, la cual
encontró como principales componentes del aceite al terpinen-4-ol (26,56 %), timol
(18,80 %) y carvacrol (2,24 %).
Por otra parte, la investigación mostró que el AEOV al 75% y 100%, según la escala
de Duraffourd, tuvo una sensibilidad media (con un halo de inhibición de 16.1 mm
y 18.8 mm respectivamente) (GRAFICO N°01 y TABLA Nº05); esto es explicado
por Kumara et al34 quienes afirmaron que el efecto antibacteriano del AEOV se
debe a la acción de sus componentes principales tales como el timol que ocasiona
una perturbación de las fracciones lipídicas de las membranas plasmáticas
bacterianas y el carvacrol que influye en las membranas celulares al alterar la
composición de los ácidos grasos, inducir la fuga y la pérdida de ATP de células
bacterianas además de que también puede inhibir la síntesis de flagelina. Chavez et
al35 afirman que los compuestos fenólicos (carvacrol y timol) y los terpenos
presentes en el AEOV alteran la membrana celular, lo que resulta en la inhibición
de las propiedades funcionales celulares (producción de energía mediante
alteraciones de la cadena respiratoria y transporte de membrana mediante cambios
en su topología) y, finalmente, provocan la fuga del contenido celular interno y la
muerte celular; siendo las bacterias Gram positivas más susceptibles a las
propiedades antibacterianas que las bacterias Gram negativas.
Finalmente, al aplicar la prueba de DUNCAN (TABLA Nº04) se determinó que la
concentración más efectiva contra Streptococcus pyogenes fue la del 100%, con lo
que queda demostrado el efecto antibacteriano del AEOV en todas las
concentraciones utilizadas y su utilización debería ser considerado como una nueva
alternativa terapéutica en el tratamiento de faringoamigdalitis aguda bacteriana.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
29
V. CONCLUSIONES
La concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de Origanum vulgare
(orégano) fue 25% (230.81 mg/mL) frente a Streptococcus pyogenes.
El diámetro in vitro del halo inhibitorio generado por el AEOV sobre
Streptococcus pyogenes al 25% fue 15.17 ± 0.72 mm, al 50% fue 15.33 ± 0.66
mm, al 75% fue 16.08 ± 0.67 mm y al 100% fue 18.75 ± 0.75 mm.
Las cepas de Streptococcus pyogenes utilizadas en el presente estudio mostraron
“sensibilidad media” a los grupos de AEOV con concentraciones de 75% y
100% en un 100% y a los grupos de AEOV con concentraciones de 25% y 50%
en un 83% y 92% respectivamente, “sensibilidad límite” a los grupos de AEOV
con concentraciones de 25% y 50% en un 17% y 8%.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
30
VI. RECOMENDACIONES
Realizar estudios con AEOV a concentraciones mucho menores al 25%.
Se recomienda aislar los principios activos de Origanum vulgare responsables
de su actividad antimicrobiana.
Incrementar investigaciones experimentales para demostrar el efecto
antibacteriano del AEOV sobre otras bacterias.
Realizar estudios para evaluar el efecto antibacteriano de Origanum vulgare en
modelos animales mediante diferentes vías de administración.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
31
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. Espadas D, Flor EM, Borrás R, Poujois S, Muñoz JI. Infección por estreptococo
pyogenes en la edad pediátrica: desde faringoamigdalitis aguda a infecciones
invasivas. An Pediatr (Barc). 2017: 1-7
2. Ubillús G, Patiño L, Maza G, Vicuña R, Pregúntegui I, Reyes P et al. Indicación
de antibióticos en niños con faringoamigdalitis aguda y test positivo para
estreptococo beta hemolítico del grupo A atendidos en el Instituto Nacional de
Salud del Niño, Lima–Perú. Horizonte Médico. 2013; 13(2): 40-45.
3. Cots JM, Alós JI, Bárcena M, Boleda X, Cañada JL, Gómez N et al.
Recomendaciones para el manejo de la faringoamigdalitis aguda del adulto.
