Post on 03-Feb-2016
Monitoreo de Vibrio spp. de importancia epidemiológica
Desde la costa hasta el talud continental en ambos laterales de la ZCP
Jurquiza V., Odizzio M., La Torre S., Salomone A., Sanabria A., García A., Izzo S. y Costagliola M.
Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus y Vibrio vulnificus implicadas en brotes de enfermedad en humanos
Género Vibrio
Bacilos pleomórficos Gram-negativos
Habitantes naturales del ambiente acuático
> 90 especies identificadas12 patógenas para el hombre
8 asociadas a ETAs3 importancia epidemiológica
http://vibrio-cholerae.org/
V. cholerae y V. parahaemolyticus manifestación clínica gastroenteritis V. vulnificus infecciones no intestinales
septicemias, infección de heridas
Vibrio cholerae Vibrio parahaemolyticus Vibrio vulnificus
Todos los serotipos O:K pueden producir
enfermedad TDH /TRH factores
de virulencia
Biotipo 1 Patógeno oportunista
en personas inmunosuprimidas
Serotipos O1 y O139 gen ctx toxina CT
responsable de las epidemias de cólera
El contagio se produce por ingestión de alimentos de origen marino (pescado o mariscos) o aguas contaminadas.
V. vulnificus, además, es contaminante de heridas abiertas a partir del contacto con agua contaminada o como consecuencia de la manipulación de
pescados o mariscos contaminados.
http:hku-env-health.blogspot.com.ar
/
www.aafp.org/afp Volume 76, (4)
2007
Broberg, 2011http://research.pomona.edu/jane-liu/
liu-lab-research/
• Tº del aguafactor más importante que rige la distribución y abundancia de Vibrio spp.
• Salinidad • Disponibilidad de nutrientes • Concentración de plancton
• Asociación con organismos marinos
En el ambiente • Libre en suspensión
• Asociado a partículas formando biofilms • Asociado a plancton (copépodos),
• Formando parte de la flora comensal de peces, mariscos y crustáceos
Lutz C. et al. 2013. Front.Microbiol. 4: 375.
Debido a que, el medio ambiente puede actuar como reservorio y vehículo de transmisión.
OBJETIVOS
Monitorear la presencia de Vibrio spp. de importancia epidemiológica en muestras ambientales para garantizar la inocuidad de los productos pesqueros.
Aportar datos a los estudios de evaluación de riesgo microbiológico para Vibrio spp.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se analizaron muestras de agua y sedimento
METODOLOGÍA
Manual de Procedimientos para el Aislamiento,
Identificación y Caracterización de V.
parahaemolyticus de la OPS y el BAM (FDA)
Aguamétodo cualitativo
Presencia/Ausencia (P/A).
Confirmación por PCR
Detección de genes especie-específicos
y factores de virulencia
NORMA ISO/TS 21872+
Recuento experimental
Sedimento método cualitativo
Molinari et al.-59° -58° -57° -56° -55° -54° -53° -52° -51°
-40°
-39°
-38°
-37°
-36°
-35°
-34°
12
34
5
6
65
43
21
Arg
entin
a
Estaciones CTD
Nodos ASCAT
COS-TAL I
COS-TAL II
RESULTADOS
Fueron recuperados 123 aislamientos presuntivosde V. cholerae, V. parahaemolyticus y V. vulnificus.
No fue detectado en agua ni en sedimento.
No fue detectado en agua. Sedimento, fueron identificados bioquímicamente
4 aislamientos:3 en la estación 3u de la Costal II.
1 en la estación 2 Costal I.
PCR Vibrio cholerae agua. Gen VC-F2 y VCmR1 (300 pb)C+: V. cholerae ATCC 14033. PM: Marcador de peso molecular
Vibrio cholerae
Vibrio vulnificus
Gen VC 16S-23S300 pb
Agua 4 aislamientos positivos,estaciones 1u y 2 u de la Costal II.
Sedimento 43 aislamientos positivos,estaciones 1u, 2u y 3u de la Costal II.
Vibrio parahaemolyticus
Se confirmó la presencia del gen toxR, especie-específico de V. parahaemolyticus.
