Métodos de tinción de proteínas y ADN

MSc. Claudia Rodriguez

PARA PROTEÍNAS

Azul de Comassie

• Detecta: 8 – 25ng/ml

• Tinción fácil.

• Un paso de lavado en agua destilada es necesario para eliminar los restos de SDS del gel.

• Las proteínas pueden ser completamente desteñidas y recuperadas para análisis o secuenciamiento.

Nitrato de plata

• Seguro• Único componente

peligroso: forlmaldehído.• Detección: 0.5 ng de

proteína.• Geles 1D, 2D• Inconveniente: La fijación

liga quimicamente a las proteínas con la matriz �no sugerido para analisis de proteinas o elución.

Tinción con zinc

• Tiñe todas las áreas del gel de poliacrilamida en donde no hay proteínas

• Los iones de zinc forman complejos con imidazol, los cuales precipitan en la matriz del gel excepto donde ocurre saturación de proteínas con SDS

• Tiempo: 15min• Detección: <1ng de

proteína.• Compatible con WB

SYPRO

• Solución acidica pero no tóxica.

• Protocolo sensillo.

• Geles 1D, 2D, IEF, mebranas de nitrocelulosa

• Sensibilidad: 1- 10ng de proteína por banda

PARA ÁCIDOS NUCLEICOS

BROMURO DE ETIDIO

• Uso: 0.2 a 0.5µg/ml

• Detección: <5ng de ADN

• Extremadamente peligroso.

• Se intercala con el ADN.

• Permite la extracción del ADN de las bandas para secuenciamiento.

SYBR GREEN

• Uso: 1:10 000 x 15min

• ADNds = 20pg/ml

• ADNss = 100pg/ml

• Se puede añadir antes o después de la electroforesis.

• No es tóxico.

• Puede ser removido y no interfiere con otras técnicas de recuperación de ADN del gel.

ADN diluido del fago 174 cortado con una ER

Fast Blast DNA Stain (500X)

• Seguro � no tóxico

• Costo-efectivo � puede ser usado hasta 7 veces.

• 15 minutos para poder visualizar las bandas.

• Permite la visualización de mínimo 50ng de ADN

• Usado a 100X = 15min

• Usado a 1X = 8 horas

Nitrato de plata

• Seguro

• Único componente peligroso: forlmaldehído.

• Detección: 0.1 a 0.001ng de ADN por banda.