Enferm Infecc Microbiol Clin. 2016; 34(9):585–594
4. Piñeiro R, Hijano F, Álves F, Fernández A, Silva JC, Pérez C et al. Documento
de consenso sobre el diagnóstico y tratamiento de la faringoamigdalitis aguda.
An Pediatr (Barc). 2011; 75(5): 342.e1-342.e13
5. Couloigner V, Graber M. Amigdalitis y sus complicaciones. EMC –
Otorrinolaringología. 2014; 43(2): 1-14.
6. Restrepo MA, Múnera MI, Ramírez BS, Acuña CP. Infección y colonización
faríngea asintomática de niños por Streptococcus pyogenes. Iatreia.2012; 25 (3):
203-209
7. González J, Gonzáles IM, Ramiro MT, Quinteiro MT et al. Actualización de un
protocolo de actuación para el diagnóstico y tratamiento de la faringoamigdalitis
estreptocócica. RqR Enfermería Comunitaria. 2014; 2(4): 31-42.
8. Shulman ST, Bisno AL, Clegg HW, Gerber MA, Kaplan EL, Lee G et al.
Clinical Practice Guideline for the Diagnosis and Management of Group A
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
32
Streptococcal Pharyngitis: 2012 Update by the Infectious Diseases Society of
America. Clinical Infectious Diseases 2012; 55(10):e86–102.
9. Parisi C. Alergia a Betalactámicos en pediatría, puesta al día y realidad en
nuestro medio. IntraMed Journal, 2014; 3(1): 1-7
10. Bassolé I, Juliani H. Essential Oils in Combination and Their Antimicrobial
Properties. Molecules. 2012; 17(1): 3989-4006.
11. García E, Castro FF, Gutiérrez JA, García S. Revisión de la producción,
composición fitoquímica y propiedades nutracéuticas del orégano mexicano.
Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas. 2012; 3(2): 339-353
12. Sayeed M, Degaga B, Azam T. Antimicrobial activity of essential oils extracted
from medicinal plants against the pathogenic microorganisms: a review. Issues
in Biological Sciences and Pharmaceutical Research. 2014; 2(1): 1-7
13. Teixeira B, Marques A, Ramos C, Serrano C, Matos O, Neng NR et al. Chemical
composition and bioactivity of different oregano (Origanum vulgare) extracts
and essential oil. Journal of the Science of Food and Agriculture. 2013; 93(11):
2707-2714.
14. Acevedo D, Navarro M, Monroy L. Composición Química del Aceite Escencial
de Hojas de Orégano (Origanum vulgare). Información tecnológica. 2013;
24(4): 43-48.
15. Siroli L, Patrignani F, Montanari C, Tabanelli G, Bargossi E, Gardini F et al.
Characterization of oregano (Origanum vulgare) essential oil and definition of
its antimicrobial activity against Listeria monocytogenes and Escherichia coli in
vitro system and on foodstuff surfaces. African Journal of Microbiology
Research. 2014 8(29): 2746-2753.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
33
16. Boskovic M, Zdravkovic N, Ivanovic J, Janjic J, Djordjevic J, Starcevic M et al.
Antimicrobial activity of Thyme (Tymus vulgaris) and Oregano (Origanum
vulgare) essential oils against some food-borne microorganisms. Procedia Food
Science. 2015; 6(1): 18 – 21
17. Magi G, Marini E, Facinelli B. Antimicrobial activity of essential oils and
carvacrol, and synergy of carvacrol and erythromycin, against clinical,
erythromycin-resistant Group A Streptococci. Frontiers in microbiology. 2015;
6(165): 1-7
18. Miranda M. Métodos de Análisis de Drogas y Extractos. Instituto de Farmacia y
Alimentos. Universidad Habana de Cuba. 2002.
19. Albarracín G., Gallo S. Comparación de dos métodos de extracción de aceite
esencial utilizando Piper aduncum (cordoncillo) procedente de la zona cafetera.
Universidad Nacional de Colombia de Manizales Ingeniería Química. 2003.
20. NCCLS-National Committee for Clinical Laboratory Standards 2004. Method
for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacterial that grow aerobically,
7ma ed., Approved Standard M7-A6. Wayne, Pennsylvania.
