AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

18
MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL UTL ASESORA: Página 1/18 ÁREA DE SUSTENTABILIDAD PARA EL DESARROLLO PROGRAMA ACADÉMICO DE QUÍMICA ESPECIALIDAD TECNOLOGIA AMBIENTAL GRUPO Qu-301 MATERIA MICROBIOLOGIA AMBIENTAL TITULO AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO ASESORA Dra. ROSA RICO MATA DATOS DE IDENTIFICACIÓN DE LOS ANALISTAS Fecha de inicio del análisis: 29 de junio de 2015 Fecha de término: 10 de julio de 2015 Nombre Cargo Luz Evelia Macías Jasso Responsable Josué Neftalí de Jesús Martínez Chiquito Administrador Cesar Alejandro Rea García Laboratorista 1 Mauricio Iván Felipe Florido Laboratorista 2 Luz Evelia Macías Jasso Laboratorista 3 GENERACIÓN: 2014-2016

description

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

Transcript of AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

Page 1: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L A S E S O R A :

Página 1/18

ÁREA DE SUSTENTABILIDAD PARA EL DESARROLLO

PROGRAMA ACADÉMICO DE QUÍMICA

ESPECIALIDAD TECNOLOGIA AMBIENTAL

GRUPO

Qu-301

MATERIA

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

TITULO

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS

DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

ASESORA

Dra. ROSA RICO MATA

DATOS DE IDENTIFICACIÓN DE LOS ANALISTAS

Fecha de inicio del análisis: 29 de junio de 2015

Fecha de término: 10 de julio de 2015

Nombre Cargo

Luz Evelia Macías Jasso Responsable

Josué Neftalí de Jesús Martínez Chiquito Administrador

Cesar Alejandro Rea García Laboratorista 1

Mauricio Iván Felipe Florido Laboratorista 2

Luz Evelia Macías Jasso Laboratorista 3

GENERACIÓN: 2014-2016

Page 2: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L A S E S O R A :

Página 2/18

DATOS DEL SITIO EN ESTUDIO

1.- Breve descripción del estatus ambiental del sitio de estudio: espacio confinado sin ventilación, en el cual se encuentra un compresor y herramientas varias de trabajo que utilizan los estudiantes de transportes de la universidad tecnológica de León.

SITIO DE MUESTREO

Nombre Ubicación /coordenadas

GPS

Imagen de mapa satelital

Universidad tecnológica de león edificio “B” pesado.

Blvd. Universidad tecnológica de león #225 col san Carlos CP.37670 21.063266, -101.579143

2. Evidencia fotográfica del sitio

Fecha:29 de junio de 2015 Hora:2:50 pm

Fecha:29 de junio de 2015 Hora:2:55 pm

DATOS DE LAS MUESTRAS A ANALIZAR

1. Identificación

Matriz ambiental: suelo Hora de toma de muestra:3:10 pm Hora de siembra:3:18pm

Punto de Muestreo (ubicación /coordenadas GPS): laboratorio de neumática e hidráulica/ 21.064417, -101.583316

Tiempo de exposición (aplica solo para muestra de aire)N/A

Nombre del/ los analistas que tomaron la muestra: Luz Evelia Macías Jasso, Mauricio Iván Felipe Florido

Nombre del/ los analistas que sembró la muestra: Luz Evelia Macías Jasso

2.Parámetros Fisicoquímicos

Color: café aceitoso Temperatura (oC) ambiental: 32°C pH: N/A

Olor: aceite Describir condiciones climatológicas: nublado

3. Evidencia fotográfica del sitio de toma de muestra

Page 3: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L A S E S O R A :

Página 3/18

AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

1. Justificación del proceso para la identificación bacteriana

En la identificación de bacterias se utilizaran distintos medios de cultivo, con el fin de llegar a la obtención de un cultivo puro, y así aplicar una marcha bioquímica la cual consiste en la actividad de una vía metabólica (conjunto de reacciones químicas) a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer transforma o no, que nos ayudara para la confirmación de la presencia de la bacteria antes mencionada. Los medios de cultivo se dividen por su finalidad en:

medios de enriquecimiento; que aumentan el número de bacterias existentes.

de aislamiento; que tienen por fin conseguir una colonia, es decir, grupo de bacterias procedentes de una sola, con todas sus propiedades.

