4 Métodos Análisis b Heterot Tubos Múltiples 28 05

7/25/2019 4 Mtodos Anlisis b Heterot Tubos Mltiples 28 05

1/13

28/05/20

COLEGIO DE BIOLOGOS DEL PERU

Consejo Regional XXII - Callao

CURSO TALLER ANLISIS MICROBIOLGICO DE AGUASCOLIFORMES TOTALES FERMENTACIN DE TUBOS

MLTIPLES

[email protected],[email protected],

[email protected]

COLEGIODE BIOLOGOS DEL PERUConsejo Regional XXII- Callao

CURSO TALLER ANLISIS MICROBIOLGICO DE AGUAS



GRUPO COLIFORMES

MTODO: FERMENTACIN DE TUBOS MLTIPLES

FTM

Dr.CsarLazcanoCarreo

Blga.EstherLazcanoCarreo

Blga.RosaAmeliaReteguiEla

PRINCIPALESBACTERIASINDICADORASENDICESYSUSMETODOSDEANLISIS

[email protected],[email protected],[email protected]



Componentes de unanlisis microbiolgico

Muestreo: Se debe realizar deforma adecuada siguiendoprotocolos establecidos.

Obteniendo muestrasestadsticamente significativas.

Mtodo analtico: Se puedenemplear diversos mtodosanalticos, eligiendo el ms

sensible para detectar lo que sequiere.

Interpretacin de resultados:Para ello se debe saber el

significado de losmicroorganismos.



PRINCIPALES BACTERIAS INDICADORAS ENDICES Y SUS METODOS DE ANLISIS

BacteriasHeterotrficas

Grupocoliformes

Coliformestermotolerantes yE.coli

Pseudomonas aeruginosa


2/13

28/05/20




MLTIPLES


[email protected]



Recuento de BacteriasHeterotrficas

Tienecomoobjetivodeterminar ladensidadde

bacteriasviables

aerobias

existentes

en

muestrasdeaguas,suelosylodos.



Bacterias Heterotrficas:

Sonbacteriasaerobias,cosmopolitas,seencuentranentodoslosambientesysenutrenyreproducenapartirdesustanciasorgnicas.



UFC(Unidades Formadoras de Colon ia):

Son el resultado del crecimiento de unao ms clulas bacterianas que se

visualizan en forma de colonia, cuandose usa como sustrato de crecimiento unmedio de cultivo solidificado con agar,gelatina, etc.


3/13

28/05/20




MLTIPLES


[email protected]



MTODOS

Recuento de BacteriasHeterotrficas

Mtododerecuentola

placavertida

Mtododerecuento

diseminacinensuperficie



PREPARACIN DE DILUCIONES




4/13

28/05/20




MLTIPLES


[email protected]



MTODO DE SIEMBRA POREXTENSIN

AgarPlate CountoR2A



MTODO DE SIEMBRA PORVERTIDO EN PLACA

AgarPlate CountoR2A




5/13

28/05/20




MLTIPLES


[email protected]



RESULTADOS

100ufc 16ufc+de600ufc

104 105 106

Inculo= 0,1mL100x10x105 = 1x108 ufc /mL demuestraoriginal



COLIFORMES

Caractersticas

Aerobias o anaerobias facultativas

Bacilos Gram negativos

Oxidasa negativos

No ser esporgenas

Fermentar la lactosa a 35 C en 48 horas

Produciendo cido gas y aldehdo



GRUPO COLIFORMES

COMPRENDEN LOSGNEROS:

Escherichia: E. coli K lebsiella: K. pneumoniae

K. rhinoescleromatisK. oxytoca

K. ozaenae

Enterobacter: E. aerogenes

E. agglomerans

E. cloacae

Citrobacter: C. freundii

C. diversus

Serratia: S. marsescens

Hafnia: H. alvei

Coliformestermotolerantes

Coliformestotales


6/13

28/05/20




MLTIPLES


[email protected]



COLIFORMES TOTALES

COLIFORMES

TERMOTOLERANTES

Escherichia

coli

RELACIN ENTRE COLIFORMES TOTALES,TERMOTOLERANTES Y E. coli



COLIFORMES TOTALES

Incluye bacilos Gram (-) aerobios y anaerobiosfacultativos, fermentan la lactosa con produccin degas, cido o aldehdo en 24 h a 35-37oC.

Adems producen la enzima -galactosidasa.

Pertenecen a los gneros: Escherichia, Citrobacter,Klebsiella y Enterobactery los ambientales:Serratia yHafnia

KlebsiellaCitrobacterCitrobacter SerratiaSerratia



MUESTRA

CaldoL.T. Incubara35C0,5C/2448h

Gasalas24h(coloramarillo)

Pruebapresuntiva(+)

s/gasalas24h(violeta)incubar

Gasalas48h(coloramarillo)

s/gasalas48h(colorvioleta)

Coliformesausentes()

CLVBB2%

Gasalas24h

Pruebaconfirmativa(+)

s/gasalas24hincubar

Gasalas48h s/gasalas48h

Incubara35C0,5C/2448h

DIAGRAMA PARA LA DETECCIN DE COLIFORMES TOTALES EN MUESTRAS DEAGUA

Coliformespresentes(+)


7/13

28/05/20




MLTIPLES


[email protected]



