Post on 12-Oct-2015
UNIVERSIDAD MICHOACANA DE
S LGO
URUAPAN, MICHOACN
F ACULTAD
PRES
ETIOLOGA Y CONTRCAUSAL DE LA MANCde burro Oncidium
de muerto
JOS LUIS
EFITO
Como requisito pa
INGENIAN NICOLAS DE HIDAS
DE AGROBIOLOGA
IDENTE JUAREZ
OL QUMICO in vitro DEL AGENTE HA FOLIAR EN ORQUDEA, Oreja cavendishianum Bateman Y Flor Laelia autumnalis Lindl.
S
sM
r
E
PTESI ENERO DEL 2008
NCHEZ LPEZ
pecialidad en: EJORAMIENTO
cial para obtener el titulo de:
RO AGRNOMO
resenta:
DEDICATORIA A mis padres, Mariano Snchez y Candelaria Lpez, por todo el amor que me han dado, y por creer siempre en m. A mis abuelos Martn, Rosa y Petronila, por que son para mi el ejemplo a seguir. A mis hermanos Lety y Oscar, por todos sus apoyos y cario. A mi esposa Mariela, por su apoyo y comprensin para la realizacin de este trabajo. A mi hijo ALAN, por ser la fuerza, el motivo para seguir adelante y la alegra de mi corazn Por ti mi hijo todo, Te AMO. A mi todos mis Tos y tas, en especial al to Jorge, por que lo admiro y respeto mucho. A m cuada deli. A mis sobrinas Anazhuri y Beln, por que son la alegra de la familia. A mis primos y primas
AGRADECIMIENTOS A DIOS por darme la vida y por que nunca me dejas solo cuando ms te necesito. A la Universidad Michoacana y a la Facultad de Agrobiologa, por ser la cuna de mi formacin profesional. A la Ing. Teresita del Carmen vila, por ser una gran persona y asesor de este trabajo y por todo su apoyo y paciencia, mil Gracias. A una gran mujer, que admiro y respeto mucho, por confiar en m, por motivarme a seguir adelante. A la Dra. Martha Elena Pedraza, gracias por su confianza. A mis sinodales, Dr. J. Luciano Morales Garca, M.C., Jorge Campos vila, Ing, Salvador Aguirre Paleo, Ing. Romn Negrete Nolasco, gracias por su valiossimo tiempo para la revisin de este trabajo. Al Ing. Pedro Garca, viverista del Parque Nacional, por las plantas facilitadas para poder realizar este trabajo, Gracias. A todos los compaeros del Laboratorio de Cultivo de tejidos, por sus apoyos directos e indirectos para la realizacin de este trabajo.
NDICE GENERAL
Pgina
NDICE DE CUADROS DEL APNDICE...
NDICE DE CUADROS Y FIGURAS...
RESUMEN...
i
ii
iv I. INTRODUCCIN..
1
II. REVISIN DE LITERATURA......................................... 3
2.1 Importancia econmica de las orqudeas.... 3
2.2 Descripcin botnica de Oncidium cavendishianum Bateman
2.2.1 Clasificacin Taxonmica de Oncidium cavendishianum...
3
5
2.3 Descripcin botnica de Laelia autumnalis Lindl
2.3.1 Clasificacin Taxonmica de Laelia autumnalis...
6
8
2.4 Enfermedades fungosas en Orqudeas....... 8
2.5 Sntomas causados por Pestalotia sp.................... 11
2.6 Caractersticas morfolgicas de Pestalotia sp.... 12
2.6.1 Clasificacin taxonmica de Pestalotia sp
2.6.2 Ciclo biolgico de Pestalotia sp..
13
14
III.
MATERIALES Y MTODOS.........
15
3.1 Localizacin del rea de muestreo.......... 15
3.2 Ubicacin del experimento.... 17
3.3 Siembra e identificacin del agente causal .... 17
3.4
3.5
Medio de cultivo Papa-Dextrosa-Agar..
Prueba de patogenicidad...................
18
19
3.6 Bioensayo con fungicidas para el control de Pestalotia sp en
condiciones in vitro..
19
3.7 Medios de cultivo.................................................................. 21
IV. RESULTADOS Y DISCUSIN.. 25
4.1 Identificacin del agente causal 25
4.2
4.3
Prueba de patogenicidad.........
Efecto de fungicidas para el control de Pestalotia sp bajo
condiciones in vitro.....
26
28
4.4
V.
VI.
VII
Evaluacin de medios de cultivo...
CONCLUSIONES
LITERATURA CITADA
APNDICE
30
34
35
39
NDICE DE CUADROS Cuadro Pgina 1 Medio de cultivo Papa-Dextrosa-Agar....... 18
2
3
4
5
6
Producto e ingrediente activo de los fungicidas utilizados para el
control in vitro de Pestalotia sp agente causal de manchas
necroticas
Medio de cultivo Jugo de Verduras V8-Agar.....
Medio de cultivo Jugo de tomate-Agar...
Efecto de fungicida para el control de Pestalotia sp in vitro..........
Efecto del medio de cultivo para el desarrollo micelial in vitro de
Pestalotia sp...
20
22
23
29
32
NDICE DE FIGURAS Figura Pgina
1
2
3
4
5
6
Inflorescencia de la Oreja de burro Oncidium cavendishianum..
Inflorescencia de la Flor de muerto Laelia autumnalis..
Ciclo biolgico de Pestalotia sp en varias plantas.............................
Lugar de la colecta y especies o ejemplares de orqudeas del
Parque Nacional Barranca del Cupatitzio
Sntomas de la enfermedad en hojas de Orqudea.....
Bioensayo de control qumico in vitro para Pestalotia sp
5
7
14
15
16
20
7
8
9
Micelio y b) conidios de Pestalotia sp. en medio de PDA...
Plantas de Laelia autumnalis con sntomas de la
enfermedad.....
Plantas de Oncidium cavendishianum con sntomas de la
enfermedad.......................................................................................
25
27
27
10 Grafica del efecto del tipo de fungicida para inhibir el crecimiento
micelial in vitro de Pestalotia sp
29
11 Inhibicin de Pestalotia sp por fungicidas a dosis medias
comparadas a los 5 das de establecido el experimento.
30
12
Grafica del efecto del medio de cultivo para el crecimiento micelial
in vitro de Pestalotia sp
32
13 Crecimiento de Pestalotia sp. en diferentes medios de cultivo a los
5 das de establecido el experimento.
33
NDICE DE CUADROS DEL APNDICE
Cuadros Pgina 1A Claves para identificacin de hongos imperfectos....... 39
2A
3A
4A
5A
6A
7A
8A
9A
10A
Anlisis de varianza para el efecto del tipo de fungicida sobre el
crecimiento in vitro de Pestalotia sp durante el primer da de
cultivo...
Anlisis de varianza para el efecto del tipo de fungicida sobre el
crecimiento in vitro de Pestalotia sp durante el segundo da de
cultivo...
Anlisis de varianza para el efecto del tipo de fungicida sobre el
crecimiento in vitro de Pestalotia sp durante el tercer da de
cultivo...
Anlisis de varianza para el efecto del tipo de fungicida sobre el
crecimiento in vitro de Pestalotia sp durante el cuarto da de
cultivo...
Anlisis de varianza para el efecto del tipo de fungicida sobre el
crecimiento in vitro de Pestalotia sp durante el quinto da de
cultivo...
Anlisis de varianza para el crecimiento in vitro de Pestalotia sp
durante primer da de evaluacin
Anlisis de varianza para el crecimiento in vitro de Pestalotia sp
durante segundo da de evaluacin
Anlisis de varianza para el crecimiento in vitro de Pestalotia sp
durante tercer da de evaluacin.