21. NCCLS-National Committee for Clinical Laboratory Standards 2004.
Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests, 7th ed.,
Approved Standard M2-A8, Wayne, Pennsylvania.
22. Koneman E, Allen S, Dowell V, Janda W, Sommers H, Winn W. Konemam
Diagnóstico Microbiológico. 3a ed. Buenos aires: Editorial Médica
Panamericana; 2008.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
34
23. Shibata H, Kondo K, Katsuyama R, Alkyl G. Intensifiers of β -Lactam
Susceptibility in Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. Antimicrob
Agents Chemother 2005; 49(2): 549-555.
24. Duraffourd C, D’hervicourt, Lapraz J. Cuaderno de fitoterapia Clínica.
Barcelona: Masson, 1987.
25. Clinical an Laboratory Standards Institute. Performance Standards for
antimicrobial susceptibility testing. 25th. Ed. Wayne: CLSI; 2015
26. Declaración de Rio sobre el Medio Ambiente y el Desarrollo. Rio de Janeiro
Rio; 3-14 de junio de 1992. Rio de Janeiro: Departamento de Asuntos
Económicos y Sociales. División del Desarrollo Sostenible. Organización
Mundial de la Salud. 1992.
27. Protocolo de Cartagena sobre Seguridad de la Biotecnología del Convenio sobre
la Diversidad Biológica. Nairobi; mayo de 1992 Montreal: Secretaría del
Convenio sobre la Diversidad Biológica. 2000.
28. Brook I. Treatment Challenges of Group A Beta-hemolytic Streptococcal
Pharyngo-Tonsillitis. International Archives of Otorhinolaryngology. 2017;
21(3):286-296.
29. Bonofiglio L, et al. Susceptibility to β-lactams in β-hemolytic streptococci. Rev
Argent Microbiol. 2018: 1-5.
30. Chaftar N, Girardot M, Labanowski J, Ghrairi T, Hani K, Frère J, Imbert C.
Comparative evaluation of the antimicrobial activity of 19 essential oils. Adv
Exp Med Biol. 2015: 1-15
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
35
31. Wijesundara NM, Rupasinghe HP. Essential oils from Origanum vulgare and
Salvia officinalis exhibit antibacterial and anti-biofilm activities against
Streptococcus pyogenes. Microbial Pathogenesis. 2018; 117(1): 118-127
32. Leyva N, Gutiérrez EP, Vázquez G, Heredia JB. Essential Oils of Oregano:
Biological activity beyond their antimicrobial properties. Molecules. 2017; 22
(989): 1-24.
33. Tellez L y Nolazco D. Estudio de la composición química del aceite esencial de
orégano (Origanum vulgare spp.) de Tacna. Ingeniería Industrial. 2017; 1(35),
195-205.
34. Kumara M, Sayeed M, Rani U. Antimicrobial Properties of Plant Essential Oils
against Human Pathogens and Their Mode of Action: An Updated
Review. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2016: 1-21
35. Chávez ML, Rodríguez R, Aguilar CN. Chapter 11 - Essential Oils: A Natural
Alternative to Combat Antibiotics Resistance. En: Antibiotic Resistance.
Editor(s): Kateryna Kon, Mahendra Rai,. Academic Press. 2016: 227-237.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
36
VIII. ANEXOS
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
37
ANEXO Nº01: Diámetros de halos de inhibición en mm en función a cuatro
concentraciones de aceite esencial de Origanum vulgare sobre Streptococcus
pyogenes. Control: Penicilina (Control positivo) y Tween80 (control negativo).
MEDICIÓN DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN
Origanum vulgare Control
(+)
Control (-)
Numero de
Repeticiones
25%
50%
75%
100% Penicilina
G
Tween80
mm mm mm mm mm mm
1 14 15 16 20 24 6
2 15 14 16 19 23 6
3 16 15 15 19 24 6
4 15 15 16 18 25 6
5 16 16 16 20 23 6
6 15 16 15 18 24 6
7 14 15 16 18 24 6
8 15 16 17 19 25 6
9 16 15 16 18 25 6
10 15 15 16 18 23 6
11 15 16 17 19 24 6
12 16 16 17 19 25 6
PROMEDIO 15.17 15.33 16.08 18.75 24.08 6.00
FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
38
ANEXO N° 02: Número de UFC en cuatro concentraciones del aceite esencial
de Origanum vulgare sobre Streptococcus pyogenes. Control: Penicilina
(Control positivo) y Tween80 (control negativo).
