Anatomía de Algunas Especies Para El Control de Calidad

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Dominguezia - Vol. 29(2) - 2013Fecha de recepcin: 4 de agosto de 2013Fecha de aceptacin: 25 de noviembre de 2013

Caracteres farmacognsticos para el control de calidadde Petiveria alliacea, Lippia graveolens y Tagetes lucida

Bonier M. Garrido, Sindy C. Polanco, Isabel C. Gaitn, Armando Cceres, Mara E. Paredes*

Universidad de San Carlos de Guatemala, Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia, Edificio T-12, CiudadUniversitaria, Zona 12, Guatemala.Escuela de Qumica Biolgica, Departamento de Citohistologa.

*Autor a quien dirigir la correspondencia: [email protected]

Resumen

Esta investigacin se centr en el estudio de tres especies de plantas aromticas de uso popular en Guatema-la: Petiveria alliacea, Lippia graveolens y Tagetes lucida, que se aplican para el tratamiento de enfermeda-des gastrointestinales. A partir del material vegetal fresco y seco, se determinaron las caractersticasmacroscpicas, organolpticas, micromorfolgicas y fitoqumicas de cada especie, a los fines de establecerlas que puedan ser utilizadas para su respectivo control de calidad. P. alliacea presenta hojas hipostomticascon estomas paracticos, mesfilo con dos capas de parnquima en empalizada y de 4 a 5 de parnquimaesponjoso, donde encontramos cristales de oxalato de calcio en forma de estiloide; el nervio medio estconstituido por hasta 6 haces vasculares dispuestos en arco. L. graveolens presenta hojas anfistomticas conestomas anomocticos; en las epidermis se observan diferentes tipos de tricomas glandulares y no glandula-res; el nervio medio est constituido por 5 a 6 haces vasculares dispuestos en arco. T. lucida presenta hojashipostomticas con estomas anomocticos y anisocticos, mesfilo isobilateral con abundantes cavidadessecretoras; el nervio medio est constituido por 3 haces vasculares con casquetes de esclernquima y vainaesclerificada. Se identificaron para cada especie los metabolitos que podran estar relacionados con los usospopulares atribuidos.

Pharmacognostic characters for the quality control ofPetiveria alliacea, Lippia graveolens, and Tagetes lucida

Summary

This research was focused on the study of three species of aromatic plants popularly used in Guatemala forthe treatment of gastrointestinal diseases, Petiveria alliacea, Lippia graveolens, and Tagetes lucida. Macro-scopic, organoleptic, micro morphological and phytochemical characteristics of each species were deter-mined from fresh and also dried plant material, to establish those that can be used for its quality control.P. alliacea exhibit hypostomatic leaves with paracytic stomata, 2 layers of palisade parenchyma and 4 to 5 ofspongy parenchyma, styloid crystals and even 6 vascular bundles drawing an arch with 2 different types ofcollenchyma, in midrib. L. graveolens shows amphystomatic leaves with anomocytic stomata, variety of

Palabras clave: Petiveria alliacea - Lippia graveolens - Tagetes lucida - micromorfologa - metabolitos secundarios - control decalidad.Key words: Petiveria alliacea - Lippia graveolens - Tagetes lucida - micromorphology - secondary metabolites - quality control.

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glandular and non-glandular trichomes on epidermal projections, a flattened arch with 3 accessory vascularbundles in midrib. T. lucida shows hypostomatic leaves with anisocytic and anomocytic stomata, isobilateralmesophyll with several secretory cavities, 3 vascular bundles adjoined with sclerenchymatic caps and sur-rounded by sclerenchymatous cells, in midrib. Also for each species, secondary metabolites that can berelated to their popular medicinal uses were identified.

Introduccin

Segn los informes de la Organizacin Mundial dela Salud (OMS), desde 1993 el 80 % de la pobla-cin mundial recurre a la medicina tradicional paraatender sus necesidades primarias de asistenciamdica (OMS, 2003).

En Guatemala existe una larga tradicin del usode plantas medicinales, relacionado con la gran di-versidad biolgica y cultural del pas; es as que losmayas observaron los efectos de muchas plantasmedicinales y sus yerbateros o curanderos domina-ron el conocimiento de la herbolaria, utilizando di-versas hierbas para el tratamiento de la sintoma-tologa de diversas enfermedades (Xiu-Chacn,1998). Actualmente la poblacin guatemalteca si-gue utilizando las plantas para el tratamiento de en-fermedades de diversa ndole, como en el caso delas afecciones gastrointestinales, que son la prime-ra causa de morbilidad nacional, y para las que seutilizan particularmente diversas plantas aromticas(Cceres y Girn, 2002; Pll, 2005).

