UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA PROGRAMA INGENIERIA DE ALIMENTOS MICROBIOLOGA DE ALIMENTOS LABORATORIO RECUENTO DE ESPORAS DE Clostridium SULFITO REDUCTOR MUESTRA: Cualquier alimento, preferiblemente con tratamiento trmico poco eficiente o almacenados inadecuadamente. INTRODUCCIN Clostridium perfringens es un contaminante comn de los alimentos crudos y de los ingredientes de muchos alimentos. Este microorganismo, por su capacidad de producir esporas resistentes puede sobrevivir en bajo nmero en algunos alimentos tratados trmicamente, y al ser almacenados inadecuadamente o recalentados se pueden incrementar y producir un brote de intoxicacin. PROCEDIMIENTO 1. PREPARACIN DEL LUGAR DE TRABAJO Lvese las manos antes de iniciar el procedimiento. Desinfecte el rea de trabajo, encienda el mechero. Marque el material a usar. 2. PREPARACIN DEL MEDIO DE CULTIVO Calcule la cantidad de medio necesaria para sembrar en 3 cajas de Petri (60 ml). Los medios a utilizar son: SPC (Agar sulfito polimixina sulfadiazina) o Agar triptosa sulfito cicloserina) Pese la cantidad de medio requerida. Disuelva el medio en 60 ml de agua destilada Esterilice el medio de cultivo 3. PREPARACIN DE LA MUESTRA: Prepare la dilucin 10-1: Muestra slida: Tome 10g de la muestra y macere hasta que sea posible diluir, Agregue la muestra macerada en 90ml de agua peptonada al 0,1%. Homogenice Muestra lquida: Destape cuidadosamente el empaque del alimento, Con la ayuda de una pipeta estril y un pipeteador, tome 10ml de la muestra. Agregue la muestra a 90ml de agua peptonada al 0,1%. Homogenice Prepare la dilucin 10-2. Use una pipeta estril de 1ml y tome 1 ml de la dilucin 10-1 y agrguelo a un tubo con 9ml de agua peptona al 0,1%. Homogenice

Prepare la dilucin 10-3. Use una pipeta estril de 1ml y tome 1 ml de la dilucin 10-2 y agrguelo a un tubo con 9ml de agua peptona al 0,1%. Homogenice 4. SIEMBRA DE LA MUESTRA Se deben sembrar 2 cajas de tres diluciones consecutivas Con una pipeta estril, tome 1ml de cada dilucin iniciando con la dilucin 10-3 y agregue a un tubo tapa rosca estril (realice este procedimiento por duplicado) Con una pipeta estril agregue 10 ml de medio de cultivo estril a cada tubo tapa rosca Espere a que el medio solidifique 5. INCUBACIN Incubar en anaerobiosis por 72 horas a 35C Observar diariamente los tubos 6. RECUENTO, CALCULO E INTERPRETACIN DE RESULTADOS Seleccionar los tubos que pertenezcan a la misma dilucin que presenten entre 5 50 colonias. PREGUNTAS 1. Busque un artculo cientfico acerca de su tema de trabajo final en alimentos analice el problema del estudio y elabore un diagrama de flujo con la metodologa que permita resolver dicho(s) problemas. Entregue el artculo y su respectivo resumen junto con el informe de laboratorio