Con la identificación de una bacteria en específico se busca el objetivo de conocer cómo trabaja su metabolismo, conocer si el microorganismo efectivamente puede crecer en el medio en el que se tomó la muestra, conocer si hay algún riesgo bacteriológico para quienes están en contacto con los sitios de estudio y saber cuál es su riesgo, aislando cultivos puros de una bacteria se puede sinterizar antibióticos o hacer crecer cultivos con el fin de utilizarlo en tu bioremediacion.

2. Dos medios de siembra (Nombre y Receta)

Medio1: Agar Mueller Hinton Receta: Infusión de carne…………….. 300 g/L Peptona acida de caseína… 17.5 g/L Almidòn…………………………….. 1.5 g/L Agar……………………………………. 15 g/L

Medio 2: medio King B Receta: Peptona de carne….……….. 10 g/L Tripteina…………………………..10 g/L Fosfato de dipotasio……..… 1.5 g/L Sulfato de magnesio………… 1.5 g/L Agar…………………………………. 15 g/ L

Morfología Colonial (Medio 1) Morfología Colonial (Medio 2)

Descripción En este agar da lugar al crecimiento de bacterias como: Entero bacterias, Pseudomona aeruginosa, Enterococcus spp., Acinetobacter spp., Burkholderia cepacia, Stenotrophomonas maltophilia, Staphylococcus spp., Vibrio cholerae, Streptococcus pneumoniae. Streptococcus grupo viridans, Streptococcus spp., Grupo Beta Hemolítico. La formación de las colonias de Pseudomonas son formaciones de puntos blancos su tamaño es muy pequeño, con un pequeño borde que sobre sale del agar, son redondeados y tienen brillo.

Descripción El agar King B es una agar que es utilizado para la diferenciación de Pseudomona aeruginosa y de otras Pseudomona basado en la producción de fluorescencia, en este medio crecen las siguientes cepas: P. aeruginosa, P. fluorescens, P. putida, P. mallei, P.stutceri, S. maltophilia, B.cepacia, E.coli. La formación de las colonias de Pseudomona aeruginosa, son formaciones de puntos color anaranjados, su tamaño es variado, el borde sobresale levemente del agar, su forma es irregular y no tienen brillo, se caracterizan por producir una fluorescencia alrededor de la colonia en este medio.

Page 4: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L A S E S O R A :

Página 4/18

Imagen

Imagen

3. Dos Medios selectivos de resiembra (Nombre y receta)

Medio1: Agar Mac Conkey

Receta: Peptona……………………….. 17 g/L Pluripeptona………………..…. 3 g/L Lactosa………………………..…. 10 g/L Mezcla de sales biliares…..1.5 g/L Cloruro de sodio…………….. 5 g/L Agar……………………………….. 13.5 g/L Rojo neutro…………….……… 0.03 g/L Cristal violeta………………. 0.001 g/L

Medio2: Agar Mac Conkey con 5% de sangre

Receta: Peptonas ………………………………….……….….20 Extracto de levadura………………………….... 3.5 Digerido tríptico de corazón de res……..….3 Almidón de maíz…………………………………….1 Cloruro sódico………………………………………. 5 Colistina…………………………………………..….. 0.01 Ácido nalidixico…………………………….…….. 0.015 Agar……………………………………………………….15 Sangre de carnero, desfibrinada……….…. 5%

Morfología Colonial (Medio 1) Morfología Colonial (Medio 2)

Descripción Este agar propicia el crecimiento de las siguientes cepas bacterianas: E. coli, Klebsiella pneumoniae, Salmonella typhimurium, Shigella flexineri, Proteus mirabilis, Enterococcus faecalis. Las colonias de Pseudomona son formaciones de puntos rosas con un pequeño borde que sobre sale del agar, el tamaño de la colonia es variado y son redondeados no tienen brillo.

Descripción Este es un medio utilizado para el aislamiento de bacterias exigentes tales como: Neisseria, Haemophilus, Staphylococcus, pseudomonas, klebsiella. Las colonias de Pseudomona tienen un color plateado con brillo metálico, la forma de la colonia es variado (no es especifico) ya que pueden ser circulares o de formas irregulares, el olor que desprenden de la placa es similar a uva debido al amoniaco que producen, tienen un brillo en su superficie, algunas colonias pueden tener un borde de gran tamaño.

