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19/10/2012
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Tecnologías para incrementar la eficiencia
reproductiva en ovinos tropicales
Ivette Rubio G. et al.
CEIEGT FMVZ UNAM
19 Octubre 2012
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Contenido
I. Introducción
II. Evaluación de la Salud Reproductiva del Semental
III. Sincronización
IV. Congelación de Semen
V. Inseminación Artificial
VI. Transferencia de Embriones
Desarrollo de biotecnologías reproductivas
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Preparación es la clave del ¡Éxito!
Animales
Nutrición
Salud
Facilidades
Personal
Partos
Empadre
Controlado Monta dirigida
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Evaluación de salud reproductiva
Examen físico general
Examen aparato reproductor
Evaluación de semen
Bagley C. 1997
Examen físico y aparato reproductor de sementales
Parámetro n Promedio Desviación estándar
Condición corporal (1-5)
Russel A. 1969
22 3.1 0.99
Circunferencia escrotal (cm)
22 32.1 2.76
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Evaluación del semen
Resumen evaluación de semen
Parámetro n Promedio Desv. std
Color/Densidad 22 cremoso -------
Volumen (ml) 22 0.8 0.39
Motilidad masa 22 3.4 0.85
Motilidad individual (%)
22 74.8 13.14
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Evaluación de salud reproductiva
Examen físico general
Examen aparato reproductor
Evaluación de semen
Bagley C. 1997
Examen físico y aparato reproductor de sementales
Parámetro n Promedio Desviación estándar
Condición corporal (1-5)
Russel A. 1969
22 3.1 0.99
Circunferencia escrotal (cm)
22 32.1 2.76
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Evaluación del semen
Resumen evaluación de semen
Parámetro n Promedio Desv. std
Color/Densidad 22 cremoso -------
Volumen (ml) 22 0.8 0.39
Motilidad masa 22 3.4 0.85
Motilidad individual (%)
22 74.8 13.14
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Consistencia o apariencia del semen
VALOR CONSISTENCIA Cantidad* Rango
5 Cremosa espesa 5.00 4.5-6.00
4 Cremosa 4.00 3.5-4.5
3 Cremosa tenue 3.00 2.5-3.5
2 Lechosa 2.00 1.5-2.5
1 Nebulosa 0.7 0.3-1.0
0 Clara (acuosa) Insignificante
*Número de espermatozoides (X109) por ml.
Nota:El semen lechoso, nebuloso o acuoso no debe usarse para IA
Motilidad en masa
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Motilidad individual y conteo espermático
Tinción Eosina/nigrosina para detectar espermatozoides vivos y muertos
En microscopio de luz
Espermatozoides muertos en tinción purpura (flechas),
Espermatozoides vivos son azul grisáceo.
Manchas purpura oscuras son gránulos de tinción
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Microscopía con luz fuorescente
Nota.2 flechas blancas muestran los mismos espermatozoides muertos de
la transparencia anterior
Espermatozoides vivos y muertos usando
microscopía fluorescente
Las fluorescencias rojas y doradas indican
Espermatozoides muertos, mientras que los vivos
mas fáciles de detectar que en la tinción purpura
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Manejo semen fresco
Congelación de semen
Llenado de pajillas
Refrigeración (2 h)
• 5oC 2oC/3min
• Fase de equilibrio 45 – 60 min
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Características semen congelado
ID Semental
Volumen eyaculado
(ml)
Motilidad individual
(%)
Concentración espermática
No. de dosis
Volumen total (ml)
Volumen diluyente requerido
(ml)
9 – 8 2 80 8,448 x 106 84.48 21.12 17.12
6 – 10 3 80 14,256 x 106 142.5 35.64 29.64
50 – 10 1.7 85 8,539.9 x 106 85.39 21.34 17.94
Ineminación artificial
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Ventajas de la IA • Mejora genética ( uso de sementales probados,
introducción de otro genotipo).
• Fácil transporte de material genético.
• Aumento de la eficiencia reproductiva (de un
eyaculado se pueden obtener 20-35 dosis con
semen fresco diluido y aprox 10 para semen
congelado)
VENTAJAS IA
• Reducción de sementales en el rebaño (bajan costos manutención).
• Prevención de enfermedades.
• Utilización más adecuada de registros.
• Utilización de programas reproductivos.
• Facilidad de pruebas de progenie
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¿Desventajas IA? • Se necesita de personal
calificado y experto (es
desventaja?).
• Dependiendo del método
de sincronización la
experiencia del
inseminador se pueden
obtener resultados de
fertilidad bajos.
• Es un método costoso
cuando se realiza IA
intrauterina
• Se puede realizar la
técnica con semen fresco,
refrigerado y congelado
Factores a considerar
Anatomía (disposición del cervix).
Procesos de dilución-conservación del semen.
Vía de aplicación del semen.
Tipo de semen usado (fresco, refrigerado, congelado).
Tipo de presentación del semen (pellet o pajilla).
