Post on 25-Sep-2018
ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
“EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE LAS HOJAS Y
FRUTOS DE LA FEIJOA (Acca sellowiana)”
TESIS DE GRADO
PREVIA LA OBTENCIÓN DEL TÍTULO DE
BIOQUÍMICO FARMACÉUTICO
PRESENTADO POR
MAYRA GARDENIA CARVAJAL AGUILAR
TUTOR
Dra. SUSANA ABDO
RIOBAMBA – ECUADOR
2015
DEDICATORIA
“El éxito se logra mediante el deseo de superación, la constancia y el no desanimarse nunca;
convirtiendo cada paso en una meta y cada meta en un paso”.
A mis padres Wilson y Blanca quienes son el pilar fundamental en mi vida, con su amor,
comprensión y apoyo incondicional que supieron motivarme para seguir siempre hacia adelante.
A mis hermanos Maricela y David, por entenderme, por no dejarme desfallecer, y así poder llevar
acabo cada meta trazada.
A mis sobrinos Mateo y Salome quienes con risas y travesuras me dan mucha felicidad y llenan de
alegría mi vida.
A toda mi familia le dedico este un escalón más de éxito en mi vida de muchos que vendrán.
AGRADECIMIENTO
A Dios por haberme dado la vida, por iluminarme en todo momento y permitirme cumplir una
etapa más en mi formación profesional.
A mis padres porque gracias a sus esfuerzos, sus consejos y sobre todo su infinita paciencia he
logrado culminar mi carrera profesional.
A la Escuela Superior Politécnica de Chimborazo por abrir sus puertas hacia el conocimiento
científico, al personal docente por prepararnos para un futuro competitivo no solo como los
mejores profesionales sino también como mejores personas.
A mi Directora de tesis la Dra. Susana Abdo quien con su gran calidad humana y sabios
conocimientos ha sido la guía idónea en el desarrollo y culminación de mi tesis.
Al Dr. Carlos Pilamunga colaborador de tesis, por su tiempo, y su excelente colaboración.
Al Dr. Iván Samaniego por sus ideas y recomendaciones respecto a esta investigación.
A todos mis amigos con quienes he compartido risas, tristezas y enojos por haber hecho de estos
largos años de estudio una vivencia inolvidable.
A todos quienes de una u otra forma aportaron su granito de arena, brindándome sus
conocimientos y palabras de aliento para seguir siempre adelante.
ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE
CHIMBORAZO
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
El Tribunal de Tesis certifica que: El trabajo de investigación: “EVALUACIÓN DE
LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE LAS HOJAS Y FRUTOS DE LA
FEIJOA (Acca sellowiana)”, de responsabilidad de la señorita egresada Mayra
Gardenia Carvajal Aguilar ha sido prolijamente revisado por los Miembros del
Tribunal de Tesis, quedando autorizada su presentación.
FIRMA FECHA
Dra. Nancy Veloz
DECANA FAC. CIENCIAS __________________ _______________
Dra. Anita Albuja
DIRECTOR ESCUELA BIOQUÍMICA Y FARMACIA __________________ _______________
Dra. Susana Abdo
DIRECTORA DE TESIS __________________ _______________
Dr. Carlos Pilamunga
MIEMBRO DEL TRIBUNAL __________________ _______________
BQF. Fausto Contero
MIEMBRO DEL TRIBUNAL __________________ _______________
Ab. Bertha Quintalla
COORDINADOR
SISBIB – ESPOCH __________________ _______________
NOTA DE TESIS __________________
Yo, Mayra Gardenia Carvajal Aguilar, soy
responsable de las ideas, doctrinas y resultados
expuestos en esta Tesis; y el patrimonio
intelectual de la Tesis de Grado, pertenece a la
ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE
CHIMBORAZO.
________________________________
MAYRA GARDENIA CARVAJAL AGUILAR
RESUMEN
Se evaluó la actividad antioxidante de las hojas y frutos de la Feijoa (Acca sellowiana.
Berg) de la Provincia Tungurahua, cantón Patate. La investigación se desarrolló en los
Laboratorios de la Facultad de Ciencias de la Escuela Superior Politécnica de Chimborazo
y en los Laboratorios de Servicios de Análisis e Investigación en Alimentos de la Estación
Experimental Santa Catalina del INIAP–Quito.
El contenido de fenoles totales y la actividad antioxidante de los extractos alcohólicos y
acuosos de las hojas y los frutos de la Feijoa se determinó a través de los ensayos de
decoloración del radical ABTS (2,2‐azinobis (3‐etilbenzotiazolin‐6‐sulfonico)); el
contenido de fenoles totales mediante el método de Folin - Ciocalteu, y se cuantificó
Vitamina C por espectrofotometría.
Se efectuó una comparación con los estándares correspondientes; para la Capacidad
Antioxidante por el método ABTS (Trolox) y para fenoles totales (Ácido gálico), los
resultados de la actividad antioxidante muestran que todos los extractos fueron capaces de
captar radicales ABTS, obteniendo mejores resultados con los extractos alcohólicos.
Los resultados se expresaron; para compuestos fenólicos como mg de ácido gálico (GA)
por g de muestra, para la actividad antioxidante en mM Trolox/g muestra y con la ayuda
de métodos estadísticos ANOVA y TUKEY se comprobó al menos uno de los extractos
presentan diferente actividad antioxidante. En el ensayo de ABTS, en los extractos
acuosos; de las hojas y frutos se obtuvo un valor de 5,43mM Trolox/g y 0,10mM Trolox/g
respectivamente, y en los extractos alcohólicos se obtuvo un valor de 0,23mM Trolox/g en
los frutos y en las hojas 19,67mM Trolox/g.
Las hojas como los frutos de la Feijoa poseen considerable capacidad antioxidante pero la
actividad de la hoja es mayor que la fruta, por lo que se recomienda realizar investigaciones
en el área de Alimentos para productos nutracéuticos y en el área de Química cosmética
para fitomedicamentos.
PALABRAS CLAVE: <Feijoa> <Vitamina C> <Fenoles> <Radical> <Antioxidante>
SUMMARY
The antioxidant activity of the leaves and fruits of Feijoa (Acca sellowiana Berg) in
Tungurahua Province, canton Patate was evaluated. The research was developed in the
laboratories of the Faculty of Sciences in Escuela Superior Politécnica de Chimborazo and
Services Laboratories Analysis and Food Reserch of Santa Catalina Experimental Station
INIAP – Quito.
The total phenolic content and antioxidant activity of alcoholic and aqueous extracts of the
leaves and fruits of the Feijoa was determined through testing discoloration of radial ABTS
(2,2-azinobis 3-ethylbenzthiazoline sulfonic); the total phenol by Folin method Ciocalteu,
and quantified Vitamin C by spectrophotometry.
A comparison with the corresponding standards was made; Antioxidant Capacity for by
the ABTS (Trolox) method and total phenols (Gallic Acid) the results of antioxidant
activity show that all extracts were able to capture ABTS radicals. It obtains better results
with alcoholic extracts.
The results were expressed; for phenolic compound as mg of gallic acid (GA) per g of
sample for antioxidant activity in mM Trolox/g sample and with the help of statistical
methods ANOVA and TUKEY. It found at least one of the extracts shows different
antioxidant activity. In the ABTS assay, in aqueous extracts; leaves and fruits 5,43 mM
Trolox/g and 0,10mMTrolox/g was obtained respectively, and alcoholic extracts a value
of 0,23mM Trolox/g in the fruits and in the leaves was obtained 19,67 mm Trolox/g.
The leaves and fruit of Feijoa have considerable antioxidant capacity but the activity of the
leaf is greater that the fruit. So, it is recommended to conduct research in Food area for
nutraceuticals products and the Chemistry cosmetic for phytomedicines.
i
ÍNDICE GENERAL
ÍNDICE DE ABREVIATURAS
ÍNDICE DE TABLAS
ÍNDICE DE CUADROS
ÍNDICE DE GRÁFICOS
ÍNDICE DE FIGURAS
ÍNDICE DE FOTOGRAFÍAS
ÍNDICE DE ANEXOS
INTRODUCCIÓN
1. MARCO TEÓRICO ........................................................................................... - 1 -
1.1. ESPECIES REACTIVAS DEL OXÍGENO – ROS (Reactive Oxigen Species) . - 1 -
1.1.1. DAÑO OXIDATIVO A BIOMOLÉCULAS ..................................................... - 2 -
1.1.2. IMPORTANCIA DE LAS ESPECIES REACTIVAS DE OXIGENO ............... - 3 -
1.2. RADICALES LIBRES ..................................................................................... - 3 -
1.2.1. DEFINICIÓN ................................................................................................... - 3 -
1.2.2. FORMACIÓN DE LOS RADICALES LIBRES ............................................... - 4 -
1.2.3. REACCIONES ................................................................................................. - 6 -
1.2.4. CLASIFICACIÓN ............................................................................................ - 6 -
1.2.5. ESTRÉS OXIDATIVO ..................................................................................... - 7 -
1.2.6. ENFERMEDADES CAUSADAS POR LOS RADICALES LIBRES. .............. - 8 -
1.3. ANTIOXIDANTES .......................................................................................... - 9 -
1.3.1. HISTORIA ....................................................................................................... - 9 -
1.3.2. DEFINICIÓN ................................................................................................... - 9 -
1.3.3. CLASIFICACIÓN.......................................................................................... - 10 -
1.3.4. ANTIOXIDANTES EN LA DIETA ............................................................... - 13 -
1.3.5. ANTIOXIDANTES Y CÁNCER .................................................................... - 18 -
1.4. POLIFENOLES .............................................................................................. - 18 -
1.4.1. CARACTERÍSTICAS QUÍMICAS GENERALES ........................................ - 19 -
1.4.2. CLASIFICACIÓN GENERAL ....................................................................... - 19 -
1.5. ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE .................................................................... - 21 -
1.5.1. DEFINICIÓN ................................................................................................. - 21 -
1.5.2. ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE LA FAMILIA MIRTÁCEAE ............... - 21 -
1.6. FEIJOA (Acca sellowiana) .............................................................................. - 22 -
1.6.1. ORIGEN ....................................................................................................... - 22 -
1.6.2. CLASIFICACIÓN CIENTÍFICA ................................................................... - 22 -
ii
1.6.3. ETIMOLOGÍA ............................................................................................... - 23 -
1.6.4. DESCRIPCIÓN BOTÁNICA ......................................................................... - 23 -
1.6.5. CULTIVO ...................................................................................................... - 25 -
1.6.6. VALOR NUTRICIONAL Y USOS ................................................................ - 25 -
2. PARTE EXPERIMENTAL .............................................................................. - 28 -
2.1. LUGAR DE LA INVESTIGACIÓN ............................................................... - 28 -
2.2. MUESTRAS, EQUIPOS Y REACTIVOS ...................................................... - 28 -
2.2.1. MUESTRAS ................................................................................................... - 28 -
2.2.2. EQUIPOS ....................................................................................................... - 29 -
2.2.3. REACTIVOS ....................................................................................................... 29
2.2.4. MATERIALES .................................................................................................... 30
2.3. TÉCNICAS Y MÉTODOS ............................................................................. - 30 -
2.3.1. RECOLECCIÓN ............................................................................................ - 30 -
2.3.2. CARACTERIZACIÓN BROMATOLÓGICA DE LAS HOJAS Y FRUTOS DE LA
FEIJOA (Acca sellowiana) ....................................................................................... - 31 -
2.3.3. SECADO Y MOLIENDA DE LAS HOJAS DE FEIJOA (Acca sellowiana) .. - 41 -
2.3.4. LIOFILIZACIÓN DE LOS FRUTOS DE LA FEIJOA (Acca sellowiana) ...... - 42 -
2.4. ANÁLISIS FÍSICO-QUÍMICO DE FEIJOA (Acca sellowiana) DROGA
SECA……. .............................................................................................................. - 42 -
2.4.1. DETERMINACIÓN DE HUMEDAD - Método Gravimétrico ........................ - 42 -
2.2.1. DETERMINACIÓN DE CENIZAS TOTALES - Método Gravimétrico ......... - 43 -
2.4.2. DETERMINACIÓN DE CENIZAS SOLUBLES EN AGUA - Método
Gravimétrico. ........................................................................................................... - 43 -
2.4.3. DETERMINACIÓN DE CENIZAS INSOLUBLES EN ÁCIDO CLORHÍDRICO -
Método Gravimétrico ............................................................................................... - 44 -
2.5. OBTENCIÓN DE LOS EXTRACTOS ........................................................... - 44 -
2.5.1. ELABORACIÓN DEL EXTRACTO ALCOHÓLICO (METANÓLICO 70%) DE
LAS HOJAS DEL ÁRBOL DE FEIJOA (A. sellowiana). ....................................... - 44 -
2.5.2. ELABORACIÓN DEL EXTRACTO ACUOSO DE LAS HOJAS DEL ÁRBOL DE
FEIJOA (A. sellowiana) ........................................................................................... - 45 -
2.5.3. ELABORACIÓN DEL EXTRACTO ALCOHÓLICO (METANÓLICO 70%) DE
LOS FRUTOS DEL ÁRBOL DE FEIJOA (A. sellowiana). ..................................... - 45 -
2.5.4. ELABORACIÓN DEL EXTRACTO ACUOSO DE LOS FRUTOS DEL ÁRBOL
DE FEIJOA (A. sellowiana) ..................................................................................... - 45 -
iii
2.6. CONTROL DE CALIDAD DE LOS EXTRACTOS ....................................... - 46 -
2.6.1. DETERMINACIÓN DE LOS REQUISITOS ORGANOLÉPTICOS .............. - 46 -
2.6.2. DETERMINACIÓN DEL pH – Método potenciométrico. .............................. - 46 -
2.6.3. DETERMINACIÓN DEL ÍNDICE DE REFRACCIÓN - Refractometría ....... - 46 -
2.6.4. DETERMINACIÓN DE LA DENSIDAD RELATIVA - Método Gravimétrico- 46
-
2.6.5. DETERMINACIÓN DE LOS SÓLIDOS TOTALES – Método Gravimétrico. - 47 -
2.7. ESTUDIO FITOQUÍMICO (SCREEENING O TAMIZAJE FITOQUÍMICO). . - 47 -
2.8. DETERMINACIÓN DE VITAMINA C DE LAS HOJAS Y FRUTOS DEL ÁRBOL
DE FEIJOA (Acca sellowiana) MEDIANTE EL MÉTODO REFLECTOMETRICO DE
LA MERCK. ............................................................................................................ - 51 -
2.8.1. FUNDAMENTO ............................................................................................ - 51 -
2.9. DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS FENÓLICOS TOTALES DE LAS HOJAS
Y FRUTOS DEL ÁRBOL DE FEIJOA (Acca sellowiana) MEDIANTE EL MÉTODO DE
FOLIN-CIOCALTEAU ........................................................................................... - 53 -
2.9.1. FUNDAMENTO ............................................................................................ - 53 -
2.9.2. CURVA DE CALIBRACIÓN ........................................................................ - 55 -
2.10. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE LAS HOJAS Y
FRUTOS DEL ÁRBOL DE FEIJOA (Acca sellowiana) MEDIANTE EL MÉTODO
(2,2’azinobis -(3-etilbenzotiazolin 6 ácido sulfónico) (ABTS). ................................. - 55 -
2.10.1. PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN MADRE ........................................... - 55 -
2.10.2. PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE PERSULFATO DE POTASIO
(K2S2O8) ................................................................................................................ - 55 -
2.10.3. PREPARACIÓN DEL RADICAL ABTS•+ ................................................. - 55 -
2.10.4. CURVA DE CALIBRACIÓN ...................................................................... - 56 -
3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ...................................................................... - 58 -
3.1. CARACTERIZACIÓN LA FEIJOA (A.sellowiana) .......................................... - 58 -
3.1.1. EVALUACION SENSORIAL........................................................................ - 58 -
3.2. ANÁLISIS BROMATOLÓGICO ..................................................................... - 59 -
3.3. CONTROL DE CALIDAD DE LA DROGA VEGETAL .................................. - 62 -
3.2. DETERMINACIÓN DE LAS PROPIEDADES ORGANOLÉPTICAS DEL
EXTRACTO ALCOHÓLICO Y ACUOSO DE LAS HOJAS Y FRUTOS DEL ÁRBOL
DE FEIJOA (Acca sellowiana)................................................................................. - 62 -
iv
3.3. DETERMINACIÓN DE LOS PARAMETROS FÍSICO QUÍMICOS DE LOS
EXTRACTOS ALCOHÓLICO y ACUOSOS DE LAS HOJAS DEL ÁRBOL DE
FEIJOA.................................................................................................................... - 63 -
3.4. TAMIZAJE FITOQUÍMICO .......................................................................... - 64 -
3.5. DETERMINACIÓN DE VITAMINA C – ÁCIDO ASCORBICO .................. - 66 -
3.6. CUANTIFICACIÓN DE COMPUESTOS FENÓLICOS TOTALES EN LOS
EXTRACTOS DE LAS HOJAS Y LOS FRUTOS DE FEIJOA (Acca sellowiana) .. - 68 -
3.7. CAPACIDAD ANTIOXIDANTE MEDIANTE EL MÉTODO ABTS ............ - 71 -
CONCLUSIONES ................................................................................................... - 75 -
RECOMENDACIONES .......................................................................................... - 76 -
BIBLIOGRAFÍA ..................................................................................................... - 77 -
ANEXOS ................................................................................................................. - 86 -
v
ÍNDICE DE ABREVIATURAS
% Porcentaje
°C Grados Celsius
µg Microgramo
µL Microlitro
ABTS (2,2‐azinobis (3‐etilbenzotiazolin‐6‐sulfonico))
AAT Actividad Antioxidante Total
ADN Ácido Desoxirribonucleico
cm Centímetros
CoA Coenzima A
EGA Equivalentes de Ácido Gálico
g Gramo
INIAP Instituto Nacional Autónomo de Investigaciones Agropecuarias
Kg Kilogramos
L Litro
m Metro
mg Miligramos
min Minutos
mL Mililitro
mM Milimol
Mol Moles
nm Nanómetros
pH Potencial de Hidrógeno
PM Peso molecular
ppm Partes por millón
R Coeficiente de relación
RL Radicales Libres
ROS Reactive Oxigen Species
TEAC Capacidad Antioxidante Equivalente en Trolox
vi
INDICE DE ANEXOS
Anexo No. 1 Materia prima utilizada...................................................................... - 86 -
Anexo No. 2 Liofilización de las muestras ............................................................. - 86 -
Anexo No. 3 Elaboración de extractos .................................................................... - 87 -
Anexo No. 4 Parámetros de calidad de la droga seca y parametros físico químicos de los
extractos. ........................................................................................... - 88 -
Anexo No. 5 Tamizaje fitoquímico de las hojas y frutos de la feijoa (Acca sellowiana).
.......................................................................................................... - 89 -
Anexo No. 6 Determinación de polifenoles por el método folin- ciocalteau ............ - 90 -
Anexo No. 7 Determinación de la actividad antioxidante ...................................... - 91 -
Anexo No. 8 Ecuación de la recta obtenida para la curva de calibración del estándar de
ácido gálico para la determinación del contenido de compuestos fenólicos
totales. ............................................................................................ - 92 -
Anexo No. 9 Análisis Bromatológico de la FEIJOA ............................................. - 92 -
Anexo No. 10 Vitamina C ..................................................................................... - 92 -
Anexo No. 11 Análisis estadístico de contenido de polifenoles en los extractos acuosos y
alcohólicos las hojas y frutos de la feijoa ......................................... - 93 -
Anexo No. 12 Análisis estadístico de actividad antioxidante en los extractos acuosos y
alcohólicos las hojas y frutos de la feijoa ......................................... - 94 -
Anexo No. 13. Cálculo de Polifenoles ................................................................... - 100 -
vii
ÍNDICE DE CUADROS
Cuadro No. 1 Resultados de la evaluación sensorial de las hojas y frutos de la Feijoa
(Acca sellowiana). Laboratorio de Nutrición Animal y Bromatología.