El hombre, a lo largo de su historia, ha utilizadoplantas aromticas para aliviar algunas de sus do-lencias y para aromatizar los sitios de sus rituales olos lugares donde moraba. Desde entonces, esossabores y olores fueron formando parte de su cultu-ra e idiosincrasia (Dey y Harbone, 2002).

Las plantas aromticas constituyen un conjuntode especies vegetales de diversas familias, denomi-nadas as debido a la presencia de glndulassecretoras que contienen aceites esenciales. Esasglndulas se encuentran localizadas en diversos te-jidos y rganos, como flores, hojas, brotes, tallos,madera, corteza, frutos, semillas, races y rizomas.Vierten el producto de secrecin al exterior o al in-terior de esa estructura. (Alleman, 2003; Domnguezy Castro, 2002). Los aceites esenciales presentanvariadas propiedades organolpticas y actividadesmedicinales, tanto antioxidantes como antimicro-bianas; de ah que sean utilizadas en diferentes par-tes del mundo en medicina tradicional para tratarpadecimientos gastrointestinales, respiratorios, fe-

briles, reumticos y dermatolgicos. En general, lasplantas medicinales se comercializan de diversasformas: frescas, secas, fragmentadas, pulverizadas,en cpsulas, o en extractos lquidos. Como se con-sideran naturales, no estn sujetas a las mismas re-gulaciones que tienen los medicamentos de snte-sis; sin embargo, pueden causar problemas a la sa-lud si no se utilizan correctamente o si se encuen-tran adulteradas o falsificadas.

Las drogas vegetales requieren el cumplimientode las Buenas Prcticas de Manufactura, desde sulugar de origen hasta su utilizacin con fines medi-cinales (Cuassolo y col., 2010).

Para asegurar la calidad de la materia prima sonimportantes los siguientes aspectos: identificacinpor medio de caractersticas botnicas, organo-lpticas, macroscpicas y microscpicas, as comoel perfil cromatogrfico, reacciones de identifica-cin y parmetros de pureza, entre los que se in-cluyen humedad, cenizas y rendimiento de aceitesesenciales.

Este estudio se enfoc en el establecimiento delos caracteres farmacobotnicos previamente men-cionados, de tres especies aromticas nativas de Gua-temala y popularmente utilizadas para el tratamien-to de afecciones gastrointestinales (Cceres, 2006;Pll, 2005): Petiveria alliacea L. (apacn), Lippiagraveolens HBK. (organo) y Tagetes lucida Cav.(pericn) en fase fenolgica de follaje y floracin.Con la finalidad de establecer caracteres diagnsti-cos que contribuyan a garantizar la identidad de es-tas especies, especialmente cuando se distribuyensecas y fragmentadas que dificulta su identificacinbotnica.

Materiales y mtodos

Se elaboraron ejemplares de herbario de las tres espe-cies en estudio atendiendo las recomendaciones deGiberti (1998); el material, botnico de P. alliacea fuerecolectado en Samayac, Suchitepquez, L. graveolensy T. lucida se recolectaron en la Coleccin y Huerto

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Productivo de Plantas Medicinales y Aromticas, dela Facultad de Agronoma, Universidad de San Carlosde Guatemala (USAC). La identificacin y el depsi-to de ejemplares de las tres plantas se realiz en elHerbario de Biologa de Guatemala (BIGU), de la Es-cuela de Biologa, Facultad de Ciencias Qumicas yFarmacia, USAC y fueron incorporadas con los n-meros 52519, 52520 y 52521 respectivamente.

Para cada especie se elabor una descripcin bo-tnica diagnstica a fin de facilitar su identificacinen el campo. En los estudios morfolgicos se em-plearon rganos en completo estado de desarrollo.La evaluacin morfolgica de la droga seca se rea-liz bajo microscopio estereoscpico.

Los caracteres microscpicos de las hojas, lostallos y la raz se determinaron a partir de prepara-dos de planta fresca obtenidos mediante cortes amano alzada (Gattuso y Gattuso, 1999).