Anlisis de varianza para el crecimiento in vitro de Pestalotia sp
durante cuarto da de evaluacin
39
39
40
40
40
40
41
41
41
11A
Anlisis de varianza para el crecimiento in vitro de Pestalotia sp
durante quinto da de evaluacin
41
RESUMEN
Las orqudeas componen un grupo numeroso de gneros y especies
botnicas adaptadas a diferentes tipos de climas tropicales y subtropicales que
desde la antiguedad han sido preferidas como plantas de ornato por su forma,
colores y fragancias.
En Michoacn gran cantidad de poblaciones de orqudeas se han visto
drsticamente afectadas, por la destruccin de bosques, en donde la tala de los
mismos para incorporar terrenos a la agricultura y los incendios modifican su
hbitat, poniendo a las especies endmicas sobre todo en peligro de extincin;
de igual forma, la depredacin reduce las poblaciones de orqudeas
significativamente.
El material enfermo se colect en el Parque Nacional Barranca del
Cupatitzio el sntoma de la enfermedad en campo se observ en hojas de
orqudeas que inician con una mancha circular central en hojas de color negro
al centro y caf oscuro alrededor, cubriendo por completo la hoja. Bajo
condiciones de laboratorio se llevaron a cabo aislamientos de material enfermo
de hojas de orqudea Laelia autumnalis y Oncidium cavendishianum en medio
de cultivo PDA, de secciones de stas hojas se obtuvieron colonias fungosas
que se observaron al microscopio, el micelio puro se coloc en portaobjetos
para obtener preparaciones fijas. El hongo aislado se identific como Pestalotia
sp siguiendo las claves de Barnett y Hunter (1998). A partir de colonias puras
se prepar una solucin que contena 54200 conidios por mL-1, y con la cual se
inocularon plantas sanas para llevar a cabo las pruebas de patogenicidad, bajo
condiciones de laboratorio. A los 120 y 75 das en donde se reprodujeron
sobre las hojas de las plantas inoculadas los sntomas de la enfermedad
observados en campo, de estas plantas se reaisl nuevamente a Pestalotia sp,
confirmando as su patogenicidad en hojas de Oncidium cavendishianum y
Laelia autumnalis.
Se hizo un bioensayo de control in vitro con cinco fungicidas (Cupravit
PH, Benomyl 50, Tecto 60, Interceptan 50 y Manzate 200) para
determinar sus efectos en el desarrollo del patgeno, Tecto 60 inhibi de mejor
forma el crecimiento del hongo desde el cuarto da del establecimiento del
experimento.
El mejor medio de cultivo para el desarrollo del hongo fue Jugo de
tomate-Agar ya que mostr un crecimiento abundante y rpido con gran
cantidad de acrvulos a los 11 das de la incubacin.
I. INTRODUCCIN
Las orqudeas componen un grupo numeroso de gneros y especies
botnicas adaptadas a diferentes tipos de climas tropicales y subtropicales
(Cabrera et al., 2007). La familia de las orqudeas es una de las ms diversas
morfolgicamente, se estima que existen alrededor de 25, 000 especies. En
Mxico se cuenta con 1106 especies de orqudeas y subespecies distribuidas
en 159 gneros (Laguna et al., 2005).
En el estado de Michoacn gran cantidad de poblaciones de orqudeas
se han visto drsticamente afectadas, principalmente por la extraccin masiva,
as como tambin por la destruccin de bosques y otros hbitats en donde
viven (ngel y ngel, 2003). La mayora de las orqudeas que son extradas de
los bosques son vendidas a personas que desconocen de los cuidados que
requieren provocando as su muerte en poco tiempo (Mrida, 2007).
Al existir poco conocimiento sobre el manejo adecuado para las
orqudeas silvestres se ponen en riesgo las plantaciones de las mismas, ya que
al no desarrollar de manera adecuada y perder su valor esttico son
rechazadas, lo que provoca prdidas econmicas (Mrida, 2007).
En el Parque Nacional Barranca del Cupatitzio de Uruapan, Michoacn
se encuentran diversas especies de plantas de ornato, entre ellas las
orqudeas, reportando Salgado (2007) 28 especies. Las orqudeas Oncidium
cavendishianum (oreja de burro) y Laelia autumnalis (flor de muerto) son de
las especies de orqudeas ms comunes.
En fechas recientes estas especies han mostrado sntomas de
decaimiento de la planta y manchas foliares que disminuyen la calidad de su
floracin razones por las cuales se plantearon los siguientes objetivos:
1.- Determinar la etiologa de la mancha foliar en la Oreja de burro Oncidium
cavendishianum y en Flor de muerto Laelia autumnalis.
2.- Evaluar fungicidas in vitro mediante un bioensayo para el control del
patgeno.
3.- Determinar el mejor medio de cultivo para el crecimiento del patgeno.
1.2 Hiptesis
Es posible que el agente causal de la mancha foliar de Oncidium cavendishianum y Laelia autumnalis sea de origen fungoso.
Con las pruebas de bioensayo es posible determinar la efectividad de los fungicidas para el control in vitro del patgeno.
II. REVISIN DE LITERATURA
2.1 Importancia econmica de las orqudeas
Las orqudeas son plantas cuya belleza y relativa facilidad de cultivo las
han convertido en objeto de gran demanda comercial en muchos pases del
mundo (Malagn y Salgado, 2005).
La creciente comercializacin legal de especies de orqudeas, que se
reproducen en lugares especializados a travs de cultivo de tejidos y/o
germinacin de microsemillas, ha favorecido la expansin de su mercado
(Navarro et al., 2001).
De las especies mexicanas el 80 % se pueden aprovechar en el mbito
ornamental ya sea como plantas completas, flor de corte, follaje, o en
colecciones especiales. La enorme diversidad gentica, morfolgica, de
ecotipos y formas de las orqudeas mexicanas presentan una gran demanda a
nivel nacional y en el extranjero (Menchaca y Moreno, 2005).
2.2 Descripcin botnica de Oncidium cavendishianum Bateman
Oncidium cavendishianum es conocida con el nombre de Oreja de burro
amarilla. Se distribuye en Centroamrica (Honduras y Guatemala); y en
Mxico en los estados de Puebla, Oaxaca y Veracruz; crece en bosques de
encino y pino, en rboles de sombra a una altura de 1000 a 2800 msnm; su
poca de floracin va de diciembre a mayo (Navarro et al., 2001).
Es una especie epifita, aunque puede adaptarse como semiterrestre en
macetas; se desarrolla sobre ramas y troncos de los rboles.
El tipo de crecimiento de esta especie es simpodial, es decir que existe
un rizoma que crece de manera horizontal, carece de pseudobulbos, con hojas
muy carnosas aproximadamente de ocho mm de espesor, de 12 cm de ancho
en su parte mayor y de 30 a 50 cm de largo (Navarro et al., 2001).
Las races son areas y pueden estar libres o colgantes; alrededor de la
raz presenta una capa de tejido esponjoso llamado velamen. Las races son de
color gris a blanco y tienen un pice meristemtico que absorbe humedad y
nutrientes que la planta necesita, el pice cumple con la funcin de realizar
parte de la fotosntesis (Navarro et al., 2001).
Su inflorescencia es terminal con 15 a 30 flores aromticas de
consistencia cerosa, el Spalo y Ptalo son de color amarillo verdoso, con
manchas caf, el lpalo de color amarillo; miden de 3 a 3.5 cm de dimetro
(Navarro et al., 2001).
