Resultados. Análisis de resultados.(SPICER, 2009, OLIVAS 2001)

Agar SangreSe sembró Streptococcus pneumoniae en Agar sangre, se observa crecimiento de colonias circulares, brillantes, de 0.5 a 2.0 mm, con bordes bien definidos y convexas, rodeadas de una zona de alfahemolisis.

Streptococcus pneumoniae.Conocido como neumococo y desarrolla colonias de 1-3 mm de diámetro, apigmentadas alfa hemolíticas en condiciones aerobias y beta hemolíticas en anaerobiosis. La hemólisis 𝛂: lisis incompleta de los eritrocitos con degradación de hemoglobina o biliverdina y la formación de pigmento verde. Las cepas virulentas dan colonias mucoides debido a que presentan una gran cápsula, lo que constituye su factor de virulencia resistente a la fagocitosis. Es sensible a la optoquina.

Agar Sangre.Se sembró Streptococcus pyogenes en Agar sangre, en donde se observa que las colonias son compactas, pequeñas, redondas, con bordes bien definidos y convexas, están rodeadas por una zona de 2 a 3 mm de betahemolisis.

Streptococcus pyogenes.Colonias pequeñas de 1 mm de diámetro, grisáceas, opacas, rodeadas de una zona de hemólisis 𝛃 de 2 mm: la destrucción completa de los eritrocitos con el aclaramiento de la sangre alrededor del crecimiento bacteriano.

DEMOSTRACIÓN DE CÁPSULA.

Streptococcus pneumoniae.Tinción negativa. Este método de tinción utiliza colorantes neutros o ácidos ya que tienen poca afinidad por la célula bacteriana por lo tanto como no se absorben se colorea el fondo en el que están las bacterias pero la célula queda incolora y transparente, así pues las bacterias aparecen

como pequeñas áreas iluminadas en un fondo oscuro. La tinción acídica con nigrosina, o neutral (con tinta china) son las más usadas.

Resultados. Análisis de resultados.(SPICER, 2009, OLIVAS 2001)

PRUEBAS BIOQUÍMICAS.

Caldo sorbitol rojo de fenol

Se sembró Streptococcus pneumoniae en Caldo sorbitol rojo de fenol, y se puede observar que no hubo fermentación, puesto que el caldo no viro de rojo a amarillo.

Se sembró Streptococcus pyogenes en Caldo sorbitol rojo de fenol, y se puede observar que no hubo fermentación, puesto que el caldo no viro de rojo a amarillo.

Caldo sorbitol rojo de fenol.

El sorbitol es un alcohol o polialcohol de azúcar, se encuentra en algunas frutas y se emplea como edulcorante en algunos alimentos, es un producto fermentable por algunos estreptococos del grupo Virdans como Streptococcus mutans a eso se debe que dicha bacteria intervenga en la formación de caries dentales, esa particularidad lo diferencia de otros miembros del género como Streptococcus pneumoniae y Streptococcus pyogenes que no fermentan sorbitol.

Caldo inulina rojo de fenol.Se sembró Streptococcus pneumoniae en Caldo inulina rojo de fenol, y se puede observar que no hubo fermentación, puesto que el caldo no viro de rojo a amarillo.

Caldo inulina rojo de fenol.

Streptococcus pyogenes fermenta inulina con producción de ácido, pero no de gas. La inulina es un polisacárido natural presente en la raíz de algunas plantas,. La base rojo de fenol puede combinarse con inulina, glucosa y otras azúcares para diferenciación de cultivos puros con base en la fermentación del carbohidrato. En una pueba positiva el caldo vira de color rojo a amarillo.

Caldo inulina rojo de fenol.

Se sembró Streptococcus pyogenes en Caldo inulina rojo de fenol, y se puede observar que no hubo fermentación, puesto que el caldo no viro de rojo a amarillo.

Caldo inulina rojo de fenol.

El caldo rojo de fenol se utiliza en la determinación bioquímica de microorganismos, el rojo de fenol es indicador de pH que vira de color rojo a amarillo por la fermentación de los carbohidratos, con frecuencia se combina con inulina, maltosa, manitol, sacarosa, sorbitol, xilosa, etc. Streptococcus pneumoniae no fermenta inulina pues no hay cambios en el indicador.