Los cortes fueron teidos con safranina yfastgreen para la observacin de estructurashistolgicas (Gattuso y Gattuso, 1999). Adems, seprepararon diafanizados en las hojas de las tres es-pecies, y se analizaron ambas caras de las lminasfoliares para establecer las caractersticas epidrmi-cas y el ndice de estomas (Gattuso y Gattuso, 1999).Las observaciones fueron hechas en microscopioptico Fisher Scientific Micromaster II y digita-lizadas con el programa Micron USB, West OverScientific.

Se determinaron los porcentajes de rendimientode aceite esencial que contena cada una de las plan-tas siguiendo la metodologa de hidrodestilacin(Henao y col., 2010; Sols y col., 2003).

Se realizaron pruebas de pureza de las cenizastotales y la humedad para garantizar la calidad delmaterial vegetal utilizado en los ensayos. Las ceni-zas fueron determinadas por medio de la ignicinde la materia seca en crisoles previamente tarados,en una mufla a 600 C durante tres horas; luego deese perodo, se evaluaron las cenizas, que estabandentro de la gama de colores que iba desde el grishasta el blanco; por lo tanto, los crisoles fueron pe-sados y las cenizas, determinadas. La humedad fuedeterminada por termogravimetra.

Se confirm de manera cualitativa la presenciade cuatro metabolitos secundarios en las tres espe-cies evaluadas: alcaloides, flavonoides, saponinasy taninos, por medio de cromatografa en capa fina,con los extractos vegetales obtenidos de estas espe-cies por percolacin y concentracin en rotavapor

(Sols y col., 2003). Todos los anlisis numricos serealizaron en un mnimo de tres repeticiones.

Resultados

Descripcin botnica y caractersticas organo-lpticas diagnsticas

Petiveria alliacea es una hierba perenne, de aproxi-madamente 60 cm de alto, tallos delgados,ramificados, con fuerte olor aliceo, de actividadlacrimgena. Hojas simples con filotaxis alterna;forma elptica a oblanceolada, pice agudo, baseredondeada, peciolada; de margen o borde ondula-do, coloracin verde, ms oscura en el haz. Tieneraz profunda, leosa con coloracin blanco-amari-llenta (Figura 1, A).

Su materia mdica son las hojas y racesdesecadas.

En la droga seca, compuesta por las hojas, au-mentan la tonalidad de la coloracin verde, compa-rada con el espcimen fresco. Conservan su oloraliceo, son quebradizas al tacto (Figura 1, B). Laraz seca es fuertemente aromtica, presenta un co-lor blanquecino opaco, es quebradiza al tacto y sutextura es rugosa (Figura 1, C).

Lippia graveolens, es un arbusto leoso perennede 1,6 m de alto, tallos leosos, ramificados, delga-dos, con fuerte olor caracterstico de la planta. Ho-jas simples con filotaxis decusada, de coloracinverde, y es de mayor intensidad en el haz que en elenvs; oblanceolada, pice obtuso, peciolada; mar-gen o borde crenado (Figura 1, D). La droga vege-tal consiste en las hojas, que cambian su tonalidadde verde claro a verde fuerte, conserva su olor ca-racterstico ligeramente picante y fresco, las hojasson delgadas y quebradizas al tacto (Figura 1, E).

Tagetes lucida es una hierba perenne de 45 a 58cm de alto, tallo delgado, ramificado, con fuerte aro-ma anisado. Tiene hojas simples con filotaxis opues-ta; son de forma oblanceolada, el pice es agudo,base connada, son ssiles, de margen dentado, de 3a 5 cm de largo y 2 a 3 cm de ancho. A trasluz lashojas presentan una gran cantidad de glndulasoleosas. Las flores son liguladas de color amarillo,se disponen en captulos y estos, en inflorescenciatipo corimbo. Las partes areas (tallo, hojas y flo-res) (Figura 1, F) son las partes que se utilizan comodroga vegetal.

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Figura 1.- Ejemplares de las especies estudiadas

A. Ejemplar de Petiveria alliacea L.; B. Droga, hoja, desecada; C. Droga, raz, desecada; D. Ejemplar de Lippiagraveolens HBK.; E. Droga, hoja desecada; F. Ejemplar de Tagetes lucida Cav.

D

BA

C

E F

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La droga seca de la materia vegetal de T. lucidacambia su tonalidad de verde fuerte a un verde unpoco ms atenuado, mientras que el color de las flo-res se intensifica. El olor caracterstico dulce y ani-sado, persiste. La consistencia de las hojas es que-bradiza al tacto.