Figura 1. Inflorescencia de la Oreja de burro Oncidium cavendishianum
2.2.1 Clasificacin taxonmica de Oncidium cavendishianum
De acuerdo con Navarro et al., (2001) esta especie se clasifica de la
siguiente manera:
Reino: Plantae
Divisin: Spermatophyta
Subdivisin: Angiospermae
Clase: Monocotyledoneae
Orden: Microspermae
Familia. Orchideaceae
Subfamilia: Orchidiideae (Neottideae)
Tribu: Epindendreae
Subtribu: Oncidiinae
Genero: Oncidium
Especie: O. cavendishianum
2.3 Descripcin botnica de Laelia autumnalis Lindl
En Mxico se le conoce con los nombres de flor de muerto, calavera,
catarinas, lirio, tzauhtli (Navarro et al., 2001).
Laelia autumnalis es una especie endmica de Mxico (Arriaga, 2005),
su distribucin se encuentra en los estados de Sonora, Durango, Jalisco,
Michoacn, Morelos, Guerrero y Puebla; crece en bosques de pino-encino a
una altura de 1500 a 2600 msnm., su poca de floracin es durante los meses
de octubre a noviembre (Navarro, et al., 2001).
Es una especie epfita o rupcola aunque puede adaptarse como
semiterrestre en macetas. Se desarrolla sobre ramas y troncos de los rboles,
sus races no penetran en el tallo de sus hospedantes, el rbol cumple con la
funcin de soporte, solo crecen en su corteza (Arriaga, 2005).
El tipo de crecimiento es simpodial, es decir que existe un rizoma que
crece de manera horizontal, del cual van surgiendo los pseudobulbos que
tienen un crecimiento vertical. A medida que crece el rizoma surgen nuevos
pseudobulbos, que dan origen a nuevas plantas (Arriaga, 2005).
Las races son areas y pueden estar libres o colgantes; alrededor de la
raz presenta una capa de tejido esponjoso llamado velamen. Las races son de
color gris a blanco y tienen un pice meristemtico que absorbe humedad y
nutrientes que la planta necesita (Navarro et al., 2001).
El tallo de esta especie es un pseudobulbo de tipo claviforme,
semicilndrico, de 2 cm de dimetro en su parte ms ancha y de 15 a 20 cm de
largo, con 2 a 3 hojas coriceas de 3 cm de ancho y de 25 a 30 cm de largo
(Navarro et al., 2001). La funcin primordial de los pseudobulbos es la de
almacenar nutrientes, que son la fuente de reserva para la planta en temporada
de sequa (Arriaga, 2005).
La inflorescencia es apical en forma de racimo con cinco a ocho flores
aromticas; los spalos y ptalos son de color rosa y magenta en la punta con
la parte del centro de color blanco, el labelo es de color blanco con el centro
amarillo y magenta en la punta; con un dimetro de 8 a 10 cm (Navarro et al.,
2001).
Las semillas pueden germinar en condiciones naturales, con ayuda de
unas micorrizas en proceso de simbiosis, donde las hifas del hongo pasan a
formar parte de la estructura de las races, desempeando la funcin de races
secundarias que ayudan en la captacin de agua y nutrientes (Arriaga, 2005).
Figura 2. Inflorescencia de la Flor de muerto Laelia autumnalis
2.3.1 Clasificacin taxonmica de Laelia autumnalis
De acuerdo con Navarro et al., (2001) esta especie se clasifica de la
siguiente manera:
Reino: Plantae
Divisin: Spermatophyta
Subdivisin: Angiospermae
Clase: Monocotyledoneae
Orden: Microspermae
Familia. Orchideaceae
Subfamilia: Orchidiideae (Neottideae)
Tribu: Epindendreae
Subtribu: Laeliinae
Genero: Laelia
Especie: L. autumnalis
2.4 Enfermedades fungosas en orqudeas
En la actualidad la economa agrcola sufre prdidas econmicas debido
a diversas causas del medio ambiente, entre ellas, son las enfermedades
ocasionadas por; hongos, bacterias, virus y nemtodos. El grupo principal de
organismos fitopatogenos es el de los hongos, se conocen actualmente mas de
8,000 especies capaz de provocar alrededor de 80,000 enfermedades
(Romero, 1993).
El cultivo de las orqudeas, tambin se ve afectado por diversos tipos de
enfermedades ocasionados por hongos.
El tizn de los ptalos causada por Botrytis cinerea ataca a las flores de
una gran variedad de orqudeas (Cattleya, Phalaenopsis, Dendrobium,
Oncidium y Vanda). Es ms comn durante el clima fresco y hmedo. Se
reconoce por unos puntos pequeos, cafs y circulares en los ptalos y
spalos de las flores; en etapas avanzadas la flor entera puede estar cubierta
con masas de esporas (Sheehan, 1988).
La pudricin negra, prevalece en clima fri Phytophthora cactorum y el
otro en el clima hmedo y clido Pythium ultimum pueden aparecer en
cualquier poca del ao. Pythium es el ms peligroso, ya que se disemina por
toda la planta rpidamente. Los sntomas de ambos hongos son similares,
afectan a las hojas pero pueden atacar a los pseudobulbos y tambin a los
tallos (Sheehan, 1988).
La pudricin del cogollo en Cymbidium, causada por el hongo
Phytophthora erythroseptica, el sntoma de la enfermedad empieza en la raz,
con una pudricin que avanza hasta la parte area, destruyendo toda la planta.
La enfermedad puede notarse claramente en las hojas interiores por un cambio
de color de los tejidos infectados, el cual primero es verde obscuro y despus
caf grisceo. Las hojas externas generalmente se amarillan luego de que su
base es podrida. La pudricin tiene apariencia hmeda, pero es firme e inodora
(Romero, 1996).
Murgua (2006) seala que el hongo Colletotrichum gloeosporioides
causa sntomas de enfermedad en orqudeas con manchas circulares y
hundidas en las hojas, pseudobulbos, flores y brotes tiernos de color oscuro, a
veces con un halo alrededor, puntos oscuros en el centro de la mancha que en
periodos prolongados adquieren un color salmn rosado. En los botones
florales, inflorescencias y brotes nuevos, se forman reas marrn oscuro o
negro que se hunden causando un doblamiento y la muerte del rgano
afectado.
Cercospora y Rhizoctonia, en hojas y tallos de orqudeas causan
sntomas de lesiones redondeadas y alargadas, algunos con bordes definidos,
en el cual algunos tejidos se tornan de color marrn oscuro. Cuando el ataque
es severo puede afectar a todas las hojas (Murgua, 2006).
Glomerella cincta conocido como antracnosis americana, los sntomas
de esta enfermedad empiezan en la punta de las hojas y avanza hacia la base.
La parte enferma es de color obscuro y se pudren (Romero, 1996).
Physalospora cattleyae y Gloeosporium sp, causan antracnosis,
apareciendo principalmente en las hojas de orqudea que comienza con
manchas de color amarillo a caf claro, son suaves, ms o menos circulares y
algo hundidas, En casos de infeccin severa las hojas llegan a morir (Romero,
1996).
2.5 Sintomas causados por Pestalotia sp
Sosa et al. (2003), reportan que Pestalotia sp. causa lesiones necrticas
en plantas de Jazmn del cabo Gardenia augusta; los sntomas se caracterizan
por manchas foliares de centro castao claro, rodeado por reas concntricas
de color castao oscuro donde se observan acrvulos. La enfermedad produce
decaimiento de la planta, notable reduccin de las hojas, escasa y baja calidad
de la floracin.