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ANATOMIA DEL CERVIX
• No tiene una forma en especifico siendo la más usual la llamada forma de “palomita de maíz”
• Diámetro aproximado de 1 cm, una consistencia dura (tejido conjuntivo rico en fibras colágenas).
• 6 a 7 “anillos” que en realidad son pliegues longitudinales y se inclinan caudalmente adquiriendo una forma sinuosa.
Cuerpo del útero
Cuernos uterinos
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• en hembras jóvenes y no gestantes se localiza en el piso de la pelvis y en hembras gestantes por lo general se localiza por delante del borde de la pelvis .
• El color del cérvix es rosáceo y solo adquiere una ligera coloración blanquecina cercano a la ovulación
Cervix en forma de
“palomita de maíz”
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• Cervix es una barrera inicial al ascenso de los spz.
• Por la disposición de los pliegues no pasa la pipeta de IA.
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• Se realiza la IA a tiempo fijo y en el menor tiempo ya que la viabilidad disminuye.
• Volumen por dosis 0.05 a 0.1 ml con por lo menos 100 millones de spz vivos.
Técnicas de IA
• Inseminación cervical.
• Inseminación transcervical.
• Inseminación intrauterina.
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IA cervical y
transcervical
• Se coloca a la hembra en un potro o una prensa de contención
Inseminación artificial transcervical
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INSEMINACIÓN ARTIFICIAL EN
PEQUEÑOS RUMIANTES
Dpto de Reproducción FMVZ –UNAM
Técnicas de IA
• IA cervical
• IA transcervical
• IA intrauterina.
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INSEMINACIÓN INTRA UTERINA
• Inician en 1967 Salamon y Lighfoot depositaron el semen descongelado en útero por laparotomia.
• En 1982 Killen y Caffery realizaron las primera IA usando laparoscopia.
• Se requieren 40 millones de spz en 0.1ml
• Para realizar esta técnica se realiza un programa de sincronización de estros en la hembras.
• Dietadas de agua y alimento pro lo menos 12 hrs antes de la técnica.
• Se requiere equipo y personal capacitado.
• Se utiliza una anestesia disociativa (rompun-ketamina),0.01g/kg y 2.0mg/kg respectivamente.
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CAMILLAS PARA REALIZAR LA IA INTRAUTERINA
Se rasura y desinfecta el área anterior a la ubre
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Procedimiento quirúrgico
Corte de piel
Introducción aguja Veress
Colocación trocar-cánula
• Se introduce un gas a cavidad abdominal antes de introducir los trocar-cánula.
• El gas puede ser CO2 o aire filtrado para crear un pneumoperitoneo.
• se inclina a la oveja en un ángulo de 45° para que con posición y gas se Cree un espacio virtual y se desplacen las vísceras.
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Se introduce el
aspic se
deposita la mitad de
la dosis
en cada cuerno
Se corrobora el libre
movimiento
de la aguja, se comprueba
que. no se forme una
protuberancia
Se retiran los instrumentos y se procede a sacar el aire
de cavidad y a suturar piel
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Implementación de Tecnologías Reproductivas en un Rebaño de Ovejas Pelibuey en el Trópico
Sincronización de estros
Objetivo General
Implementar la sincronización de estros y
la inseminación artificial en un rebaño de
ovejas Pelibuey en el trópico
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Objetivos Específicos
Evaluar estado reproductivo de las ovejas previo
a la sincronización.
Medir la respuesta a la sincronización.
Estimar la tasa de gestación de la técnica de I.A.
utilizando semen fresco y semen congelado.
Introducción
I.A. transcervical con semen congelado se obtienen bajos porcentajes de gestación debido al proceso de congelación del semen
(Donovan A. et al 2004)
Estructura del cérvix
(O’Hara L. et al 2010)
(Senger, 2003)
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Tratamientos para sincronizar
• Uso de Prostaglandina F2α o sus análogos para lisar el CL ( estro 48Hrs después de la aplicación)
• PG a todos los animales los que no entran repetir la dosis 11 días después.
