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Validación y verificación de métodos de examen cuantitativos
Ignacio Reyes Ramírez
entidad mexicana de acreditación, a.c.
Temas selectos de Calidad en Serología
(aplicación en el banco de sangre)
Introducción
• Se describirán los puntos a considerar para la validación y verificación de los
procedimientos de examen cuantitativos, para el cumplimiento y evaluación del punto
5.5.2
de la norma NMX‐EC‐15189‐2008.
• Conforme a las directrices establecidas en la “Guía para la validación y la verificación de los
procedimientos de examen cuantitativos empleados por el laboratorio clínico”.
Alcance de la Guía
• La deben aplicar los laboratorios clínicos que se encuentran en alguna etapa del proceso de acreditación ante la entidad mexicana de
acreditación, a.c.
a todos los procedimientos de examen cuantitativos del alcance de la
acreditación
Descripción
• Ya que existen diversos tipo de métodos analíticos
disponibles en el mercado.
• Es importante que el laboratorio evalúe
los diferentes métodos y seleccione aquel que mejor se adecue a las necesidades y recursos.
Validación
• Se define como:• La Confirmación mediante el suministro de
evidencia objetiva de que se han cumplido los requisitos del método para una
utilización o aplicación especifica prevista. (NMX‐CH‐152‐IMNC‐2005)
• Los datos de la validación del método
los informa el fabricante en sus
instructivos y estos pueden comprender
por su aplicación:
• Linealidad.• Precisión.• Veracidad.• Limite de detección.• Selectividad.• Sensibilidad analítica.• Intervalo de trabajo.• Especificidad analítica.• Incertidumbre.
• Si se utilizan métodos desarrollados por el
laboratorio o alguno fue modificado, se
debe realizar la validación completa y
presentar las evidencias
correspondientes.
• Linealidad.• Precisión.• Veracidad.• Limite de detección.• Selectividad.• Sensibilidad analítica.• Intervalo de trabajo.• Especificidad analítica.• Incertidumbre.
• La validación
comprueba la aptitud de los procedimientos de examen
y refleja las
condiciones reales de la aplicación de los mismos.
Verificación
• La confirmación mediante la aportación de evidencia objetiva de que se han cumplido los
requisitos especificados para un método. (NMX‐CC‐9000‐IMNC‐2005)
• La verificación consiste en evaluar el desempeño del método
para demostrar que
cumple con los requisitos para el uso previsto, que fueron especificados como resultado de
su validación. (NMX‐CH‐152‐IMNC‐2005)
Parámetros de desempeño
• El laboratorio debe realizar la verificación
de los métodos y evidenciar si cumplen
con las características de desempeño en las
condiciones del laboratorio.
• Linealidad.• Precisión.• Veracidad.• Incertidumbre.
Evaluación de los Parámetros
• Linealidad • Evaluar el intervalo analítico del método
en el laboratorio.
• El comportamiento lineal.
• La verificación debe tomar en cuenta los puntos de decisión
clínica.
• Precisión.• Valor de la magnitud.
• Estimación del valor del mensurando.
• Error de medida (aleatorio y
sistemático).
• Veracidad.• Concordancia entre la
media aritmética y el valor verdadero o
aceptado como referencia.
• Error sistemático (sesgo).
• Error sistemático.
Media que resulta de un número infinito de mediciones del mismo
mensurando, efectuado bajo condiciones de repetibilidad, menos un valor verdadero del mensurando.
(NMX‐Z‐055‐IMNC)
• Exactitud de medición.
proximidad de la concordancia entre el resultado de una
medición
y un valor verdadero del mensurando. (NMX‐CH‐152‐IMNC‐2005)
EXACTITUD
ERROR DE MEDIDA
PRECISIÓN VERACIDAD
ERROR ALEATORIO ERROR SISTEMATICO
Relación entre los distintos tipos de error y los correspondientesconceptos cualitativos
• Incertidumbre. • Intervalo dentro del cual se espera
que se encuentre la cantidad
medida, teniendo en cuenta todas
las fuentes de error.
• Incertidumbre estándar (u).
1 DS
• Incertidumbre expandida (U).
U= u
x k
Incertidumbre Combinada (Uc).
Error cuadrático medio (ECM).
• Incertidumbre de medición.
Parámetro asociado al resultado de una medición que
caracteriza la dispersión de los valores que podrían razonablemente, ser atribuidos al
mensurando. (NMX‐CH‐152‐IMNC‐2005)
Aplicación de la verificación
• ObjetivoVerificar el desempeño del método analítico
para la cuantificación de Ac. úrico
en un equipo automatizado conforme a lo
establecido en la Guía de Validación de métodos cuantitativos.