Gonzlez et al. (2002) encontraron en Cipres lambertiana que Pestalotia
sp es el agente causal del tizn, observndose muerte de acculas y ramas
jvenes que quedan adheridas al tallo tomando una coloracin pardo grisceo,
a veces con presencia de inflorescencias de color negro producidas por las
fructificaciones del hongo
Esquivel (2004) en campo encontr hojas de guayaba con manchas
caf-plateadas, las cuales al ser aisladas encontr a Pestalotia sp.
Por su parte, lvarez et al. (1998), reportan a Pestalotia guepinii,
provocando manchas foliares en Hortensias (Hydrangea sp.) identificndose en
forma preliminar como antracnosis.
Romero (1993), reporta a Pestalotia palmarum, que en plantaciones
jvenes de palmas de coco, los sntomas de esta enfermedad inician con unas
manchas transparentes y claras sobre las hojas, que mas tarde cambian a
verde amarillento, el tejido se seca y las hojas se desprenden.
Bigre et al. (1990), reportan que Pestalotia guepini, provoca manchas
amarillas a pardas sobre las hojas de Camelia y Rododendro, estas manchas
tienen un desarrollo en crculos concntricos.
Campos et al. (2005), en trabajos de investigacin en ave de paraso
encontraron al genero Pestalotia causante del tizn foliar y follaje, en un 20 %
de los casos.
2.6 Caractersticas morfolgicas de Pestalotia sp
Romero (1993) menciona que este hongo se caracteriza, al igual que
todos los que forman este orden, por la produccin de conidios en cuerpos
fructferos llamados acrvulos, los acrvulos son negros, discoides o
pulvinados, subepidrmicos; conidiforos cortos y simples. Bigre et al. (1990)
cita que forman conidios pluricelulares fusiformes. Montiel y Avelar (2001) y
Bigre et al. (1990) mencionan que los conidios son alargados y multiseptados,
presentan de 5 clulas y las de ambos extremos son hialinas en tanto que las
del centro son de color oscuro el conidio presenta dos a tres apndices en uno
de los extremos y tambin son hialinos.
Romero (1993) seala que estos hongos penetran principalmente a
travs de heridas, varias especies de este hongo son causantes de manchas
foliares o lesiones cancrosas en frutos de plantas tropicales.
2.6.1 Clasificacin taxonmica de Pestalotia sp
De acuerdo con Romero (1993) este hongo se clasifica de la siguiente
manera.
Reino: Fung
Clase: Deuteromycetes
Orden: Melanconiales
Familia: Melanconiaceae
Genero: Pestalotia
Especie: sp
2.6.2 Ciclo biolgico de Pestalotia sp.
Germinacin del conidio y penetracin en el tejido
Infeccin primaria e invasin del tejido
Micelio
Infeccin de varias plantas
Hoja de Oncidium
Hoja de Laelia
Hoja de Jazmin
Hoja de Hortensia
Hoja de Guayaba
Sntomas de manchas foliares en varias plantas
Conidio de Pestalotia sp.
Acervulo de Pestalotia sp.
Los tejidos infectados mueren y se colapsan para formar una zona hendida
Los acrvulos con masas de conidios oscuros se desarrollan en la zona infectada
Avrvulos en grandes zonas circulares y hundidas que han sido infectadas
Figura 3. Ciclo biolgico de Pestalotia sp en varias plantas (Adaptado de
Agrios, 2002).
III. MATERIALES Y MTODOS
3.1 Localizacin del rea de muestro
La colecta del material enfermo se hizo en el Parque Nacional Barranca
del Cupatitzio municipio de Uruapan, Michoacn, Mxico, mediante un
muestreo visual de las plantas de Laelia autumnalis y Oncidium
cavendishianum con sntomas caractersticos de estas enfermedades se
seleccionaron hojas con manchas circulares, colocndose en bolsas de plstico
y etiquetndolas para su posterior procesamiento en laboratorio.
Figura 4. Lugar de la colecta y especies o ejemplares de orqudeas del Parque
Nacional Barranca del Cupatitzio.
El Parque Nacional "Barranca del Cupatitzio" tiene una superficie de
19.8 hectreas de rea de recreacin y 452 hectreas de rea de
conservacin, es el segundo Parque ms visitado de la Repblica; se le conoce
como Barranca del Cupatitzio, ya que es en este lugar nace el Ro Cupatitzio
que suministra agua a la ciudad de Uruapan, dicho nombre proviene de la
composicin de dos vocablos del origen Purpecha, de kupatzini "zambullirse"
e itzio "en el agua", cuenta con una gran variedad de vegetacin, diversas y
exuberantes fuentes, conocido por su leyenda de la rodilla del diablo (www.wp-
m.com/uruapanturistico/index/uruapan /parque nacional .html).
En campo, los sntomas de esta enfermedad inician con una pequea
mancha circular central en las hojas de color negro al centro y caf-oscuro
alrededor, bordeada por un halo clortico, la cual desarrolla hasta cubrir por
completo la hoja dejndola con un aspecto deshidratado de color caf oscuro.
a b
Figura 5. Sntomas de la enfermedad en hojas de Orqudea a) Oncidium
cavendishianum y b) Laelia autumnalis.
3.2 Ubicacin del experimento
El estudio se realiz en el laboratorio de Cultivo de Tejidos de la Facultad
de Agrobiologia Presidente Jurez dependiente de la Universidad Michoacana
de San Nicols de Hidalgo, ubicado en el municipio de Uruapan, Michoacn.
3.3 Siembra e identificacin del agente causal
Bajo condiciones aspticas las muestras de hojas fueron lavadas
previamente, se cortaron en trozos pequeos de aproximadamente 2 mm y
desinfectaron con hipoclorito de sodio 2 % durante 1.5 minutos, se enjuagaron
tres veces con agua destilada estril para eliminar la presencia de cloro en los
tejidos. En cada caja de Petri con medio de PDA se colocaron cinco secciones
de muestra dispuestas en cinco de oro; posteriormente se sellaron las cajas
con Kleen Pack y etiquetaron debidamente, y se mantuvieron bajo condiciones
de laboratorio desarrollndose colonias fungosas de todas las muestras en
forma uniforme, en cuales fueron transferidos a cajas de Petri con medio de
cultivo PDA para su purificacin. Para esto se cort una seccin del medio con
crecimiento fungoso y se coloc en el centro de una caja de Petri con el fin de
obtener colonias puras.
Purificado el hongo se hicieron preparaciones fijas con lactofenol blanco en
portaobjetos del micelio y estructuras reproductivas del hongo y a travs de sus
caractersticas morfolgicas se hizo la identificacin siguiendo las claves de
Barnett y Hunter (1998).
3.4 Medio de cultivo Papa-Dextrosa-Agar
Para el aislamiento in vitro del patgeno, se prepar medio de cultivo
Papa-dextrosa-agar (Lpez, 1978), (Cuadro 1).
Cuadro 1 Medio de cultivo Papa-Dextrosa-Agar
Ingrediente Cantidad (gL-1)
Papa
Dextrosa
Agar
200
20
15
Para la elaboracin se cocieron 200 g de papa en 500 mL-1 de agua
destilada, luego se filtr a travs de una manta de cielo y embudo. Aparte se
disolvi el agar junto con la dextrosa en 400 mL-1 de agua destilada en un vaso
precipitado, calentndolos ligeramente para disolverlos. Posteriormente se hizo
un vaciado en un matraz Erlenmeyer, el filtrado de papa, el agar y la dextrosa
disueltas se afor con agua destilada a un litro y se tap con una torunda
(tapn de algodn y gasa).