Page 5: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L A S E S O R A :

Página 5/18

Imagen

Imagen

4. Procedimiento de Aislamiento (describir detalladamente la cantidad de materiales y los pasos a seguir)

Materiales/Reactivos/Medios de cultivo/ Equipo a utilizar Material:

2 caja Petri 1 probeta de 100 ml 1 Pizeta 1 matraz Erlenmeyer de 250 ml 1 paquete de algodón 1 paquete de gasas 1 Cinta testigo 1 pliego de papel estraza 1 asa bacteriológica 1 mechero bunsen 1 espátula

Equipo: 1 autoclave 1 campana de flujo laminar 1 incubadora 1 balanza analítica

Reactivos:

500mL Agua destilada 1 agar Mac Conkey

Preparación de medios de cultivo:

1. Pesar 1.5 g de agar Mac Conkey, colocarlos en un matraz Erlen-Meyer y adicionar 30 mL de agua destilada. Colocar un tapón de algodón y cubrir con papel aluminio.

2. Introducir el matraz Erlenmeyer y las 2 cajas Petri a la autoclave 15 min a 121°C. 3. Dejar enfriar las cajas, hacer uso de la campana de flujo laminar para la transferencia del medio estéril

(matraz Erlenmeyer- cajas Petri). 4. Se debe tener cuidado al momento de realizar la transferencia del medio de estéril la boca del matraz no

debe estar muy separado de la caja y esta a su vez no debe estar abierta completamente. 5. Una vez solidificado el medio, comenzar con el procedimiento de resiembra.

Page 6: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L A S E S O R A :

Página 6/18

Pasos para el aislamiento del microorganismos (siembra, selección de la colonia y resiembra): Siembra:

1. Una vez solidificado el agar, tomar el asa bacteriológica y esterilizar en la llama del mechero bunsen. 2. Tomar una porción de la muestra con la punta circular del asa y utilizar una técnica de estría cruzada (ver

figura1) sobre la superficie del agar. 3. Esterilizar el asa cada vez que se tome muestra y al finalizar la siembra. 4. Tapar la caja Petri que contiene el cultivo y dejarla en incubación a 38°C. 5. Observar el crecimiento a las 24hr y 48 hr.

Selección de la colonia: 1. Después de 48 hrs de la siembra observar el crecimiento de las colonias. 2. Seleccionar la colonia aislada que tenga una morfología similar a la bacteria que se quiere identificar.

Resiembra:

1. Tomar el asa bacteriológica y esterilizar en la llama del mechero bunsen. 2. Tomar una de las colonias aisladas del agar Mueller Hinton con el asa y utilizar una técnica de estría por

desgaste 3. Esterilizar el asa al finalizar la resiembra. 4. Tapar la caja Petri la cual contiene la colonia resembrada y dejarla en incubación a 38°C. 5. Observar el crecimiento a las 24hr.

Figura

1.

Técnic

a de

estria

cruzad

a.

Figura 1. Técnica de estría cruzada.

Page 7: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L A S E S O R A :

Página 7/18

5. Esquema del Perfil bioquímico (metabólico ) para la identificación del microorganismo seleccionado

+

+

-

+

-

Identificación de enterobacterias

+ -

+ -

Tinción Gram

Positivo negativo

No es entero

bacteria

Negativo

Negativo

Móvil

Catalasa Indol Rojo de metilo

Citrato

Tinción de capsula

Prueba TSI Negativo Positivo

Para la identificación de entero bacterias se debe seguir el siguiente esquema bioquímico, de

acuerdo a las pruebas obtenidas se llegara a la identificación de la bacteria.

Positivo

Positivo Positivo Positivo Negativo

A/A: Fermentación 3 azucares

K/A: Fermentación de la glucosa

K/K: No hay fermentación de los 3

Precipitado negro: Formación H2S

Page 8: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L A S E S O R A :

Página 8/18

RESULTADOS DEL AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

1. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO DE LA MUESTRA (SIEMBRA)

Crecimiento bacteriano a las 24 hrs de la siembra en agar Mueller Hinton.

