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GUÍA de Lab. A. Q. GRADO-FARMACIA GUÍA de Lab. A. Q. GRADO-FARMACIA
- Previo al Lab (Entregables al comenzar las prácticas)[1] Cuestiones (Leer la introducción del cuadernillo de prácticas en pdf. y acceder a los enlaces allí indicados. Hacer el cuestionario on-line en aula virtual)[2] Esquemas prácticas 1, 3, 4 y 5 (presentar el 1er día, según modelo para la práctica 2, resuelto al final del cuadernillo). El prof. Lo valorará y devolverá.
- Sesiones experimentales (Laboratorio). Breve explicación + 5 sesiones prácticas[3] Informe parcial-resultados. Al final de cada día/práctica presentar al prof. el borrador cumplimentado (tras los cálculos) del informe (al final del cuadernillo).El prof. lo valorará in situ.
- Posterior al Lab. Sesión seminario post-prácticas:[1] Desarrollo Prácticas (discusión grupal participativa. El prof. valorará in situ la participación activa, sobre todo el cuadernillo, el experimental, los esquemas)[2] Presentación Informe (discusión grupal participativa. El prof. valorará in situ la participación activa sobre los resultados del informe en el cuadernillo)[3] Informe-resultados (Entrega del informe, hoja de informe suelta-impresa aparte. El prof. valorará posteriormente los resultados de dicha hoja)
-------------------------Calificación final: Examen [1] 30% + Memoria [2] 20% + Resultados [3] 50%
Salvador Sagradosagrado@uv.es Dpto. Q. Analítica (Farmacia)
TAREAS EVALUABLES (SE VALORARA LA FECHA DE ENTREGA)TAREAS EVALUABLES (SE VALORARA LA FECHA DE ENTREGA)
ANÁLISIS
ANALITOS MUESTRAS
1) DUREZA (Ca, Mg) AGUA VOLUMETRÍA (complejos)
2) N-acetíl-L-cisteína MEDICAMENTO ESPECTROFOTOMETRÍA (Vis.)
3) FLUORURO DENTÍFRICO POTENCIOMETRÍA
4) Ca MEDICAMENTO ABSORCIÓN ATÓMICA
5) PARACETAMOL MEDICAMENTO HPLC ASPIRINA CAFEÍNA
TÉCNICA (método)
ANÁLISIS
ANALITOS MUESTRAS
1) DUREZA (Ca, Mg) AGUA
2) N-acetíl-L-cisteína MEDICAMENTO
3) FLUORURO DENTÍFRICO
4) Ca MEDICAMENTO
5) PARACETAMOL MEDICAMENTO ASPIRINA CAFEÍNA
1º 2º 3º 4º 5º
1,2
3,4
5,6
7,8
ORGANIZACIÓN PRACTICAS:
Parejas días exp.
1,2
3,4
5,6
7,8
1,2
3,4
5,6
1,2
3,4 1,2
7,8 5,6
7,8
3,4
5,6
7,8
INFORME (por pareja)
Nº patrones de Calibrado: 5 ó (justificar)
Pedir al profesor junto con la muestra o patrón-verificación
Verificar
PRÁCTICA (ANALITO)ETAPA (Código) (Resultado
previsto, unidades)
RESULTADOS(Completar. Media y s con cifras
significativas)
INCIDENCIAS (código)(Describir por detrás)
DUREZA Muestra: Agua
MUESTRA Dm .750-1350 mg.L-1 CaCO3
Media ±s = 1230 ± 50 (Verificado)RSD(%) = <5% ; n =
.
N-acetíl-L-cisteína Muestra: Medicamento
CALIBRACIÓN
VERIFICACIÓN Nv .10-40 %
MUESTRA Nm .Fabricante mg/unidad
np = 5 (o incidencia) ; R2=
>0.99
Media ±s =RSD(%) = ; n = 3 (o incidencia)
Media ±s =RSD(%) = ; n =
.