CONCENTRACION MINIMA INHIBITORIA (CIM)
Origanum vulgare Control
(+)
Control
(-)
Numero de
Repeticiones
25%
50%
75%
100% Penicilina
G
Tween80
UFC/ml UFC/ml UFC/ml UFC/ml UFC/ml UFC/ml
1 0 0 0 0 0 10⁶
2 0 0 0 0 0 10⁶
3 0 0 0 0 0 10⁶
4 0 0 0 0 0 10⁶
5 0 0 0 0 0 10⁶
6 0 0 0 0 0 10⁶
7 0 0 0 0 0 10⁶
8 0 0 0 0 0 10⁶
9 0 0 0 0 0 10⁶
10 0 0 0 0 0 10⁶
11 0 0 0 0 0 10⁶
12 0 0 0 0 0 10⁶
PROMEDIO 0 0 0 0 0 10⁶
FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2018
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
39
ANEXO N° 03: Constancia de Asesoría
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MEDICINA
CONSTANCIA DE ASESORÍA
Yo, Elva Manuela Mejía Delgado, profesora principal a tiempo completo del
Departamento Académico de Ciencias Básicas de la Facultad de Medicina de la
Universidad Nacional de Trujillo.
CERTIFICO
Ser asesora de la tesis titulada: “EFECTO ANTIBACTERIANO in vitro DEL
ACEITE ESENCIAL DE Origanum vulgare (orégano) SOBRE Streptococcus
pyogenes”, perteneciente al estudiante de Pregrado: Héctor Diego Delgado
Nicolás, identificado con DNI: 74610655, código de matrícula: 1011800313; de la
facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.
Se expide la presente para los fines correspondientes.
Trujillo, 13 de Julio del 2017
Elva Manuela Mejía Delgado
Código Docente: 3147
ASESORA
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
40
ANEXO N° 04: Constancia de Co-Asesoría
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MEDICINA
CONSTANCIA DE CO-ASESORÍA
Yo, Marilú Roxana Soto Vásquez, docente auxiliar a dedicación exclusiva del
Departamento Académico de Farmacotecnia de la Facultad de Farmacia y
Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo.
CERTIFICO
Ser Co-asesora de la tesis titulada: “EFECTO ANTIBACTERIANO in vitro DEL
ACEITE ESENCIAL DE Origanum vulgare (orégano) SOBRE Streptococcus
pyogenes”, perteneciente al estudiante de Pregrado: Héctor Diego Delgado
Nicolás, identificado con DNI: 74610655, código de matrícula: 1011800313; de la
facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.
Se expide la presente para los fines correspondientes.
Trujillo, 13 de Julio del 2017
Marilú Roxana Soto Vásquez
Código Docente: 5727
CO-ASESORA
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
41
ANEXO N° 05: Constancia de Aprobación para ejecución del proyecto
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
42
ANEXO N° 06: Constancia de preparación del aceite esencial
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
43
ANEXO N° 07: Acta de consentimiento informado
ACTA DE CONSENTIMIENTO INFORMADO
Yo, , identificado con Nº de DNI
, expreso mi voluntad de someterme a la prueba de hisopado faríngeo,
como parte del trabajo de investigación: “Efecto antibacteriano in vitro del aceite
esencial de Origanum vulgare “orégano” sobre Streptococcus Pyogenes”, realizado
por el estudiante Héctor Diego Delgado Nicolás de la Facultad de Medicina de la
Universidad Nacional de Trujillo, identificado con código universitario:
1011800313.
Además, comprendo y acepto que durante el procedimiento pueden aparecer
circunstancias inesperadas, que puedan requerir una extensión del procedimiento
original.
Al firmar este documento reconozco que he sido informado de los objetivos que
tiene la investigación, lo he leído o que me ha sido leído y explicado su contenido.
Se me ha dado amplias oportunidades de formular preguntas y que todas las
preguntas que he formulado han sido respondidas o explicadas en forma
satisfactoria.