No fueron detectados aislamientos toxigénicos (ausencia de los genes tdh y trh).
PCR V. parahaemolyticus (gen toxR 368 pb) en sedimento.10: C + (ATCC 17802); PM: Marcador de peso molecular 100 pb.
PCR múltiple genes tdh (250 pb)y trh (500 pb) en sedimento. 13. C+ CAIM
1772 tdh+/trh+ [http://www.ciad.mx/caim/CAIM.html]).
5ºC
10ºC
15ºC
20ºC
25ºC
30
31
32
33
34
35
36
37
Cuantificación de Vibrio
parahaemolyticus
Est. UFC/g
Costal II 1u 370
2u 330
3u 200
5u -
Costal I 1 -
2 -
3 -
5 -
Diagramas de cajas (Box Plots) obtenidos para temperatura y salinidad en muestras de agua y sedimento, según la recuperación de V. parahaemolyticus: P (presencia) - A (ausencia).
Se observa> frecuencia de aislamiento de
Vibrio parahaemolyticus con Tº y Sal.
Asociación entre detección de V. parahaemolyticus en agua y sedimentoy su relación con temperatura y salinidad
Agua / Temperatura
Mediana 25%-75% Rango
de valoresP A
Presencia/Ausencia de Vibrio parahaemolyticus
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
Tem
pera
tura
Agua / Salinidad
Mediana 25%-75% Rango
de valores
P A
Presencia/Ausencia de Vibrioparahaemolyticus
29,5
30,0
30,5
31,0
31,5
32,0
32,5
33,0
33,5
34,0
34,5
Sal
inid
ad
Sedimento / Temperatura
Mediana 25%-75% Rango
de valoresP A
Presencia/Ausencia de Vibrio parahaemolyticus
6
8
10
12
14
16
18
20
22
Tem
pera
tura
Sedimento / Salinidad
Mediana 25%-75% Rango
de valores
P A
Presencia/Ausencia de Vibrioparahaemolyticus
31,4
32,0
32,6
33,2
33,8
34,4
Sal
inid
adTemperatura (ºC)
19,44-21,29
Salinidad 30,14-32,43
Si bien se demostró la presencia de V. parahaemolyticus, no fueron detectados marcadores de virulencia.
En función de los resultados obtenidos y de acuerdo a la normativa internacional de aceptación de V. parahaemolyticus en productos de la pesca (< 102 ufc/g), el riesgo de padecer enfermedad por el
consumo de productos pesqueros en la ZCP podría calificarse bajo.
Debido a que, es la primera vez que se realiza este análisis en la zona, resulta necesario efectuar repeticiones del mismo, con
variaciones espacio-temporales que refuercen estas conclusiones.
CONCLUSIONES
GRUPO DE TRABAJO MICROBIOLOGÍA
URUGUAY:Dirección Nacional de Recursos Acuáticos-DINARAMarta Odizzio, Sabrina La Torre y Analía Sanabria
ARGENTINA:Instituto Nacional de Investigación y Desarrollo Pesquero-INIDEPMarcela Costagliola, Verónica Jurquiza, Andrea Salomone, Analía
García y Silvina Izzo
Holanda, < 102 ufc/g punto de venta para productos pesqueros importados congelados, cocinados o crudos.
Reino Unido la Health Protection Agency (HPA), productos listos para el consumo, en el punto de venta, insatisfactorios > 102 ufc/g.
Estados Unidos, límite máximo un nivel de 102 ufc/g. Australia y Nueva Zelanda, en manufactura y venta m=102; M=103,
(n=5; c=2; m=102; M=103) Japón para ostras crudas < 102 ufc/g. España límite máximo de 102 ufc/g, (n=5, c=0, m=M=102 ufc/g).
Criterios microbiológicos para Vibrio parahaemolyticus
A partir de capturas procedentes de zonas de riesgo, debería establecerse un plan de vigilancia especial en relación con algunas de las serovariantes principales del O3:K6
surgidas en los últimos años en relación con brotes de enfermedad.
AESAN, 2010
¡Muchas gracias…!