El medio de cultivo se esteriliz en una olla de presin de 21 litros de
capacidad de 15 Lbs/pulg2 durante 15 minutos. Bajo condiciones aspticas se
vaciaron 10 mL-1 de medio de cultivo a cada caja de petri. Una vez solidificado
el medio se sell con papel kleen Pack y se etiquetaron debidamente, y se
mantuvieron en refrigeracin para su posterior uso.
3.5 Prueba de patogenicidad
Se escogieron seis cajas de Petri que mostraron abundante esporulacin y
sobre cada caja se adicion agua y posteriormente con una aguja se removi la
mayora de acrvulos formados en la superficie del medio para que liberaran
las esporas; se tamizaron a travs de una gasa para solo obtener esporas.
Hecha la suspensin de esporas; se utiliz un hematocimetro para calcular el
numero de esporas por mL siendo de 54,200 por mL-1. De esta suspensin de
esporas se tomaron 150 mL-1 y se procedi a la inoculacin de plantas de
orqudeas sanas de ambas especies, utilizando un atomizador manual; las
plantas se cubrieron con una bolsa de plstico para formar una cmara
hmeda que favoreciera la penetracin del hongo.
3.7 Bioensayo con fungicidas para el control de Pestalotia sp en
condiciones in vitro
El hongo se cultiv en cajas de Petri con medio de cultivo de PDA (Papa-
Dextrosa-Agar), a temperatura ambiente por dos das.
Se seleccionaron los productos fungicidas; Tecto 60, Intercaptan 50,
Manzate 200, Benomyl 50 y Cupravit PH para realizar el bioensayo. stos
fueron pesados en una balanza analtica a la dosis media recomendada por el
fabricante para manchas foliares en ornamentales y disolvieron en 10 mL-1 de
agua destilada estril en tubos de ensaye (Cuadro 2).
Cuadro 2. Producto e ingrediente activo de los fungicidas utilizados para el
control in vitro de Pestalotia sp agente causal de manchas necroticas.
Fungicida
Ingrediente activo
Dosis media
g/10 mL agua
Benomyl 50 PH Benomilo: Metil-1-(butil carbamoil) bencimidazol-2-il carbamato
0.0325
Cupravit PH Oxicloruro de cobre 0.03
Intercaptan 50 PH Captan: Cis-N-(triclometil)tio)-4ciclohexen-1,2-dicarboximida
0.025
Manzate 200 PH Mancozeb (producto de coordinacin del ion zinc y etilen bis ditiocarbamato de manganeso).
0.025
Tecto 60 PH Tiabendazol: 2-(4-tiazolil)-1H-benzimidazol
0.01
MANZATE 200 BENOMYL 50 CUPRAVIT PH TECTO 60 INTERCAPTAN 50 TESTIGO
Figura 6. Establecimiento del bioensayo para el control qumico in vitro de
Pestalotia sp.
Se colocaron discos de papel filtro estril en tubos de ensaye con el
producto, para que se impregnara de ste durante tres minutos, se colocaron
cuatro discos de papel filtro a cada caja en forma de cruz procurando que
tuvieran la misma distancia.
Se establecieron seis tratamientos conformados por cinco fungicidas y
un testigo (agua destilada), con siete repeticiones distribuidas bajo un diseo
experimental completamente al azar. Para analizar el crecimiento del hongo, se
registr la variable dimetro de crecimiento de la colonia en centmetros a partir
del segundo da de inicio del experimento, la medicin se interrumpi al
momento en que el hongo del tratamiento testigo coloniz por completo la caja
de Petri.
3.6 Evaluacin de medios de cultivo
Debido a que en medio de cultivo PDA la presencia de acrvulos fue
escasa, se decidi establecer este experimento para incrementar el desarrollo
de estructuras. Para esto se hizo la siembra del patgeno en los diferentes
medios de cultivo, Avena-Agar, Jugo de verdura V8-Agar, Harina de Maz-Agar,
jugo de tomate Agar, Orqudea-Agar y Papa-Dextrosa-Agar, se coloc el disco
de micelio en el centro de la caja de Petri para un crecimiento uniforme. Las
cajas se cubrieron con peridico y se guardaron en una caja de cartn.
Medio de cultivo Avena-Agar (A-A)
Durante 24 horas se dej en remojo 60 g de avena en 600 mL-1 de agua,
luego se hirvi la mezcla durante 30 minutos y se filtr a travs de una manta
cielo, para clarificar la solucin filtrada se centrifug la solucin a 2000 rpm
durante 5 minutos se decant y colect el lquido obtenido. Aparte se disolvi
12 g de agar en 400 mL-1 con agua caliente. Posteriormente se vaciaron en un
Matraz Erlenmeyer el lquido obtenido y el agar, se afor con agua destilada a
un litro y se tap con una torunda. El medio de cultivo se esteriliz a 15
lbs/pulg2 durante 15 minutos (Lpez, 1978).
Medio de cultivo Jugo V8-Agar (V8-A)
Al jugo de verduras V8 se agreg carbonato de calcio, y se agit hasta
disolverlos. Se dej reposar la solucin durante 10 minutos; para clarificarla se
centrifug durante 5 minutos a 2000 rpm. se colect el lquido claro
centrifugado hasta reunir la cantidad requerida. Despus al jugo de V8
centrifugado se agreg la solucin de agar y se afor con agua a 1000 mL-1
(Lpez, 1978).
Cuadro 3. Medio de cultivo Jugo V8-Agar (V8-A)
Ingredientes Cantidad (gL-1)
Jugo V8 centrifugado
Agar
Carbonato de calcio
200 mL
15 g
4.5 g
Medio de cultivo Harina de Maz-Agar (HM-A)
En 500 mL-1 de agua destilada a 70 C de temperatura se agreg la
harina de maz 20 gL-1 y se calent por una hora a 80 C, la infusin fue filtrada
a travs de una manta de cielo; posteriormente se centrifugo el lquido obtenido
a 2000 rpm durante 5 minutos. El lquido centrifugado fue decantado y
colectado. Aparte se disolvi el agar 20 gL-1 en 300 mL-1 de agua destilada
calentndolo ligeramente, se aadi el liquido centrifugado a la solucin de
agar y se afor con agua destilada a 1000 mL-1 (Lpez, 1978).
Medio de cultivo Jugo de Tomate-Agar (T-A)
Al jugo de tomate se le agreg el carbonato de calcio agitndolos hasta
disolverlos y se dej reposar durante 10 minutos. Para clarificar, se centrifug
durante 5 minutos a 2000 rpm, se decant y colect el lquido centrifugado
hasta la cantidad requerida. Despus se disolvi el agar en 450 mL-1 de agua
destilada, se aadi la solucin centrifugada, se vaci en un matraz Erlenmeyer
y se tap con torunda (Lpez, 1978).
Cuadro4. Medio de cultivo Jugo de Tomate-Agar (T-A)
Ingredientes Cantidad (gL-1)
Jugo de tomate centrifugado
Carbonato de Calcio
Agar
60 mL
0.6 g
14 g
Medio de cultivo Orqudea-Agar (O-A)
Para su elaboracin se cocieron 52 g de hojas de Orqudea en 500 mL
de agua destilada, se filtr a travs de una manta cielo. Aparte se disolvi 14.4
g de agar en 250 mL de agua destilada, calentndolos ligeramente para
disolverlos. Posteriormente se hizo un vaciado en un matraz Erlenmeyer, el
filtrado de orqudea y el agar disuelto, se aforo con agua destilada a 1 L-1 y tap
con una torunda.
Todos los medios fueron esterilizados en una olla de presin de 21 litros
de capacidad a una presin de 15 lbs/pulg2 durante 15 minutos (Tuite, 1969).