Facultad de Ciencias Pecuarias. ESPOCH, Septiembre 2014 ......... - 58 -
Cuadro No. 2 Resultados del análisis bromatológico de las hojas y frutos de la Feijoa
(Acca sellowiana) por 100 g de muestra. Laboratorio de Nutrición
Animal y Bromatología. Facultad de Ciencias Pecuarias. ESPOCH,
Septiembre 2014 ........................................................................... - 59 -
Cuadro No. 3 Determinación de los parámetros de calidad de la droga seca y molida de
las hojas del árbol de Feijoa (A. sellowiana). Laboratorio de Productos
Naturales. Facultad de Ciencias. ESPOCH, Septiembre 2014 ........ - 62 -
Cuadro No. 4 Descripción organoléptica del extracto alcohólico y acuoso de las hojas
del árbol de Feijoa (Acca sellowiana). Laboratorio de Productos
Naturales. Facultad de Ciencias. ESPOCH. Septiembre 2014. ....... - 62 -
Cuadro No. 5 Descripción organoléptica del extracto alcohólico y acuoso de los frutos
del árbol de Feijoa (Acca sellowiana). Laboratorio de Productos
Naturales. Facultad de Ciencias. ESPOCH. Septiembre 2014. ....... - 63 -
Cuadro No. 6 Determinación de los parámetros de calidad del extracto alcohólico y
acuoso de las hojas y frutos de la Feijoa (Acca sellowiana). Laboratorio
de Análisis Instrumental. Facultad de Ciencias. ESPOCH. Septiembre
2014. ............................................................................................ - 63 -
Cuadro No. 7 Tamizaje fitoquímico del extracto alcohólico del árbol de Feijoa (A.
sellowiana). Laboratorio de Productos Naturales. Facultad de Ciencias.
ESPOCH. Octubre 2014…………….……………………………..….-
65 -
Cuadro No. 8 Tamizaje fitoquímico del extracto acuoso del árbol de Feijoa (A.
sellowiana). Laboratorio de Productos Naturales. Facultad de ciencias.
ESPOCH. Octubre 2014……………………… ............................. - 65 -
Cuadro No. 9 Determinación de Vitamina C de las hojas y frutos de la Feijoa (A.
sellowiana). Laboratorio de Servicios de Análisis e Investigación en
Alimentos (LSAIA). Departamento de Nutrición y Calidad. Estación
Experimental Santa Catalina. INIAP. Cutuglahua. Octubre 2014 .. - 66 -
viii
Cuadro No. 10 Curva de calibración para cuantificación de fenoles totales utilizando
como patrón ácido gálico. ............................................................. - 68 -
Cuadro No. 11 Resultados de la concentración de compuestos fenólicos totales
expresados en mg de ácido gálico/g de muestra determinados en los
extractos metanólicos y acuosos de las hojas y frutos de la Feijoa.
Laboratorio de Servicios de Análisis e Investigación en Alimentos
(LSAIA). Departamento de Nutrición y Calidad. Estación Experimental
Santa Catalina. INIAP. Cutuglahua. Octubre 2014. ....................... - 69 -
Cuadro No. 12 Curva de calibración para cuantificación de capacidad antioxidante
utilizando como patrón Trolox. Laboratorio de Servicios de Análisis e
Investigación en Alimentos (LSAIA). Departamento de Nutrición y
Calidad. Estación Experimental Santa Catalina. INIAP. Cutuglahua.
Noviembre 2014 ........................................................................... - 71 -
Cuadro No. 13 Resultados de la concentración de compuestos fenólicos totales
expresados en mg de ácido gálico/g de muestra determinados en los
extractos Metanólicos y acuosos de las hojas y frutos de la Feijoa.
Laboratorio de Servicios de Análisis e Investigación en Alimentos
(LSAIA). Departamento de Nutrición y Calidad. Estación Experimental
Santa Catalina. INIAP. Cutuglahua. Octubre 2014. ....................... - 72 -
ix
ÍNDICE DE GRÁFICOS
Gráfico No. 1 Análisis proximal de las hojas y frutos Feijoa (Acca sellowiana) ....... - 61 -
Gráfico No. 2 Determinación de Vitamina C de los extractos acuosos de las hojas y los
frutos de la Feijoa (A. sellowiana).Laboratorio de Servicios de Análisis
e Investigación en Alimentos (LSAIA). Departamento de Nutrición y
Calidad. Estación Experimental Santa Catalina. INIAP. Cutuglahua.
Octubre 2014. ............................................................................... - 67 -
Gráfico No. 3 Curva de absorbancia vs concentración de ácido gálico para cuantificación
de fenoles totales. Laboratorio de Servicios de Análisis e Investigación
en Alimentos (LSAIA). Departamento de Nutrición y Calidad. Estación
Experimental Santa Catalina. INIAP. Cutulagua. Octubre 2014 .... - 68 -
Gráfico No. 4 Concentración de compuestos fenólicos totales extraídos en los extractos
expresados en mg de ácido gálico por g de muestra. Laboratorio de
Servicios de Análisis e Investigación en Alimentos (LSAIA).
Departamento de Nutrición y Calidad. Estación Experimental Santa
Catalina. INIAP. Cutulagua Octubre 2014 .................................... - 70 -
Gráfico No. 5 Curva de absorbancia vs concentración de Trolox para cuantificación de
capacidad antioxidante Laboratorio de Servicios de Análisis e
Investigación en Alimentos (LSAIA). Departamento de Nutrición y
Calidad. Estación Experimental Santa Catalina. INIAP. Cutuglahua.
Noviembre 2014. .......................................................................... - 71 -
Gráfico No. 6 Concentración de compuestos fenólicos totales extraídos en los extractos
expresados en mg de ácido gálico por g de muestra. Laboratorio de
Servicios de Análisis e Investigación en Alimentos (LSAIA).
Departamento de Nutrición y Calidad. Estación Experimental Santa
Catalina. INIAP. Cutuglahua. Noviembre 2014. ............................ - 72 -
x
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura No.1 Mecanismo de reacción del radical superóxido ..................................... - 2 -
Figura No.2. Vías de producción de RL y los principales sistemas antioxidantes ....... - 5 -
Figura No.3 Enfermedades y daños causados por las Especies Reactivas al
Oxígeno…………...……………………………………………………..…-
9 -
Figura No.4 Antioxidante neutralizando a un radical libre. ..................................... - 10 -
Figura No.5 Estructura química de la vitamina C ................................................... - 14 -
Figura No.6 Mecanismo propuesto para la estabilización de radicales libres por la
vitamina C (ácido ascórbico). ............................................................ - 15 -
Figura No.7 Estructura química del α-tocoferol (la forma más potente de vitamina E)…-
16 -
Figura No.8 Mecanismo presentado para la estabilización de radicales libres por la
vitamina E (α-tocoferol) .................................................................... - 16 -
Figura No. 9 Estructura química de B-CAROTENO ............................................... - 17 -
Figura No.10 Mecanismo de estabilización de radicales libres por betacaroteno ...... - 17 -
Figura No.11 Estructura del Fenol ........................................................................... - 18 -
Figura No.12 Estructura básica de los flavonoides .................................................. - 20 -
Figura No.13 Diagrama de flujo de la determinación de compuestos fenólicos de hojas y
frutos del árbol de feijoa (Acca sellowiana) mediante el método de Folin
ciocalteau. ......................................................................................... - 54 -
Figura No.14 Diagrama de flujo de la determinación de actividad antioxidante de hojas y
frutos del árbol de feijoa (Acca sellowiana) mediante el método de ABTS -
57 -
xi
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla No.1 Principales especies reactivas del oxígeno (ROS) ..................................... - 1 -
Tabla No.2 Antioxidantes exógenos ......................................................................... - 11 -
Tabla No.3 Fuentes de Antioxidantes en algunos alimentos ...................................... - 13 -
Tabla No.4 Actividad biológica de algunos compuestos fenólicos ............................ - 20 -
Tabla No.5 Taxonomía de la Feijoa (A. sellowiana) ................................................. - 22 -
Tabla No.6 Valor nutricional de la Feijoa (A. sellowiana) ........................................ - 25 -
Tabla No.7 Muestras del material vegetal y alimenticio utilizado en la investigación - 28 -
Tabla No.8 Ténicas del tamizaje fitoquímico ............................................................ - 48 -
INTRODUCCIÓN
Los antioxidantes son moléculas que poseen la capacidad de retrasar o inhibir la oxidación
ocasionada por las moléculas inestables conocidas como los radicales libres. (Hamid A. et
al. 2010) La oxidación es una reacción de transferencia de electrones de una sustancia a
un agente oxidante. Las reacciones de oxidación logran provocar radicales libres que
comienza reacciones en cadena que perjudican las células (Guerrero, C. 2012)
Los compuestos antioxidantes actualmente se los está utilizando en diferentes aplicaciones
en la industria, en los alimentos como inhibidores del pardeamiento, suplementos
dietéticos; en la industria cosmética con diversos fines como la eliminación de manchas;
en la medicina el estudio se ha realizado para el tratamiento de los accidentes
cerebrovasculares, enfermedades neurodegenerativas, el cáncer, en terapias alternativas,
etc., pero se han enfocado principalmente en productos nutraceúticos y cosmeceúticos con
el objetivo de conseguir una mejor calidad de vida. (Mora, A. 2014)
Los radicales libres son moléculas inestables y muy reactivas que tienen electrones no
apareados y que causan daños en el ADN, proteínas, lípidos, membranas celulares y
estructurales. Para alcanzar la estabilidad modifican a las moléculas de su alrededor
provocando la aparición de nuevos radicales, por lo que se crea una reacción en cadena
que dañará a muchas células y logra ser indefinida si los antioxidantes no intervienen.
(Venereo, J. 2002).
Durante el metabolismo normal son originados los efectos de los radicales libres y
externamente son producidos por estrés oxidativo. Los radicales libres se van
incrementando conforme aumenta la edad y los mecanismos de defensa endógenos que los
combaten disminuyen, esto va a originar el daño de las estructuras celulares y provocar el
envejecimiento acelerado; entre unos de sus efectos está el envejecimiento de la piel.
(Katiyar, S. et. al 2001) (Palomino L. et al. 2009).
Las frutas son una fuente potencial de antioxidantes, proporcionan nutrientes como agua,
proteínas, carbohidratos, minerales y vitaminas necesarios en una adecuada alimentación.
El interés en las propiedades antioxidantes de las frutas es reciente, algunos autores han
evaluado la capacidad captadora de radicales libres y el contenido de fenoles de frutas
tropicales como mora, mango de azúcar, guayaba, granadilla, fresa, maracuyá, uchuva,
lulo, piña, mortiño entre otros (Atala, et al. 2009); (Contreras-Calderón et al. 2010); Lopera
et al., 2013); sin embargo, especies nativas de la familia Mirtácea como la Feijoa han sido
poco estudiadas. (Zapata, K. et. al. 2013).
El consumo elevado de frutas tiene un impacto positivo en la salud, debido a la presencia
de metabolitos capaces de neutralizar especies reactivas del oxígeno. Nuestro organismo
no puede fabricar los antioxidantes, por ello necesitamos consumirlos; una ingesta
adecuada asegurará los requerimientos necesarios para evitar el estrés oxidativo. (Zapata
K. et. al. 2013).
Dentro de la dieta, una de las frutas con alto poder antioxidante es la Feijoa originaria del
Brasil y que en los últimos años se adaptó en el Ecuador, se produce en el cantón Patate
perteneciente a la provincia de Tungurahua y que poco a poco va incrementando su
producción y a su vez el consumo a nivel nacional.
Existen estudios de la planta en otros países, más se realiza este estudio para conocer la
adaptación de la Feijoa en nuestro país, a diferente altitud y a diferentes condiciones
agroecológicas.
Por esta razón se ha realizado la presente investigación que tiene como objetivo evaluar la
actividad antioxidante de las hojas y los frutos de la Feijoa, mediante el control de calidad,
cuantificación de fenoles, vitamina C; y evaluación de la actividad antioxidante por el
método ABTS, con el fin de contribuir al conocimiento científico de las propiedades
antioxidantes de la Feijoa para así incrementar su consumo, abrir un renglón de la
economía local y permitir que el fruto compita internacionalmente con otras frutas de alto
valor nutracéutico.
- 1 -
CAPÍTULO I
1. MARCO TEÓRICO
1.1.ESPECIES REACTIVAS DEL OXÍGENO – ROS (Reactive Oxigen Species)
Las especies reactivas del oxígeno o conocido como ROS, (Reactive Oxigen Species) por
sus siglas en inglés, son compuestos que se derivan de la molécula de oxígeno (O2) por
reducción química parcial. ROS, es un término agrupado que contiene radicales libres:
anión superóxido (O2•-), radical hidroxilo (OH•) y ciertas especies no radicales como el
peróxido de hidrógeno (H2O2).que son oxidantes y/o se convierten fácilmente en radicales
libres. (Halliwell, B y Whiteman, M 2004)
Tabla No. 1 Principales especies reactivas del oxígeno (ROS)
FUENTE: Halliwell B, Whiteman M. (2004).
- 2 -
Las especies reactivas de oxigeno son radicales libres o precursores de radicales. Los
electrones giran en pares con un espín particular, en los orbitales a esto se lo conoce como
la máxima estabilidad natural; razón por la cual, si existen electrones desapareados en un
orbital, se forman especies moleculares altamente reactivas que tienden a robar un electrón
de cualquier otro átomo para compensar su deficiencia electrónica. El principal radical
libre es el Oxigeno ya que posee dos electrones despareados (Trejo, A. y Pascual, S. 2011).
1.1.1. DAÑO OXIDATIVO A BIOMOLÉCULAS
Las especies reactivas de oxigeno que actúan como oxidantes biológicos son numerosas,
pero el oxígeno (O2) es el mayor reductor, la simple adición de un protón da lugar a la
formación de HO2, convirtiéndose en un agente oxidante muy activo.
Figura No. 1 Mecanismo de reacción del radical superóxido
FUENTE: Martinez, J. (2007)
Sobre el metabolismo de los principios inmediatos las especies reactivas de oxigeno
producen diversas acciones, las mismas que pueden ser el origen del daño celular.
- En las proteínas las ERO pueden inducir en el extremo la fragmentación de proteínas,
pero además existen una serie de alteraciones que pueden modificar notablemente su
función, modificando con ello el metabolismo, la estructura, el transporte, los
receptores, las proteínas reguladoras y los inmunorreguladores, entre otros. Provocan
inactivación y desnaturalización.
- En los lípidos donde se produce el mayor daño en un proceso conocido como
peroxidación lipídica, afecta a las estructuras ricas en ácidos grasos poliinsaturados, ya
- 3 -
que se altera la permeabilidad de la membrana celular produciéndose edema y muerte
celular.
- Ocasionando mutagénesis y carcinogénesis sobre los ácidos nucleicos por medio de la
modificación de bases
- En los glicósidos, proceden alterando las funciones celulares tales como las asociadas
a la actividad de las interleucinas y la formación de prostaglandinas, hormonas y
neurotransmisores. (Trejo, A. y Pascual, S. 2011).
1.1.2. IMPORTANCIA DE LAS ESPECIES REACTIVAS DE OXIGENO
Cumplen un papel muy importante las especies reactivas de oxígeno y a su vez también
pueden ejercer efectos tóxicos. Las especies reactivas de oxígeno son producidas como
resultado del metabolismo y son fundamentales para la generación de energía, para la
síntesis de compuestos biológicamente esenciales y la fagocitosis, siendo este un proceso
relevante para el sistema inmunológico. Las ROS desempeñan un rol vital en la traducción
de señales, lo cual es importante para la comunicación y función de las células (Papas,
A.1999).
Se ha incrementado en los últimos veinte años la evidencia que demuestra que las especies
reactivas de oxigeno pueden ser las promotoras de distintas enfermedades entre ellas las
más importantes las enfermedades coronarias, el envejecimiento y el cáncer. (Papas,
A.1999).
1.2.RADICALES LIBRES
1.2.1. DEFINICIÓN
Los radicales libres (RL) son átomos o grupos de átomos que tienen uno o más electrones
desapareados lo cual los hace altamente inestables y reactivos. (Basaga H. 1990)
Estos radicales recorren nuestro organismo deseando robar un electrón de las moléculas
estables, con el fin de alcanzar su estabilidad electroquímica por medio de reacciones de
óxido‐reducción.
- 4 -
Una vez que el RL ha conseguido robar el electrón que necesita para aparear su electrón
libre, la molécula estable que se lo cede se convierte a su vez en un nuevo RL, por quedar
con un electrón desapareado; iniciándose así una verdadera reacción en cadena que
destruye nuestras células; estas reacciones en cadena se combate con la acción de los
antioxidantes, los cuales neutralizan los átomos de oxigeno La vida biológica media del
RL es de microsegundos; pero tiene la capacidad de reaccionar con todo lo que esté a su
alrededor provocando un estrés oxidativo que puede conducir a diversas enfermedades,
tales como envejecimiento, problemas del sistema cardiovascular (arterosclerosis),
problemas en el sistema nervioso, daño genético (mutaciones y cánceres). (López H. 2013).
1.2.2. FORMACIÓN DE LOS RADICALES LIBRES
La formación de cierta cantidad de radicales libres (RL) en las células es un proceso normal
e inevitable, los radicales libres producidos por el cuerpo para llevar a cabo determinadas
funciones son neutralizados fácilmente por nuestro propio sistema. (Avello, M.et al. 2006)
1.2.2.1. FUENTES ENDÓGENAS DE RADICALES LIBRES
a). La autooxidación de compuestos de carbono reducido como son: proteínas,
aminoácidos, lípidos, glúcidos y ácidos nucleicos tienen como fin también a la formación
de estos compuestos.
b). Usan el sistema de la NADPH oxidasa generando directamente O2- ; las células
fagocitarias (neutrófilos, monocitos o macrófagos), estas células generan monóxido de
nitrogeno (NO), por acción de la óxido nítrico sintasa sobre la arginina intracelular, como
mecanismo de defensa. Da lugar a la formación del ONOO- la combinación del O2- con
el NO apto de inducir en las lipoproteínas la peroxidación lipídica.
c). Da lugar a la formación de la mayoría de estos compuestos la cadena respiratoria, la
reducción monovalente de la molécula de oxígeno. A pesar de, el 95 % del oxígeno que
respiramos es reducido a H2O por acción de la citocromo oxidasa-α-3, último eslabón de
la cadena de transporte electrónico, por medio de un mecanismo en el que intervienen
cuatro centros rédox suministrando, además, la principal fuente de energía (ATP) al
organismo.
- 5 -
d). La activación catalítica de varias enzimas del metabolismo intermediario como la
xantina y la hipoxantina oxidasa, lipoxigenasa, monoamino oxidasa, aldehído oxidasa,
ciclooxigenasa, son fuentes particulares muy importantes de esta producción. (Trejo, A.
y Pascual, S. 2011).
Figura No. 2.Vías de producción de radicales libres y los principales sistemas
antioxidantes
FUENTE: Hernández, L. 2013
1.2.2.2. FUENTES EXÓGENAS CON EXCESO DE RADICALES LIBRES
- Alimentos procesados (alimentos sintéticos o tratados con químicos, calor o
radiación)
- Alimentos viejos (congelados y enlatados posteriormente recalentados)
- Alimentos quemados (particularmente asados o grillados)
- Productos de procedencia animal, especialmente carnes rojas
- Consumo de tabaco (activo y pasivo)
- Alcohol y café
- Conservantes alimentarios.
- Pesticidas (insecticidas, repelentes y venenos)
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- Herbicidas
- Artículos de limpieza, pinturas, pegamentos, agentes de propagación de fuego,
limpiadores de muebles, entre otros artículos
- Humo de los vehículos
- Contaminación industrial
- Agua clorada (agua para beber y de las piscinas)
- Exceso de sol (cuando el sol provoca quemaduras, "despellejamiento" y dolor)
- Píldoras anticonceptivas. (Taradellas, J. 2011)
1.2.3. REACCIONES
Según Halliwell (1991), los radicales libres pueden llevar a cabo uno de los siguientes tipos
de reacciones:
1. Ceder su electrón desapareado (radical reductor).
2. Aceptar un electrón de la molécula estable para estabilizar el electrón desapareado
(radical oxidante).
3. Unirse a una molécula estable.
En cualquiera de los tres casos, la situación resultante es la génesis de otro radical
químicamente agresivo:
2. RH + ·OH R· + H2O
Esto lo hace muy inestable, extraordinariamente reactivo y de vida efímera, con una
enorme capacidad para combinarse inespecíficamente en la mayoría de los casos, así como
con la diversidad de moléculas integrantes de la estructura celular: carbohidratos, lípidos,
proteínas, ácidos nucleicos y derivados en cada una de estas macromoléculas.