Características del reactivo
Intervalo Biológico de Referencia:2,0 a 7,0 mg/dL
(hombre).
2,0 a 5,0 mg/dL
(mujeres).Reproducibilidad:Nivel: 3,7 mg/dL, DS: ± 0,23 mg/dL, CV%: 0,61Nivel: 6,2 mg/dL, DS: ± 0,37 mg/dL, CV%: 0,60Nivel: 10,0 mg/dL, DS: ± 1,60 mg/dL, CV%: 1,60Recuperación:Entre 97 a 101 % para un nivel de Uricemia
de 10
mg/dL.
Límite de detección:
En espectrofotómetro el estándar de 10,0 mg/dL proporciona una lectura aproximada de 0,290
D.O.
Lo que significa que el cambio mínimo de concentración detectable en esas condiciones
para 0,001 D.O. será
aproximadamente de 0,03 mg/dL.
Linealidad:
La reacción es lineal hasta 20 mg/dL
Linealidad
VERIFICACION DE LA LINEALIDAD DEL AC. URICO
No. Dilución %
Concentración minima y maxima (mg/dL)
Valor obtenido
mg/dL
Valor Teorico (X)
mg/ dL Sesgo % Error
1 0 20 17.83 20 2.17 0.11
2 25 8.66 10 1.34 0.13
3 50 4.57 5 0.43 0.09
4 75 2.28 2.5 0.22 0.09
5 100 1.25 1.21 1.25 0.04 0.03
Promedio 0.08
Grafico de Linealidad
1.21 2.284.57
8.66
17.83
0.00
5.00
10.00
15.00
20.00
0 20 40 60 80 100 120
Dilución
[ ] m
g/ d
L A
c. U
rico
Ensayo de Linealidad
Datos de la
Correlación Lineal Regresion LinealValor obtenido
mg/dL
Constante [A] 0.060
coeficiente de regresion [b] 0.884
coeficiente de correlación [r] 0.999
coeficiente critico de correlacion [r2] 0.999
Ecuación de la recta y = (0.884)x + (0.60)
r2 = 0.999
Grafico de Linealidad
0.00
5.00
10.00
15.00
20.00
0 5 10 15 20 25
Valor asignado [ ] mg/dL Ac. Urico
Valo
r ob
teni
do [
] m
g/dL
Ac
. Uri
co
Ensayo de Linealidad
y = (0.884)x + (0.60)r2 = 0.999
Criterios de aceptabilidad
• Calcular la pendiente (1) y la ordenada al origen (0).
• Comparar el sesgo o el porcentaje de error para cada dilución y comparar con
el fabricante.
• Tomar la decisión de aceptar o rechazar.
Decisión
• El método analítico en las condiciones del optimas del laboratorio presenta un rango lineal confiable de 1,12 a 17,83 mg/dL.
• El coeficiente de correlación lineal ( r2) de 0,999
lo que indica que el intervalo
evaluado, la función de calibración es lineal.
VERIFICACION DE LA LINEALIDAD DEL AC. URICO
No.Dilución
% Valor 1 Valor 2 Valor 3 Media DS1 0 17.50 18.00 18.00 17.83 0.242 25 8.50 9.00 8.50 8.66 0.243 50 4.50 4.70 4.50 4.57 0.094 75 2.30 2.25 2.30 2.28 0.025 100 1.25 1.20 1.17 1.21 0.03
Promedi o 0.08
• Al comparar la desviación estándar de cada dilución se observa un promedio de 0,08.
• El % Error no supera el 0,08 %.• Por lo que el rango evaluado para el método
es lineal según lo establecido por el fabricante, ya que a concentraciones bajas
permite una desviación de ± 0,23 mg/dL y altas a ± 1,60 mg /dL.
Precisión
• Suero Control de Ac. Úrico de 5,25 y 9,01
mg/dL.• 20 datos corrida
intradía.• Se calcula:
mediadesviación estándar% del coeficiente de
variación
No. de Lectura
Ac. Urico (mg/dL) Normal
Ac. Urico (mg/dL) Patologico
Valor Asignado 5.25 0.91
x 5.1587756 8.98855357
DS 0.082078268 0.11357817
CV% 1.591041645 1.26358669
%Error relativo 1.737607617 0.23802924
%Recobro 98.26239238 99.7619708
• De acuerdo con CLIA para imprecisión intraserial o intradía, la DS obtenida debe ser
igual o menor a ¼ del Error Total permitido.• Para Ac. Úrico el error total permitido ± 5%.• DS Intradía ≤
0,25 ET, ≤
1,25 %
• SustituyendoSuero Normal: 0,082 ≤
1,25%
Suero Patológico: 0,113 ≤
1,25 %
Veracidad
• La veracidad del método se puede estimar por medio del
error relativo.