PREPARACIN DE DILUCIONES 1/10AGUAS NO POTABLES



PREPARACIN DE DILUCIONES 1/10AGUA POTABLE

Sedebepreparar10tubosconcaldolauril triptosa 2Xentubos20mL

Sembra 10mLdemuestraencadatubo

Incubar2448ha35.5+0.5oC



MTODO DE LOS TUBOS MLTIPLES

MUESTRA

PREPARACION DE DILUCIONES

90 mL de agua dedilucin

10 mL demuestra

Agitar la dilucin10 mL de la dilucin

10--5 . . .Siembra de 1mL de la dilucin en 9mL

del caldo de cultivo

10--1

Agitar lamuestra

Incubar atemperatura y

tiempo adecuado

10--2 10--3 10--4


8/13

28/05/20




MLTIPLES


[email protected]



GasenCLVBB2%

Agar EndoLes Incubara35C/24h

Coloniastpicas3oms

CaldoLT. Incubara35C/2448h


Incubara35C/2448h


Coliformesv er if ic ad o C ol ifo rm esausente

DIAGRAMA PARA VERIFICAR LA PRESENCIA DE COLIFORMES TOTALESFERMENTACIN DE TUBOS MLTIPLES



FERMENTACIN DE TUBOS MLTIPLES FTM

Observamos elCrecimiento bacteriano por lafermentacin de la lactosa con

produccin de cido y gas

La turbiedad nos indica que haycrecimiento

El gas la presencia del gas (CO2)coliformes

SinCrecimiento

mediotransparente




La turbiedad nos indicaque hay crecimiento y el

gas la presencia decoliformes (CO2) tubo

(+)

Sin Crecimientomedio transparente


9/13

28/05/20




MLTIPLES


[email protected]



FERMENTACIN DE TUBOS MLTIPLES NMP conindicador







Presencia de Gas en la Campana Durham

Turbiedad crecimiento


10/13

28/05/20

1




MLTIPLES


[email protected]


CURSO TALLER ANLISIS MICROBIOLGICO DE AGUASCRECIMIENTO MICROBIANO

28

FERMENTACIN DE TUBOS MLTIPLES NmeroMs Probable NMP

Caldo EC (+)Indol(+)

(24 2hs a 44.5 0.2 C)

Caldo Lauril Triptosa (+)produccin de gas (+)(48 3hs a 35 0.5C)

Caldo Verde Brillante Bilis 2 % (+)produccin de gas (+)

(48 3hs a 35 0.5C)



Basadoenelprincipioqueunaclulapuedesercapazdeproduciruncultivoturbioencaldosapropiados.

CLCULO:FACTOR DE DILUCIN (PRIMERO) X NMP

TABLA: 1000 X 11,0 = 11 000 cel./ml

NMEROMS

PROBABLE



Escherichia coli

y COLIFORMES TERMOTOLERANTES

Ambos fermentan lalactosa a 44-45oC

Generalmente

predomina el gneroEscherichia, peroalgunos tipos deCitrobacter, Klebsiella y

Enterobacter, tambinson termotolerantes. Ecoli, es propia del tractointestinal del hombre yvertebrados.


11/13

28/05/20

1




MLTIPLES


[email protected]



Escherichia col i

y COLIFORMES TERMOTOLERANTES

VALOR COMO

INDICADORE. coli , es el ndice decontaminacin fecal masadecuado. Coliformestermotolerantes es un grupomenos real pero es un ndiceaceptable de contaminacinfecal. Cualquiera de ellos puedeser escogido en los programasde verificacin y vigilancia deagua potable.



SIGNIFICADO EN AGUA POTABLE

La presencia de E. coli ocoliformes termotolerantesen agua potable proveeevidencia de contaminacinfecal reciente; su deteccin,debe incluir muestrasfuturas e investigacin defuentes de contaminacinpotenciales, tales como untratamiento inadecuado oroturas en el sistema dedistribucin.



Pruebapresuntiva(+)

MedioECMUG

Incubar/24h44,5C0,2C

MedioEC

Gas24h

Coliformes

termotolerantes

presentes

S/Gas24h

Coliformes

termotolerantes

ausentes

Gas24h+

fluorescencia

S/Gas24h

E.Colipresente E.coliausente

Diagrama para la deteccin de colif ormestermotorerantes y E. coli-Tubos mltiples

Incubar/24h44,5C0,2C


12/13

28/05/20

1




MLTIPLES


[email protected]




Bacilos G(-), aerbicos, flagelados,generalmente origina infecciones en personas

predispuestas, especialmente en quemados ynadadores, en piel, mucosas, ojos y tractogenitourinario pudiendo originar septicemia ymeningitis. Es resistente al cloro y a una granvariedad de antibiticos




Fuente: comn en aguas naturales,suelos y medio ambiente en general,especialmente en piscinas.

[email protected] 35



Significado en agua potable: su presencia enagua potable y agua embotellada se asocia a oloresy sabores desagradables. Se deben tomar accionespara minimizar la biopelcula tuberas y reservorios,

lo que evita la proliferacin de Pseudomonasaeruginosa

[email protected] 36



13/13

28/05/20



MLTIPLES




Pseudomonas aeruginosa por elmtodo de los tubos mltip les

MUESTRA

CALDOASPARAGINA Incubara35C/2448h

FluorescenciaverdeconluzUVencuartooscuro24h

Pruebapresuntiva(+)

S/fluorescenciaverde24h Incubar

Fluorescenciaverde48h S/fluorescenciaverde48h

P.aeruginosa()Agar ocaldoacetamida Incubara35C/2436h

Pruebaconfirmativa(+) P.aeruginosa(+)

Colorprpura



MUCHAS GRACIAS


[email protected]

Dr.CsarLazcanoCarreoBlga.EstherLazcanoCarreo

Blga.RosaAmeliaReteguiEla

4 Métodos Análisis b Heterot Tubos Múltiples 28 05

Documents

Transcript of 4 Métodos Análisis b Heterot Tubos Múltiples 28 05