(Carhuapoma, M. 2006)
1.2.4. CLASIFICACIÓN
1. Radicales libres inorgánicos o Primarios
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Se forman por transferencia de electrones sobre el átomo de oxígeno, por tanto representan
distintos estados en la reducción de este y se caracterizan por poseer una vida media muy
corta; estos son el radical hidroxilo, el óxido nítrico y anión superóxido.
2. Radicales libres orgánicos o Secundarios
Se pueden producir por la transferencia de un electrón de un radical primario a un átomo
de una molécula orgánica o por la reacción de 2 radicales primarios entre sí, tienen una
vida media un poco más larga que los primarios; los principales átomos de las biomoléculas
son: nitrógeno azufre y oxígeno (Venereo, J. 2002)
3. Intermediarios estables relacionados con los radicales libres del oxígeno
Se incluye aquí un grupo de especies químicas que a pesar de no ser radicales libres, son
generadoras de estas sustancias o repercuten de la reducción o metabolismo de ellas, entre
las que están el oxígeno singlete, el hidroperóxido orgánico, el peróxido de hidrógeno, el
ácido hipocloroso, el peroxinitrito. (Mayor, R. 2010)
1.2.5. ESTRÉS OXIDATIVO
En circunstancias explícitas la producción de radicales libres puede incrementarse en
forma descontrolada, situación conocida con el nombre de estrés oxidativo.
El concepto expresa la existencia de un desequilibrio entre las velocidades de producción
y de destrucción de las moléculas tóxicas que da lugar a un aumento en la concentración
celular de los radicales libres. (Antioxidantes y radicales libres, 2014)
Cuando el estrés oxidativo afecta a sustratos biológicos, el desequilibrio redox que lo
caracteriza, se traduce en un daño oxidativo a diversas macromoléculas. Cuando el daño
oxidativo es intenso, sostenido en el tiempo, y no logra ser revertido, esto conducirá a la
aparición de ciertas patologías. Ej.: enfermedades cardiovasculares, cáncer, distrofia
muscular, enfermedades autoinmunes, esclerosis múltiple, Alzheimer, etc. (Alomar, M.
2014)
- 8 -
1.2.6. ENFERMEDADES CAUSADAS POR LOS RADICALES LIBRES.
El estrés oxidativo ocurre en los organismos que, por mala nutrición, enfermedad u otras
causas, pierden el equilibrio entre radicales libres y antioxidantes. Es en esta situación de
estrés oxidativo en la que se manifiestan las lesiones que producen los radicales libres, que
reaccionan químicamente con lípidos, proteínas, carbohidratos y ADN al interior de las
células, y con componentes de la matriz extracelular, por lo que pueden desencadenar un
daño irreversible que, si es muy extenso, puede llevar a la muerte celular. (Antioxidantes
y radicales libres. 2014)
Enfermedades o procesos asociados al daño oxidativo en las moléculas biológicas:
- ENVEJECIMIENTO: Peroxidación de los ácidos grasos de la membrana celular y
daño del ADN.
- ATEROESCLEROSIS: Peroxidación de lípidos en las partículas de LDL con daño de
otros componentes.
- CANCER: Daño del ADN.
- CATARATAS: Modificaciones irreversibles en las proteínas.
- PROCESOS INFLAMATORIOS CRÓNICOS: Activación de genes relacionados con
la respuesta inflamatoria.
Contribuyen al proceso del envejecimiento los radicales libres cuando quitan el electrón
que les hace falta de las células del tejido colágeno de la piel, dando como consecuencia,
que la piel pierda su elasticidad al dañarse las fibras elásticas y la aparición precoz de
arrugas y sequedad. Los RL aportan también al crecimiento anormal de las células, al
perder éstas, la capacidad de “reconocer” las células vecinas. Esa proliferación sin control
se produce en los tumores benignos y malignos. (Taradellas, J. 2011)
- 9 -
Figura No. 3.Enfermedades y daños causados por las Especies Reactivas al Oxígeno.
1.3. ANTIOXIDANTES
1.3.1. HISTORIA
Originalmente el término antioxidante fue utilizado para referirse específicamente a un
producto químico que previniera el consumo de oxígeno. Los antioxidantes se han
utilizado por primera vez en el siglo XIX en la industria del caucho, cuando se observó
que algunas moléculas, identificadas empíricamente, podrían retardar la degradación y
permitir la optimización del proceso de vulcanización. En el siglo XX, los antioxidantes
se introducen en el arsenal de la industria alimentaria que emerge, como una herramienta
clave para frenar la degradación oxidativa de los alimentos almacenados. (Ursini F. 2014).
1.3.2. DEFINICIÓN
Un antioxidante es una molécula capaz de retardar o prevenir la oxidación (pérdida de uno
o más electrones) de otras moléculas. La oxidación es una reacción química de
transferencia de electrones de una sustancia a un agente oxidante. Las reacciones de
oxidación pueden producir radicales libres que comienzan reacciones en cadena que dañan
las células. Los antioxidantes terminan estas reacciones quitando intermedios del radical
libre e inhiben otras reacciones de oxidación oxidándose ellos mismos. Debido a esto es
que los antioxidantes son a menudo agentes reductores tales como tioles o polifenoles.
(Martínez, J. 2014)
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Figura No. 4 Antioxidante neutralizando a un radical libre.
Por su estructura química los antioxidantes frenan la formación de Radicales Libres (RL),
previenen o tratan las enfermedades causadas por el estrés oxidativo, o a su vez los
antioxidantes son un conjunto de compuestos químicos o productos biológicos que
contrarrestan de una manera directa o indirecta los efectos nocivos de los radicales libres
u oxidantes, tales como oxidación a lípidos, proteínas y ácidos nucleicos, alterando las
funciones celulares. (López A, et. al 2012).
Para protegerse de los daños causados por los RL, el cuerpo genera ciertas sustancias
conocidas como antioxidantes, sin embargo en situaciones de estrés, mala alimentación,
deficiencia en el sistema inmunológico, la cantidad de estos antioxidantes llega a ser
notoriamente insuficiente. Para ello es de vital importancia alimentarse de manera
adecuada reforzando la dieta con alimentos ricos en antioxidantes, o dependiendo el caso
tomar complementos de los mismos. Entre los más conocidos están la vitamina A, el
Selenio, la vitamina C, la vitamina E, el Betacaroteno, la melatonina, la coenzima Q10 y
los bioflavonoides. (Stevens, N. 1998).
1.3.3. CLASIFICACIÓN
1.3.3.1. Según su origen
1. Antioxidantes endógenos (Enzimáticos).
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Normalmente son bio-sintetizados por el organismo, son las enzimas (proteínas) con
capacidad antioxidante que no se consumen al reaccionar con los radicales libres y son
dependientes de sus cofactores tales como el cobre, el hierro, el zinc, el magnesio y selenio.
Mecanismos enzimáticos del organismo; incluye a enzimas como superóxido dismutasa
(SOD), catalasa (CAT), glutatión peróxidasa (GSH-PX), tiorredoxina reductasa, glutatión
reductasa y la coenzima Q. Algunas enzimas necesitan cofactores metálicos como selenio,
cobre, zinc y magnesio para poder realizar el mecanismo de protección celular.
(Antioxidantes y radicales libres. 2014)
2. Antioxidantes exógenos (No enzimáticos)
Son introducidos por la dieta y a diferencia de las enzimas se consumen al reaccionar con
los radicales libres, y deben ser reemplazados y se depositan en las membranas celulares
impidiendo la lipoperoxidación (vitaminas E y C y del caroteno).
Los antioxidantes exógenos están determinados por una serie de compuestos llamados
depuradores de radicales libres, los mismos que intervienen logrando retrasar la
generación y acción de los radicales libres. (Hernández, L. 2013)
Tabla No.2 Antioxidantes exógenos
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NRN: No se reportan efectos nocivos por exceso en su consumo.
Fuente: (Delgado L. et. al 2010)
1.3.3.2. Según la zona donde actúan:
Los antioxidantes impiden que otras moléculas se unan al oxígeno, al reaccionar-
interactuar más rápido con los radicales libres del oxígeno y las especies reactivas del
oxígeno que con el resto de las moléculas presentes, en un determinado microambiente -
membrana plasmática, citosol, núcleo o líquido extracelular.
Lipófilo.- es el comportamiento de toda molécula, la misma que posee afinidad por los
lípidos. En una disolución o coloide, las partículas lipófilas tienden a acercarse y mantener
contacto con los lípidos (Cajas, P. 2012).
Los que ejercen su acción a nivel de la membrana lipídica son: la vitamina E; los
polifenoles, flavonoides; y los carotenos
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Hidrófilo.- es el proceder de toda molécula que goza de afinidad por el agua. En una
disolución o coloide, las partículas hidrófilas tienden a acercarse y conservar contacto con
el agua. (Cajas, P. 2012).
Los que actúan en medio acuoso: el ácido ascórbico (conocido generalmente como
vitamina C). Los relacionados con metales pesados: transferrina, lactoferrina, ferritina y
ceruloplasmina. (Licata, M. 2014)
1.3.4. ANTIOXIDANTES EN LA DIETA
En la dieta alimenticia diaria se debe incluir a alimentos ricos en antioxidantes naturales
ya que estos son importantes para la salud, en el organismo se da un equilibrio entre
oxidantes y antioxidantes, más cuando se rompe este equilibrio a favor de los oxidantes se
produce un estrés oxidativo el mismo que está implicado en muchas factores
fisiopatológicos, es por ello importante el consumo de alimentos que contenga gran
cantidad de antioxidantes para que de esta forma se pueda mantener el equilibrio entre
oxidantes y antioxidantes y a medida que la persona va envejeciendo este balance está a
favor de los oxidantes y es de suma importancia el consumo de alimentos ricos en
antioxidantes para poder contrarrestarlos, es importante el consumo de frutas, frutos secos
como almendras, seguido por las verduras, hortalizas, legumbres y cacao.
Entre los antioxidantes más importantes en los alimentos cabe destacar: vitamina C,
carotenoides, vitamina E y en la actualidad los flavonoides.
(Llanga, B. 2014).
Tabla No.3 Fuentes de Antioxidantes en algunos alimentos
Fuente Antioxidante
Frijol de soya Isoflavonas, ácidos fenólicos
Aceites y semillas de
aceites
Tocoferoles y tocotrienoles; sesamol y
sustancias relacionadas, resisas de
aceites de olivo, fosfolipidos
Té verde, té negro Polifenoles, catequinas
Café Ésteres fenólicos
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Vino tinto Ácido fenólico
Frutas y vegetales Ácido ascrobico, acidos
hidroxicarboxilicos, flavonoides,
carotenoides.
Romero, sábila Ácido carnósico, ácido rosmarímico
Cítricos Bioflavonoides, chalconas
Cebollas Quercetina, camferol
Aceitunas Polifenoles, catequinas
Cacao Compuestos fenólicos
Avena y salvado Varios compuestos derivados de la
lignina
1.3.4.1. Ácido ascórbico o Vitamina C
La Vitamina C, o ácido Ascórbico, es una de las vitaminas hidrosolubles, que se disuelven
en agua, presentes en las partes acuosas de los alimentos. Nuestro organismo sólo puede
almacenar una cantidad limitada y el exceso es fácilmente eliminado por la orina.
La vitamina C se absorbe mayoritariamente en el duodeno y yeyuno proximal mediante un
mecanismo de transporte activo dependiente del sodio. (Valls V. 2009).
Figura No. 5 Estructura química de la vitamina C
La vitamina C es un antioxidante que ejerce en medios acuosos, entre ellos el fluido ocular
el líquido pleural y el espacio intersticial. Este antioxidante actúa conjuntamente con otros
antioxidantes primarios como la vitamina E y los carotenoides, así como en conjunto con
las enzimas antioxidantes. La vitamina C se ayuda con la Vitamina E regenerando el α-
tocoferol desde el radical α-tocoferilo en membranas y lipoproteínas. La mayoría de
plantas y animales sintetizan ácido ascórbico a partir de la glucosa; pero, los humanos son
incapaces de sintetizarlo y requieren adquirir de la dieta. (Griffiths, H.et. al. 2001)
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Figura No. 6 Mecanismo propuesto para la estabilización de radicales libres por la
vitamina C (ácido ascórbico).
El ácido ascórbico es el único antioxidante endógeno en plasma que logra proteger contra
el daño peroxidativo provocado por radicales peróxido En la FIGURA No.6 se plasma la
donación de un electrón realizada por el ácido ascórbico lo que produce el radical
semidihidroascorbil, que puede nuevamente ser oxidado para dar dihidroascorbato
(Griffiths H.et. al. 2001)
Los cítricos, los tomates, las patatas son los alimentos que se encuentran entre los alimentos
que tienen alto contenido de vitamina C. En la actualidad la recomendación para la ingesta
diaria de vitamina C es para mujeres 75 mg/día y de 90 mg/día para hombres.
Los pacientes con enfermedades crónicas como el cáncer, la diabetes, los fumadores son
quienes necesitan mayores dosis en su dieta habitual. El déficit de ácido ascórbico tiene
lugar a la aparición del escorbuto, enfermedad que se ve raramente en los países
desarrollados. Los síntomas se desarrollan con niveles plasmáticos inferior a 0,15 mg/dl.
El escorbuto se caracteriza por la debilidad, dolor articular o lesiones cutáneas en forma
de petequias, sangrado de encías, facilidad para desarrollar hematomas o retraso en la
curación de las heridas. Las manifestaciones cutáneas más características son las pápulas
purpúricas hiperqueratósicas perifoliculares y la presencia de pelos ensortijados. (Valdés,
F.2006).
1.3.4.2. Vitamina E
El vocablo vitamina E es la descripción genérica para todos los tocoferoles y tocotrienoles
que presentan actividad biológica de alfa-tocoferol, siendo éste el antioxidante natural más
efectivo en fase lipídica y en la parte externa de las lipoproteínas, por tanto opera a nivel
de membranas o lipoproteínas. (Valls, V. 2009)
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Figura No. 7 Estructura química del α-tocoferol (la forma más potente de vitamina E)
La vitamina E es liposoluble imprescindible para diversas funciones biológicas. Una de las
más importantes funciones que cumple es la de antioxidante de las membranas biológicas,
sitio el cual protege los ácidos grasos poli-insaturados y otros componentes de las
membranas celulares de los radicales libres; esta función garantiza la estabilidad de las
membranas de células como los leucocitos y las plaquetas frente a variados tipos de
agresiones.(Valls, V. 2009)
Figura No. 8 Mecanismo presentado para la estabilización de radicales libres por la
vitamina E (α-tocoferol)
El mecanismo que se presenta para la estabilización de RL por la vitamina E se muestra en
la FIGURA No. 8. Donde la vitamina E logra reaccionar con los radicales lipídicos, para
de esta manera formar la vitamina E radical tomando en cuenta que es poco reactiva como
para reaccionar con ácidos grasos poliinsaturados, actuando de esta manera en la reacción
de la peroxidación lipídica como finalizador de la cadena. Esta vitamina E radical es muy
estable ya que el electrón desapareado del átomo de O2 puede ser deslocalizado dentro de
la estructura del anillo aromático. (Griffiths H.et al. 2001)
- 17 -
1.3.4.3. Carotenoides
Al referirse a los carotenoides nos referimos a los precursores de la vitamina E ya que hay
más de 600 carotenoides, dentro de ellos alrededor de 50 son precursores de la vitamina A
o retinol. Dentro de la dieta alimenticia la vitamina A puede ser ingerida por medio de los
alimentos de origen animal, en su mayoría en forma de esteres de retinilo o también en
forma de carotenoides, principalmente el β-caroteno que se encuentran en los alimentos de
origen vegetal. (Valls, V. 2009)
Figura No. 9 Estructura química de B-CAROTENO
En los carotenoides el papel biológico no se encuentra limitado únicamente a la protección
del aparato fotosintético de las plantas frente a la afectación de la luz o a la producción de
retinoides; además se ha indicado que: previene el daño por fotosensibilidad en bacterias,
humanos y animales; disminuye el daño genético y las transformaciones malignas; inhibe
la inducción tumoral provocada por los rayos UV y agentes químicos y disminuye en
humanos las lesiones premalignas. (Krinsky, N. 1989).
Figura No. 10 Mecanismo de estabilización de radicales libres por betacaroteno
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En la FIGURA No.10 se presenta el mecanismo el mismo que está determinado por su
capacidad para estabilizar el oxígeno singlete y así nuevamente convertirlo a su forma
menos reactiva (triplete) a expensas de una activación intramolecular. (Krinsky, Norman.
1989).
1.3.5. ANTIOXIDANTES Y CÁNCER
Evidencian más de 150 estudios epidemiológicos una correlación inversa entre la ingesta
de antioxidantes y el riesgo de adquirir diversos tipos de tumores y tienden a señalar al b-
caroteno como el agente protector en enfermedades tumorales. Como posible mecanismo
se reconoce que el ADN puede dañarse y por ende, sufrir mutaciones por lesión directa de
los RL sobre las bases, o en forma directa afectando la actividad de las proteínas específicas
que lo repara (proto-oncogen), o lo frena (supresores). El tabaquismo también produce un
alto grado de estrés oxidativo por diversos mecanismos, ocasionando a la misma
carcinogénesis a nivel pulmonar. (Carhuapoma, M. 2006)
1.4. POLIFENOLES
Los polifenoles son un conjunto heterogéneo de moléculas, comparten la característica de
tener en su estructura diversos grupos bencénicos sustituidos por funciones hidroxílicas;
son un amplio grupo de compuestos, producto del metabolismo secundario de las plantas,
donde desempeñan diversas funciones de protección al ataque de patógenos o herbívoros
y son pigmentos que atraen a los polinizadores. (Caravaca, E. 1999).
Figura No. 11 Estructura del Fenol
En su estructura presentan un anillo benceno con por lo menos un grupo hidroxilo
(fenólico). Se pueden clasificar los compuestos fenólicos según su origen biosintetico y su
complejidad estructural, tomando en cuenta que el grupo más sencillo corresponde a los
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fenoles debidamente llamados. Tenemos a los flavonoides que son aproximadamente la
mitad de los compuestos fenólicos que se encuentran presentes en las plantas, los mismos
que se pueden clasificar en 5 diferentes grupos: antocianas (pigmentos), flavonoides
menores (que incluyen flavonas, dihidroflavonoles y dihidrochalconas), flavonoles,
isoflavonoides y taninos. (Arriaga, I. 2007)
1.4.1. CARACTERÍSTICAS QUÍMICAS GENERALES
De los compuestos fenólicos lo más destacable son sus propiedades antioxidantes; por una
parte son muy susceptibles a ser oxidados y por otra son los cuales impiden que los metales
catalicen las reacciones de oxidación, es de esta manera que los grupos hidroxilo, al estar
unidos a un anillo bencénico, dan la posibilidad de que el doblete del átomo de oxígeno
interaccione con los electrones del anillo, razón por lo cual se les confiere unas
características especiales respecto al resto de alcoholes. También pueden actuar de
quelantes (sobre todo los fenoles no flavonoides) y constituir complejos con metales di o
trivalentes, especialmente con el aluminio y el hierro, lo que consigue poseer también
implicaciones nutricionales. (Gimeno, E. 2004)
1.4.2. CLASIFICACIÓN GENERAL
De distintas maneras se puede clasificar a los polifenoles debido a su diversidad estructural.
Por su estructura química tenemos 2 grandes grupos:
1. No flavonoides
Entre ellos hay dos subgrupos:
- Fenoles no carboxílicos: C6, C6-C1, C6-C3.
- Ácidos fenoles: derivados del ácido benzoico C6-C1y derivados del ácido cinámico
C6-C3.
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2. Flavonoides (C6-C3-C6)
Figura No. 12 Estructura básica de los flavonoides
Formados por 2 grupos bencénicos unidos por un puente tricarbonado.
