Post on 20-Jul-2022
IDENTIFICACIÓN, CARACTERIZACIÓN Y PATOGENICIDAD DEL HONGO ENTOMOPATÓGENO Paecilomyces cateniannulatus AISLADO DE Thaumastocoris
peregrinus (HEMIPTERA: THAUMASTOCORIDAE) EN RIO GRANDE DO SUL - BRASIL
Universidade Estadual PaulistaPrograma de Pós-Graduação em Proteção de Plantas
Trabajo presentado como parte de la tesis para la obtención del título de Maestría en Protección de Plantas UNESP, Facultd de Ciencias Agronómicas
Campus de Botucatu
Ing. Agr. María Lorena San Román LazoOrientador: Prof. Dr. Carlos Frederico Wilcken
Identificación, caracterización y patogenicidad del hongo entomopatógeno Paecilomyces cateniannulatus aislado de Thaumastocoris peregrinus
(Hemiptera: Thaumastocoridae) en Rio Grande do Sul - Brasil
• Introducción
• Objetivos
• Materiales y Métodos • Materiales y Métodos
• Resultados
• Conclusiones
Introducción
+ 25 millones de
Situación mundial de la plantación de Eucaliptos
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+ 25 millones de
ha en el mundo
Según ABRAF (2013) en el 2012 el área total plantada con eucalipto en Brasil fue de 5.102.103 ha
Introducción
Orden: Hemiptera; Familia: Thaumastocoridae; Nombre común: Chinche del eucalipto.
•Insectos fitófagos, con aparato bucal suctor.
•Cada hembra, a lo largo de su vida, coloca 60 huevos aproximadamente.
•Las hembras ovipositan colocando huevos en forma gregaria.
•Ciclo de vida adulto 35 días, con 2 a 4 mm de longitud.
Thaumastocoris peregrinus Carpintero & Dellapé
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•Las hembras ovipositan colocando huevos en forma gregaria.
•Hasta llegar adulto el insecto pasa por 5 estadios ninfales
San Román, L.
Introducción
Especies de eucalipto suceptibles
Eucalyptus Reacción
E.
camaldulensis+ + +
E. tereticornis + + +
E.
Eucalyptus Reacción
E. benthamii + + +
E. dunnii ++
E. grandis +
5
.
E.
camaldulensis x
E. grandis
+ + +
E. viminalis + +
E. grandis +
E. paniculata +
E. robusta +
E. saligna +
E. syderoxilon +
+ + + Suscep
+ + Interm
+ Poco sucep.
0 No atacada
+ + + Suscep
+ + Interm
+ Poco sucep.
0 Nao atacada
Uruguay ( Paysandú FO , 2009)
Sudáfrica (JACOBS e NESER, 2005)
Introducción
Estrategias de control para T. peregrinus
•Resistencia de Plantas
•Control químico
•Control biológico
- Enemigos naturales- Enemigos naturales
-Control microbiano
Nematodos, virus, bacterias, hongos
•La ocurrencia de epizootias con mortalidades naturales de T. peregrinus es fuentepara desarrollo de investigación y busqueda de agentes patógenos como hongos
•La caracterización, identificación y constatación de la patogenicidad de esoshongos constituye una herramenta importante como parte del control integrado deT. peregrinus
Introducción
Mecanismo de acción Hongo- Hospedero
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Identificación, caracterización y patogenicidad del hongo entomopatógeno Paecilomyces cateniannulatus aislado de Thaumastocoris peregrinus
(Hemiptera: Thaumastocoridae) en Rio Grande do Sul - Brasil
• Introducción
• Objetivos
• Materiales y Métodos • Materiales y Métodos
• Resultados
• Conclusiones
Objetivos
• Realizar la caracterización cultural, morfológica, patogénica
y molecular de Paecilomyces sp. aislado de T. Peregrinus.
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• Acompañar la colonización del insecto por el hongo vía MEB
(Microscopía Eletrónica de Barrido).
Identificación, caracterización y patogenicidad del hongo entomopatógeno Paecilomyces cateniannulatus aislado de Thaumastocoris peregrinus
(Hemiptera: Thaumastocoridae) en Rio Grande do Sul - Brasil
• Introducción
• Objetivos
• Materiales y Métodos• Materiales y Métodos
• Resultados
• Conclusiones
Materiales y Métodos
Lugar de realización del trabajoLaboratório de Control Biológico de Plagas Forestales yLaboratório de Fitopatología da FCA/UNESP – Campus de Botucatu.
Colecta de insectos y aislamiento del hongo T. peregrinus muertos y enfermos hallados en epizootia ocurrida en la empresa Stora Enso, en la región de Alegrete, RS, Nov. de 2011(Figura 1).
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. empresa Stora Enso, en la región de Alegrete, RS, Nov. de 2011(Figura 1).
Figura1:A. T. peregrinus sobre hoja de eucalipto a campo. B. T. peregrinus
cubiertos con micelio y sanos, colectados en epizootia a campo.