Se establecieron seis tratamientos (medios de cultivo) con cuatro
repeticiones, la variable a evaluar fue la velocidad del crecimiento de la colonia
(llenado de caja) expresado en centmetros. Todos los tratamientos o medios a
evaluar se mantuvieron bajo condiciones de laboratorio (18 a 24 C).
IV. RESULTADOS Y DISCUSIN
4.1 Identificacin del agente causal
Del material vegetativo enfermo se aisl el hongo Pestalotia sp en 85 %
de los casos, con un patrn de crecimiento radial en sus colonias, de micelio
extenso y algonodoso blanco, con fructificaciones de color negro brillante
llamados acrvulos de apariencia aceitosa, que en algunas ocasiones solo
aparecen cuando el hongo a cubierto por completo la caja de Petri (Fig. 7).
a b
Figura 7. a) micelio y b) conidio de Pestalotia sp. en medio de PDA
Estos acrvulos son grupos de conidios de forma alargadas y
multiseptados, de 3-5 clulas, las de los extremos son hialinas y las centrales
oscuras (Romero, 1993), con dos a tres sedas en uno de los extremos y
tambin son hialinos (Bigre et al., 1990).
El hongo Pestalotia sp present un crecimiento vigoroso, ya que coloniz
por completo la caja de Petri con medio de cultivo de PDA en 6 das a 25 C, lo
que coincide con Montiel y Avelar (2001) quienes mencionan que Pestalotia se
desarrolla bien de 22 a 26 C en 15 das y que en temperaturas mayores a 30
C su crecimiento es lento.
4.2 Prueba de patogenicidad
De acuerdo a las pruebas de patogenicidad realizadas en las plantas de
orqudeas de Laelia autumnalis, stas presentaron los sntomas propios de la
enfermedad a los 2 meses y medio de ser inoculadas con la solucin de
esporas de Pestalotia sp. Las hojas nuevas de las plantas inoculadas
desarrollaron los sntomas de manera virulenta ya que en tres das las
manchas cubran por completo la lamina foliar para desprenderse del
pseudobulbo finalmente.
Las hojas adultas de las plantas inoculadas mostraron en el centro de la
misma una mancha circular de color negro y color caf-oscuro, rodeada por un
fino halo clortico, la cual en pocos das cubri por completo la hoja, dejndola
con un aspecto deshidratado de color caf-oscuro para posteriormente
desprenderse del pseudobulbo (Figura 8). Probablemente por la ineficiencia
generada para la realizacin de la fotosntesis por las hojas, lo que provoca la
deshidratacin del tejido como lo reporta Romero (1996) en plantas jvenes de
palmas de coco.
a b
Figura 8. Plantas de Laelia autumnalis con sntomas de las enfermedad a)
inicio del sntoma, b) desarrollo de la enfermedad.
En la prueba de patogenicidad realizada en plantas de Oncidium
cavendishianum los sntomas se presentaron a los 4 meses de ser inoculadas
con la solucin de esporas de Pestalotia sp probablemente por el tipo de hoja
que presenta esta especie, ya que posee una cubierta cerosa que la cubre
totalmente que limita el avance del patgeno, y la manifestacin del sntoma la
infeccin empez a partir de la base de la planta, avanzando poco a poco hasta
cubrir por completo la hoja la cual se desprendi de su base (Fig. 9).
a b
Figura 9. Plantas de Oncidium cavendishianum con sntomas de la
enfermedad a) inicio del sntoma y b) desarrollo de le enfermedad.
De las plantas inoculadas se pudo reaislar el hongo Pestalotia sp que
present las mismas caractersticas morfolgicas, que las observadas en su
aislamiento inicial de esta manera se cumplieron con los postulados de Koch.
4.3 Efecto de fungicidas para el control de Pestalotia sp bajo condiciones
in vitro
La adicin de Cupravit, Manzate 200 e Interceptan 50 estimularon el
desarrollo del hongo, registrndose valores de crecimiento de micelio de (6.00,
5.44 y 5.60 cm) con respecto al de Benomyl 50 y Tecto 60 que tuvieron valores
de (3.69 y 3.61 cm) respectivamente al tercer da de iniciado el experimento
(Cuadro 5) y (Fig. 10)
Despus del cuarto da de evaluacin los fungicidas Tecto 60 y Benomyl
50 inhibieron el crecimiento de Pestalotia sp (3.61 y 3.69 cm) con respecto al
testigo (5.16 cm) (Cuadro 5).
Estos resultados, coinciden con los obtenidos en los trabajos de
investigacin de Jimnez (2007) y Negrete (2007), quienes trabajaron
enfermedades en plantas tropicales y encontraron que Tecto 60 y Benomyl 50
fueron los mejores fungicidas, ya que inhibieron el crecimiento in vitro de
Fusarium sp a partir del quinto da de establecido sus experimentos.
Los fungicidas Tecto 60 y Benomyl son productos de accin sistmica,
que requieren de un tiempo de reentrada a la planta de 24 y 12 horas
respectivamente.
Cuadro 5. Efecto de fungicida para el control de Pestalotia sp in vitro
Crecimiento (cm)
Fungicida 1 da 2 da 3da 4 da 5 da Cupravit 3.89 a 4.93 a 6.00 a 7.00 a 7.39 a
Benomyl 50 3.56 a 3.66 ab 3.69 b 3.69 b 3.69 b
Tecto 60 3.54 a 3.59 b 3.61 b 3.66 b 3.66 b
Manzate 200 3.80 a 4.64 ab 5.44 a 6.70 a 7.08 a
Intercaptan 50 3.80 a 4.66 ab 5.60 a 6.40 a 6.93 a
Testigo 3.36 a 4.23 ab 5.16 ab 6.00 a 6.69 a
0
1
2
3
4
5
6
7
8
1 2 3 4 5
Dias despus de la siembra
Cre
cim
ient
o (c
m)
CUPRAVIT PHBENOMYL 50TECTO 60MANZATE 200INTERCAPTAN 50TESTIGO
Figura 10. Efecto del tipo de fungicida para inhibir el crecimiento micelial in vitro
de Pestalotia sp
Los fungicidas Cupravit PH, Manzate 200 e Intercaptan 50 no inhibieron
el desarrollo in vitro del hongo Pestalotia sp, incluso algunas veces el micelio
tratado con estos fungicidas creci mas rpido (4.93, 4.64 y 4.66 cm) que el
tratamiento Testigo (4.23 cm).
TESTIGO CUPRAVIT PH BENOMYL 50
MANZATE 200TECTO 60 INTERCAPTAN 50
Figura 11. Inhibicin de Pestalotia sp por fungicidas a dosis medias
comparadas a los 5 das de establecido el experimento.
4.4 Evaluacin de medios de cultivo
El mximo desarrollo micelial del hongo Pestalotia sp (1.71 cm) se logr
en el medio Jugo de tomate-Agar a partir del primer da de establecido el
experimento, tendencia que mantuvo hasta el quinto da de la evaluacin
(Cuadro 6) momento en que se suspendi la medicin por haber llenado el
hongo la caja Petri con medio de cultivo. El hongo tuvo un crecimiento
estadsticamente similar en el medio PDA (1.55 cm) y en los medios Jugo de
tomate V8-Agar (1.62 cm), Avena-Agar (1.44 cm).
Al segundo da de la evaluacin en los medios de Harina de maz-Agar y
Orqudea-Agar se observ un crecimiento menor (2.30 y 2.10 cm), en
comparacin con el PDA. Este efecto se mantuvo hasta el quinto da en el caso
del medio de Orqudea-Agar (5.46 cm).