Crecimiento bacteriano a las 48 hrs de la siembra en agar Mueller Hinton.

2. MORFOLOGÍA COLONIAL OBSERVADA

Tipo de colonia 1: Descripción

Se observaron dos colonias que se desarrollaron con este tipo de morfología, en el núcleo de la colonia se observó un punto anaranjado y a su alrededor estaba cubierto con un crecimiento en forma irregular, convexo y lobulado, los bordes eran distintos ya que no todos tienen la misma altura y algunos tenían un tamaño más pequeño de diámetro. En esta imagen se logra apreciar una colonia aislada la cual es color negro y es pequeña, tiene un borde irregular y brillo en su superficie, presuntivamente se identifica como salmonella ya que su morfología es similar a esta entero bacteria.

FOTO 1

Page 9: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L A S E S O R A :

Página 9/18

Tipo de colonia 2: Descripción Otra de las colonias identificadas fue un hongo, en su centro tiene un punto color negro verdoso y este a su vez está cubierto de una especie de capa filamentosa. El crecimiento de este hongo es lento ya que en la placa solo se encontró un crecimiento de este tipo, su diámetro es pequeño e irregular.

FOTO 2

Tipo de colonia 3: Descripción

La última colonia identificada era circular su diámetro era relativamente pequeño e irregular, tenía un poco de elevación, color blanco y tenía brillo en la superficie, esta colonia se identificó presuntivamente como Pseudomona.

FOTO 3

3. EVIDENCIA FOTOGRAFICA DEL CULTIVO PURO ( RESIEMBRA)

FOTO 1 Para la resiembra se eligieron 4 morfologías distintas, para su posterior identificación en el agar Mac Conkey, se tomaron distintas colonias y se identificó en que cuadrante del agar selectivo se sembró.

FOTO2 Solo una de las colonias que se resembraron tuvo crecimiento (eje 3), la cual se identificó presuntivamente como: Pseudomona aeruginosa.

3

Page 10: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L A S E S O R A :

Página 10/18

4. MORFOLOGIA COLONIAL OBSERVADA

Descripción

Se observó el crecimiento de una colonia de diámetro irregular, ya que su crecimiento no es en forma circular; su elevación es convexa e irregular ya que en algunas pares de la colonia tenía una altura mayor, y su color es rosa característico de las Pseudomonas en agar Mac Conkey. Se observó al momento de tomar una muestra de la colonia para las pruebas bioquímicas que su estructura era rígida, es decir, que al momento de tomar con el asa una pequeña porción de la colonia era difícil ya que no se podía tomar por las orillas de la colonia, el tipo de morfología que se observó coincidía con la morfología presuntiva de la Pseudomona en agar Mac Conkey.

FOTO 1

FOTO 2

5. EVIDENCIA FOTOGRÁFICA DEL RESULTADO DEL PERFIL BIOQUÍMICO

Nombre de la prueba Medio de

cultivo utilizado

Resultado obtenido

(positivo/negativo)

Evidencia fotográfica

Page 11: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L A S E S O R A :

Página 11/18

1. Crecimiento selectivo en

Agar Mac Conkey

Agar Mac

Conkey

Positivo

Fundamento de la prueba

Es un medio diferencial que permite distinguir entre entero bacterias que hidrolizan lactosa y las que no lo hacen. La hidrólisis de la lactosa produce ácidos orgánicos y las colonias que la hidrolizan adquieren un color rojo. Las colonias lactosas negativas permanecen incoloras aunque el medio tira a amarillo por la subida de pH que origina la utilización de las proteínas (peptona) del medio.

2. Tinción Gram

N/A negativo

Fundamento de la prueba

La tinción de Gram es la más importante de las tinciones diferenciales. Las células Gram positivas retienen el cristal

violeta cuando se tratan con etanol mientras que las grandes negativas no lo tienen y se tiñen entonces del color

rojo de la safranina. Diferencias en la estructura de la pared son las responsables de este comportamiento.

3. Motilidad Medio

SIM Positivo

Fundamento de la prueba La movilidad de las bacterias es consecuencia de la presencia de flagelos. El movimiento puede observarse en preparación en fresco con el microscopio de contraste de fase Para ver la movilidad se realiza una preparación en fresco que se observa en contraste de fases.

