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EVALUACIÓN DEL EFECTO ANTAGÓNICO DE CUATRO CEPAS DE Trichoderma sp.
SOBRE HONGOS CONTAMINANTES DE
SEMILLAS DE PALMA HIBRIDA INTERESPECÍFICA OxG (Elaeis oleífera x Elaeis guineensis).
GABRIEL CHAVES BETANCOURT
OSCAR EDUARDO LADINO REY
CHRISTIAN CHASIN ZAMBRANO
CONTENIDO
ANTECEDENTES
OBJETIVOS
METODOLOGÍA
RESULTADOS
CONCLUSIONES
1
2
3
4
5
En trabajos anteriores evaluaron diferentes
fungicidas y Trichodermasp.
Encontraron hongos como
Rhizopus sp.Aspergillus sp.Penicillium sp.Fusarium sp.
FungicidasMaxim XL
VitavaxFolicur
Mancozeb
Fuente: Autor Fuente: anavl.blogspot.com
ANTECEDENTES
Trichoderma sp
Micoparasitismo
CompetenciaEspacio
Nutrientes
Antibiosis
Metabolitos secundarios
Antibióticos
Inducción de resistencia en plantas superioresDeuteromycota
Hyphomycetes
Hifales
Moniliales
Trichoderma sp.
Phylum
Clase
Orden
Familia
Género
(Chavez M. , 2006) (Martinez, Infante, & Reyes, 2013) (Agrios, 2004) (Vinale, et al., 2008)
ANTECEDENTES
ANTECEDENTES
TRATAMIENTO QUIMICO73 días de germinada
TRATAMIENTO BIOLOGICO73 días de germinada
ENDOSPERMO CONSERVADO
ANTECEDENTES
TRATAMIENTO QUIMICO73 días de germinada
TRATAMIENTO QUIMICO73 días de germinada
ANTECEDENTES
2,226
4,39
2,402
3,386
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
4,5
5
Plumula Radicula
Cre
cim
ien
to (
cms)
Variables evaluadas
Efecto de tratamientos sobre el crecimiento de Plúmula y Radícula
Trichoderma
Quimico
0,00%
0,20%
0,40%
0,60%
0,80%
1,00%
1,20%
1,40%
1,60%
1 2 3 4 5 6 7 8
% C
ON
TAM
INA
CIÓ
N
Saques
% Contaminación por Hongos
Químico
Trichoderma sp
ANTECEDENTES
ANTECEDENTES
1er 2do 3er 4to 5to 6to 7mo 8vo 9no
%Germinación Acumulada
Químico
15%
Antecedentes
Objetivos
Metodología
Resultados
Conclusiones
1
2
3
4
5
CONTENIDO
Objetivo general
• Evaluar el efecto antagónico de cuatro cepas de Trichoderma spsobre hongos contaminantes de semillas de palma hibrida OxGIndupalma® (E. oleífera x E. guineensis).
Objetivos específicos
• Identificar hongos contaminantes prevalentes en semillas de palmahibrida interespecífica OxG Indupalma® (E. oleífera x E. guineensis).
• Determinar el efecto antagónico de Trichoderma sp. mediante platodual sobre los hongos contaminantes aislados.
OBJETIVOS
Hipótesis Nula
Hipótesis Alterna
No se observa diferencias significativasentre los efectos de las cuatro cepas deTrichoderma sp sobre los hongoscontaminantes de semillas
Existen diferencias significativas entre losefectos de las cuatro cepas deTrichoderma sp sobre los hongoscontaminantes de semillas
HIPOTESIS
METODOLOGÍAPlantación Indupalma Ltda.
Altura de 120 msnm
Temperatura de 28°C (oscilando entre 22°C y 34°C)
Precipitación anual promediode 2497 mm
Humedad relativa del 72,3%
Brillo solar de 2130
horas al año
Evaporación de 1208 mm/año
Identificación de hongos contaminantes
MUESTRA
3 MuestrasIntervalos 20-30 díasDiferentes
lotes
200 semillasGerminación
100 SemillasEmbriones
50 SemillasCalefacción
1050Semillas
METODOLOGÍA
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN Y CLASIFICACIÓN DE HONGOS
IDENTIFICACIÓN:• Claves taxonómicas de Carrillo (2003)• Corena, Zambrano y Gualdrón, 2011
PDA x325°C 7 días
>5% por muestra>2% de muestra
global
METODOLOGÍA
Cepas Antagónicas
• T. harzianum
• T. viride
Cepas Comerciales
• T. harzianumSuelo de E. oleifera
• T. virideEspigas de inflorescencia masculina E. guineensis
Cepas Nativas
TharC
TvirC
TharN
TvirN
METODOLOGÍA
Efecto Antagónico mediante Plato Dual
60 mm
60 mm 60 mm
Testigo Patógeno Testigo Trichoderma spAntagonista
Unidad ExperimentalEnfrentamiento
Se marca el crecimiento diariamente8 días, 27°C, Cinco veces.Medio de cultivo PDA.
