Post on 19-Oct-2018
Emil Fischer (1852-1919) Franz Hofmeister (1850-1922)
74th Meeting of the Society of German Scientists and Physicians. 1902, Karlsbad
• Reacciones del enlace peptídico
• Reacciones del grupo amino terminal
• Reacciones del grupo carboxilo terminal
Análisis químico
Composición? Detección? Secuencia?
Reacciones del enlace peptídico
• Hidrólisis ácida (ClH 6M a 100 C, 24hs). Hidrólisis alcalina.
• Reacción de Biuret ( SO4Cu/tartrato alcalino 540nm). Baja sensibilidad.
• Reacción de Lowry et al. (Reactivo de Folin-Ciocalteau = mezcla de óxidos de tungsteno y molibdeno) 720-750 nm
Reacciones del grupo amino (terminal)
• Ninhidrina (570 nm) Pro a 440nm
• Fluorescamina (producto fluorescente). Alta sensibilidad
• 1-Fluoro-2,4 dinitrobenceno(FDNB, reactivo de Sanger)
• Cloruro de dansilo
• o-ftalaldehído (en sn con mercaptoetanol, producto fluorescente). Alta sensibilidad
Reacciones del grupo Carboxilo
• Hidrazina (H2NNH2) (hidrazinolisis)
• Carboxipeptidasa (exopeptidasas)
Secuenciación
1. Purificación de la proteína o péptido
2. Determinación de la composición y PM
3. Determinación del número de cadenas (ruptura de los puentes disulfuro)
4. Determinación de los extremos amino-terminales y carboxilo-terminales
5. Corte específico de la secuencia principal en fragmentos menores, al menos en dos formas distintas
6. Purificación de cada segmento y secuenciación
7. Determinación de la secuencia total