En el medio de cultivo Jugo tomate-Agar se obtuvo el mayor nmero de
acrvulos formados, los cuales se observaron desde los 11 das despus de la
inoculacin con el disco de micelio, mientras que en el medio de PDA no se
observ la formacin de estas estructuras.
Montiel y Avelar (2001), en sus trabajos de investigacin en guayabo
obtuvieron como resultado que el hongo Pestalotia sp cubre una caja Petri por
completo con medio de cultivo PDA en un tiempo de 15 das cuando stas se
incubaron a una temperatura de 22-26 C y que a temperaturas mayores de 30
C su crecimiento es muy lento.
Cuadro 6. Efecto del medio de cultivo para el crecimiento micelial in vitro de Pestalotia sp
Crecimiento (cm)
Medio cultivo
1 da 2 da 3da 4 da 5 da
Papa Dextrosa Agar 1.55ab 2.76b 3.60abc 4.88bc 6.40b
Jugo de verduras V8 Agar 1.63ab 3.05ab 4.38a 5.36ab 7.26a
Harina de Maiz Agar 1.41b 2.30c 3.40bc 4.55cd 6 .28b
Orquidea Agar 1.38b 2.10c 3.13c 4.04d 5.46c
Avena Agar 1.44ab 2.70b 4.15ab 5.73a 7.30a
Jugo de Tomate Agar 1.71a 3.33a 3.98abc 5.79a 7.08a
0
1
2
3
4
5
6
7
8
1 2 3 4 5
Dias despues de la siembra
Cre
cim
ient
o (c
m)
PDAV8HARINA DE MAIZORQUIDEAAVENAJUGO TOMATE
Figura 12. Efecto del medio de cultivo para el crecimiento micelial in vitro de
Pestalotia sp.
JUGO DE VERDURAS V8 PDA HARINA DE MAIZ
JUGO DE TOMATE ORQUIDEA AGAR AVENA AGAR
Figura 13. Crecimiento de Pestalotia sp en diferentes medios de cultivo a los 5
das de establecido el experimento.
V. CONCLUCIONES
El hongo Pestalotia sp es el agente causal de la mancha foliar en Oncidium cavendishianum y Laelia autumnalis.
Los conidios son de forma alargadas y multiseptados, de 3-5 clulas, la de los extremos son hialinas y las centrales oscuras, con dos a tres
apndices hialinas.
En pruebas de patogenicidad realizada en Laelia autumnalis esta present los sntomas propios de la enfermedad observados en campo y
en Oncidium cavendishianum el sntoma empez a partir de la base de
la planta, pero logrndose rescatar el hongo Pestalotia sp.
El fungicida Tecto 60 inhibi el desarrollo in vitro del hongo a partir del cuarto da de establecido el experimento.
El mejor medio de cultivo para el desarrollo del patgeno fue Jugo de tomate-Agar que a partir del primer da de establecido el experimento el
hongo Pestalotia sp desarroll mas rpido tendencia que se mantuvo
hasta el quinto da de la evaluacin, adems produjo gran cantidad de
estructuras reproductivas (acrvulos).
VI. LITERATURA CITADA
Agrios, G. N. 2002. Fitopatologia. 2 Edicin, 7 Reimpresin. Editorial Limusa.
Mexico. pp 420.
lvarez, R. E., M. G., Cabrera de A., N. T., Sosa de C. 1998. Manchas foliares
de la Hortensia (Hydrangea sp.) en el Nordeste de la Argentina.
http://www.unne.edu.ar/cyt/agrarias/a-042.pdf. (Consultado el 20 de
enero del 2007).
ngel, P. U., y M. E. ngel P. 2003. Efecto del medio de cultivo con electrolitos
y aceleradores del crecimiento comerciales sobre la respuesta
morfogentica de Laelia sp. y Oncidium sp. in vitro. In: X Congreso
Nacional de la Sociedad Mexicana de Ciencias Hortcolas, IX Congreso
Nacional y II Internacional de Horticultura Ornamental. Del 20 al 24 de
Octubre. Universidad Autnoma Chapingo, departamento de Fitotecnia.
Texcoco, Edo. de Mxico. pp: 176.
Arriaga, O., S. H. 2005. Evaluacin de Reguladores del Crecimiento, Sacarosa,
Sales Minerales y Medios Slidos y Liquido en la Micropropagacin de
Orqudea Laelia autumnalis. Tesis Profesional. Facultad de Agrobiologia
Presidente Jurez Uruapan, Michoacn, Mxico. Pp. 6-7.
Barnett, H. L. and Hunter B. B. 1998. Illustrated Genera of Imperfect Fungi.
Fourth Edition. Burgess Publishing Company. Minneapolis, Minnesota.
USA. Pp. 31 y 204.
Bigre, J. P., J. Claude M., M. Tharaud. 1990. Patologa de los cultivos florales y
ornamentales. Ed. Mundi-Prensa. 139 pp.
Cabrera, M. G., M. R. Galmarini., y E. Flachsland. 2007. Colletotrichum
gloeosporioides patgeno de orqudeas en el NE de Argentina. Facultad
de Cs. Agrarias UNNE. pp. 1-2.
Campos, A. J., T. del C. vila V., K. Vega V., S. Ponce M. 2005. Etiologa de la
enfermedades del ave de paraso Strelitzia reginae en Uruapan, Mich. In:
X Congreso Nacional y III Internacional de Horticultura Ornamental.
Guilln-Andrade, H., Lpez-Medina, J., Ramrez-Mandujano, C. A.,
Pedraza-Santos, M. E., y Rocha-Granados, M. C. (comps.). Del 4 al 7 de
Octubre. Facultad de Agrobiologia Presidente Jurez, Uruapan,
Michoacn, Mxico. 60 pp.
Esquivel, C. M. 2004. Etiologa de las enfermedades de la guayaba (Psidium
guajaba L.) en la regin de Uruapan, Michoacn. Tesis Profesional.
Facultad de Agrobiologa. Uruapan, Michoacn. 41y 49 pp.
Gonzlez, V. C. A., S. F. Valle, C. Juri M. 2002. Identificacin del patgeno que
causa el Tizn de las coniferas en Catamarca. Congreso Regional de
Ciencia y Tecnologa. Del 29 al 30 de Agosto. Universidad Nacional de
Catamarca, Argentina. pp: 1-3.
Jimnez, C. Ma. G. 2007. Etiologa y control in vitro de pudricin radical en
Ginger Alpinia purpurata. Tesis Profesional. Facultad de Agrobiologa.
Uruapan, Michoacn. pp.
Laguna, C. A., M. A. Rosales L., D. Escobedo L. 2005. Actualizacin del listado
orqudeoflorstico del municipio de Temascaltepec Estado de Mxico. In:
X Congreso Nacional y III Internacional de Horticultura Ornamental.
Guilln-Andrade, H., Lpez-Medina, J., Ramrez-Mandujano, C. A.,
Pedraza-Santos, M. E., y Rocha-Granados, M. C. (comps.). Del 4 al 7 de
Octubre. Facultad de Agrobiologia Presidente Jurez, Uruapan,
Michoacn, Mxico. 96 pp.
Lpez, A. G. 1978. Tcnica de uso comn en el manejo de hongos
fitopatogenos. Tesis de licenciatura. ENA: Chapingo, Mxico. pp: 76-86.
Malagon, Q. L. M., R. Salgado G. 2005. Micropropagacion de Phalaenopsis
Luchia lady (orchidaceae) por el cultivo de segmentos de hoja y tallo. In:
X Congreso Nacional y III Internacional de Horticultura Ornamental.