METODOLOGÍA
(Fernandez & Suarez, 2009).
Inhibición del crecimiento radial Micoparasitismo
Comparación con patógeno testigo Crecimiento de Trichoderma spsobre el micelio del hongo patógeno (línea punteada)
Efecto Antagónico mediante Plato Dual
METODOLOGÍA
Comparar el Radio deCrecimiento Antagonista (RCA)con elRadio de Crecimiento Patógeno(RCP).
Ezziyyani et al. (2004)R1 es el radio del patógeno testigoR2 es el radio del patógeno enenfrentamiento
Competencia por espacio y nutrientes
Porcentaje de Inhibición de
crecimiento radial (PICR)
Efecto Antagónico mediante Plato Dual
METODOLOGÍA
Elías y Arcos (1984) y citada por Ezziyyani et al. (2004)
Micoparasitismo
(MICMO)
Se midió la invasión de la superficiey esporulación de Trichoderma spsobre los hongos donde se presentecrecimiento sobre el micelio delpatógeno.
Grado Capacidad antagónica
0 Ninguna invasión de la superficie de la colonia del hongo patógeno
1 Invasión de ¼ de la superficie de la colonia del hongo patógeno
2 Invasión de ½ de la superficie de la colonia del hongo patógeno
3 Invasión total de la superficie de la colonia del hongo patógeno
4 Invasión total de la superficie de la colonia del hongo patógeno y
esporulación sobre ella.
METODOLOGÍA
Efecto Antagónico mediante Plato Dual
Análisis de Datos
Análisis de datos
Los cuatro antagonistas se analizaránmediante un ANOVA de los resultadosobtenidos de PICR para cada uno de loshongos. Además, se realizará la prueba deTukey (P=0,05) para comparar las mediasentre ellas.
Para analizar el MICMO se hizo mediantela prueba de Kruskal-Wallis para variablesno paramétricas ordinales.
METODOLOGÍA
Antecedentes
Objetivos
Metodología
Resultados
Conclusiones
1
2
3
4
5
CONTENIDO
Microorganismos presentes en las etapas del proceso
54,02%
11,62%
10,17%
8,33%
5,70%
4,40%2,63%
2,52%0,63%
Calefacción
Mucor sp Syncephalastrum sp
A. niger A. terreus
Penicillium sp F Schizhophyllum sp
Levaduras Bacterias
Penicillium sp V
26,03%
18,41%
16,66%
10,00%
4,95%
4,83%
3,86%
3,75%
2,20%2,07%
1,90%
1,35% 1,16%
0,99%0,79% 0,70%
0,19%
0,17%
Germinación
Schizophyllum spSyncephalastrum spMucor spAspergillus terreusRhizopus spT virideLevadurasAspergillus nigerAspergillus fumigatusPenicillium sp VFusarium spAspergillus flavusPenicillium sp FFusarium sp 2
50,37%
11,71%
10,35%
10,29%
4,21%
3,03%2,82%
1,96%
1,90%0,73% 0,63%
0,63%
0,63%0,41%
0,32%
Embriones
Schizophyllum sp Levaduras
Mucor sp Fusarium sp 1
Syncephalastrum sp A. fumigatus
A. terreus No identificado
Fusarium sp 3 T. viride
Basipetospora sp Penicillium sp G
Penicillium sp NB Bacterias
Penicillium sp F
RESULTADOS
HONGOCódigo
ETAPA DEL PROCESO
Calefacción Germinación Embriones
Aspergillus fumigatus IPS01X X
Aspergillus niger IPS02X X
Aspergillus terreus IPS03X X X
Fusarium sp IPS04X X
Fusarium sp IPS05X
Mucor sp IPS06X X X
Penicillium sp IPS07X
Penicillium sp IPS08X
Rhizopus sp IPS09X
Schizophyllum sp IPS10X X X
Syncephalastrum sp IPS11X X X
RESULTADOS
Identificación de hongos contaminantes
Mayor contaminante de semillas en germinación.Disminuye tasa de germinación(Zubir, et al., 1995, citado por Dikin, et al., 2003)
Microorganismos no reportados anteriormente
Chrysosporium sp.
Schizophyllum sp
Syncephalastrum sp.
Microorganismos reportados no encontrados
Sclerotinia sp.