INCIDENCIAS:N1 . Eliminación de 1 patrón de calibrado por que se alejaba de la recta de calibrado, por lo que np= 4
N2 Eliminación de 1 réplica de la muestra discrepante por que superaba el ensayo Q, por lo que n = 2
N1N2
Ejemplos... y algunos datos esperables
CÁLCULOS (ver Guía en Cuaderno de prácticas):
statreg.xls (ordenadores prácticas)
- Calibrado + interpolación
- Media ± s, RSD%, n (+ ensayo Q)
HOJA EXCEL
Opcionalmente o para verificar...
Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Calibración del método (instrumental)- Patrón (p): NAC (puro, desecador)
Vpmp
vi
0
vp
Cp1
Cp5
Ap1
Ap5
Blanco, ‘Cero’ instrumento
Informenp=5(R2 >0.99)
Cp
*
‘Recta de calibrado’:
Protocolo operativo (Equipos) … sólo para cálculos (ver NOTA) Datos primarios
[Ap- 5.2] Pesar con precisión en balanza analítica 0.010 g de N-acetíl-L-cisteína… enrasar a 250 mL con agua. (aforado)
mp
Vp
~[0.01] g=0.25 L
[Ap- 6.1] Tomar alícuotas de la disolución de N-acetíl-L-cisteína de 0 a 5 mL (por ejemplo, 0, 1, 2, 3, 4 y 5 mL) (pipeta grad.) e introducir en matraces de 25 mL. (aforado) ...
vi
vp
=[0 – 5] mL=25 mL
Api
Cpi(mg/L)mp : masa de patrón
Vp : volumen disolución patrón (madre)
vi : volumen alícuotas patrón (alícuotas i )vp: volumen disolución patrones calibrado
Cpi : concentración patrones calibrado (mg/L)Api : absorbancia patrones calibrado
Marcar (rotular) material EsquemaEsquema
seco
NOTA: mirar el procedimiento completo (cuadernillo) para ver el resto de reactivos a añadir
Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Verificación del método (instrumental)- Patrón verif. (pve); [20-30%]-Analito (a): NAC
Va
mpve
vi
va
Ca1
Ca3
Aa1
Aa3
Ca
ma
* Interpolar en ‘Recta de calibrado’:
Protocolo operativo (Equipos) … sólo para cálculos (ver NOTA) Datos primarios
[Ap- 6.2] Pesar en balanza analítica 0.04 g del patrón de verificación… enrasar a 100 mL con agua (aforado). Por triplicado, tomar 1 mL (pipeta grad.) de esta disolución, trasvasar a un aforado de 25 mL …
mpve
Va
vi
va
~[0.04] g=0.1 L=1 mL=25 mL
Cai
mpve : masa de patrón-verif.
Va: volumen disolución analito-pve (madre)
vi : volumen alícuotas (réplicas i )
va: volumen disolución analito (réplicas)
Ca-pvei : concentración de analito en el pve (%); incógnita
Aai : absorbancia analitoCai : concentración estimada analito (mg/L)
Ca-pvei (%) ?Aai
Marcar (rotular) material EsquemaEsquema
seco
Cai
NOTA: mirar el procedimiento completo (cuadernillo) para ver el resto de reactivos a añadir
Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Análisis de muestra (m)- Analito (a): NAC (contenido según fabricante)
Va
mm
vi
va
Ca1
Ca3
Aa1
Aa3
Ca
ma
*
Protocolo operativo (Equipos) … sólo para cálculos (ver NOTA) Datos primarios
[Ap- 6.3] Pesar en balanza analítica el contenido de un sobre o cápsula. Triturar en un mortero. Pesar 0.125 g de muestra… llevar a 250 mL en un matraz aforado. Por triplicado, tomar 1mL de esta disolución, trasvasar a un aforado de 25 mL…
mc
mm
Va
vi
Va
~[0.125] g=0.25 L=1 mL=25 mL
Cai
mc
mc : masa de comprimido
mm : masa de muestra
Va: volumen disolución analito-muestra (madre)
vi : volumen alícuotas (réplicas i )va: volumen disolución analito (réplicas)ma-ci : masa de analito por comprimido (mg/unid.); incógnita
Aai : absorbancia analitoCai : concentración estimada analito (mg/L)
Interpolar en ‘Recta de calibrado’:
ma-c (mg/unid.) ?Aai
Marcar (rotular) material EsquemaEsquema
seco
Cai
NOTA: mirar el procedimiento completo (cuadernillo) para ver el resto de reactivos a añadir
Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Calibración del método (instrumental)- Patrón (p): NAC (puro, desecador)
Vpmp
vi
0
vp
Cp1
Cp5
Ap1
Ap5
Blanco, ‘Cero’ instrumento
Informenp=5(R2 >0.99)
Cp
*
‘Recta de calibrado’:
Protocolo operativo (Equipos) Datos primarios
[Ap- 5.2] Pesar con precisión en balanza analítica 0.010 g de N-acetíl-L-cisteína… enrasar a 250 mL con agua. (aforado)
mp
Vp
~[0.01] g=0.25 L
[Ap- 6.1] Tomar alícuotas de la disolución de N-acetíl-L-cisteína de 0 a 5 mL (por ejemplo, 0, 1, 2, 3, 4 y 5 mL) (pipeta grad.) e introducir en matraces de 25 mL. (aforado) ...
vi
vp
=[0 – 5] mL=25 mL
Api
Cpi(mg/L)mp : masa de patrón
Vp : volumen disolución patrón (madre)
vi : volumen alícuotas patrón (alícuotas i )vp: volumen disolución patrones calibrado
Cpi : concentración patrones calibrado (mg/L)Api : absorbancia patrones calibrado
CálculoCálculoCpi (mg/L) = mp(g) / Vp(L) x 103(mg) / 1(g) x vi(L) / vp(L) = (mp(g) 103 vi(L)) / (Vp(L) vp(L))
Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Verificación del método (instrumental)- Patrón verif. (pve); [20-30%]-Analito (a): NAC
Va
mpve
vi
va
Ca1
Ca3
Aa1
Aa3
Ca
ma
* Interpolar en ‘Recta de calibrado’:
Protocolo operativo (Equipos) Datos primarios
[Ap- 6.2] Pesar en balanza analítica 0.04 g del patrón de verificación… enrasar a 100 mL con agua (aforado). Por triplicado, tomar 1 mL (pipeta grad.) de esta disolución, trasvasar a un aforado de 25 mL …
mpve
Va
vi
va
~[0.04] g=0.1 L=1 mL=25 mL
Cai
mpve : masa de patrón-verif.
Va: volumen disolución analito-pve (madre)
vi : volumen alícuotas (réplicas i )
va: volumen disolución analito (réplicas)
Ca-pvei : concentración de analito en el pve (%); incógnita
Aai : absorbancia analitoCai : concentración estimada analito (mg/L)
CálculoCálculoCa-pvi (%) = 100 ma(g) / mpve(g) = (Cai(mg/L) x va(L) / vi(L)
x Va(L) x 1(g) / 103(mg)) / mpve(g) = (Cai(mg/L) va(L) Va(L)) / (vi(L) 10 mpve(g))
Ca-pvei (%) ?Aai
Cai
Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC)Análisis de muestra (m)- Analito (a): NAC (contenido según fabricante)
Va
mm
vi
va
Ca1
Ca3
Aa1
Aa3
Ca
ma
*
Protocolo operativo (Equipos) Datos primarios
[Ap- 6.3] Pesar en balanza analítica el contenido de un sobre o cápsula. Triturar en un mortero. Pesar 0.125 g de muestra… llevar a 250 mL en un matraz aforado. Por triplicado, tomar 1mL de esta disolución, trasvasar a un aforado de 25 mL…
mc
mm
Va
vi
Va
~[0.125] g=0.25 L=1 mL=25 mL
Cai
mc
mc : masa de comprimido
mm : masa de muestra
Va: volumen disolución analito-muestra (madre)
vi : volumen alícuotas (réplicas i )va: volumen disolución analito (réplicas)ma-ci : masa de analito por comprimido (mg/unid.); incógnita
Aai : absorbancia analitoCai : concentración estimada analito (mg/L)
CálculoCálculo
Interpolar en ‘Recta de calibrado’:
ma-ci (mg/unid.) = ma(mg) x mc(g) / mm(g) = (Cai(mg/L) x va(L) / vi(L) x Va(L) ) x mc(g) / mm(g) =
(Cai(mg/L) va(L) Va(L) mc(g) ) / (vi(L) mm(g))
ma-c (mg/unid.) ?Aai
Cai
CALIBRACIÓN DEL MÉTODO Datos primarios Resultados
Masa de biftalato potásico patrón (g) m p = 1.03E-02 g Señal
Volumen dis. patrón (madre) (L) V p = 0.25 L Disol. Conc. Abs.