Subgrupos:
- Antocianos; flavononas, flavanoles y flavanonoles; flavanoles, taninos condensados y
lignanos
Son derivados fenólicos los flavonoides los cuales son sintetizados en cantidades
sustanciales por las plantas. Alrededor de 4000 aproximadamente conforman los
compuestos identificados, son derivados metoxilados, glicosilados del 2-fenilbenzo-γ-
pirano e hidroxilados. Tienen una actividad antioxidante y una gran capacidad para
capturar radicales libres, de igual forman que las antocianidinas tienen actividad diurética
además poseen también acción laxante. (Naranjo, A. 2013)
Tabla No.4 Actividad biológica de algunos compuestos fenólicos
- 21 -
1.5. ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
1.5.1. DEFINICIÓN
Halliwe y Gutteridge (1998), definieron como actividad antioxidante a toda sustancia que
hallándose presente a bajas concentraciones, con respecto a las de un sustrato oxidable
(biomolécula) retarda o previene la oxidación de dicho sustrato. El antioxidante a
reaccionar con el radical libre (RL), le cede un electrón oxidándose a su vez y
transformándose en un radical libre débil, con escasos o nulos efectos tóxicos y que en
algunos casos como la vitamina E, pueden regenerarse a su forma primitiva por la acción
de otros antioxidantes.
Los antioxidantes tiene diferentes mecanismos de acción; unos impiden la formación de
los RL o especies reactivas (sistema de prevención), otros inhiben la acción de los radicales
libres (sistema barredor) y otros favorecen la reparación y la reconstitución de las
estructuras dañadas (sistemas de reparación). (Halliwel B .et al. 1998)
1.5.2. ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE LA FAMILIA MIRTÁCEAE
La familia Mirtácea posee alrededor de 131 géneros y unas 4620 especies, producen aceites
esenciales, son fuente importante de madera lo que resulta notable en las especies de
eucalipto (Eucalyptus resinifera). Entre las que producen frutos comestibles tenemos la
guayaba (Psidium guajaba, L.) y la pomarrosa (Syzygium jambos); tienen valor ornamental
debido a sus llamativas flores Eucalyptus, Myrtus, Callistemon, Leptospermum, Acca,
Myrrhinium. Los frutos de la mayoría de las especies Neotropicales son comestibles. Entre
ellas se destaca Psidium guajava (Guayaba), Eugenia uniflora (Pitanga), E. brasiliensis
(Cereza brasilera), Myrciaria cauliflora (Jabuticaba). (Fredes, C. et al. 2013).
La familia Mirtácea tiene gran importancia económica, al encontrarse en ella plantas de
gran interés y utilidad al poseer una elevada actividad antioxidante, un alto contenido de
compuestos fenólicos. Es conocida por la alta concentración de terpenos de su follaje.
Igualmente numerosas especies tienen sus frutos comestibles con un gran potencial
nutricional y funcional. (Vilela A et al. 2011)
- 22 -
1.6. FEIJOA (Acca sellowiana)
FUENTE: CARVAJAL, M 2014.
FOTOGRAFÍA No. 1 ÁRBOL DE FEIJOA (Acca sellowiana)
1.6.1. ORIGEN
Es una fruta subtropical, conocida en el sur de Brasil, noreste de Argentina, Uruguay y este
de Paraguay, desde los tiempos prehispánicos. (Mateo, J. 2005). La especie fue descripta
por primera vez por Otto Berg en 1854 quien se basó en colectas realizadas por Friedrich
Sellow en 1819. (Feijoa. 2014). Es conocida en la Costa Azul francesa desde 1890, cuando
fue introducida por el Prof. Edouard André, de la Escuela de Horticultura de Versailles, a
través de semillas de Argentina. En 1990 fue introducida en California, donde se ha
extendido su cultivo. En Uruguay se cultiva comercialmente hace 50 años. Es cultivada y
muy apreciada en Nueva Zelandia. (Hernández J. et al. 1992). En la actualidad se cultiva
en Brasil, Uruguay, Colombia, Argentina, en el sur de Estados Unidos, Australia, Nueva
Zelanda, Israel y Francia.
1.6.2. CLASIFICACIÓN CIENTÍFICA
Tabla No.5 Taxonomía de la Feijoa (A. sellowiana) Reino : Plantae
División: Magnoliophyta
Clase: Magnoliopside
Subclase: Rosidae
Orden: Myrtales
Familia: Myrtaceae
Subfamilia: Myrtoideae
Tribu: Myrteae
Género: Acca
Especie:
A. sellowiana
(BERG. 1855)
BURRET 1942
- 23 -
1.6.3. ETIMOLOGÍA
El nombre de Feijoa recibió gracias al botánico Don da Silva Feijoa; sellowiana, en
memoria de Friedrich Sellow (1789-1831), naturalista y viajero alemán que colectó plantas
en Brasil y Uruguay y llevó por primera vez la Feijoa a Europa.
NOMBRE COMÚN: Feijoa (en todo el mundo); castellano: guayabo grande, guayabo
chico (Uruguay); portugués: goiaba serrana, goiaba verde, goiaba abacaxí (Brasil); inglés:
pineapple guava (Estados Unidos). (Hernández J. et al. 1992)
1.6.4. DESCRIPCIÓN BOTÁNICA
Arbusto o pequeño árbol de 3-5 m de altura, muy ramificado. Tallos cilíndricos, de color
ceniza rojizo, desprendiendo pequeñas placas de la corteza. (Hernández J. et al 1992)
1.6.8.1. Hojas
FUENTE: CARVAJAL, M 2014.
FOTOGRAFÍA No. 2. HOJAS DE FEIJOA (Acca sellowiana)
Son elípticas de 4 a 8 cm de longitud con bordes enteros o ligeramente ondulados, opuestas,
pecioladas, consistentes, de color verde intenso, liso y brillante en el haz, mientras que en
el envés son blanquecinas y tomentosas.
- 24 -
1.6.8.2. Flores
FUENTE: CARVAJAL, M 2014.
FOTOGRAFÍA No. 3.FLORES DE FEIJOA (Acca sellowiana)
Las flores son grandes 2 -3 cm, muy vistosas, con cuatro pétalos rojos carmín y largos
estambres de un rojo muy intenso. Cáliz con 4 sépalos blancos y corola con 4 pétalos
céreos, curvados, de color blanco en el exterior y rosados por el interior. Estambres
numerosos de color rojo muy salientes. Los pétalos son comestibles, de sabor similar a la
miel.
1.6.8.3. Fruto
FUENTE: CARVAJAL, M 2014.
FOTOGRAFÍA No. 4. FRUTOS DE FEIJOA (Acca sellowiana)
Es una baya, blonga de 4 a 7 cm × 3 a 5 cm, verde oscuro en la madurez, con aromas
agradables propios. La piel es de color verde intenso y lisa. La fructificación requiere clima
fresco. La pulpa es carnosa, color blanquecino, sabor agridulce, contienen de 20 a 40
semillas comestibles y que no son advertidas por el paladar. Tiene un agradable sabor que
difícilmente puede ser descrito comparándolo al de otros frutos conocidos, se asemeja al
de la piña, kiwi y emana un agradable aroma. La pulpa puede consumirse con o sin la piel
Se caracterizan por su alto contenido de yodo, (3mg/100g).
- 25 -
1.6.5. CULTIVO
La Feijoa crece en una amplia variedad de suelos. Las mejores cosechas, sin embargo,
provienen de plantas que crecen en suelos bien drenados con un pH entre 5,5 y 7,0.Son
bastante tolerantes a la sal, pero la salinidad disminuye el crecimiento y reduce los
rendimientos. (Feijoa cultivo. 2014)
Son resistentes y tolerantes a temperaturas extremas de -7 ° C a 40 ° C, la producción de
flores es pobre en las zonas con menos de 50 horas de enfriamiento, prefieren inviernos
fríos y veranos moderados (25 ° C a 33 ° C); el sabor de la fruta es mucho mejor en zonas
frías. Un árbol de Feijoa madura sana puede producir alrededor de 200 kg de fruta cada
temporada; algunos cultivares injertados de Feijoa son auto-fértiles. La mayoría no lo son,
y requieren un polinizador. (Feijoas crecimiento 2014)
1.6.6. VALOR NUTRICIONAL Y USOS
Tabla No.6 Valor nutricional de la Feijoa (A. sellowiana)
Feijoa (A. sellowiana)
Valor nutricional por cada 100 g
Energía 60 kcal 230 kJ
Carbohidratos 12.92 g
• Azúcares 8.2 g
• Fibra alimentaria
6.4 g
Grasas 0.6 g
Proteínas 0.98 g
Tiamina (vit. B1) 0.006 mg (0%)
Riboflavina (vit. B2)
0.018 mg (1%)
Niacina (vit. B3) 0.295 mg (2%)
Ácido pantoténico (vit.
B5)
0.233 mg (5%)
Vitamina B6 0.067 mg (5%)
Ácido fólico (vit. B9)
23 μg (6%)
Vitamina C 32.9 mg (55%)
Vitamina E 0.16 mg (1%)
Vitamina K 3.5 μg (3%)
Calcio 17 mg (2%)
Hierro 0.14 mg (1%)
Magnesio 8 mg (2%)
Manganeso 0.084 mg (4%)
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Fósforo 19 mg (3%)
Potasio 172 mg (4%)
Sodio 3 mg (0%)
Zinc 0.06 mg (1%)
% CDR diaria para adultos.
Fuente: Feijoa, raw en la base de datos de
nutrientes de USDA.
Posee una condición de fruta exótica, de muy buenas características organolépticas, y con
una producción no muy difundida. Según Hardy y Michael (1970) reportan que las
características aromáticas se deben a la presencia de benzoatos de etilo y metilo que
representan el 90% de las sustancias volátiles, responsables de la característica resistente
de la fruta.
Desde el punto de vista nutricional, el fruto de feijoa se caracteriza por su alto contenido
de yodo y vitamina C (Hoffmann, A et al.1994). La feijoa posee características
inmunológicas y antioxidantes, gracias a que es un fruto rico en bioflavonoides, polifenoles
activos como la catequina, leucoantocianinas, flavonoides, proantocianidinas y
naftoquinonas (Ebrahimzadeh M. et al. 2008); tiene propiedades anticancerígenas e influye
en la secreción de citoquinas en el intestino (Nakashima, H et al.2005). El fruto tiene
actividad antimicrobiana, que junto con las propiedades antioxidantes, permite
considerarlo como materia prima para producción de nuevos medicamentos (Vuotto M et
al. 2000), que permitan prevenir, entre otras, enfermedades cardiovasculares, cáncer e
infecciones.
A nivel empírico, el uso de feijoa sobre heridas e infecciones en la piel acelera y mejora el
proceso de cicatrización. Además los frutos de feijoa son ricos en fibra, potasio, fósforo,
magnesio, azúcar y calcio (Parra A. y Fischer G. 2013)
Los frutos de feijoa son ricos en vitamina C, polifenoles, terpenos, taninos, esteroides,
saponinas, flavonoides hidrocarburos, minerales, yodo, y benzoato de etilo lo afirma
Binder y Flath (1989).
La feijoa se presenta como un fruto rico en flavonoides, los cuales poseen actividades
inmunológicas y antioxidantes (Ielpo M et al., 2000). Debido a las expectativas
- 27 -
comerciales del cultivo y a la importancia nutricional y medicinal de este fruto es
importante optimizar el manejo agronómico del mismo. Sin embargo, en Colombia, no hay
publicaciones científicas de estudios anatómicos del crecimiento y desarrollo del fruto que
permitan implementar prácticas de manejo con el propósito de mejorar su calidad.
(Rodríguez M, et al 2010)
Actualmente, se consume su fruta al estado fresco, deshidratada o enlatada; además se
utiliza en la fabricación de vino, pulpa para yogurt, aromas, néctares y perfumes. (Usos
Feijoa 2014)
Presenta beneficios para tratamientos complementarios en el exceso de Colesterol debido
a su alta concentración de pectinas, que contribuyen a bajar y estabilizar los niveles de
colesterol y también para controlar la Hipertensión. (Feijoa usos. 2014).
La Feijoa estimula la regeneración celular y disminuye el envejecimiento celular; la
presencia de pectinas regula la digestión. Es de gran importancia para tratar problemas de
anemia. (Perea, M.et. al 2010)
- 28 -
CAPÍTULO II
2. PARTE EXPERIMENTAL
2.1. LUGAR DE LA INVESTIGACIÓN
La presente investigación se llevó a cabo en los siguientes laboratorios de la ESPOCH:
- Laboratorio de Nutrición Animal y Bromatología (Facultad de Ciencias Pecuarias).
- Laboratorio de Fitoquímica (Facultad de Ciencias).
- Laboratorio de Química Instrumental (Facultad de Ciencias).
Y en el Instituto Nacional Autónomo de Investigaciones Agropecuarias (INIAP),
Laboratorio de Servicio de Análisis e Investigación en Alimentos (LSAIA) del
Departamento de Nutrición y Calidad ( DNC) de la Estación Experimental Santa Catalina
(EESC).
2.2. MUESTRAS, EQUIPOS Y REACTIVOS
2.2.1. MUESTRAS
La materia prima que se usó en la presente investigación está detallada en la siguiente tabla.
Tabla No.7 Muestras del material vegetal y alimenticio utilizado en la investigación
MUESTRA SITIO DE
RECOLECCIÓN
DÍA DE
RECOLECCIÓN
ESTADO DE
MADURACIÓN
Hojas y Frutos del
árbol de Feijoa
Provincia Tungurahua-
Cantón Patate.
Sábado 20 de
Septiembre, 2014 Semi-maduro
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2.2.2. EQUIPOS
- Agitador de Tubos Vórtex (MIXER)
- Balanza analítica de precisión 0.1g
Shimadzu, modelo AUX 220
- Baño Ultrasonido (COLE PARMER
8892)
- Baño María
- Bomba de vacío.
- Congelador
- Cronómetro digital Thomas
Scientific
- Centrifuga
- Espectrofotómetro UV-VIS 2600
- Estufa (MEMMERT).
- Liofilizador
- Licuadora
- Mufla (VULCAN Y SNOL)
- pH metro (HANNA INSTRUMENT
Y HANNA WATERPROOF)
- Refractómetro (BAUSCH Y LOMB)
- Reflectometro RQ flex 16970
2.2.3. REACTIVOS
- Ácido gálico
- Ácido clorhídrico
- Agua bidestilada
- Agua destilada
- Alcohol amílico
- Carbonato de sodio al 20 %
- Cloruro de sodio
- 2,2´-azinobis (ácido 3-
etilbenzotiazolina-6-sulfónico)
(ABTS)
- Etanol
- Éter etílico
- Magnesio metálico
- Metanol
- Merckoquant Test ácido ascórbico, el
tubo contiene 50 tirillas analíticas
- Persulfato de Potasio
- Reactivo de Dragendorff
- Reactivo de Mayer
- Reactivo de Wagner
- Reactivo de Baljet
- Reactivo de Folin-Ciocalteau
- Solución de Fehling
- Tricloruro férrico
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2.2.4. MATERIALES
- Balones ámbar aforados de 25ml
- Balones aforados de 100 y 250 mL.
- Bureta de 25 y 50 mL.
- Cápsulas de porcelana
- Celdas plásticas
- Crisoles
- Cuchillo
- Dispensador de agua
- Embudo de vidrio.
- Espátula.
- Frascos de vidrio ámbar.
- Gradilla porta tubos de ensayo
- Guantes quirúrgicos
- Mandil
- Mascarilla
- Micropipetas de 1000 y 100 µL
regulables
- Mortero con pistilo.
- Olla de acero inoxidable.
- Papel absorbente.
- Papel de Aluminio.
- Papel Filtro.
- Pera de succión.
- Pinza para capsula
- Pinzas para bureta.
- Pinzas para tubos.
- Picnómetro de 10 mL.
- Pipetas pasteur
- Pipetas graduadas de 1, 5, 10 y 25
mL.
- Pizeta.
- Puntas plásticas para micropipetas
- Soporte universal.
- Termómetro.
- Trípode.
- Tubos de ensayo de vidrio de punta
cónica de 10mL
- Tubos de ensayo de vidrio
- Varilla de agitación.
- Vasos de Precipitación de 50, 100,
150, 250, 500 y 1 000 mL.
2.3. TÉCNICAS Y MÉTODOS
2.3.1. RECOLECCIÓN
La muestra de Feijoa (Acca sellowiana) se recolectó en la provincia de Tungurahua -
Cantón Patate.
- 31 -
2.3.2. CARACTERIZACIÓN BROMATOLÓGICA DE LAS HOJAS Y FRUTOS
DE LA FEIJOA (Acca sellowiana)
2.3.2.1. ANÁLISIS SENSORIAL
Los atributos sensoriales son: color, apariencia, textura, sabor y olor.
2.3.2.2. DETERMINACIÓN DE HUMEDAD - MÉTODO DESECACIÓN EN
ESTUFA DE AIRE CALIENTE
Fundamento
En los alimentos es de gran importancia el contenido de humedad, es un paso obligado en
el análisis calcular el porcentaje de agua por la pérdida de peso debida a su eliminación
por calentamiento (evaporación del agua), mediante la desecación en estufa de aire caliente
a 103ºC durante 24 horas. El agua se encuentra en los alimentos especialmente en dos
formas: agua disponible o libre y agua enlazada o ligada. El agua libre es la forma
predominante, se puede congelar o se libera con facilidad por evaporación o por secado.
El agua ligada o enlazada está combinada o unida en alguna forma química o a través de
puentes de hidrogeno a grupos iónicos o polares que no puede alinearse fácilmente (Lucero
O. 2010)
- 32 -
Procedimiento:
Cálculos:
FÓRMULA No.1
Dónde:
m= masa de la capsula en g
m1= masa de la capsula con la muestra en g
m2= masa de la capsula en g con la muestra después del calentamiento
2.3.2.3. DETERMINACIÓN DE CENIZAS. MÉTODO INCINERACIÓN EN MUFLA
Fundamento
La determinación de cenizas con el método incineración en mufla involucra la oxidación
de toda la materia orgánica presente en una cantidad exactamente pesada de muestra
homogénea, y su pesada posterior de las cenizas blancas resultantes, de la combustión total
en una mufla o en un horno a 550 oC. (Lucero O. 2010).
Determinacion de humedad
Se pesó 5 de muestra (previamente realizado su desmuestre) en cápsula de porcelana que con anterioridad se taro.
Se colocó en la estufa a 103°CC ± 3 ºC por un lapso de 2 a 3 h, hasta peso
constante.
En el desecador se enfrió hasta temperatura ambiente y se pesó. La
determinación se realizó por duplicado.
- 33 -
Procedimiento
Cálculos
FÓRMULA No.2
Dónde:
%Cbs = Porcentaje de ceniza en base seca
m = masa de la cápsula vacía en gramos
m1 = masa de la cápsula con la muestra antes de la incineración en ramos.
m2 = masa de la cápsula con las cenizas después de la incineración en gramos.
2.3.2.4. DETERMINACIÓN DE PROTEÍNA. MÉTODO MACRO-KJELDHAL
Fundamento
Se somete a un tratamiento oxidativo la muestra con ácido sulfúrico concentrado en
presencia de una mezcla catalizadora, los compuestos como grasas y proteínas son
destruidas hasta llegar a formar CO2 y agua, se descomponen las proteínas con la
formación de sulfato de amonio, este sulfato en medio ácido es resistente y solamente en
medio básico sucede su destrucción con desprendimiento de amoníaco, este amoníaco es
Determinación de Cenizas
Colocar la cápsula con la muestra seca resultado de la
determinación del contenido de humedad en un reverbero,
calcinar hasta ausencia de humos en la sorbona.
Transferir la cápsula a la mufla e incinerar a 500 – 550 ºC, hasta
obtener cenizas libres de residuo carbonoso (esto se obtiene al
cabo de 2 a 3 horas).
Sacar la cápsula y colocar en el desecador, enfriar y pesar.
La determinación debe hacerse por duplicado.
- 34 -
retenido en una solución de ácido bórico al 2.5% y titulado con HCl al 0.1 N. El contenido
en proteína de la muestra se calcula teniendo en cuenta el contenido medio en nitrógeno
de la muestra en análisis. (Flores C. 2012)
Procedimiento
Porcentaje de Proteína:
Determinación de proteína
Pesar el papel aluminio y añadir0,5 g de la muestra.Encender eldigestor y scrubber 15min antesde iniciar el ensayo y limpiarlos.