Page 12: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L A S E S O R A :

Página 12/18

Positiva: los organismos móviles migran de la línea de siembra y se difunden en el medio provocando turbiedad. Negativa: crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la línea de siembra.

4. Catalasa

Peróxido de hidrogeno

Positivo

Fundamento de la prueba El peróxido de hidrógeno es el producto final del metabolismo oxidativo de carbohidratos, a esta vía

metabólica recibe el nombre de metabolismo aerobio-oxidativo.

La acumulación del peróxido es muy toxico por lo que la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias

facultativas exceptuando a Streptococcus ssp.

La catalasa es una enzima que poseen la mayoría de las bacterias aerobias. Descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. El desprendimiento de burbujas procedentes del oxígeno indica que la prueba es positiva. 2H2O2 2H2O + O2

5. Indol Caldo RM-VP negativo

Fundamento de la prueba El indol es un compuesto que se genera mediante la desaminación reductiva del triptófano y esta reacción es llevada a cabo por algunas bacterias que poseen las enzimas denominadas en su conjunto triptofanasas. Para detectar la producción de indol se utiliza el medio Caldo triptófano y la lectura de la prueba se realiza con el reactivo de Kovacs (alcohol isoamilo, p-dimetilaminobenzaldehído y ácido clorhídrico concentrado) con el que el indol producido reacciona generando una coloración rosa intensa. H2O+triptófano indol+ acido pirúvico+NH3

6. Fermentación

de glucosa /Rojo de metilo

Medio SIM Negativo

Fundamento de la prueba

Comprobar la capacidad de un organismo de producir y mantener estables los productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa y vencer la capacidad amortadora del sistema. Es una prueba cualitativa de la

triptofan

asa

Page 13: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L A S E S O R A :

Página 13/18

producción de ácido (La formación de acetoína y butilenglicol es una vía alternativa del metabolismo del ácido pirúvico). Es uno de los test del IMVIC para bacterias entéricas. Algunas vías fermentativas originan ácidos orgánicos mientras otras originan productos que son neutros. Las bacterias se crecen en caldo de glucosa peptona. Si se fermenta el azúcar el pH baja por debajo de 4.3. Se añade rojo de metilo como indicar que es rojo a pH <4.3. y amarillo a pH >4.3.

7.-

Citrato de Simmons

Agar citrato de Simmons

Positivo

Fundamento de la prueba

Determina si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono para el metabolismo y crecimiento, provocando alcalinidad. El medio incluye citrato de sodio, un anión como fuente de carbono y fosfato de amonio como única fuente de nitrógeno. Normalmente el metabolismo del citrato comprende una condensación de acetilo con la coenzima A y oxalacetato para entrar en el ciclo de Krebs. El desdoblamiento del citrato comprende un sistema enzimático si la intervención de la coenzima A. esta enzima se denomina citrasa o citrato desmolasa. C4H4O5+ C4H6O2 C3H4O3 + CO2 PIRUVATO ACETATO + LACTATO + CO

pH básico:

citrato CO2+ CH2O2+ 2 C2H4O2

pH acido:

Page 14: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L A S E S O R A :

Página 14/18

2 piruvato acetato+ CO2+ lactato

2 piruvato acetoína+ 2CO2

8.- prueba de fermentación de glucosa, fermentación de sacarosa y fermentación de lactosa