Resultados. Análisis de resultados.(SPICER, 2009)

Caldo glucosa rojo de fenol

Se sembró Streptococcus pneumoniae en Caldo glucosa rojo de fenol, y se puede observar que no hubo fermentación, puesto que el caldo no viro de rojo a amarillo.

Se sembró Streptococcus pyogenes en Caldo glucosa rojo de fenol, y se puede observar que sí hubo fermentación, puesto que el caldo viro de rojo a amarillo. Caldo glucosa rojo de fenol

La fermentación de la glucosa produce ácido pirúvico en condiciones aerobias y no requiere de fosforilación inicial. La producción de ácido se observa por el vire del indicador al amarillo. De acuerdo a este principio Streptococcus pneumoniae, bacteria aerobia y anaerobia facultativa, no fermenta glucosa, pues se observa el tubo de color rojo, por el contrario Streptococcus pyogenes si es fermentador del carbohidrato.

Caldo lactosa rojo de fenol.

Se sembró Streptococcus pneumeniae en Caldo lactosa rojo de fenol, y se puede observar que sí hubo fermentación, puesto que el caldo viro de rojo a amarillo.

Se sembró Streptococcus pyogenes en Caldo lactosa rojo de fenol, y se puede observar que no hubo fermentación, puesto que el caldo no viro de rojo a amarillo.

Caldo lactosa rojo de fenol.

La diferenciación de especies de Streptococcus puede realizarse en base a su capacidad para fermentar glucosa al cultivar al microrganismo en medio caldo rojo de fenol en combinación con dicho carbohidrato, a las 24 horas se observa un cambio de color de rojo amarillo lo que indica la capacidad de la bacteria para producir lactosa, como es el caso de Streptococcus pneumeniae, de lo contrario el color permanece rojo como ocurre en presencia de Streptococcus pyogenes.

Streptococcus pneumoniae

Streptococcus pyogenes

Resultados. Análisis de resultados.(OMS, enfermedades transmisibles, 2004)

Caldo Desoxicolato de sodio.

Se sembraron Streptococcus pneumoniae (izquierda) y Streptococcus pyogenes (derecha) en Caldo Desoxicolato de sodio y optoquina, en ambos casos se puede observar que se aclaró el caldo, lo cual nos indica que la prueba es positiva.

Caldo Desoxicolato de sodio.

Prueba de la solubilidad en bilis: Se utiliza esta prueba principalmente para diferenciar entre Streptococcus pneumoniae, soluble en bilis, y otras especies de estreptococos alfa hemolíticos, “insolubles” en bilis. Esta prueba controla la capacidad de las células bacterianas de producir lisis en presencia de sales biliares, en un tiempo y a una temperatura específica. Las sales biliares provocan una descomposición de la membrana celular y aceleran el proceso autolítico natural del neumococo activando las enzimas por combinación de las sales biliares con el neumococo. Interpretación: Positiva cuando se observa un aclaramiento del tubo con desoxicolato respecto al de solución fisiológica. Negativo, cuando no hay diferencia de turbidez entre ambos tubos.

La prueba se solubilidad en bilis también se utiliza para identificar cepas cuando los resultados de prueba de sensibilidad a la optoquina son ambiguos. Streptococcus pyogenes también presenta solubilidad en bilis.

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Referencias bibliográficas.

SPICER WJ. Microbiología clínica y enfermedades infecciosas. 2ª ed. España: Elsevier 2009.

BROOKS GF. Carrol KC. Jawetz, Melnick y Adelberg. Microbiología Médica. 25ª ed. China: McGraw-Hill. 2010.

Streptococcus pneumoniae. Laboratorios Britania S.A. [En línea] 2010. [Citado 20 Feb 2016]. Disponible en: http://www.britanialab.com.ar/esp/informacion_cientifica/apuntes/a2_10.htm

OMS. Manual de laboratorio para la identificación y prueba de susceptibilidad a los antimicrobianos de patógenos bacterianos. [En línea]. 2004. [Citado: 20 Feb 2016]. Disponible: www.who.int