Agregar 1.8 g de sulfato de sodiomás 0,2 g de sulfato cúprico llamadatambién muestra catalizadora. Todoeste contenido se coloca en cada tuboal cual se añade 20mL de H2SO4
concentrado (grado técnico).
Agitar el contenido de cada balón contodo este contenido es llevado alMacro Kjeldahl para su digestión, auna temperatura graduada en 800C porun tiempo de 90 minutos a partir delmomento que se clarifica la digestión.
Una vez terminada la fase de digestión. Se procede a
preparar la etapa de destilación para lo cual
colocamos en los matraces Erlenmeyer 250 ml.
Colocar 50 ml de ácido bóricoal 4% mas indicador mixto(rojo metilo y verde debromocresol) y los colocamosen cada una de las terminalesdel equipo de destilación.
Transferir las muestras frías de lostubos de digestión a los tubos dedestilación con mucho cuidadoAgregar a los tubos poco a poco25ml de agua destilada y agregarHidróxido de Sodio 6N (NaOH) conla válvula dosificadora hasta obtenerun colar café
Se enciende el equipo para inicialla destilación que dura hasta que elcontenido del matraz adquiera uncolor verde esmeralda este procesodura aproximadamente 30segundosSe retira los tubos con sucontenido, se desechan.
Para la fase de titulación searma el soporte universalcon la bureta con HCl al0.1N.
Se titula hastaobtener un colorgrisáceo transparenteque es el punto finalde la titulación.
El número de ml. deHCl al 0.1 N. gastadose registra para elcálculo respectivo
- 35 -
FÓRMULA No.3
Donde:
V= ml de HCl gastado durante la titulación
N= Normalidad del HCL
F= Factor de Nitrógeno para convertir a proteínas. 6.25 para verduras y frutas
m= Peso de la muestra
2.3.2.5. DETERMINACIÓN DE FIBRA CRUDA. MÉTODO DE WEENDE
Principio
Fibra cruda es la pérdida de masa que incumbe a la incineración del residuo orgánico que
queda en seguida de la digestión con soluciones de ácido sulfúrico e hidróxido de sodio en
condiciones específicas.
- 36 -
Cálculos
Porcentaje de Fibra:
FÓRMULA No.4
Dónde:
F = fibra cruda en base seca y desengrasada
P1 = masa del crisol más el residuo desecado en la estufa
P = masa del crisol más la ceniza de la incineración en mufla en g.
m= masa de la muestra seca y desengrasada tomada para la determinación en g.
2.3.2.6. DETERMINACIÓN DE EXTRACTO ETÉREO. MÉTODO SOXHLET
Determinación de fibra cruda
Se pesa 2 gramos de muestraseca y desengrasada y colocaren el bazo de Berzellius connúcleos de ebullición y 250 mlde ácido sulfúrico 1.25%.
Colocar el vaso en elequipo y ajustar alcondensador, subir laparilla y calentar hastaebullición.
Mantener la ebullición pormedia hora exacta,contados partir de queempieza a hervir.
Desconectar el vaso delcondensador, enfriar yfiltrar al vacío.
Lavar el vaso y el residuodel papel con 250 ml deagua destilada caliente.
El residuo trasvasarcuantitativamente al vasode Berzellius y añadir 250ml de NaOH 1.25%.
Colocar el vaso en elequipo y ajustar alcondensador, subir laparilla y calentar hastaebullición.
Mantener en ebulliciónmedia hora exacta,contados partir de queempieza a hervir.
Lavar el vaso y el residuode papel con 250 ml deagua destilada caliente.Lavar por último con 15 mlde hexano o etanol.
Colocar el crisol de Goochen la estufa a 105durantetoda la noche, luego enfriaren desecador y pesar
Colocar el crisol deGooch en la mufla a600oC por media hora,enfriar en desecador ypesar.
- 37 -
Fundamento
Se considera grasa al extracto etéreo que se obtiene cuando la muestra es sometida a
extracción con éter etílico. El extractor utilizado en el siguiente método es el Soxhlet el
cual utiliza un sistema de extracción cíclica de los compontes solubles en éter que se
encuentran en el alimento. Insoluble en agua y soluble en disolventes orgánicos apolares.
Proporcionan energía y son la principal reserva energética del organismo. Fuente de ácidos
grasos esenciales, transporte de combustible metabólico y disolvente de algunas vitaminas.
Influyen en la absorción de las proteínas y en la calidad de la grasa que se deposita en el
cuerpo. (Lucero O. 2010)
Cálculos:
FÓRMULA No.5
%Ex. E BS= grasa cruda o bruta en muestra seca expresado en porcentaje en masa.
P1= masa del balón más la grasa cruda o bruta extraída en gramos.
P= masa del balón de extracción vacío en gramos
Determinación de extracto etéreo
Pesar 2 gramos demuestra seca ycolocar en el dedal,luego introducirlo enla cámara desifonación.
En el balón previamente tarado,adicionar 50 mL de éter etílico oéter de petróleo (se puede usartambién hexano) o la cantidadadecuada dependiendo deltamaño del equipo.
Embonar la cámara desifonación al balón.
Colocar el condensadorcon las manguerassobre la cámara desifonación.
Encender la parrilla,controlar la entrada ysalida de agua y extraerpor 8 a 12 horas.
Al terminar el tiempo,retirar el balón con elsolvente más el extractograso y destilar elsolvente.
El balón con la grasabruta o cruda colocaren la estufa por mediahora, enfriar endesecador y pesar.
- 38 -
m= masa de la muestra seca tomada para la determinación en gramos.
Grasa bruta en base húmeda:
FÓRMULA No.6
2.3.2.7. EXTRACTO LIBRE NO NITROGENADO (ELNN)
FÓRMULA No.7
Dónde:
%ELnN= porcentaje de carbohidratos digeribles.
%H= porcentaje de humedad
%C porcentaje de cenizas
%F= porcentaje de fibra
%Ex. E= porcentaje de extracto etéreo
%P= porcentaje de proteína
2.3.2.8. DETERMINACIÓN DE AZÚCARES TOTALES: MÉTODO DE FEHLING
Fundamento
Los azúcares que poseen en su estructura grupo
Se trata de una reacción redox en la que el grupo aldehído (reductor) de los azúcares es
oxidado a grupo ácido por el Cu2+que se reduce a Cu+. Tanto los monosacáridos como los
disacáridos reductores reaccionan con el Cu2+dando un precipitado rojo de óxido cuproso
- 39 -
Cálculos:
FÓRMULA No. 8
Dónde:
%AT = porcentaje de azúcares Totales
A= aforo de la muestra
F= título de Fehling
W= peso de la muestra en g
Determinación de Azúcares
Se pesa 5g de muestra
previamente homogenizada.
Colocar en un balón de 250mL y añadir 100mL
de agua destilada.
Adicionar 5mL de HCI concentrado. Calentar a reflujo por 20 minutos.
Neutralizar con NaOH al 50% hasta
pH7.Aforar a 250mL con agua destilada. Filtrar y colocar el
filtrado en una bureta de 50mL
En un erlenmeyer de 250mL colocar 5mL de la solución de fehling A y 5mL de la solución de fehling B, mezclar y añadir
40mL de agua destilada, núcleos de ebullición. Colocar en una fuente calorifica
y calentar hasta ebullición.
En este momento y controlando el tiempo con un cronómetro
empezar añadir lentamente cada 2 segundos y en pequeñas
cantidades de 0,5mL la solución problema desde la bureta, sin
dejar de hervir.
Al 1 minuto y 55 segundos de ebullición adicionar 3 gotas de la
solución indicadora de azul de metileno y continuar la titulación a ritmo de 0,l mL por segundo hasta
color rojo brillante.
Repetir la titulación adicionando de una sola vez el volumen gastado
inicialmente en la titulación anterior menos
0.5mL.
Titular a ritmo de 0.05mL cada 10
segundos.El punto final debe alcanzar en un
periodo de ebullición de 2 a 3 minutos
- 40 -
V= volumen de la solución problema gastado en la titulación
2.3.2.8. DETERMINACIÓN DE pH Y ACIDEZ.
Fundamento
Se determina la acidez por titulación con NaOH diluido y se coloca indicador en la muestra
por lo que se espera el viraje a color rosado, con lo que se evalúa con el volumen del
titulante gastado
Cálculos
FÓRMULA No.9
Donde:
ml NaOH = ml de hidróxido de sodio titulados.
N NaOH = Normalidad de hidróxido de sodio.(0,1N) meq.
Ac. Málico = mili equivalentes del ácido málico. (0,06704)
W muestra = peso de la muestra utilizados en gramos.
Determinación de pH y Acidez
Se pesa una cantidad de muestra (previamente
realizado su demuestre) comprendido entre 5 y 10 g y coloque en un erlenmeyer de 250 ml
Se añade agua destilada 50 a 100 ml y
agitara por dos minutos, tome su pH y dejar en reposo un rato.
Licuar por tres minutos y cernir
Titular con NaOH 0,1 N en presencia de
solución indicadora de fenolftaleína hasta
color rosa persistente.
- 41 -
2.3.2.9. DETERMINACIÓN DE VITAMINA C- MÉTODO DEL YODO
Fundamento
El procedimiento de las titulaciones consiste en colocar una de las sustancias en una bureta,
y la otra en un matraz aforado, dependiendo de las circunstancias. A la sustancia colocada
en el matraz se le añade un reactivo indicador. Las titulaciones o valoraciones acido-base
son empleadas para determinar concentraciones de sustancias químicas con precisión y
exactitud
CÁLCULOS
FÓRMULA No. 10
2.3.3. SECADO Y MOLIENDA DE LAS HOJAS DE FEIJOA (Acca sellowiana)
Procedimiento
La muestra fresca se limpió, se lavó con abundante agua destilada para dejarla libre de
polvo o vestigios de contaminación y se dejó secar al ambiente.
Secado en bandejas
Determinación de Vitamina C
Pesar 5g de muestra preparada y colocar en un Erlenmeyer de 250ml vAñadir 100 ml de agua
destilada y 1ml de HCl conc.
Titular inmediatamente con solución de yodo N/10 en
presencia de sol. Indicadora de almidón soluble hasta
coloración azul.
Cada mL de yodo 0,1N corresponde a 8,806 mg de
acido ascórbico
- 42 -
- Se dejó por 3 días en el deshidratador con ventiladores de aire
- En los secadores a gas con una temperatura de 28 a 32°C se colocó por dos días.
- Se sacó de las bandejas y se pasó al molino.
Molienda
- Se molió y se homogenizó la muestra en el molino.
- Se tamizó la muestra para separar el polvo de la fibra.
- Se guardó la muestra en bolsas de papel bien cerradas para que no ingrese humedad
2.3.4. LIOFILIZACIÓN DE LOS FRUTOS DE LA FEIJOA (Acca sellowiana)
Las frutas se lavaron, se despulparon y se congelaron rápidamente a -18°C; evitando la
acumulación de cristales de hielo.
Una vez ya congelada la pulpa se colocó en el liofilizador por 48 horas a una temperatura
constante 40°C; donde se secó por sublimación de hielo de la pulpa congelada; aquí
ocurrió la sublimación, es decir la pulpa de la Feijoa pasó directamente de solido a gas sin
pasar por líquido.
Se guardó en frascos ámbar; se puede almacenar por períodos muy largos con reducciones
muy bajas de sus características organolépticas, físicas, químicas y biológicas.
La liofilización se realizó con ayuda de un liofilizador Labconco modelo 1400 (tipo
armario), a una temperatura de -40 C y 0,13 mbar de presión. .
2.4. ANÁLISIS FÍSICO-QUÍMICO DE FEIJOA (Acca sellowiana) DROGA SECA
Se realiza el control de calidad con la finalidad de evaluar cada uno de los parámetros y
determinar si cumplen con los límites establecidos.
2.4.1. DETERMINACIÓN DE HUMEDAD - Método Gravimétrico
Promueve la proliferación de microorganismos la humedad, de esta manera altera cada uno
de sus componentes, el límite de aceptación de humedad se encuentra en un rango de 8-
14%. (MIRANDA, M. 2000).
- 43 -
H =𝑚2 −𝑚
𝑚2 −𝑚∗ 100
FÓRMULA No.11
H = Pérdida de peso por desecación (%).
m = Peso de la capsula más la muestra (g).
m1 = Peso de la capsula más la muestra (g).
m2 = Peso de la capsula más la muestra (g).
100 = factor matemático para los cálculos.
2.2.1. DETERMINACIÓN DE CENIZAS TOTALES - Método Gravimétrico
Al incinerar la muestra del vegetal a ser analizado se obtiene un residuo orgánico (cenizas).
Formula
% cenizas = (P3 - P1 / P2 - P1) x 100
FÓRMULA No.12
C = porcentaje de cenizas totales en base hidratada.
P1 = masa del crisol vacío (g)
P2 = masa del crisol con la porción de ensayo (g)
P3= masa del crisol con la ceniza (g)
100 = factor matemático para los cálculos. (MIRANDA, M., 2006)
2.4.2. DETERMINACIÓN DE CENIZAS SOLUBLES EN AGUA - Método
Gravimétrico
Las cenizas solubles en agua son la diferencia en peso que existe entre las cenizas totales
y el residuo después del tratamiento de las cenizas totales con agua. (MIRANDA, M.,
2006).
%CA =𝑚2 −𝑚𝑎
𝑚1 −𝑚∗ 100
FÓRMULA No.13
%CA= porcentaje de cenizas solubles en agua en base hidratada.
- 44 -
m2= masa del crisol con las cenizas totales (g).
ma =masa del crisol con las cenizas insolubles en agua (g).
m1 = masa del crisol con la muestra de ensayo (g).
m = masa del crisol vacío.
100 = factor matemático.
2.4.3. DETERMINACIÓN DE CENIZAS INSOLUBLES EN ÁCIDO CLORHÍDRICO
- Método Gravimétrico
Las cenizas insolubles en ácido son el residuo el mismo que se obtiene luego de hervir las
cenizas totales con ácido clorhídrico diluido y llevar a la combustión el material insoluble
sobrante. (MIRANDA, M. 2006).
%Ci =𝑚2 −𝑚
𝑚1 −𝑚∗ 100
FÓRMULA No.14
%Ci= porcentaje de cenizas insolubles en ácido clorhídrico en base hidratada.
m1= masa del crisol con la porción de ensayos (g).
m = masa del crisol vació (g).
m2= masa del crisol con las cenizas ácido clorhídrico (g).
100= factor matemático.
2.5. OBTENCIÓN DE LOS EXTRACTOS
Para la elaboración de los extractos se aplicó la metodología adaptada por el INIAP
2.5.1. ELABORACIÓN DEL EXTRACTO ALCOHÓLICO (METANÓLICO 70%) DE
LAS HOJAS DEL ÁRBOL DE FEIJOA (A. sellowiana).
1. Se pesó 0,5 g de muestra seca de las hojas del árbol de Feijoa en tubos cónicos de
plástico de 10ml.
2. Se añadió 5mL de metanol y se colocó en el agitador de tubos por 2 minutos.
3. Por 5 minutos se los dejó en el ultrasonido.
4. Se centrifugó por 10 minutos y se obtuvo el sobrenadante para los análisis.
- 45 -
5. El paso 2, 3, 4 se repitió por cuatro veces y se obtiene el extracto, este se aforó a 25 ml
con metanol al 70%.
6. Se guardó el extracto en un frasco ámbar.
2.5.2. ELABORACIÓN DEL EXTRACTO ACUOSO DE LAS HOJAS DEL ÁRBOL
DE FEIJOA (A. sellowiana)
1. Se pesó 0,5 g de muestra seca de las hojas del árbol de Feijoa en tubos cónicos de
plástico de 10ml.
2. Se añadió 5mL de agua bidestilada y se colocó en el agitador de tubos por 2 minutos.
3. Por 5 minutos se los dejó en el ultrasonido
4. Se centrifugó por 10 minutos y se obtuvo el sobrenadante para los análisis.
5. El paso 2, 3,4 se repitió por cuatro veces y se obtuvo así el extracto, este se afora a 25
ml con metanol al 70%.
6. Se guardó el extracto en un frasco ámbar.
2.5.3. ELABORACIÓN DEL EXTRACTO ALCOHÓLICO (METANÓLICO 70%) DE
LOS FRUTOS DEL ÁRBOL DE FEIJOA (A. sellowiana).
1. Se pesó 0,5 g de muestra liofilizada de los frutos del árbol de Feijoa en tubos cónicos
de plástico de 10ml.
2. Se añadió 5mL de metanol y se colocó en el agitador de tubos por 2 minutos
3. Por 5 minutos se los dejó en el ultrasonido
4. Se centrifugó por 10 minutos y se obtuvo el sobrenadante para los análisis.
5. El paso 2, 3, 4 se repitió por cuatro veces consiguiendo así el extracto, este se aforó a
25 ml con metanol al 70%.
6. Se guardó el extracto en un frasco ámbar.
2.5.4. ELABORACIÓN DEL EXTRACTO ACUOSO DE LOS FRUTOS DEL
ÁRBOL DE FEIJOA (A. sellowiana)
1. Se pesó 0,5 g de muestra liofilizada de los frutos del árbol de Feijoa en tubos cónicos
de plástico de 10ml.
2. Se añadió 5mL de agua bidestilada y se colocó en el agitador de tubos por 2 minutos.
- 46 -
3. Por 5 minutos se los dejó en el ultrasonido
4. Se centrifugó por 10 minutos y se obtuvo el sobrenadante para los análisis.
5. El paso 2, 3, 4 se repitió por cuatro veces y así se obtuvo el extracto, este se aforó a 25
ml con metanol al 70%.
6. Se guardó el extracto en un frasco ámbar.
2.6. CONTROL DE CALIDAD DE LOS EXTRACTOS
Para realizar el control de calidad de los extractos de Feijoa (Acca sellowiana) que
permitió establecer la calidad del extracto obtenido a partir de la droga cruda se utilizaron
los siguientes métodos de análisis físico – químicos. Los procedimientos están basados en
la metodología de Farmacognosia y productos naturales. (Normas Ramales. de drogas
crudas y extractos y tinturas Miranda M (2006).
2.6.1. DETERMINACIÓN DE LOS REQUISITOS ORGANOLÉPTICOS
Para la determinación estos requisitos utilizamos los órganos de los sentidos, a los extractos
se procedió a analizar el aspecto, color, olor, sabor.
2.6.2. DETERMINACIÓN DEL pH – Método potenciométrico.
La acidez o la alcalinidad de las soluciones acuosas se determinan por el valor del índice
de hidrógeno (pH).
2.6.3. DETERMINACIÓN DEL ÍNDICE DE REFRACCIÓN - Refractometría
Es una constante muy característica de cada una de las sustancias representa la relación
existente entre el seno del ángulo de incidencia de la luz y el seno del ángulo de refracción
cuando la luz pasa oblicuamente a través del medio.
2.6.4. DETERMINACIÓN DE LA DENSIDAD RELATIVA - Método Gravimétrico
A la densidad relativa se la conoce como la relación que existe entre la masa de un volumen
de la sustancia a ensayar a una temperatura de 25°C y a similar temperatura la masa de un
volumen igual de agua. Este término equivale a peso específico.
- 47 -
2.6.5. DETERMINACIÓN DE LOS SÓLIDOS TOTALES – Método Gravimétrico.
Se entiende por sólidos totales a los residuos de material que quedan en un recipiente
después de la evaporación de una muestra y su consecutivo secado en estufa posteriormente
de la evaporación de una muestra y su sucesivo secado en estufa a una temperatura definida
de 105°C.
2.7. ESTUDIO FITOQUÍMICO (SCREEENING O TAMIZAJE FITOQUÍMICO).
El estudio fitoquímico tiene como finalidad aislar e identificar los diferentes tipos de
compuestos que biosintetiza la planta (los que podrá tener o no alguna actividad o
toxicidad). Las hojas secas y el fruto liofilizado de la planta de Feijoa son sometidos a
extracciones sucesivas y a las siguientes pruebas siguiendo la metodología de Miranda
(2006).
- 48 -
FUENTE: MIRANDA, M. 2002
FIGURA No.13. Extracciones sucesivas del material vegetal.
Se aplicaron solo las pruebas destinadas a la determinación de metabolitos presentes en
el extracto alcohólico en base a las técnicas descritas en la tabla siguiente:.