A. clavatus
A. ochraceus
RESULTADOS
RESULTADOS
Fuente GL SC MC F P
Tratamiento 3 0,2395 0,0798 105,8 0,000
Error 16 0,0120 0,0007
Total 19 0,2515
R-cuad 95,2% Desv. Estand. 0,02747
ANOVA multifactorial
56,5%
43,7%
61,4% 61,0%
0,0%
10,0%
20,0%
30,0%
40,0%
50,0%
60,0%
70,0%
TharC TharN TvirC TvirN
PIC
R
Antagonistas
PICR de A. terreus (IPS03)
H GL P
16,07 3 0,001
19,00 3 0,000
Prueba de Kruskal-Wallis
0 0 0
2
0
1
2
3
4
TharC TharN TvirC TvirN
Esca
la M
ICM
O
Antagonistas
MICMO de A. terreus (IPS03)
Aspergillus terreus IPS03
Mucor sp. IPS06
Fuente GL SC MC F P
Tratamiento 3 0,0362 0,0134 26,15 0,000
Error 15 0,0069 0,0005
Total 18 0,0431
R-cuad 83,95% Desv. Estand. 0,02149
ANOVA multifactorial
H GL P
16,89 3 0,001
17,83 3 0,000
Prueba de Kruskal-Wallis
RESULTADOS
RESULTADOS
Fuente GL SC MC F P
Tratamiento 3 0,0686 0,0228 74,83 0,000
Error 15 0,0045 0,0003
Total 18 0,0732
R-cuad 93,74% Desv. Estand. 0,0174
ANOVA multifactorialH GL P
16,07 3 0,001
19,00 3 0,000
Prueba de Kruskal-Wallis
0 0
4 4
0
1
2
3
4
TharC TharN TvirC TvirN
Esca
la M
ICM
O
Antagonistas
MICMO de Syncephalastrum sp. (IPS11)
Syncephalastrum sp. IPS11
RESULTADOS
Fuente GL SC MC F P
Tratamiento 3 0,2395 0,0798 89,4 0,000
Error 15 0,0134 0,0008
Total 18 0,2529
R-cuad 94,70% Desv. Estand. 0,0298
ANOVA multifactorial
H GL P
10,71 3 0,013
18,75 3 0,000
Prueba de Kruskal-Wallis
0 0
1
00
1
2
3
4
TharC TharN TvirC TvirN
Esca
la M
ICM
O
Antagonistas
MICMO de Schizophyllum sp. (IPS10)
Schizophyllum sp. IPS10
RESULTADOS
9876543210
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Día
Da
tos Y
P3
T3
TestigoP
TestigoT3
Variable
Efecto de Trichoderma viride Comercial sobre Schizophyllum sp
(•) Crecimiento del patógeno en plato dual(■) Crecimiento de Trichoderma sp en plato dual a 60 mm de distancia (▲) Crecimiento de Trichoderma sp testigo(♦) Crecimiento de patógeno testigo
Dis
tan
cia
(mm
s)
RESULTADOS
0,0%
10,0%
20,0%
30,0%
40,0%
50,0%
60,0%
70,0%
80,0%
90,0%
IPS01 IPS02 IPS03 IPS04 IPS05 IPS06 IPS07 IPS08 IPS09 IPS10 IPS11
% P
ICR
Hongos contaminantes
PICR de las cuatro cepas de Trichoderma sp. sobre hongos contaminantes de semillas
TharC TharN TvirC TvirN
Noveriza y Quimio (2004)los antagonistas promisorios deben tener más del 60% de inhibición del crecimiento radial
CONTENIDO
Antecedentes
Objetivos
Metodología
Resultados
Conclusiones
1
2
3
4
5
Se aislaron e identificaron once cepas de hongos prevalentes enel proceso de germinación de semilla de palma híbridainterespecífica OxG Indupalma® (E. oleífera x E. guineensis) delos géneros Aspergillus sp., Fusarium sp., Mucor sp., Penicilliumsp., Rhizopus sp., Schizophyllum sp. y Syncephalastrum sp.
Las cuatro cepas de Trichoderma sp. inhibieron el crecimiento delos hongos contaminantes de semillas de palma híbridainterespecífica OxG Indupalma® y se presentaron diferenciassignificativas entre los efectos de inhibición del crecimiento detodos los antagonistas usados.
CONCLUSIONES
La cepa de T. viride comercial es la más promisoria para el usocomo antagonista, debido a que inhibe en gran medida (>60%PICR) a seis de los once hongos estudiados, y de los cuales, notodos son inhibidos a su vez por los demás antagonistas.
La cepa de T. viride comercial presentó parasitismo en diez de losonce hongos aislados y en siete de ellos colonizó y esporuló lamitad o más del micelio del patógeno.
Se hace promisorio el uso de moléculas biológicas para el controlde hongos patógenos en proceso de producción de semillashibridas de palma de aceite.
CONCLUSIONES
GRACIAS