Volumen alicuotas (L) v 1 = 1.00E-03 L P1 C p1 = 1.64800 mg/L A p1 = 0.1050
v 2 = 2.00E-03 L P2 C p2 = 3.29600 mg/L A p2 = 0.1928
v 3 = 3.00E-03 L P3 C p3 = 4.94400 mg/L A p3 = 0.3286
v 4 = 4.00E-03 L P4 C p4 = 6.59200 mg/L A p4 = 0.4027v 5 = 5.00E-03 L P5 C p5 = 8.24000 mg/L A p5 = 0.4917
Volumen patrones calibrado (L) v p = 2.50E-02 L
Ec. Recta ordenada pendiente R 2
y = 0.0092 + 0.059671 x 0.9912 VERIFICACIÓN DEL MÉTODO Datos primarios
Masa de patrón-verificación (g) m pve = 0.0399 g Interpolación Señal
Volumen dis. analito-pve (madre) (L) V a = 0.1 L Disol. Conc. est. Abs.
Volumen alícuotas (réplicas) (L) v 1 = 1.00E-03 L PVe1 C a1 = 3.5887 mg/L Aa 1 = 0.2233
v 2 = 1.00E-03 L PVe2 C a2 = 3.4907 mg/L Aa 2 = 0.2175v 3 = 1.00E-03 L PVe3 C a3 = 3.3958 mg/L Aa 3 = 0.2118
Volumen disolución analito (L) v a = 2.50E-02 L
Resultados Comparación:
Conc. est. PVe
Concentración analito en Pve C a-pve1 = 22.4858 % Media = 21.8782 ? [20 - 30] %
C a-pve2 = 21.8716 % s = 0.6043C a-pve3 = 21.2772 % RSD (%) = 2.8
n = 3
ANÁLISIS DE MUESTRA Datos primarios Informar con cifras significativas
Masa comprimido/unidad medic. (g) m c = 1.0198 g
Masa de muestra (g) m m 0.1250 g Interpolación Señal
Volumen dis. analito-m (madre) (L) V a = 0.25 L Disol. Conc. est. Abs.
Volumen alícuotas (réplicas) (L) v 1 = 1.00E-03 L M1 C a1 = 4.0362 mg/L Aa 1 = 0.2500
v 2 = 1.00E-03 L M2 C a2 = 4.0027 mg/L Aa 2 = 0.2480v 3 = 1.00E-03 L M3 C a3 = 3.8351 mg/L Aa 3 = 0.2380
Volumen disolución analito (L) v a = 2.50E-02 L
Resultados Comparación:
masa est. Medicamento (Fabricante)
Masa analito por comprimido (mg) m a-c1 = 205.8054 mg/u Media = 201.8176 ? 200 mg/u
m a-c2 = 204.0963 mg/u s = 5.4938m a-c3 = 195.5512 mg/u RSD (%) = 2.7
n = 3
Informar con cifras significativas
Incidencias (Código) Descripción
Ejemplo de Registro de ensayo(basado en los esquemas y cálculos)