A B
Materiales y Métodos
Test de patogenicidad en T. peregrinus
• Insectos adultos de T. peregrinus
obtenidos a partir de la cría en
laboratorio.
• A partir de generar aislamientos de
colonias puras (cultivos monosporicos)
.
colonias puras (cultivos monosporicos)
se obtuvieron concentraciones de
esporas para montar los bioensayos
• Micro aspersión Torre de PotterVol de 3 mL, de 106 esporas/mL. y15 lb/pol2, Testigo pulverizado con agua
destilada.
• El experimento fue montado em bloques
al azar con 4 repeticiónes y 10 insectos
por placa de petri conteniendo gel estéril.
Materiales y Métodos
Test de patogenicidad en T. peregrinus
• Cámara BOD a 25 °C e fotofase de 12 horas.
• Evaluaciones diarias del experimento, contando y retirando insectos muertos.
• Los insectos muertos son retirados y colocados en cámara húmeda para reaislar los hongos y confirmar de la mortalidad asocida.
Materiales y Métodos
Proceso de colonización del hongo en el insecto
• Acompañamiento de la colonización del aislamiento selecionado sobre el insecto.
• Tratmientos pulverizados con suspensión de esporas de 106 esporas/mL.
• Testigo pulverizado con agua destilada autoclavada.
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. • Test de patogenicidad, insectos tratados en intervalos de tiempo pre- determinados2, 4, 8, 12, 24, 48, 72 y 96 horas y testigo.
• Muestras de insectos preparadas y analizadas en MEB, Figura 3.
Figura 3. Muestras de T, peregrinus montadas en “stubs” (izq) y MEB - ESALQ/USP (der).
Materiales y Métodos
Caracterización morfológica
•La medición de los conidos se realizó utilizando un sistema de
vídeo-cámara adaptada al microscópio óptico y PC,
utilizando el programa EDN-2 para lámina micrografiada .
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•Se midieron 30 esporas de cada aisamiento.
Caracterización molecular del aislamiento selecionado
•La extracción de ADN del aislamiento patogénico,basada en el método modificado
Murray yThompson (1980).
•La amplificacíón de la región ITS del ADN del hongo selecionado fue realizada
utilizando los pares de primers ITS 1 e ITS 4.
•Para el PCR relacionado con α-elongasa se utilizaron los pares de primers EF1 e EF2.
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(Hemiptera: Thaumastocoridae) en Rio Grande do Sul - Brasil
• Introducción
• Objetivos• Objetivos
• Materiales y Métodos
• Resultados
• Conclusión
Resultados
Con base en las características biológicas de los cultivos, morfológicas y a las
secuencias de ADN extraídas del hongo, este fue identificado como Paecilomyces
cateniannulatus Liang
Caracteristicas morfológicas
• Velocidad de crecimento micelial : 10,7 mm/día.
• Características de la colonia
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• Características de la colonia
•Fiálides globosas en la posición basal, alargadas afinandose hacia el final donde
presentan conídios.
•Conídios de forma oval con dimensiones de (2, 0 -3,5 µm) 2,6 x 1,6 (0,8-2,5 µm).
Resultados
.
Test de patogenicidad en T. peregrinus
.
Figura 4. Mortalidad de ninfas y adultos de T. peregrinus a lo largo del tiempo,
después de la inoculación con esporas de Paecilomyces cateniannulatus en laboratorio (Temperatura 25 ± 1 oC , fotofase de 12 h).
Resultados
Proceso de colonización del hongo en el insecto vía MEB
Paecilomyces cateniannulatus
A= 2 hs
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Resultados
Paecilomyces cateniannulatus
B = 4 hs
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Resultados
Paecilomyces cateniannulatus
C= 8 hs
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Resultados
Paecilomyces cateniannulatus
D= 12 hs
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Resultados
Paecilomyces cateniannulatus
E=24 hs
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Resultados
Paecilomyces cateniannulatus
F= 48 hs
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Resultados
Paecilomyces cateniannulatus
G= 72 hs
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Resultados
Paecilomyces cateniannulatus
H= 96 hs
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Identificación, caracterización y patogenicidad del hongo entomopatógeno Paecilomyces cateniannulatus aislado de Thaumastocoris peregrinus
(Hemiptera: Thaumastocoridae) en Rio Grande do Sul - Brasil
• Introducción
• Objetivos• Objetivos
• Materiales y Métodos
• Resultados
• Conclusiones
Conclusiones
•Fue identificada la especie Paecilomyces cateniannulatus infectando T.
peregrinus, siendo esta primera ocurrencia del hongo entomopatógeno sobre
esta plaga forestal exótica en Brasil.
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•P. cateniannulatus es capaz de ingresar al cuerpo del insecto a partir de las 4
horas posteriores a la inoculación, por aberturas naturales del insecto y
penetrando la cutícula.
•En los test de patogenicidad realizados en condiciones de laboratorio P.
cateniannulatus se mostró altamente patogénico a T. peregrinus causando 50
% de mortalidad a los dos días posteriormente a la inoculación.
Gracias!