Agar triple azúcar de hierro

Negativo

Fundamento de la prueba

Es una prueba usada para la fermentación de la glucosa, lactosa y sacarosa y la producción de H2S por parte de la bacteria sumándole producción de gas. El cambio de color rojo-anaranjado (color inicial del medio) a amarillo indica fermentación. Si se fermenta únicamente la glucosa el cambio de color del medio ocurre solamente en el fondo debido a que se encuentra 10 veces menos concentrada que la sacarosa y la lactosa, además los radicales libres no son suficientes para hacer virar el medio. Es una prueba usada para la fermentación de la glucosa. Identificación de las diferentes fermentaciones: K/A= fermentación de glucosa A/A= fermentación de glucosa y lactosa K/K= no fermentación de glucosa y lactosa Pico de flauta alcalino / profundidad alcalina (K/K). No fermentación de hidratos de carbono. Característico de bacterias no fermentadoras como Pseudomonas aeruginosa. Pico de flauta alcalino / profundidad ácida (K/A). Glucosa fermentada, lactosa no fermentada. Característico de bacterias no fermentadoras de lactosa como especies de Shigella. Pico de flauta alcalino / profundidad ácida (negra)(K/A/H2S). Glucosa fermentada, lactosa no fermentada; producción de H2S. fermentadoras de lactosa y productoras de H2S : Salmonella, Arizona, Citrobacter y algunas especies de Proteus. Pico de flauta ácido / profundidad ácida (A/A). Glucosa y lactosa fermentadas. Característico de coliformes que

fermentan lactosa como: E. coli y grupo Klebsiella, Enterobacter. Anaranjado (color inicial del medio) a amarillo. Reacciones: Lactosa glucosa + galactosa Glucosa o galactosa CO2+H2O+energia anaerobio

a

Beta galactosidasa

Ciclo de krebs

Page 15: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L A S E S O R A :

Página 15/18

9.- Tinción de capsula

N/A positivo

Fundamento de la prueba

La capsula se puede definir como una estructura superficial que presentan muchas bacterias en sus ambientes naturales, consiste en una acumulación de material mucoso o viscoso, situado externamente respecto de la pared celular. Las capsulas se pueden clasificar en función del grado de asociación con la superficie celular. O por su consistencia: Capsula rígida: con suficiente consistencia estructural como para evitar la entrada de partículas como las de la tinta china. Suele tener límite exterior definido. Capsula flexible: poca consistencia, de modo que no excluye partículas, además, es deformable y carece d límites precisos. Capsula integral: íntimamente asociada con la superficie celular, con la pared celular. Capsula periférica: asociada a la superficie celular solo determinadas condiciones, pero finalmente se dispersa al medio exterior.

10.- fermentación alcohólica (Vogues proskauer)

Caldo RM-VP

Negativo

Fundamento de la prueba

Uno de los test del IMVIC para entero bacterias es el voges Proskauer, las especies que llevan a cabo la fermentación de la glucosa a butanodiol acumulando acetoína en el medio. Las bacterias se inoculan en caldo glucosa-peptona. Las especies que llevan a cabo la fermentación butanodiólica de la glucosa aumentan la acetoína en el medio. Se añade alfa naftol en medio alcalino (KOH) y la acetoína se convierte en di acetilo que reacciona formándose un color rojo. Reacciones:

Page 16: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L A S E S O R A :

Página 16/18

Page 17: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L A S E S O R A :

Página 17/18

IDENTIFICACIÓN DEL MICROORGANISMO AMBIENTAL

EN LA MATRIZ DE ESTUDIO: _suelo_

1.- Nombre científico del o los microorganismo identificado de acuerdo a los resultados del perfil bioquímico planteado ( género y especie)

Pseudomona aeruginosa

2. Taxonomía del o los microorganismo identificados

Reino: bacteria Filo: Proteobacteria Clase: Gammaproteobacteria Orden: Pseudomonadales Familia: Pseudomonadaceae Género: Pseudómonas Especie: aeruginosa

3. Características generales

Los microorganismos del orden Pseudomonadales son bacilos Gram negativos rectos o ligeramente curvos, aerobios estrictos, con motilidad unipolar. Es un patógeno oportunista en humanos y también en plantas. Es capaz de crecer en combustibles como queroseno o gasóleo, ya que es un microorganismo capaz de nutrirse a partir de hidrocarburos, sin embargo, en algunos casos pueden utilizar el nitrato como aceptor final de electrones permitiendo su crecimiento en anaerobiosis, causando estragos de corrosión microbiana, y creando una gelatina oscura que a veces se identifica inadecuadamente con un alga. Se han aislado bacterias de este género tanto en suelos limpios como en suelos contaminados por productos biogénicos y xenobióticos. También son microbiota predominante en la rizosfera y en la filosfera de plantas; del mismo modo, se han aislado de ambientes acuáticos, tanto de agua dulce como de agua marina, Las cepas del género Pseudomonas son capaces de procesar, integrar y reaccionar a una amplia variedad de condiciones cambiantes en el medio ambiente, y muestran una alta capacidad de reacción a señales físico-químicas y biológicas. Se han descrito cepas capaces de adquirir resistencia a metales pesados, disolventes orgánicos y detergentes, lo cual les permite explotar una amplia gama de fuentes de carbono como nutrientes, así como colonizar ambientes y nichos que difícilmente son colonizables por otros microorganismos.