Asimismo, tendré la potestad de retirarme del proyecto cuando así lo desee.
Trujillo, de del 2018
Nombre:
DNI:
Firma:
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
44
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
HERBARIO TRUXILLENSE (HUT)
FLORA PERUANA
Familia: Lamiaceae
Nombre Científico: Origanum vulgare L.
Leg: Delgado Nicolás, Héctor Diego
(Alumno de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo)
Código: 59398
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
45
ELABORACIÓN DEL ACEITE ESENCIAL DE Origanum vulgare
(orégano) EN EL LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA DE LA
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA- UNT
1) Selección de la muestra de Origanum vulgare para la preparación del aceite
2) Obtención de las concentraciones al 25%, 50%, 75% y 100% del aceite
esencial de Origanum vulgare.
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
46
HISOPADO FARÍNGEO PARA EL CULTIVO DE CEPAS DE
Streptococcus pyogenes EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
DE LA FACULTAD DE MEDICINA-UNT
3) Toma de muestra de pacientes sintomáticos con FAA bacteriana
4) Crecimiento en Agar sangre y observación mediante microscopio
óptico de las cepas de Streptococcus pyogenes
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
47
MÉTODO PARA OBSERVAR EL EFECTO ANTIBACTERIANO “IN
VITRO” DEL ACEITE ESENCIAL DE Origanum vulgare (orégano) SOBRE
Streptococcus pyogenes EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
DE LA FACULTAD DE MEDICINA-UNT
5) Preparación de los discos con aceite esencial de Origanum vulgare
6) Obtención de la concentración inhibitoria mínima del aceite esencial
de Origanum vulgare y Penicilina G
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
48
7) Colocación de los discos con aceite esencial de Origanum vulgare en las
placas de Agar Sangre con cepas de Streptococcus pyogenes
8) Sembrado del contenido de los tubos en placa con Agar Sangre para
determinar las unidades formadoras de colonias (UFC) por cada
concentración de Origanum vulgare (orégano)
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
49
9) Halos de inhibición formados por las concentraciones de aceite
esencial de Origanum vulgare al 25%, 50%, 75% y 100%; penicilina G
y Tween80 sobre Streptococcus pyogenes
10) Conteo de UFC en concentraciones de aceite esencial de Origanum
vulgare al 25%, 50%, 75% y 100%; penicilina G y Tween80
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
50
IX. ANEXOS DE LA EVALUACION DE LA TESIS
CRITERIOS DE EVALUACIÓN DEL INFORME FINAL DE LOS
TRABAJOS DE INVESTIGACIÓN EN LA FACULTAD DE MEDICINA
DE LA UNT
ASPECTOS PUNTAJE
I. TITULO
a. Contiene las variables del problema de investigación. No es mayor a
quince palabras.
1
b. El título refiere de manera general las variables del problema. Tiene más de 15 palabras.
0.5
c. El título no refleja el contenido del trabajo. 0.1
2. RESUMEN
a. Tiene no más de 200 palabras y palabras clave. 0.5
b. Tiene más de 200 palabras y palabras clave. 0.3
c. Tiene más de 200 palabras o no tiene palabras clave. 0.1
3. ABSTRACT
a. Tiene no más de 200 palabras y palabras clave con correcto uso del
idioma
0.5
b. Tiene más de 200 palabras y palabras clave con correcto uso del idioma 0.3
c. Tiene más de 200 palabras en idioma inglés o no tiene palabras clave o uso incorrecto del idioma inglés.
0.1
4. INTRODUCCIÓN
a. Se basa en antecedentes de conocimientos previos, presenta el
problema con sustento, la hipótesis es coherente con el problema y
objetivos.
3.5
b. Se basa en antecedentes de conocimientos previos, el problema no está
bien sustentado o la hipótesis no es coherente con el problema y/o
objetivos.
2
c. Se basa en antecedentes de conocimientos previos. No presenta
problema
1
5. MATERIAL Y MÉTODO
a. La muestra recolectada es representativa, adecuada y plantea un
diseño experimental apropiado a la solución del problema.