Tabla No.8 Técnicas del tamizaje fitoquímico
- 49 -
Ensayo
METABOLITO
PROCEDIMIENTO
RESULTADO
Antocianidinas Estructuras de
secuencia C6-
C3-C6 del grupo de los
flavonoides.
Se calientan 2 mL del
extracto metanólico 10
minutos con 1 mL de HCl concentrado. Se deja enfriar
y se adiciona 1mL de agua y
2 mL de alcohol amílico. Se agita y se deja separar las
dos fases.
La aparición de
color rojo a
marrón en la fase amílica.
Baljet Lactonas. Si la alícuota del extracto se
encuentra en alcohol, debe evaporarse el solvente en
baño de agua y re disolverse
en la menor cantidad de alcohol (1mL). En estas
condiciones se adiciona
1mL de reactivo.
La aparición de
una coloración o precipitado rojo
(++ y +++)
respectivamente.
Borntrager Quinonas. Si la alícuota del extracto no se encuentra en cloroformo,
debe evaporarse el solvente
en baño de agua y el residuo re disolverse en 1mL de
cloroformo.
Se adiciona 1mL hidróxido
de sodio, hidróxido de potasio o amonio al 5% en
agua. Se agita mezclando las
fases y se deja en reposo hasta su ulterior separación.
Si la fase acuosa alcalina se colorea
de rosado o rojo.
Coloración rosada (++), coloración
roja (+++).
Catequinas Catequinas Tome una gota de la
fracción alcohólica, con la
ayuda de un capilar y aplique la solución sobre
papel filtro. Sobre la
mancha aplique solución de carbonato de sodio.
Verde carmelita a
la luz UV.
Cloruro Férrico Compuestos
fenólicos y/o
taninos.
Si el extracto es acuoso se
añade acetato de sodio para
neutralizar y tres gotas de una solución de tricloruro
férrico al 5% en solución
salina fisiológica a una alícuota del extracto
alcohólico se adiciona el
reactivo.
Coloración rojo –
vino, verde
intenso, azul.
Dragendorff Alcaloides. Si la alícuota del extracto está disuelta en un solvente
orgánico, éste debe
evaporarse, en un baño de agua y el residuo re
disolverse en 1 mL de ácido
clorhídrico al 1 % en agua.
Si hay opalescencia se
considera (+)
turbidez definida (++), precipitado
(+++).
- 50 -
Si el extracto es acuoso, a la
alícuota se le añade 1 gota
de ácido clorhídrico
concentrado. Con la solución acuosa ácida se
realiza el ensayo, añadiendo
3 gotas del reactivo.
Espuma Saponinas. Si la alícuota se encuentra en alcohol, se diluye con 5
veces su volumen en agua y
se agita la mezcla fuertemente durante 5–10
min.
Si aparece espuma en la superficie del
líquido.
Fehling Azúcares
Reductores.
Si la alícuota del extracto no
se encuentra en agua, debe evaporarse el solvente en
baño de agua y el residuo re
disolverse en 1–2 mL de agua.
Se adicionan 2mL del
reactivo y se calienta en baño de agua 5–10 min la
mezcla.
Solución se
colorea de rojo o aparece
precipitado rojo.
Liebermann-
Burchard
Triterpenos y/o
esteroides.
Se adiciona 1mL de
anhídrido acético y se mezcla bien. Por la pared del
tubo de ensayo se dejan
resbalar 2-3 gotas de ácido sulfúrico concentrado sin
agitar.
1. Rosado
2. Verde intenso – visible
3. Verde oscuro –
negro
Resinas Resinas. Adicione a 2mL de la
solución alcohólica, 10 mL de agua destilada.
Precipitado.
Shinoda Flavonoides. Si la alícuota del extracto se
encuentra en alcohol, se
diluye con 1 mL de ácido clorhídrico concentrado y
un pedacito de cinta de
magnesio metálico. Después de la reacción se
espera 5 minutos, se añade 1
mL de alcohol amílico, se mezclan las fases y se deja
reposar hasta que se
separen.
Cuando el alcohol
amílico se colorea
de amarillo, naranja, carmelita
o rojo; intenso en
todos los casos.
Wagner y Mayer Se parte de igual manera en los casos anteriores de la solución acida, añadiendo 2 ó 3 gotas del
reactivo.
Posteriormente en cada extracto por separado se procede según los siguientes esquemas:
- 51 -
FUENTE: MIRANDA, M. 2002
FIGURA No. 10. Esquema de las reacciones a realizar en el extracto alcohólico.
FUENTE: MIRANDA, M. 2002
FIGURA No. 11. Esquema de las reacciones a realizar en el extracto alcohólico.
2.8. DETERMINACIÓN DE VITAMINA C DE LAS HOJAS Y FRUTOS DEL
ÁRBOL DE FEIJOA (Acca sellowiana) MEDIANTE EL MÉTODO
REFLECTOMETRICO DE LA MERCK.
2.8.1. FUNDAMENTO
El ácido ascórbico reduce el ácido molibdofosfórico amarillo a azul de fosfomolibdeno,
cuya concentración se determina por reflectometría, que es una técnica basada en la
interacción entre la luz y la materia, la luz es una forma de energía que se expresa en
parámetros de onda, por la óptica geométrica se detectó la reflexión.
- 52 -
FIGURA No. 12 Diagrama de flujo de la determinación de vitamina C de hojas y frutos
del árbol de feijoa (Acca sellowiana) mediante el método reflectométrico de la merck
MÉTODO REFLECTOMÉTRICO DE LA MERCK
Pesar 3g planta seca de feijoalicuar y llevar a un volumen de200ml con agua destilada (paramuestras ricas en vitamina C)
Calibrar el equipocon la curva decalibración queviene con las tirillas.
Tomar una tirillay cerrar el tuboinmediatamente
Presionar la tecla STAR delrefractómetro e introducir deforma simultanea la tirillaanalítica con ambas zonasde reacción duranteaproximadamente 2segundos en la muestra.
Eliminar el excesode líquido de la tirilla,sacudiéndolamanualmente.
Cuando suene la señal acústica (5segundos antes de transcurrir eltiempo de reacción) la tirilla yadebe estar introducida con la zonade reacción en dirección a lapantalla hasta el tope en eladaptador de tirillas.
Después de transcurrido eltiempo de reacción, leer en lapantalla el valor de la mediciónen mg/L de ácido ascórbico. Elvalor se almacenaautomáticamente.
Si el valor de medición es superior alintervalo de medida, debe repetirse lamedición con nuevas muestras diluidashasta obtener un valor inferior a 450mg/L de ácido ascórbico que luego semultiplicara por el factor.
- 53 -
2.9. DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS FENÓLICOS TOTALES DE LAS
HOJAS Y FRUTOS DEL ÁRBOL DE FEIJOA (Acca sellowiana) MEDIANTE EL
MÉTODO DE FOLIN-CIOCALTEAU
2.9.1. FUNDAMENTO
Los compuestos fenólicos son oxidados por el reactivo de Folin-Ciocalteau. Este reactivo
contiene una mezcla de ácido fosfotúngstico (H3PW12O40) y el ácido fosfomolíbdico
(H3PMo12O40), que se reduce por oxidación de los fenoles, originando óxidos de
tungsteno (W8O23) y de molibdeno (Mo8O23), de color azul. La coloración azul producida
es proporcional a la concentración de compuestos fenólicos presentes, y posee una
absorción máxima a 765 nm. (Palomino L. et al. 2009).
- 54 -
Figura No. 13 Diagrama de flujo de la determinación de compuestos fenólicos de hojas y
frutos del árbol de feijoa (Acca sellowiana) mediante el método de Folin ciocalteau.
MÉTODO DE
FOLIN-CIOCALTEU
Tomar 1mL del extracto de Feijoa (A. sellowiana)
Añadir 6mL de aguabidestilada y 1 ml dereactivo de Folin-Ciocalteu.
Dejar en reposo 3 minutos
Añadir 2mL de la solución de Carbonato de sodio al 20%.
Inmediatamente agitar en Vortex.
Calentar en baño María a 50°C por 15 minutos. (INCUBAR)(Tanto para
muestras como para estándares)
Pasar la solución a la cubeta de
plástico
Cuantificar en elespectrofotómetro UV-Vis2600 bajo las siguientescondiciones:
Longitud de onda 760nm;T° ambiente,Slit 0,2m
- 55 -
2.9.2. CURVA DE CALIBRACIÓN
Se elaboró una curva de calibración para determinar la concentración de los compuestos
fenólicos totales para lo cual se utilizó el ácido gálico como estándar de referencia; se
preparó soluciones en concentraciones de 5, 10, 40, 80, 100, 140 y 200 ppm.
Se estableció la ecuación de la recta para la curva de calibración en base al estándar de
ácido gálico preparado a diferentes concentraciones y se midió a una longitud de onda
de 765nm.
2.10. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE LAS HOJAS
Y FRUTOS DEL ÁRBOL DE FEIJOA (Acca sellowiana) MEDIANTE EL MÉTODO
(2,2’azinobis -(3-etilbenzotiazolin 6 ácido sulfónico) (ABTS).
El método ABTS que se basa en la decoloración del catión radical ABTS•+. Al inicio el
radical ABTS es de color azul oscuro a la adición de un agente antioxidante determina su
decoloración.
2.10.1. PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN MADRE
Se preparó una solución madre de ABTS (7mM), para ello se pesó exactamente 0,09601g
de ABTS 2,2’azinobis -(3-etilbenzotiazolin 6 ácido sulfónico) y se disolvió en 25 mL de
agua bidestilada.
2.10.2. PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE PERSULFATO DE POTASIO
(K2S2O8)
Se preparó una solución de Persulfato de Potasio K2S2O8 (2,45mM), para ello se pesó
0,0165g de K2S2O8 y se disolvió en 25 mL de agua bidestilada.
2.10.3. PREPARACIÓN DEL RADICAL ABTS•+
En un frasco ámbar, se colocó 3mL de la solución madre ABTS (7mM) y 3 mL de la
solución de Persulfato de Potasio K2S2O8 (2,45mM), se homogenizó y se cubrió con papel
- 56 -
aluminio. La solución se incubó de 12 a 16 horas a temperatura ambiente (±25ºC) antes de
su utilización.
La solución tiene un periodo de uso de 2 días en refrigeración.
Una vez formado el radical ABTS•+ se diluyó con etanol hasta obtener un valor de
absorbancia comprendido entre 0,70 (±0,1) a 754 nm (longitud de onda de máxima
absorción)
2.10.4. CURVA DE CALIBRACIÓN
Se preparó una curva de calibración con Trolox, inicialmente se partió de una solución de
Trolox a 200mM, para lo cual se pesó 0,050g de reactivo de Trolox y se aforó a 100mL
con etanol al 96%. De esta solución se tomó alícuotas de 2,5; 3,75; 5; 6,25; 7,5; 8,75 y se
aforó a 25 mL con una concentración para la curva de calibración de 200, 300, 400, 500,
600 y 700 mM respectivamente.
Los resultados se expresan en mMTrolox / g muestra
- 57 -
Figura No. 14 Diagrama de flujo de la determinación de actividad antioxidante de hojas y
frutos del árbol de feijoa (Acca sellowiana) mediante el método de ABTS
MÉTODO ABTS
Preparar
Solución madre
ABTS (7mM)
Solución de
K2S2O8 (2,45mM)
Solución de
ABTS
radicalizado
Dejar en
oscuridad de
12-16 horas
ABTS•+ diluido con
etanol hasta obtener una
Absorbancia de 0,70
(λ) 754nm
200µl de Extracto de
Feijoa
+
3,8mL de ABTS•+
Dejar en reposo por 45’
Colocar en las cubetas
de plástico
Solución estándar
de Trolox
Lectura del
estándar
Lectura de los
extractos
- 58 -
CAPITULO III
3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En este capítulo se exponen en tablas los datos experimentales, con una media de los
valores obtenidos de cada uno de las determinaciones analizadas.
3.1. CARACTERIZACIÓN LA FEIJOA (A. sellowiana)
3.1.1. EVALUACION SENSORIAL
Cuadro No. 1 Resultados de la evaluación sensorial de las hojas y frutos de la Feijoa
(Acca sellowiana). Laboratorio de Nutrición Animal y Bromatología.
Facultad de Ciencias Pecuarias. ESPOCH, Septiembre 2014
PARÁMETROS HOJAS DE
FEIJOA
FRUTOS DE
FEIJOA
COLOR Verde Verde
OLOR Herbario Fragante
SABOR Herbario Acido-dulce
TEXTURA Normal Blanda
En el CUADRO No.1 se observa la evaluación sensorial de las hojas y frutos de la Feijoa
análisis primordial que se realizó para conocer la idoneidad en la recolección de la materia
prima para realizar posteriormente el análisis bromatológico y el análisis fitoquímico.
Se saboreó un sabor ácido en los frutos y esto dependió de la etapa de maduración del
fruto, en esta investigación se trabajó con frutos semi-maduros. El fruto posee un color
verde, el mismo que no varía en la maduración. Según estudios realizados por (Amarante
et al., 2008), al aumentar la temperatura se promueve la maduración y por ende la
degradación de la clorofila en feijoa la cual no cambia de color debido a la genética de la
fruta, variando solamente la tonalidad del verde.
- 59 -
Hardy y Michael (1970) reportan que las características aromáticas se deben a la presencia
de benzoatos de etilo y metilo que representan el 90% de las sustancias volátiles,
responsables de la característica presentes en la fruta.
Después de ser cosechadas, las feijoas maduran desde adentro hacia afuera; la fruta
demasiado madura presenta pérdida de sabor (disminución de la concentración de sólidos
solubles y acidez) y oscurecimiento de la pulpa y de las semillas (Thorp y Klein, 1987).
3.2. ANÁLISIS BROMATOLÓGICO
Cuadro No. 2 Resultados del análisis bromatológico de las hojas y frutos de la Feijoa
(Acca sellowiana) por 100 g de muestra. Laboratorio de Nutrición
Animal y Bromatología. Facultad de Ciencias Pecuarias. ESPOCH,
Septiembre 2014
PARÁMETRO FRUTOS
Referencia
bibliográfica
HOJAS
Humedad 86,66 ±0,24 84,94 54,31 ± 0,09
Ceniza 0,64 ± 0,07 0,56 5,34 ± 0,03
Proteína 0,82 ± 0,12 0,98 6,60 ± 0,29
Fibra 5,55 ± 0,15 6,4 14,60 ± 0,11
Grasa 0,38 ± 0,09 0,60 0,68 ± 0,08
ELnN 6,09 ± 0,16 6,52 18,47 ± 0,14
Azúcares 6,86 ± 0,15 8,20 3,98 ± 0,07
pH 2,9 ± 0,12 3,0-3,5 5,68 ± 0,12
Acidez 2,7 ± 0,08 1,6-2 ----
°Brix 8 ± 0,2 10-12 ----
± Desviación estándar para dos repeticiones.
(Fuente: USDA Base de Datos Nacional de Nutrientes)
En el CUADRO No.2 se plasman los resultados del análisis bromatológico de las hojas
frescas y la pulpa de los frutos de Feijoa valores reportados en 100 gramos de muestra, los
valores analizados del fruto concuerdan con los datos bibliográficos USDA más al realizar
el análisis estadístico aplicando el test t Student para una cola, se reporta que existe
diferencia altamente significativa a un nivel de confianza del α=0,05 entre los valores de
humedad, fibra, azúcares, acidez y grados Brix de la muestra comparados con la fuente
bibliográfica, debiéndose esto a varios factores entre los más importantes el estado de
- 60 -
madurez, el fruto en este análisis se encontraba en estado semi-maduro, también influye
las condiciones ambientales en las que se desarrolló el fruto. Se reporta además con la
ayuda del test t que no existe diferencia significativa en los contenidos de ceniza, proteína,
grasa, ElnN y pH.
Los frutos de Feijoa presentan una cantidad considerable de fibra, lo que hace que sea un
buen laxante; el contenido de fibra ayuda a proteger la mucosa del colon, disminuyendo el
tiempo de exposición a las toxinas, así como la unión a los productos químicos que causan
cáncer en el colon.
El contenido de acidez reportado en esta investigación es superior al valor referido por la
fuente bibliográfica, uno de los factores influyentes para esta diferencia es el estado del
fruto, y el predominio de diferentes ácidos según Herrera y Quicazán (2000), los
principales ácidos presentes en la pulpa del fruto de Feijoa son el ácido cítrico (9,84 g/100
g), el ácido málico (1,72 g/100 g) y el ácido succínico (0,49 g/100 g
La fruta tuvo una acidez mayor (2,7±0,08) y un pH menor (2,9±0,02) que los reportados
en bibliografía, este valor puede variar ya sea por las condiciones agroecológicas que se
desarrolló el fruto, el estado de maduración y por las condiciones de almacenamiento del
mismo.
En los Sólidos solubles se obtuvo un valor menor al reportado en bibliografía, Murray et
al. (2005) afirman que la mejora en la concentración de sólidos solubles se puede atribuir
a una mayor fotosíntesis en hojas adyacentes y, por ende, una mayor disponibilidad de
carbohidratos para los frutos en desarrollo, explicando las mayores concentraciones de los
sólidos solubles en las partes exteriores y superiores de la copa de Feijoa.
Estos comportamientos diferentes, posiblemente, estén influenciados por: la edad de la
planta, por las condiciones climáticas, por el tiempo de recolección, por el cuidado que se
le haya dado a la planta, por el almacenamiento, por el tipo de cultivo plagas a las que
pudieron estar expuestos.
No existe referencia bibliográfica sobre análisis proximal de las hojas de Feijoa.
- 61 -
Gráfico No. 1 Análisis proximal de las hojas y frutos Feijoa (Acca sellowiana)
Laboratorio de Nutrición Animal y Bromatología. Facultad de Ciencias Pecuarias.
ESPOCH, Septiembre 2014
En el GRÁFICO No.1 se puede observar los valores obtenidos tras el análisis proximal
realizado en las hojas y frutos de Feijoa, las hojas poseen mayor cantidad de nutrientes al
que los frutos, esto se debe fundamentalmente a una de las principales funciones que
realiza la hoja la transpiración que es la pérdida de agua de la planta en forma de vapor. La
transpiración ocurre en todas las partes expuestas de la planta, pero es mayor en las hojas,
que están normalmente más expuestas al aire. El calor del sol evapora el agua de la
superficie de las células. La transpiración facilita las funciones del vegetal al desplazar
hacia arriba el agua por el tallo y concentrar en las hojas las soluciones diluidas de
minerales absorbidos por las raíces, razón por la cual existe menos cantidad de agua en las
hojas que en fruto, concentrando así mayor cantidad de nutrientes.
0102030405060708090
Humedad Ceniza Proteína Fibra Grasa ELnN
FRUTOS 86,66 0,64 0,82 5,55 0,24 6,09
HOJAS 54,31 5,34 6,6 14,6 0,68 18,47
ANÁLISIS PROXIMAL DE LA FEIJOA
FRUTOS HOJAS
- 62 -
3.3. CONTROL DE CALIDAD DE LA DROGA VEGETAL
Cuadro No. 3 Determinación de los parámetros de calidad de la droga seca y molida
de las hojas del árbol de Feijoa (A. sellowiana). Laboratorio de
Productos Naturales. Facultad de Ciencias. ESPOCH, Septiembre 2014
%
HUMEDAD
RESIDUAL
% CENIZAS
TOTALES
% CENIZAS
SOLUBLES EN
AGUA
% CENIZAS
INSOLUBLES
EN ÁCIDO
6,88± 0,10 4,67± 0,26 2,46 ± 0,08 1.30± 0,13
≤ 14% ≤ 12% ≤ 7% ≤ 5%
* FARMACOPEA ESPAÑOLA 2002.
± Desviación estándar para tres repeticiones.
En el cuadro No.3.se puede apreciar que los valores reportados después del análisis
respectivo se encuentran dentro de los parámetros de calidad correspondientes.
Las cenizas son un indicativo del contenido de sales minerales presentes en la muestra, el
contenido de cenizas totales es importante e indica, en cierta medida, el cuidado que se ha
tenido en la preparación de la droga. El contenido de cenizas insolubles en ácido fue 1,30%
el mismo que indica su bajo contenido en sílice y que la especie vegetal no está
contaminada con productos térreos; este valor se encuentra en los límites establecidos.