4. Ciclo(s) biogeoquímicos en el(los) que intervienen

Las bacterias Pseudomonas se pueden encontrar en la matriz agua y suelo ya que estas bacterias están encargadas de la desintegración de la materia orgánica, desde la perspectiva ambiental tienen gran importancia de la depuración de aguas residuales, tienen la capacidad de crecer en hidrocarburos, por lo cual participa en el ciclo del carbono. También las bacterias Pseudomonas son importantes en el ciclo del nitrógeno ya que “es un desnitrificaste del medio en donde se encuentra”.(Cornelis . 2008)

Page 18: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE LA MATRIZ AMBIENTAL: SUELO

M I C R O B I O L O G Í A A M B I E N T A L U T L A S E S O R A :

Página 18/18

5. La función que juegan en la transformación de la materia orgánica a través de los ciclos biogeoquímicos

Uno de los habitantes comunes en las hojas de las plantas son las Pseudomonas, cuyo éxito en la colonización se debe a su capacidad para utilizar como fuente de energía y carbono compuestos como el metanol y metilaminas, los cuales se encuentran disponibles en la superficie de las hojas y constituyen una de las principales fuentes de emisión de metanol a la atmósfera. Esta característica le permite a la bacteria parasitar más de 80 especies de plantas, causando lesiones necróticas. Las especies de Pseudomona spp son utilizadas en biorreactores (aerobios y/o anaerobios), ya que para la obtención de nutrientes degradan la materia orgánica consumiendo los enlaces de carbono que existen en estos compuestos orgánicos utilizándolos como única fuente de energía, también tienen una importante participación en la depuración de metales pesados ya que al no ser especies exigentes nutrimentalmente tienen la capacidad de asimilar dichos metales. Dicha bacteria es parte fundamental en la biorremediación de agua y suelo contaminados; ya que esta bacteria no tiene una exigencia nutrimental alta puede asimilar los tipos de contaminantes que se pueden encontrar, haciendo a la Pseudomona spp la bacteria más apta para remediaciones.

La alta utilización de esta bacteria se atribuye a su metabolismo; las especies de Pseudomona spp son entero bacterias negativas que poseen capsulas que protegen su núcleo haciéndolas menos vulnerables a otros microorganismos y contaminantes, su movilidad le permite desplazarse en medios acuosos y solidos (utilizando su capsula para desplazarse) con esto tiene una tasa más alta de aprovechamiento de nutrientes.

6. Conclusión parcial sobre las interacciones bacterianas en la matriz estudiada y la importancia de la microbiología en el área ambiental

Después de la realización de la correspondiente marcha bioquímica se pudo identificar de manera presuntiva la presencia de Pseudomona aeruginosa, el hecho de que la muestra provenga del piso no quiere decir que no hay problema alguno, al contrario la muestra se extrajo de un lugar en donde alumnos de la Universidad Tecnológica de León habitan diariamente, es decir, los jóvenes estudiantes de la carrera de transportes están en una constante exposición a esta bacteria patógena oportunista. Se puede deducir que esta bacteria está presente en este edificio ya que en el cuarto de almacén se encuentra un compresor en el cual a sus alrededores se encuentran derrames de hidrocarburos, que como ya se sabe es una de las fuentes de energía de la Pseudomona. En dicho almacén se encuentran las ventanas cerradas para mantener una temperatura elevada para el buen funcionamiento del compresor, por lo cual las bacterias se encuentran en un medio de crecimiento idóneo. De cierta manera encontrar Pseudomona en esta área de la carrera de transportes fue buena ya que está degradando lentamente los continuos derrames de hidrocarburos que se tienen cada vez que se utiliza el compresor, también al no estar en contacto directo con la tierra no existe una des nitrificación.