3
b. La muestra recolectada es representativa, adecuada y no plantea un diseño experimental apropiado a la solución del problema.
2
c. La muestra recolectada no es representativa, ni adecuada. 1
6. RESULTADOS
a. Presenta los resultados en forma sistemática en función de las variables
del problema e incluye pruebas estadísticas, figuras y tablas de acuerdo a
las normas internacionales.
4
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
51
b. Presenta los resultados en forma sistemática en función de las variables
del problema. No incluye pruebas estadísticas, figuras y tablas de acuerdo
a las normas internacionales.
2
c. No presenta los resultados en forma sistemática en función de las
variables del problema.
1
7. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN
a. Discute cada uno de los resultados para probar su validez y contrasta
con las pruebas estadísticas mencionadas en los resultados. Busca
generalizaciones y establecer las posibles implicancias de los nuevos
conocimientos.
4
b. Discute algunos resultados para probar su validez y no contrasta con
las pruebas estadísticas mencionadas en los resultados. Busca
generalizaciones y establecer las posibles implicancias de los nuevos conocimientos.
2
c. Discute algunos resultados para probar su validez y no contrasta con las
pruebas estadísticas mencionadas en los resultados. No busca
generalizaciones.
1
8. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
a. Replantea sumariamente el problema y las características de la muestra.
Formula conclusiones lógicas y emite recomendaciones viables. 2
b. Replantea sumariamente el problema y las características de la muestra.
No formula conclusiones lógicas o no emite recomendaciones viables. 1
c. No replantea sumariamente el problema, ni las características de la
muestra. 0.5
9. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
a. Presentan citas justificables y asentadas de acuerdo a un solo sistema de
referencia bibliográfica reconocido internacionalmente. 1
b. No presenta citas justificables que están asentadas de acuerdo a un solo
sistema de referencia bibliográfica reconocido internacionalmente 0.5
c. Presenta citas que no se justifican o usa más de un sistema de referencia
bibliográfica reconocido internacionalmente 0.2
10. APÉNDICE Y ANEXOS.
a. Presentar valores ordenados sistemáticamente de acuerdo a las normas
internacionales 0.5
b. Presentar valores desordenados, pero de acuerdo a las normas
internacionales. 0.3
c. Presentar valores desordenados que no están de acuerdo a las
normas internacionales 0.1
CALIFICACIÓN DEL INFORME FINAL
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
52
CRITERIOS DE EVALUACIÓN DE LA DEFENSA DE LA
TESIS EN LA FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNT
ASPECTOS Puntaje
1. EXPOSICIÓN
a. Formalidad lógica, lingüística y metodológica y uso adecuado de los medios audiovisuales
5
b. Exposición con formalidad lógica lingüística y metodológica pero no hace
uso adecuado de los medios audiovisuales
3
c. Incongruencia en la formalidad lógica, lingüística y metodológica y uso
inadecuado de medios audiovisuales.
1
2. CONOCIMIENTO DEL TEMA
a. Fluidez, dominio del tema y suficiente en responder preguntas 5
b. Fluidez, dominio del tema, pero lentitud e inseguridad en las respuestas 3
c. No dominio del Tema, respuestas contradictorias o no responde 1
3. RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIÓN
a. Relevancia completa de las conclusiones en la salud. 4
b. Relevancia parcial. 2
c. Ninguna relevancia 1
4. ORIGINALIDAD
a. Original. 4
b. Repetitivo en nuevo ámbito 2
c. Repetitivo 1
5. FORMALIDAD
a. Presentación personal formal acorde con el acto académico. 2
b. Presentación formal pero no acorde con el acto académico. 1
c. Presentación informal 0.5
CALIFICACIÓN DE LA DEFENSA DE LA TESIS
CALIFICACIÓN DEL INFORME FINAL (A): X 3 =
CALIFICACIÓN DE LA DEFENSA DE LA TESIS (B):
SUB TOTAL (A + B)/4 = NOTA NOTA:
Jurado:
X 1=
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
53
IDENTIFICACIÓN DE LA TESIS
Nombre: “Efecto antibacteriano in vitro del aceite esencial de Origanum vulgare
(orégano) sobre Streptococcus pyogenes”
Autor: DELGADO NICOLÁS, HÉCTOR DIEGO
CALIFICACIÓN FINAL
(Promedio de las 03 notas del Jurado)
JURADO: Nombre Código Docente Firma
Presidente: Dr
Grado Académico:
Secretario: Dr
Grado Académico:
Miembro: Dr
Grado Académico:
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
54
OBSERVACIONES DE LA TESIS
El Jurado deberá consignar las observaciones y objeciones pertinentes, si los hay,
relacionados a los siguientes ítems:
TESIS:……………………………………………………………………………...