3.2. DETERMINACIÓN DE LAS PROPIEDADES ORGANOLÉPTICAS DEL
EXTRACTO ALCOHÓLICO Y ACUOSO DE LAS HOJAS Y FRUTOS DEL
ÁRBOL DE FEIJOA (Acca sellowiana)
Cuadro No. 4 Descripción organoléptica del extracto alcohólico y acuoso de las hojas
del árbol de Feijoa (Acca sellowiana). Laboratorio de Productos
Naturales. Facultad de Ciencias. ESPOCH. Septiembre 2014.
PARÁMETROS EXTRACTO
ALCOHÓLICO
HOJAS
EXTRACTO
ACUOSO HOJAS
COLOR Verde claro intenso Verde claro
OLOR Herbal característico de
la planta, a alcohol
Herbario
SABOR Amargo Ligeramente amargo
ASPECTO Ligeramente turbio Turbio
- 63 -
Cuadro No. 5 Descripción organoléptica del extracto alcohólico y acuoso de los frutos
del árbol de Feijoa (Acca sellowiana). Laboratorio de Productos
Naturales. Facultad de Ciencias. ESPOCH. Septiembre 2014.
PARÁMETROS
EXTRACTO
ALCOHÓLICO
(METANÓLICO)
FRUTOS
EXTRACTO
ACUOSO FRUTOS
COLOR Transparente Blanco
OLOR Alcohol Característico de la
fruta
SABOR Amargo Ligeramente dulce
ASPECTO Transparente Turbio
Los parámetros van acorde con las características de la planta. El color verdoso se debe a
que el extracto procede de la parte aérea (hojas) del vegetal, específicamente a la clorofila.
Presentó un aspecto transparente sin presencia de ninguna partícula visible. Se percibió un
olor alcohólico debido al metanol utilizado como solvente. El sabor del extracto es amargo
y ligeramente astringente, debido al alcohol.
3.3. DETERMINACIÓN DE LOS PARAMETROS FÍSICO QUÍMICOS DE LOS
EXTRACTOS ALCOHÓLICO y ACUOSOS DE LAS HOJAS DEL ÁRBOL
DE FEIJOA
Cuadro No. 6 Determinación de los parámetros de calidad del extracto alcohólico y
acuoso de las hojas y frutos de la Feijoa (Acca sellowiana). Laboratorio
de Análisis Instrumental. Facultad de Ciencias. ESPOCH. Septiembre
2014.
Determinaciones
HOJAS FRUTOS
Extracto
Alcohólico
Extracto
acuoso
Extracto
Alcohólico
Extracto
acuoso
pH 6,11±0,02 5,99±0,00 4,50±0,05 3,27±0,10
Índice de
Refracción 1,365±0,002 1,335±0,013 1,358±0,007 1,319±0,031
Densidad
Relativa (g/mL)) 0,984 ±0,003 1,037±0,008 0,896±0,007 0,992±0,002
Sólidos Totales 14,347±0,053 12,295±0,032 9,195±0,042 7,018±0,026
± Desviación estándar para tres repeticiones.
CARVAJAL, M 2014
- 64 -
Los valores de pH reportados en el CUADRO No.6 son ácidos, esto se debe a los propios
requerimientos de la planta ya que prefieren suelos ligeramente ácido con un pH de 6,0-
6,5; el pH elevado, condiciones alcalinas puede causar retraso en el crecimiento y
amarillamiento de las hojas.( Feijoa - Tharfield Nursery)
Se presentan las determinaciones de control de calidad del extracto alcohólico y acuoso de
los frutos de Feijoa; el valor promedio de pH del extracto alcohólico de los frutos resultó
5,43 y para el extracto acuso 4,16, pH ácido el mismo que puede variar según la variedad,
las condiciones agroecológicas en las que se desarrolle el fruto y las condiciones de
almacenamiento.
El extracto alcohólico (metanólico) de las hojas y los frutos presentó un valor de índice de
refracción de 1,365 y 1,358 en comparación con el Índice de refracción del metanol 1,329
nos indica que existen componentes solubles en el metanol.
Al utilizar metanol como solvente la densidad relativa del extracto resultó para las hojas
0,984 y para los frutos 0,896 g/mL; al compararlo con la densidad relativa del metanol que
es de 0,791 g/mL demuestra la presencia de compuestos extraídos con este solvente.
El extracto acuoso del fruto presento un valor promedio de densidad relativa de 0,992
mg/mL al compararlo con la densidad del agua que es de 1 g/mL se muestra que en el caso
de las hojas es ligeramente mayor sucediendo lo contrario en el extracto de los frutos.
Los sólidos totales muestran la presencia de sales y residuos orgánicos en los extractos, los
valores nos indican la gran cantidad de metabolitos secundarios extraídos por cada
solvente.
3.4. TAMIZAJE FITOQUÍMICO
El estudio fitoquímico se desarrolló con objetivo de identificar cualitativamente la
presencia de los principales metabolitos secundarios presentes en A. sellowiana.
- 65 -
Cuadro No. 7 Tamizaje fitoquímico del extracto alcohólico del árbol de Feijoa (A.
sellowiana). Laboratorio de Productos Naturales. Facultad de Ciencias.
ESPOCH. Octubre 2014.
INTERPRETACIÓN: (-) AUSENCIA DEL METABOLITO; (+) BAJA EVIDENCIA; (++)
EVIDENCIA ;(+++) ALTA EVIDENCIA
Cuadro No. 8 Tamizaje fitoquímico del extracto acuoso del árbol de Feijoa (A.
sellowiana). Laboratorio de Productos Naturales. Facultad de ciencias.
ESPOCH. Octubre 2014.
Ensayo Metabolito HOJAS FRUTO
Dragendorff Alcaloides - -
Mayer Alcaloides - -
Wagner Alcaloides - -
Cloruro férrico
(FeCl3) Tanino + +
Shinoda Flavonoides ++ +
Fehling Azucares reductores ++ ++
Espuma Saponinas - -
Mucilagos Mucilagos + +++
Principios amargos - -
INTERPRETACIÓN: (-) AUSENCIA DEL METABOLITO; (+) BAJA EVIDENCIA;
(++) EVIDENCIA ;(+++) ALTA EVIDENCIA
Ensayo Metabolito HOJAS FRUTO
Catequinas Catequinas - -
Resinas Resinas - -
Fehling Azucares reductores +++ +++
Baljet Lactonas y cumarinas + -
Lieberman-
Buchard
Triterpenos y/o
esteroides ++ +
Espuma Saponinas - -
FeCl3 Fenoles y Taninos +++(verde
intenso) ++
Borntrager Quinonas +++ ++
Shinoda Flavonoides +++(amarillo) +
Antocianidinas Flavonoides +++(rojo) -
Dragendorff Alcaloides + -
Mayer Alcaloides - -
Wagner Alcaloides - -
- 66 -
Se puede observar en el CUADRO No. 8 que al realizar el Tamizaje Fitoquímico de los
extractos acuoso de las diferentes partes del árbol de Feijoa nos dio resultados positivos en
los ensayos de Shinoda, Fehling y mucilagos lo que indica que la Feijoa es rica en
metabolitos secundarios y pueden ser de alto beneficio para la salud.
En el CUADRO No.7 Se plasma los resultados de la determinación fitoquímica de los
extractos alcohólicos tanto de las hojas como del fruto de se evidenció la alta cantidad de
Fenoles, taninos, quinonas y flavonoides, estos metabolitos encontrados concuerdan con
los investigados por (Monforte, M. et al. 2014) ya que llevaron a cabo ensayos para
terpenos, mucílagos, taninos y flavonoides y fueron positivos
Dado que los compuestos fenólicos y flavonoides son de naturaleza polar, se utilizó
metanol para extraerlos.
La no presencia de alcaloides en todas las muestras se puede atribuir a que al ser un árbol
que se da en zonas bajas urbanas no necesitan protección frente a predadores herbívoros,
microorganismos, etc. La cantidad de metabolitos secundarios que existan en una planta
pueden ser afectados por diversos factores, que pueden ser tanto extrínsecos como
intrínsecos. Los factores extrínsecos son el clima y la temperatura, la humedad, o las
condiciones del suelo; y los factores intrínsecos son de tipo genético (mutaciones, otras
alteraciones), interacción con las enzimas para sufrir transformaciones, o variaciones
diurnas, ontogénicas o estacionales. (Dueñas J 2014)
3.5. DETERMINACIÓN DE VITAMINA C – ÁCIDO ASCORBICO
Cuadro No. 9 Determinación de Vitamina C de las hojas y frutos de la Feijoa (A.
sellowiana). Laboratorio de Servicios de Análisis e Investigación en
Alimentos (LSAIA). Departamento de Nutrición y Calidad. Estación
Experimental Santa Catalina. INIAP. Cutuglahua. Octubre 2014
± Desviación estándar para cuatro repeticiones. Valor p 0,05
CARVAJAL, M 2014
mg/100g
HOJAS 795,25±0.45
FRUTOS 159,25±0.84
- 67 -
En el CUADRO No. 9 se presenta los valores de la determinación de vitamina C realizado en
muestra seca de las hojas y frutos de la Feijoa, los mismos que al aplicar el análisis estadístico
nos indica que hay una diferencia entre muestras; existe diferencia altamente significativa
entre las dos muestras p <0,05 a un intervalo de confianza del 99%.
Gráfico No. 2 Determinación de Vitamina C de los extractos acuosos de las hojas y
los frutos de la Feijoa (A. sellowiana).Laboratorio de Servicios de Análisis e
Investigación en Alimentos (LSAIA). Departamento de Nutrición y Calidad. Estación
Experimental Santa Catalina. INIAP. Cutuglahua. Octubre 2014.
Los resultados del contenido de Vitamina C o Ácido ascórbico se presentan en el
GRÁFICO No.2 donde los diferentes componentes del árbol de Feijoa variaron en su
contenido de ácido ascórbico, con un mayor valor en las hojas 795,25mg/100g y en los
frutos 159,25mg /100g. Para corroborar los resultados obtenidos se realizó la
determinación de Vitamina C por el método volumétrico con el cual se reportó los
siguientes resultados: para la hoja presentó un contenido de 791mg/100g y los frutos 350
mg/100g
Se observó un alto contenido de vitamina C respecto a los valores reportados en literatura,
esto se podría justificar debido a que en este trabajo investigativo se utilizó la fruta
liofilizada, y en otros trabajos se analiza únicamente la pulpa de la fruta fresca.
El ácido ascórbico reduce al ácido molibdofosfórico, el color cambia de amarillo a azul de
fosfomolibdeno, cuya concentración se determina por reflectometría.
0
100
200
300
400
500
600
700
800
FRUTOS
HOJAS
159,125
795,25
mg
de
ácid
o a
scó
rbic
o/1
00g
bas
e se
ca
VITAMINA C
- 68 -
3.6. CUANTIFICACIÓN DE COMPUESTOS FENÓLICOS TOTALES EN LOS
EXTRACTOS DE LAS HOJAS Y LOS FRUTOS DE FEIJOA (Acca sellowiana)
Para la determinación se realizó la curva de calibración del ácido gálico para obtener la
ecuación de la recta. ANEXO No.8
Cuadro No. 10 Curva de calibración para cuantificación de fenoles totales
utilizando como patrón ácido gálico.
CONCENTRACIÓN
(ppm)
ABSORBANCIA
765nm
5 0,126
10 0,218
40 0,561
80 1,031
100 1,224
140 1,680
200 2,319
CARVAJAL, M 2014
Gráfico No. 3 Curva de absorbancia vs concentración de ácido gálico para
cuantificación de fenoles totales. Laboratorio de Servicios de Análisis e Investigación
en Alimentos (LSAIA). Departamento de Nutrición y Calidad. Estación Experimental
Santa Catalina. INIAP. Cutulagua. Octubre 2014
y = 0,0119x - 0,10395R² = 0,99925
-0,5
0
0,5
1
1,5
2
2,5
5 10 40 80 100 140 200
Ab
sorb
anci
a (7
65n
m)
Concentración ppm
CURVA DE CALIBRACIÓN CON ÁCIDO GÁLICO
Series1 Lineal (Series1)
- 69 -
Cuadro No. 11 Resultados de la concentración de compuestos fenólicos totales
expresados en mg de ácido gálico/g de muestra determinados en
los extractos metanólicos y acuosos de las hojas y frutos de la
Feijoa. Laboratorio de Servicios de Análisis e Investigación en
Alimentos (LSAIA). Departamento de Nutrición y Calidad.
Estación Experimental Santa Catalina. INIAP. Cutuglahua.
Octubre 2014.
MUESTRA ABSORBANCIA CONCENTRACIÓN
ppm mg/g muestra
Extracto
Alcohólico Hojas 0,2780 15,55 77,76 ±0,13
Extracto Acuoso
Hojas 1,5615 130,25 65,12±0,63
Extracto
Alcohólico Frutos 0,1333 2,62 13,10±0,48
Extracto Acuoso
Frutos 0,3775 24,45 12,23±0,12
± Desviación estándar para cuatro repeticiones. Valor p 0,05
CARVAJAL, M 2014
En el Cuadro No.11. se puede observar las absorbancias, los valores de concentración de
fenoles totales que se obtuvieron al remplazar las absorbancias obtenidas en la ecuación
de la recta del ácido gálico, ver Anexo No. 13.
- 70 -
Gráfico No. 4 Concentración de compuestos fenólicos totales extraídos en los
extractos expresados en mg de ácido gálico por g de muestra. Laboratorio de
Servicios de Análisis e Investigación en Alimentos (LSAIA). Departamento de
Nutrición y Calidad. Estación Experimental Santa Catalina. INIAP. Cutulagua
Octubre 2014
En GRÁFICO No.4 se presenta la concentración de compuestos fenólicos que reportaron
para el extracto alcohólico de las hojas 77,76; para el fruto 13,10mg/g y para los extractos
acuoso 65,12 mg/g en las hojas y 12,23 mg/g de muestra seca en los frutos de Feijoa, con
el Test de Tukey a nivel de significancia del 95,00 % se estableció que todas las muestras
son estadísticamente diferentes con Valor p < 0,05.
En estudios realizados sobre el contenido de fenoles de los frutos de Feijoa (Acca
sellowiana) por Kathleen J. et al. (2010) reportaron un valor de 150-200 mg de ácido
gálico/100g de producto fresco siendo este resultado menor al de la muestra estudiada en
la presente investigación tomando en cuenta la variación de las unidades, Ebrahimzadeh
M. et al.(2008) encuentran cantidades representativas de compuestos fenólicos en el
extracto metanólico de las hojas 92,09±0,2,23 g AG/g muestra seca y en el extracto acuoso
44,04 ±1,27mg AG/g de muestra seca.
La alta variabilidad de los resultados obtenidos al comprarlos con los reportados por
diferentes autores se debe a diversos factores entre los más importantes el estado de
maduración del fruto, si se trabaja con muestra fresca o muestra seca y el reporte en
diferentes unidades.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
77,76
65,12
13,112,23
mgA
G /
g b
ase
se
ca
COMPUESTOS FENÓLICOS
EXTRACTOALCOHÓLICO HOJAS
EXTRACTO ACUOSOHOJAS
EXTRACTOALCOHÓLICO FRUTOS
- 71 -
Por medio de los resultados, se determinó que los extractos de las hojas presentan mayor
contenido de compuestos fenólicos que el fruto; se observa también una mejor extracción
de compuestos fenólicos en el solvente alcohólico (metanólico) que en el acuoso.
La cantidad de fenoles presentes en la Feijoa es alto al comprarlos con otras frutas.
3.7. CAPACIDAD ANTIOXIDANTE MEDIANTE EL MÉTODO ABTS
Cuadro No. 12 Curva de calibración para cuantificación de capacidad
antioxidante utilizando como patrón Trolox. Laboratorio de
Servicios de Análisis e Investigación en Alimentos (LSAIA).
Departamento de Nutrición y Calidad. Estación Experimental
Santa Catalina. INIAP. Cutuglahua. Noviembre 2014
CONCENTRACIÓN
(ppm)
ABSORBANCIA
754nm
ABSORBANCIA
NETA
0 0,910 0,000
200 0,731 0,179
300 0,602 0,308
400 0,500 0,410
500 0,339 0,571
600 0,229 0,681
700 0,082 0,828
CARVAJAL, M 2014
Gráfico No. 5 Curva de absorbancia vs concentración de Trolox para cuantificación
de capacidad antioxidante Laboratorio de Servicios de Análisis e Investigación en
Alimentos (LSAIA). Departamento de Nutrición y Calidad. Estación Experimental
Santa Catalina. INIAP. Cutuglahua. Noviembre 2014.
y = 0,0012x - 0,0368R² = 0,9922
-0,2
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
0 100 200 300 400 500 600 700 800Ab
sorb
anci
a (7
54n
m)
Concentración ppm
CURVA DE CALIBRACIÓN CON TROLOX
Series1 Lineal (Series1)
- 72 -
Cuadro No. 13 Resultados de la concentración de compuestos fenólicos totales
expresados en mg de ácido gálico/g de muestra determinados en
los extractos Metanólicos y acuosos de las hojas y frutos de la
Feijoa. Laboratorio de Servicios de Análisis e Investigación en
Alimentos (LSAIA). Departamento de Nutrición y Calidad.
Estación Experimental Santa Catalina. INIAP. Cutuglahua.
Octubre 2014.
MUESTRA mMTROLOX/g en
base seca
Extracto
Alcohólico Hojas 19,67±0,37
Extracto Acuoso
Hojas 5,43±0,11
Extracto
Alcohólico Frutos 0,23±0.01
Extracto Acuoso
Frutos 0,10±0.00
± Desviación estándar para cuatro repeticiones. Valor p 0,05
CARVAJAL, M 2014
Gráfico No. 6 Concentración de compuestos fenólicos totales extraídos en los
extractos expresados en mg de ácido gálico por g de muestra. Laboratorio de
Servicios de Análisis e Investigación en Alimentos (LSAIA). Departamento de
Nutrición y Calidad. Estación Experimental Santa Catalina. INIAP. Cutuglahua.
Noviembre 2014.
02468
101214161820
19,67
5,43
0,230,1
Mm
Tro
lox/
g
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTEEXTRACTOALCOHÓLICOHOJAS
EXTRACTOACUOSO HOJAS
- 73 -
En el GRÁFICO No. 6. Se puede observar el promedio de la capacidad antioxidante
obtenida con los distintos extractos de la Feijoa. La mayor capacidad antioxidante se
presentó en el extracto alcohólico de las hojas con un valor de 19,67 mM Trolox/g de
muestra seca, mientras que el menor valor obtenido se presentó en el extracto acuoso de
los frutos 0,1 mM Trolox/g de muestra seca. En bibliografía todavía no existe suficiente
información sobre la capacidad antioxidante por medio del método ABTS, sin embargo
al comparar el estudio realizado en los frutos de Feijoa (Acca sellowiana) por Kathleen
J. et al. (2010) mediante el método ORAC reporta un valor de 2800-4200 μmol
Trolox/100 g de producto fresco; valores relativamente bajos al compararlos con los
obtenidos en esta investigación, esto se debe a diversos factores entres los más
importantes, estado de muestra seca o fresca, la situación geográfica la diferencia de
suelo, la época de cosecha del fruto, el método de preparación de la muestra, el extracto
obtenido y la variabilidad del método para la determinación de la capacidad antioxidante.
.8. RELACIÓN ENTRE LA CONCENTRACION DE COMPUESTOS FENOLICOS
TOTALES, CONTENIDO DE ÁCIDO ASCÓRBICO Y ACTIVIDAD
ANTIOXIDANTE DE LOS EXTRACTOS DE FEIJOA (Acca sellowiana).
La Feijoa (Acca sellowiana) posee elevados valores de capacidad antioxidante,
desatancando mejor extracción en los extractos alcohólicos de hojas y frutos, los
compuestos fenólicos y contenido de vitamina C atribuyen visualmente a esta capacidad
antioxidante, observándose una correlación directa entre los valores obtenidos en cada
extracto y en cada parte de la planta respectivamente.
Todos los extractos estudiados tanto acuosos como metanólicos demostraron actividad
antioxidante y presencia de compuestos fenólicos, sin embargo se evidenció una mayor
actividad antioxidante alta cantidad de fenoles y vitamina C en los extractos de las hojas,
pueden ser algunos factores que influyan, un factor importante es la evaporación y
transpiración que ocurre en la parte laminar de la hoja ya que está es la fábrica principal
de conversión de energía y para eso necesitan tanto de luz solar como de los nutrientes
inorgánicos absorbidos por las raíces y que por capilaridad suben en dilución a las hojas.