Sincronización con progesterona y progestagenos
• Pueden utilizarse en cualquier etapa del ciclo estral
• Alta eficiencia • Baja Fertilidad
• Productos:
▫ Progesterona
▫ Norgestomet
▫ Acetato de Fluorogestona
▫ Acetato de Medroxiprogesterona
▫ Acetato de Melengestrol
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Material y métodos
n= 50 ovejas Pelibuey
• multíparas: 2 - 7 años
Condición corporal 2.5 - 3.5
Peso promedio 40.93 kg
Asignación 2 grupos:
• n=25 semen fresco
• n=25 semen congelado
Material y métodos
Sincronización de estro
• Cronipres® CO
• 160 mg de progesterona por
dispositivo intravaginal
• eCG 100 UI (Folligon®)
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Material y Métodos
Muestras de sangre
• Suero
• Concentraciones de progesterona (P4)
Radioinmunoensayo (RIA)
• COAT–A–COUNT® Progesterone, Siemens
• Laboratorio Endocrinología FMVZ, UNAM
Pulido A. et al. 1991
Protocolo de sincronización
muestra sangre
-21 -18 -15 -2 I.A. 7 9 13 17 21 25 35
Inserción Cronipres®CO
Retiro Cronipres®CO Aplicación 100 UI eCG
55-58 h post retiro
12 Días
Diagnóstico de gestación por Ultrasonido
Días
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Resultados
Concentraciones progesterona ≥ 1.0 ng/ml en 2 mediciones consecutivas
• Ciclicidad
Concentración de P4 sérica en ovejas Pelibuey previo a la sincronización
0.00
1.00
2.00
3.00
4.00
5.00
6.00
-21 -18 -15 -2
ng
/m
l
Días
Inserción dispositivo Cronipres®CO
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Respuesta a la sincronización
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
-21 -18 -15 -2 IA 7
ng
/ m
l
Días
ID 30-7
ID 213-9
Cronipres®CO
Resultados por tipo de semen
Ciclando previoa sincronización
Respuesta a lasincronización
Retorno a estro Tasa degestación
Semen Congelado
Semen Fresco
100%
76% 68%
80%
68%
20%
32%
n=25 n=25
n=19
n=17
n=20
n=17
n=5
n=8
Prueba X2 >0.333
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0.00
1.00
2.00
3.00
4.00
5.00
6.00
7.00
8.00
9.00
-21 -18 -15 -2 IA 7 9 13 17 21 25
ng
/m
l
Días
Gestantes
Vacías
Concentración de P4 sérica en ovejas durante el programa reproductivo
Cronipres®CO
Resultados generales del programa reproductivo
Ciclando previo
a lasincronización
Respuesta a la
sincronización
Retorno a estro Tasa de
gestación
100%
72% 74%
26%
n= 50
n= 36 n= 37
n= 13
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Discusión
Respuesta a la sincronización
Autor Producto Raza Respuesta
(%)
Cuevas EA. et al. Crestar® Pelibuey 100
Hernández OJ. Esponja MPA Pelibuey 100
Ozyurtlu N. et al. CIDR® Rambouillet 90
Carballo E. et al. 2008 Cronipres Corriedale 100
CEIEGT Cronipres Pelibuey 72
Discusión
Porcentaje de gestación
Transcervical semen fresco
Transcervical semen
congelado
Laparoscopía semen
congelado
Carballo E. et al. 2008 (TF - 48H) 58 - -
Donovan A. et al. 2004 (TF - 57h) 70 44
Rivera R. 1997 (12h post celo) 74.5 - -
Hiwasa M. et al. 2009 (Celo) 5.5 0 72.2
Domínguez R.et al. 2007 (TF – 48h) 29.4 20 16.6
CEIEGT - 2012 (55-58h) 32 20 -
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Conclusiones
Implementación de la técnica de I.A. en
“El Cenzontle”.
Respuesta aceptable a la sincronización.
Tasa de gestación baja con semen congelado.
Revisión del uso del dispositivo “Ramgo”
TRANSFERENCIA DE EMBRIONES
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Objetivo de la transferencia de embriones
Aumentar la capacidad reproductora de
hembras de gran valor genético
Disminuye el intervalo generacional
Recuperación de hembras de elevado valor
genético (edad, accidentes)
Conservación de diversidad genética.
Animales en peligro de extinción
Intercambio de material Genético
APARTE DE LAS HEMBRAS SELECCIONAR
MACHOS GENETICAMENTE SUPERIORES
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TÉCNICA DE TRANSFERENCIA SE
REQUIERE: • Técnica compleja
• Se requiere personal muy calificado
• Buenas instalaciones (para los animales y laboratorio etc)
• Elevado costo ( hormonas, medicamentos, honorarios, equipo de trabajo etc)
Selección de animales
• DONADORA ▫ Merito genético
Pedigree Sin defectos genéticos Conformación superior Habilidad de transmitir
características Comportamiento
productivo y reproductivo Alta producción Sin distocias Sin problemas reproductivos
Otros 60d posparto Vacunada Condición corporal 3.5
• RECEPTORA ▫ Bajo mérito genético
▫ Fértiles
▫ 5-10 años de edad (depende
la especie)
▫ Buena condición corporal y talla
▫ Sanas
▫ Vacunadas
▫ Sin enfermedades abortivas
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Donadora
Genéticamente superior
Receptora
Genética “estandar”
Superovulacion y
sincronización
Del estro
Sincronización del estro
Aplicación eCG
Estros y servicio
Transferencia embriones
Y revisión de CL
Colecta de embriones
Estro
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TÉCNICA DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES
SUPEROVULACIÓN INSEMINACIÓN ARTIFICIAL o
MONTA NATURAL (DONADORA
OBTENCIÓN DE LOS EMBRIONES
(DONADORA)
Transferencia a la receptora
O congelamiento de los embriones
Laparoscopía en ovinos
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Tecnologías para incrementar la eficiencia
reproductiva en ovinos tropicales
Ivette Rubio Gutiérrez
CEIEGT FMVZ UNAM
ivetterubio@gmail.com
Tel oficina: 232 3243941 ext. 120