Guilln-Andrade, H., Lpez-Medina, J., Ramrez-Mandujano, C. A.,
Pedraza-Santos, M. E., y Rocha-Granados, M. C. (Comps.). Del 4 al 7
de Octubre. Facultad de Agrobiologia Presidente Jurez, Uruapan,
Michoacn, Mxico. 5 pp.
Menchaca, G. R., D. Moreno M. 2005. Micropropagacion de orqudeas
silvestres con potencial ornamental. In: X Congreso Nacional y III
Internacional de Horticultura Ornamental. Guilln-Andrade, H., Lpez-
Medina, J., Ramrez-Mandujano, C. A., Pedraza-Santos, M. E., y Rocha-
Granados, M. C. (Comps.). Del 4 al 7 de Octubre. Facultad de
Agrobiologia Presidente Jurez, Uruapan, Michoacn, Mxico. 7 pp.
Mrida, P. H. L., G. A., lvarez V. 2007. Diagnstico de las enfermedades en la
plantacin comercial de orqudeas del Centro Experimental Archila.
Facultad de Agronoma en la Universidad San Carlos de Guatemala. 2
pp.
Montiel, M. R. D. y J. J. Avelar. 2001. Etiologa de la enfermedad clavo del
guayabo. 5 Jornadas de Investigacin (trabajo: AP/UAGRO-06/006).
Universidad Autnoma de Zacatecas. 7 pp.
Murgua, G., J. 2006. Cultivo comercial de orqudeas. I Encuentro de
Floricultura Tropical. Facultad de Ciencias Biolgicas, Crdoba,
Veracruz. pp: 25-26.
Navarro, L. E. R., I. Gil V., E. V. Cruz S. P. y A. Bastida T. 2001. Botnica e
identificacin de orqudeas. Serie Agribot No. 6. Universidad Autnoma
Chapingo. Texcoco, Edo. De Mxico. 42pp
Negrete G. R. 2007. Etiologa y control in vitro de la pudricin radical en
heliconia Heliconia wagneriana Petersen. Tesis Profesional. Facultad de
Agrobiologa. Uruapan, Michoacn. 36 pp.
Romero, C., S. 1993. Hongos fitopatogenos. Universidad Autnoma Chapingo.
pp: 333-336.
Romero, C., S. 1996. Plagas y enfermedades de ornamentales. Primera
edicin. Universidad Autnoma Chapingo. pp. 160-165.
Salgado, G. R. 2007. Conservacin y Propagacin in situ y ex situ de las
orqudeas del Parque Nacional Barranca del Cupatitzio. 3er. Informe.
Sheehan, T. J. 1988. Introduccin a la floricultura. 1 Edicin. AGT, S.A. editor.
Departamento de Ciencia Hortcola de la Universidad del Estado de
California del Norte. Pp. 141-142.
Sosa de C., N. T., R. E., lvarez., M. G., Cabrera. 2003. Ocurrencia de
Pestalotia sp. causando lesiones necroticas en plantas de Jazmn
(Gardenia Augusta), en Corrientes Argentina.
http://www1.unne.edu.ar/cyt/2003/comunicaciones/05-agrarias/A019.pdf
(consultado en Enero del 2007).
*Tuite. 1969. Plant pathological methods (fungi an bacterial). Ed. Burgess.
Publis hing. Company-Minneapolis. Pp.
www.wp-m.com/uruapanturistico/index/uruapan/parquenacional.html
(consultado el 03 de diciembre del 2007)
VII. APNDICE
Cuadro 1A. Claves para identificacin de hongos imperfectos
Melanconiales
1b Conidios de 2 a varias clulas con septas transversales, no
filiformes
7b Conidios de tres a varias clulas
9a Conidios oscuros.
10a Conidios con apndices en clulas hialinas terminales.
11b 2 a 3 apndices apicales en el pice del conidio.Pestalotia
7
9
10
11
204
Cuadro 2A. Anlisis de varianza para el efecto del tipo de fungicida sobre el
crecimiento in vitro de Pestalotia sp durante el primer da de cultivo.
Fuente de variacin
GL SC CM F. CAL. P>F
Tratamiento Error Total r2CV
5 36 41 0.079747 18.59576
1.44285714 16.6500000018.09285714
0.288571430.46250000
0.62 0.6825
Cuadro 3A. Anlisis de varianza para el efecto del tipo de fungicida sobre el
crecimiento in vitro de Pestalotia sp durante el segundo da de cultivo.
Fuente de variacin
GL SC CM F. CAL P>F
Tratamiento Error Total r2CV
5 36 41 0.310069 19.16378
10.9074404824.2700000035.17744048
2.181488100.67416667
3.24 0.0163
Cuadro 4A. Anlisis de varianza para el efecto del tipo de fungicida sobre el
crecimiento in vitro de Pestalotia sp durante el tercer da de cultivo.
Fuente de variacin
GL SC CM F. CAL P>F
Tratamiento Error Total r2CV
5 36 41 0.518812 19.71103
36.4374404833.7950000070.23244048
7.287488100.93875000
7.76 < .0001
Cuadro 5A. Anlisis de varianza para el efecto del tipo de fungicida sobre el
crecimiento in vitro de Pestalotia sp durante el cuarto da de cultivo.
Fuente de variacin
GL SC CM F. CAL P>F
Tratamiento Error Total r2CV
5 36 41 0.634922 20.23231
79.6897619 45.8214286 125.5111905
15.93795241.2728175
12.52 < .0001
Cuadro 6A. Anlisis de varianza para el efecto del tipo de fungicida sobre el
crecimiento in vitro de Pestalotia sp durante el quinto da de cultivo.
Fuente de variacin
GL SC CM F. CAL P>F
Tratamiento Error Total r2CV
5 36 41 0.657764 20.96899
106.167583355.2392286 161.4068119
21.23351671.5344230
13.84 < .0001
Cuadro 7A. Anlisis de varianza para el crecimiento in vitro de Pestalotia sp
durante primer da de evaluacin.
Fuente de variacin
GL SC CM F. CAL P>F
Tratamiento Error Total r2CV
5 17 22
0.353437500.280625000.63406250
0.070687500.01559028
4.53 0.0075
Cuadro 8A. Anlisis de varianza para el crecimiento in vitro de Pestalotia sp
durante segundo da de evaluacin.
Fuente de variacin
GL SC CM F. CAL P>F
Tratamiento Error Total r2CV
5 17 22 0.901255 6.040477
4.147146740.454375004.60152174
0.829429350.02672794
31.03 < .0001
Cuadro 9A. Anlisis de varianza para el crecimiento in vitro de Pestalotia sp
durante tercer da de evaluacin.
Fuente de variacin
GL SC CM F. CAL P>F
Tratamiento Error Total r2CV
5 17 22 0.624977 10.48154
4.387065222.632500007.01956522
0.877413040.15485294
5.67 0.0030
Cuadro 10A. Anlisis de varianza para el crecimiento in vitro de Pestalotia sp
durante cuarto da de evaluacin.
Fuente de variacin
GL SC CM F. CAL P>F
Tratamiento Error Total r2CV
5 17 22 0.900895 4.847007
9.17933877 1.00979167 10.18913043
1.835867750.05939951
30.91 < .0001
Cuadro 11A. Anlisis de varianza para el crecimiento in vitro de Pestalotia sp
durante quinto da de evaluacin.
Fuente de variacin
GL SC CM F. CAL P>F
Tratamiento Error Total r2CV
5 17 22 0.906580 3.709073
9.88625000 1.01875000 10.90500000
1.977250000.05992647
32.99 < .0001
Yg=/sdVOa\-I6c