………………………………………………………………….…………………..
TÍTULO:……………………………………………………………...……………
….………………………………………………………………………………...…
.……….………………………………………………………………………..……
RESUMEN:………………………………………………………………..………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
ABSTRACT:……………………………………………………………….………
………………………………………………………………………………………
….………………………………………………………………………………...…
………………………………………………………………………………………
INTRODUCCIÓN:……………………………………………………………..…
………………………………………………………………………………………
………………………………………………..………………………………….…
………………………………………………………………………………………
MATERIAL Y MÉTODO: ………………………………………………………
……..…………………………………………………………………….…………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
RESULTADOS:………………………………………………..……….…………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
ANÁLISIS Y DISCUSIÓN:……………………………………………………….
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
55
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:…………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:…………………………………………..
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
APÉNDICE Y ANEXOS:………………………………………………………….
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………..
NOMBRE:
FIRMA:
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
56
RESPUESTAS DE TESISTAS A OBSERVACIONES DEL JURADO
El Tesista deberá responder en forma concreta de las observaciones del jurado a
manuscrito en el espacio correspondiente:
a) Fundamentando su discrepancia.
b) Si está de acuerdo con la observación también registrarla.
c) Firmar.
TESIS: “Efecto antibacteriano in vitro del aceite esencial de Origanum vulgare
(orégano) sobre Streptococcus pyogenes”
FUNDAMENTACIÓN:
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………..
NOMBRE:
FIRMA:
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
57
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MEDICINA
CONSTANCIA DE REVISION DE INFORME FINAL DE TESIS
Por la presente yo, MEJÍA DELGADO ELVA MANUELA, docente del
Departamento Académico de Ciencias Básicas – Sección de Microbiología medica
de la Facultad de Medicina en la Universidad Nacional de Trujillo, ASESORA de
la tesis: “EFECTO ANTIBACTERIANO in vitro DEL ACEITE ESENCIAL
DE Origanum vulgare (orégano) SOBRE Streptococcus pyogenes”, de quien es
autor Héctor Diego Delgado Nicolás, identificado con DNI: 74610655, estudiante
del 6º año de la facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo, dejo
constancia que he revisado esta tesis y el informe final se encuentra terminado, por
lo cual el autor se halla en condiciones de iniciar el proceso para sustentación.
Se expide la presente, a solicitud del interesado para los fines correspondientes
Trujillo, 03 de Septiembre del 2018
Elva Manuela Mejía Delgado
Código Docente: 3147
ASESORA
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
58
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MEDICINA
CONSTANCIA DE REVISION DE INFORME FINAL DE TESIS
Por la presente yo, MARILÚ ROXANA SOTO VÁSQUEZ, docente auxiliar a
dedicación exclusiva del Departamento Académico de Farmacotecnia de la
Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, CO-
ASESORA de la tesis: “EFECTO ANTIBACTERIANO in vitro DEL ACEITE
ESENCIAL DE Origanum vulgare (orégano) SOBRE Streptococcus pyogenes”,
de quien es autor Héctor Diego Delgado Nicolás, identificado con DNI: 74610655,
estudiante del 6º año de la facultad de Medicina de la Universidad Nacional de
Trujillo, dejo constancia que he revisado esta tesis y el informe final se encuentra
terminado, por lo cual el autor se halla en condiciones de iniciar el proceso para
sustentación.
Se expide la presente, a solicitud del interesado para los fines correspondientes
Trujillo, 03 de Septiembre del 2018
Marilú Roxana Soto Vásquez
Código Docente: 5727
CO-ASESORA
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
59
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
60
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/