Los frutos tienen como función principal asegurar las semillas y promover su dispersión y
justamente debido a esto desarrollan toda la variedad de olores, sabores y demás para atraer
- 74 -
a dispersores específicos así que la cantidad de nutrientes que tenga un fruto depende
también de cómo ha evolucionado la planta con los requerimientos de los dispersores de
su ecosistema. De esta forma la planta organiza la distribución de su energía y de a donde
envía, es decir a donde son más necesarios, los nutrientes que absorbe.
La feijoa además tiene la característica que sus frutos no maduran en la planta sino una vez
que se desprenden con lo cual también se interrumpe el paso de nutrientes por parte de la
planta.
Una las causas a la gran variabilidad entre hojas y frutos se debe principalmente a la
influencia de la intensidad lumínica en la actividad fotosintética mayor las hojas que en
fruto, contribuyendo directamente en su composición química.
- 75 -
CONCLUSIONES
1. Los extractos alcohólicos (metanólico70%) y acuosos de las hojas y frutos de la Feijoa,
elaborados con la materia prima recolectada en el Cantón Patate de la Provincia de
Tungurahua, y liofilizada en el INIAP, cumplen con todos los parámetros de calidad
correspondientes.
2. Se determinó el contenido de fenoles presentes en la Feijoa (Acca. Sellowiana) y los
valores fueron: en los extractos alcohólicos 77,76 mg/g muestra de hojas y en los frutos
13,10 mg/g. En los extractos acuosos 65,12mg/g en las hojas y 12,23mg/g en los frutos. Se
evidenció una cantidad muy apreciable de ácido ascórbico en las hojas 795,25mg/100g y
en los frutos 159,25mg/100g; en muestras en base seca; por lo que es de especial interés el
seguimiento que se le pudiera hacer a la Feijoa por su gran contenido de compuestos
fenólicos y vitamina C.
3. Se evaluó la actividad antioxidante de los extractos de Feijoa (A. sellowiana) mediante
el método ABTS, con los resultados obtenidos se realizó el Test de ANOVA demostrando
que al menos un extracto presenta diferente actividad antioxidante. Los extractos
alcohólicos (metanólico 70%) fueron los que dieron mejor respuesta tanto para hojas como
para fruto, la actividad antioxidante se relaciona muy bien con el contenido de fenoles
totales y con el contenido de vitamina C de la Feijoa.
- 76 -
RECOMENDACIONES
1. La Feijoa (Acca sellowiana) es una fruta rica en antioxidantes, un papel importante en
la prevención de enfermedades relacionadas con la generación de radicales libres, por
lo que se recomienda incluir información sobre el contenido de la capacidad
antioxidante de los alimentos en las Tablas de Composición de Alimentos.
2. Realizar nuevos productos derivados de las frutas exóticas existentes en el país, como
es el caso de la Feijoa ya que posee excelentes características organolépticas,
propiedades nutricionales y antioxidantes.
3. Las hojas presentan alto contenido de nutrientes por lo que se recomienda realizar
investigaciones para la creación de nuevos productos tanto en el área de alimentos
como el en área de química cosmética.
4. Se recomienda para estudios posteriores hacer comparaciones con otros métodos de
determinación de la capacidad antioxidante para establecer el método más práctico,
sensible, rápido, estable y reproducible.
5. Dar a conocer a los fruticultores las propiedades de la Feijoa para incrementar su
producción y a su vez el consumo.
- 77 -
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- 86 -
ANEXOS
Anexo No. 1 MATERIA PRIMA UTILIZADA
Anexo No. 2 LIOFILIZACIÓN DE LAS MUESTRAS
FRUTOS
HOJAS
FOTOGRAFÍA No.5 ÁRBOL DE FEIJOA (Acca sellowiana)
PULPA DE FEIJOA
FRUTOS
HOJAS
FOTOGRAFÍA No.6. LIOFILIZACIÓN DE LAS MUESTRAS
- 87 -
Anexo No. 3 ELABORACIÓN DE EXTRACTOS
FRUTOS
HOJAS
EXTRACTOS
FOTOGRAFÍA No. 7 ELABORACIÓN DE EXTRACTOS ACUOSOS
Y ALCOHOLICOS
- 88 -
Anexo No. 4 PARÁMETROS DE CALIDAD DE LA DROGA SECA Y
PARAMETROS FÍSICO QUÍMICOS DE LOS EXTRACTOS.
CENIZAS HUMEDAD
DENSIDAD RELATIVA
INDICE DE REFRACCIÓN
pH EXTRACTOS ALCOHÓLICOS
HOJAS
FRUTOS
FOTOGRAFÍA No. 8. PARAMETROS FISICO QUIMICSO DE LOS
EXTRACTOS
- 89 -
Anexo No. 5 TAMIZAJE FITOQUÍMICO DE LAS HOJAS Y FRUTOS DE LA
FEIJOA (Acca sellowiana).
ENSAYO DE FEHLING
ENSAYO DE SHINODA (Flavonoides)
FOTOGRAFÍA No.9. ENSAYOS REALIZADOS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE
METABOLITOS SECUNDARIOS EN LOS EXTRACTOS.
- 90 -
Anexo No. 6 DETERMINACIÓN DE POLIFENOLES POR EL MÉTODO
FOLIN- CIOCALTEAU
MUESTRAS PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
PREPARACIÓN DEL ESTÁNDAR
LECTURA EN EL
ESPECTROFOTOMETRO
FOTOGRAFÍA No.10. DETERMINACIÓN DE FENOLES
- 91 -
Anexo No. 7 DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
MÉTODO ABTS
SOLUCIÓN DE ABTS RADICALIZADO
PRERACION DE MUESTRAS
CURVA DEL ESTANDAR
MUESTRAS EN LA CUBETA PARA
LA LECTURA
LECTURA EN EL
ESPECTROFOTOMETRO
FOTOGRAFÍA No. 11. DETERMINACION DE ACTIVIDA ANTIOXIDANTE
- 92 -
Anexo No. 8 Ecuación de la recta obtenida para la curva de calibración del estándar de
ácido gálico para la determinación del contenido de compuestos fenólicos
totales.
Concentración de ácido
Gálico (ppm)
Ecuación de la Recta R 2 R
5 –200 y= 0,01119x + 0,10395 0,99925 0,999
Anexo No. 9 Análisis Bromatológico de la FEIJOA
CUADRO No.14. Cuadro de Test t Student para una población con un nivel de
confianza de α=0,05, Análisis Bromatológico de la Feijoa (A.
sellowiana).
PARAMETRO Humedad Ceniza Proteína Fibra Grasa ElnN Azúcar pH Acidez °BRIX
media 86,66 g 0,64g 0,82g 5,55g 0,38g 6,09 6,86 2,9 2,7 8
Desv 0,24 0,07 0,12 0,15 0,09 0,16 0,15 0,12 0,08 0,2
n 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2
Referencia
USDA 84,94g 0,56g 0,98g 6,4g 0,6g 6,52 8,2 3,25 1,8 11
t 10,135197 1,61624 -1,88562 -
8,013877 -
3,45697 -
3,8007 -12,634 -4,12 15,91
-21,213
t* 6,3137 6,3137 6,3137 6,3137 6,3137 6,3137 6,3137 6,3137 6,3137 6,3137
Anexo No. 10 Vitamina C
CUADRO No.15. Cuadro de Prueba t para dos muestras suponiendo varianzas
iguales. Contenido de Vitamina C de las hojas y frutos de la
Feijoa (A. sellowiana).
Variable 1
FRUTOS
Variable 2
HOJAS
Media 159,2475 795,2525
Varianza 0,71129167 0,211425
Observaciones 4 4
Varianza agrupada 0,46135833
Diferencia hipotética de
las medias
0
Grados de libertad 6
Estadístico t -1324,20841
P(T<=t) una cola 6,2594E-18
Valor crítico de t (una
cola)
1,94318028
P(T<=t) dos colas 1,2519E-17
Valor crítico de t (dos
colas)
2,44691185
CARVAJAL, M 2014
- 93 -
Anexo No. 11 ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE CONTENIDO DE POLIFENOLES
EN LOS EXTRACTOS ACUOSOS Y ALCOHÓLICOS LAS HOJAS
Y FRUTOS DE LA FEIJOA
CUADRO No.16 Repeticiones de cada extracto alcohólico y acuso de hojas y
frutos
POLIFENOLES mg/gmuestra
Trat. Extracto
Repeticiones
I II III IV
Hoja Alcoholico 80,45 70,15 84,45 76,00
Hoja Acuoso 65,64 64,62 65,70 64,53
Fruto Alcoholico 12,10 8,50 12,55 19,25
Fruto Acuoso 12,29 12,16 12,09 12,38
CUADRO No. 17. Resultado del análisis de la varianza ANOVA y FISHER entre
extractos alcohólicos de hojas y frutos y acuosos de hojas y
frutos, con un nivel de significancia de 0.05 %
ANOVA
F. Var. gl S. Cuad. C. Medio
Fisher
Cal 0,05 0,01
Total 15 14314,68
Trat. 1 13818,88 13818,88 950,04 4,75 9,33 **
Extracto 1 182,69 182,69 12,56 4,75 9,33 **
Int. AB 1 138,56 138,56 9,53 4,75 9,33 **
Error 12 174,55 14,55 1,35 0,00
CV % 9,07 1,35 0,0041
Media 42,05 1,91 0,0094
CUADRO No. 18 . Resultados de la comparación de los extractos de las hojas vs
los extractos del fruto aplicando la prueba Hsd de Tukey con
nivel de significancia 0,05 %. Separación de medias según Tukey (P < 0.05)
Trat. Media Rango
Hoja 71,44 a
Fruto 12,66 b
- 94 -
CUADRO No. 19 . Resultados de la comparación de los extractos alcohólicos vs
los extractos acuosos aplicando la prueba Hsd de Tukey con
nivel de significancia 0,05 %.
Extracto Media Rango
Alcohólico 45,43 a
Acuoso 38,67 b
CUADRO No. 20 . Resultados de la comparación múltiple entre extractos y
frutos y hojas. El extracto acuoso de las hojas y el extracto
alcohólicos de las hojas vs el extracto acuoso y el extracto
alcohólico de los frutos aplicando la prueba Hsd de Tukey con
nivel de significancia 0,05 %.
Int. AB Media Rango
A1B1 77,76 a
A1B2 65,12 b
A2B1 13,10 c
A2B2 12,23 c
A1. HOJA
A2. FRUTO
B1. EXTRACTO ALCOHÓLICO
B2. EXTRACTO ACUOSO
Anexo No. 12 ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE
EN LOS EXTRACTOS ACUOSOS Y ALCOHÓLICOS LAS
HOJAS Y FRUTOS DE LA FEIJOA
CUADRO No. 21 Repeticiones de cada extracto alcohólico y acuso de hojas y
frutos respectivamente.
ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE mMTrolox/g
Trat. Extracto
Repeticiones
I II III IV
Hoja Alcohólico 19,15 19,80 20,01 19,71
Hoja Acuoso 5,46 5,40 5,56 5,31
Fruto Alcohólico 0,22 0,22 0,23 0,24
Fruto Acuoso 0,10 0,11 0,10 0,10
- 95 -
CUADRO No. 22. Resultado del análisis de la varianza ANOVA, y FISHER de la
Actividad Antioxidante, con un factor, con un nivel de
significancia de 0.05 %
ADEVA
F. Var. gl S. Cuad. C. Medio
Fisher
Cal 0,05 0,01
Total 15 1019,29
Trat. 1 613,60 613,60 16737,26 4,75 9,33 **
Extracto 1 206,20 206,20 5624,67 4,75 9,33 **
Int. AB 1 199,05 199,05 5429,46 4,75 9,33 **
Error 12 0,44 0,04 0,07 0,00
CV % 3,01 0,07 0,0001
Media 6,36 0,10 0,0001
CUADRO No. 23 . Resultados de la comparación de los extractos de las hojas vs
los extractos del fruto aplicando la prueba Hsd de Tukey con
nivel de significancia 0,05 %.
Separación de medias según Tukey (P < 0.05)
Trat. Media Rango
Hoja 12,55 a
Fruto 0,16 b
CUADRO No. 24 . Resultados de la comparación de los extractos alcohólicos vs
los extractos acuosos aplicando la prueba Hsd de Tukey con
nivel de significancia 0,05 %.
Extracto Media Rango
Alcohólico 9,95 a
Acuoso 2,77 b
- 96 -
CUADRO No. 25 . Resultados de la comparación múltiple entre extractos y
partes de la planta. El extracto acuoso de las hojas y el extracto
alcohólicos de las hojas vs el extracto acuoso y el extracto
alcohólico de los frutos aplicando la prueba Hsd de Tukey con
nivel de significancia 0,05 %.
Int. AB Media Rango
A1B1 19,67 a
A1B2 5,43 b
A2B1 0,23 c
A2B2 0,10 c
A1. HOJA
A2. FRUTO
B1. EXTRACTO ALCOHÓLICO
B2. EXTRACTO ACUOSO
CUADRO No. 26 Resultados de estadísticas de regresión de Polifenoles y
actividad antioxidante extractos alcohólico de las hojas
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple 0,025822617
Coeficiente de determinación R^2 0,000666808
R^2 ajustado -0,498999789
Error típico 0,450478217
Observaciones 4
CUADRO No. 27. Resultado del análisis de la varianza de polifenoles y actividad
antioxidante con un factor, extractos alcohólicos de las hojas
con un nivel de significancia de 0.05 %
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de
libertad Suma de
cuadrados
Promedio de los
cuadrados F
Valor crítico de F
Regresión 1 0,00027 0,00027081 0,001 0,97
Residuos 2 0,40586 0,20293062
Total 3 0,40613
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad
Inferior 95%
Superior 95%
Inferior 95.0%
Superior 95.0%
Intercepción 19,7868 3,30304 5,99048347 0,027 5,57 33,9986 5,575 34
Variable X 1 -0,00155 0,04238 -
0,03653088 0,974 -0,2 0,18079 -0,184 0,181
- 97 -
CUADRO No. 28 Resultados de estadísticas de regresión Polifenoles y actividad
antioxidante de los extractos acuosos de las hojas
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple 0,88181823 Coeficiente de determinación R^2 0,7776034
R^2 ajustado 0,6664051
Error típico 0,06109026
Observaciones 4
CUADRO No. 29. Resultado del análisis de la varianza de polifenoles y actividad
antioxidante con un factor, extractos acuosos de las hojas con
un nivel de significancia de 0.05 %
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de
libertad Suma de
cuadrados
Promedio de los
cuadrados F Valor
crítico de F
Regresión 1 0,0260978 0,0260978 6,9929432 0,11818177
Residuos 2 0,00746404 0,00373202
Total 3 0,03356184
Coeficientes Error típico Estadístico
t Probabilidad Inferior
95% Superior
95% Inferior 95.0%
Superior 95.0%
Intercepción -
4,13089451 3,61650009 -
1,14223542 0,37166755 -
19,6914385 11,4296495 -
19,6914385 11,4296495
Variable X 1 0,14685777 0,05553502 2,64441736 0,11818177 -
0,09209013 0,38580568 -
0,09209013 0,38580568
CUADRO No. 30 Resultados de estadísticas de regresión Polifenoles y actividad
antioxidante de los extractos alcohólicos de los frutos
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple 0,92283557 Coeficiente de determinación R^2 0,85162549
R^2 ajustado 0,77743823
Error típico 0,00353467
Observaciones 4
- 98 -
CUADRO No. 31. Resultado del análisis de la varianza de polifenoles y actividad
antioxidante con un factor, extractos alcohólicos de los frutoss
con un nivel de significancia de 0.05 % ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de
libertad Suma de
cuadrados Promedio de los
cuadrados F Valor
crítico de F
Regresión 1 0,00014342 0,00014342 11,4794039 0,07716443
Residuos 2 2,4988E-05 1,2494E-05
Total 3 0,00016841
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior
95% Superior
95% Inferior 95.0%
Superior 95.0%
Intercepción 0,20654425 0,00622006 33,2061711 0,00090567 0,17978151 0,23330699 0,17978151 0,23330699
Variable X 1 0,00154242 0,00045524 3,3881269 0,07716443 -
0,00041633 0,00350118 -
0,00041633 0,00350118
CUADRO No.32 Resultados de estadísticas de regresión Polifenoles y actividad
antioxidante de los extractos acuosos de los frutos
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple 0,33196194 Coeficiente de determinación R^2 0,11019873
R^2 ajustado -
0,33470191
Error típico 0,00535933
Observaciones 4
CUADRO No. 33. Resultado del análisis de la varianza de polifenoles y actividad
antioxidante con un factor, extractos acuosos de los frutos con
un nivel de significancia de 0.05 %
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de
libertad Suma de
cuadrados Promedio de
los cuadrados F Valor crítico
de F
Regresión 1 7,1143E-06 7,1143E-06 0,2476929 0,66803806
Residuos 2 5,7445E-05 2,8722E-05
Total 3 6,4559E-05
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior
95% Inferior 95.0%
Superior 95.0%
Intercepción 0,24716284 0,29359068 0,84186201 0,48848553 -
1,01605592 1,5103816 -
1,01605592 1,5103816
Variable X 1 -
0,01194932 0,02400969 -0,49768755 0,66803806 -
0,11525467 0,09135603 -
0,11525467 0,09135603
- 99 -
CUADRO No. 34 Resultados de estadísticas de regresión Polifenoles y actividad
antioxidante de los extractos alcohólicos y acuosos de los frutos
y hojas
Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple 0,9342222 Coeficiente de determinación R^2 0,87277112
R^2 ajustado 0,85319745
Error típico 3,15841832
Observaciones 16
CUADRO No. 35. Resultado del análisis de la varianza de polifenoles y actividad
antioxidante con un nivel de significancia de 0.05 %
ANÁLISIS DE VARIANZA
Grados de
libertad Suma de
cuadrados Promedio de
los cuadrados F Valor
crítico de F
Regresión 2 889,605213 444,802607 44,5890299 1,5129E-06
Residuos 13 129,682882 9,97560629
Total 15 1019,2881
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior
95% Superior
95% Inferior 95.0%
Superior 95.0%
Intercepción 5,25282462 2,63732668 1,99172315 0,06783779 -
0,44477328 10,9504225 -
0,44477328 10,9504225
Variable X 1 -0,52552386 0,20187457 -2,60321975 0,02187195 -
0,96164735 -
0,08940037 -
0,96164735 -
0,08940037
Variable X 2 0,00871301 0,00231243 3,76790328 0,00234619 0,00371731 0,01370872 0,00371731 0,01370872
- 100 -
Anexo No. 13. Cálculo de Polifenoles
POLIFENOLES TOTALES
HOJAS
EXTRACTO ALCOHÓLICO
ABSORBANCIA CONCENTRACIÓN Volumen del Balón
Factor
de dilución
peso de muestra
mg/g muestra
0,284 16,09 0,025 100 0,5 80,45
0,261 14,03 0,025 100 0,5 70,15
0,293 16,89 0,025 100 0,5 84,45
0,274 15,2 0,025 100 0,5 76
77,7625
EXTRACTO ACUOSO
0,1573 131,28 0,025 10 0,5 65,64
0,155 129,23 0,025 10 0,5 64,615
0,1576 131,39 0,025 10 0,5 65,695
0,1548 129,05 0,025 10 0,5 64,525
65,11875
FRUTOS
ABSORBANCIA CONCENTRACIÓN
Volumen del
Balón
Factor de
dilución
peso de la
muestra mg/g muestra
EXTRACTO
ALCOHÓLICO
0,131 2,42 0,025 100 0,5 12,1
0,123 1,7 0,025 100 0,5 8,5
0,132 2,51 0,025 100 0,5 12,55
0,147 3,85 0,025 100 0,5 19,25
13,1
EXTRACTO
ACUSO
0,379 24,58 0,025 10 0,5 12,29
0,376 24,31 0,025 10 0,5 12,155
0,373 24,18 0,025 10 0,5 12,09
0,383 24,75 0,025 10 0,5 12,375
12,2275