% de Error relativo = [ Valor real – Valor de la medición
] x 100
Valor real• Criterio:
El valor del error relativo sea menor o igual al reportado.
Resultados:Suero Normal: 1,73 %Suero Patológico: 0,23 %
La veracidad del método se puede estimar por medio del calculo del porcentaje de recuperación.
% Recuperación = [___Valor obtenido___] x 100Valor de referencia
Criterio:El % de recuperación sean menor o igual al
reportado por el fabricante.
Resultados:Intervalo del fabricante de 97 al 101 %
Suero Normal: 98,26 %Suero Patológico: 99,76 %
Incertidumbre
• Método enzimático para la cuantificación de ácido úrico espectrofotométrico con uricasa. Empleando un calibrador con un valor de 10 ± 0.005 mg/dL con un factor de cobertura k = 2 para un nivel de confianza del 95%.
Componentes de la incertidumbre
• Variabilidad premetrológica.
• Incertidumbre del valor del calibrador.
• Magnitudes influyentes endógenas.
• Imprecisión interdiaria.
Variabilidad premetrológica
• El conjunto de actividades realizadas desde la toma de la muestra hasta que la muestra de
suero esta lista para la medición provoca un coeficiente de variación premetrológica de
0,8 %. Esta variabilidad aplicada al resultado obtenido (5,25 mg/dL) corresponde a una
incertidumbre estandar de 0,04 mg/dL.
Incertidumbre del valor del calibrador
• El valor del calibrador es de 10 mg/dL y la incertidumbre expandida es de 0,005 mg/dL.
Por lo tanto, la incertidumbre estándar relativa del valor asignado al calibrador es
0.05 %, que aplicado al resultado obtenido (5,25 mg/dL) corresponde a una
incertidumbre estándar de 0,002 mg/dL.
Magnitudes influyentes endógenas
• Según el fabricante de los reactivos el criterio para aceptar que una concentración de
bilirrubinas, ácido ascórbico o bromuro de hioscina en el plasma produzca una interferencia
significativa es que no altere el valor del mensurando en ± 10 %.
• Los posibles cambios del valor verdadero del mensurando estarán en el intervalo [0%; 10%] ó
[‐10%; 0%], aunque es más probable que esté más cerca de 0% que del 10 % ó del ‐0%.
Considerando una distribución triangular rectangular: u = [(b‐a)2/18]0,5
donde a y b son, respectivamente, los limites inferior y superior del intervalo; en este caso:
u = [ (10‐0)2/18] 0,5
= 2,4 %
que aplicado al resultado de 5,25 mg/dL, corresponde a 0,126 mg/dL; y como esto es
aplicable a tres magnitudes influyentes:
Uc
= [ 3 X (0,126 mg/dL)2
]0,5 = 0,027 mg/dL
Imprecisión interdiaria
• Este procedimiento de medida tiene un comportamiento heterocedástico con un
coeficiente de variación metrológico, aproximadamente constante a lo largo del
intervalo de medida, igual al 1,6 %. Esta imprecisión interdiaria aplicada al resultado
5,25 mg/dL y expresada como incertidumbre estándar, corresponde a 0,08 mg/dL.
Estimación de la incertidumbre
• uc
= (0,042
+ 0,0022 + 0,0272
+ 0,082)0,5 = 0,047 mg/dL
• U = uc
x k = 0,047 mg/dL x 2 = 0,094 mg/dL
• Resultado:5,25 ±
0,094 mg/dL
Intervalo:
5,15 a 5,34 mg/dL
Datos de la verificación
Verificación del Método enzimático de uricasa para la determinación de ácido úrico.
• Linealidad:El método es lineal de 1,2 a 17.8 mg/dL
• Precisión:Suero Normal: DS = 0,08; CV = 1,59 %
Suero Patológico: DS = 0,11; CV = 1,26 %
• Veracidad:Error Relativo
Suero Normal: 1,73 %
Suero Patológico: 0,230 %
Recuperación
Suero Normal: 98,26 %
Suero Patológico: 99,76 %
• Incertidumbre:
U = 0,094 mg/dL
Resultado de la muestra:
5,25 ±
0,094 mg/dL
Intervalo:
5,15 a 5,34 mg/dL
Criterios de evaluación de la norma NMX‐EC‐15189‐IMNC‐ 2008 / ISO 15189:2007
MP-FE009-00Entrada en vigor 2009-05-08