Caracteres micromorfolgicos e histolgicos parala identificacin

Petiveria alliacea L.

HojaVista superficialLa hoja de P. alliacea en vista superficial presentavenacin cerrada reticulada de tipo broquiddroma(Figura 2, A). En la seccin paradrmica y en eldiafanizado de la hoja se observan clulas epidr-micas con paredes anticlinales gruesas y ligeramenteonduladas que muestran puntuaciones primarias. Lahoja es hipostomtica con estomas de tipo paractico(Figura 2, B). Presenta escasos tricomas simplespluricelulares aglandulares, que pueden tener de dosa ms de diez clulas, y estn ubicados en ambascaras de la hoja y sobre los nervios principales (Fi-gura 2, C).

Corte transversalEn el corte transversal (CT) se observa mesfilodorsiventral, epidermis unistrata con clulas de ta-mao irregular en ambas caras; las clulas de la epi-dermis adaxial son ms altas que las de la cara abaxial.En ambos lados se observa una cutcula delgada. Elparnquima en empalizada es irregular y presenta deuno a dos estratos de clulas cortas y largas; elparnquima esponjoso, con aproximadamente cincoestratos de clulas, ocupa entre el 60 y el 70 % delmesfilo. El nervio medio est constituido por cincoa seis haces vasculares de tipo colateral abierto, es-tn enclavados en el parnquima esponjoso y dispues-tos en forma de arco; junto al floema se observancasquetes de esclernquima. En la zona del nerviomedio y adyacente a la epidermis adaxial encontra-mos colnquima laminar; junto a la epidermis abaxialobservamos colnquima lagunar (Figura 2, E) Enambos parnquimas se observan grandes cristalesestiloides de oxalato de calcio (Figuras 2, C y D).

Se evidencia adems, la presencia de tricomas sim-ples de bicelulares a pluricelulares situados en la epi-dermis en la zona del nervio medio (Figura 2, E).

RazEl CT de la raz presenta una peridermis pluries-tratificada, y un cilindro vascular con estructura an-mala; se observa una estructura con xilema com-pacto central, seguido por anillos de xilema alter-nando con anillos de parnquima que contienen is-lotes de floema. En todos los parnquimas se en-cuentran estiloides y cristales tetradricos de oxalatode calcio.

Lippia graveolens HBK.

HojaVista superficialLa hoja de L. graveolens en vista superficial pre-senta venacin simple, abierta y reticulada de tipocraspeddroma (Figura 3, A). El diafanizado del lim-bo foliar muestra una hoja anfistomtica con estomasdel tipo anomoctico. Las clulas epidrmicas de lacara adaxial presentan clulas con paredes anticli-nales lisas y ligeramente gruesas, mientras que enla cara abaxial presentan paredes anticlinalessinuosas y delgadas (Figura 3, B). En las epidermisse observan gran cantidad de tricomas eglandularesy glandulares (Figuras 3, B y C).

PelosTricomas eglandularesUnicelulares, simples, verrucosos, de base ancha yextremo agudo y pueden estar en lnea con la epi-dermis o elevados sobre columnas epidrmicas dedos o ms clulas. Presentan cistolitos en la base dela clula tricomtica (Figuras 3, D y E).

Tricomas glandularesSsiles, cabezuela unicelular (peltados), (Figura3, D); pie 1-2 celular, cabeza unicelular achatada(Figuras 3, B y D); pie bicelular, corto y cabeza dedos clulas (Figura 3, C); pie pluricelular largo ycabeza unicelular pequea (Figura 3, E).

Corte transversalEn el CT del limbo foliar se observa el mesfilodorsiventral con epidermis unistrata e irregular, for-mada por clulas rectangulares de paredes periclinalesrectas y delgadas (Figuras 3 D y E ). En la cara adaxialpresenta una sola capa de parnquima en empalizadaformada por clulas largas que aproximadamenteocupan la mitad del grosor de la hoja y tres capasirregulares de parnquima esponjoso.

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Figura 2.- Petiveria alliacea L.

A. Tipo de venacin de la hoja, materia fresca: vena primaria (1), venacin cerrada (2), venas secundarias (3), venacinreticulada (4) (10x); B. Seccin paradrmica de la hoja, epidermis abaxial, se observan estomas paracticos: clulassubsidiarias (1), clulas oclusivas (2), ostiolo (3) (400x); C. Tricomas no glandulares de la cara abaxial, cristalesestiloides de oxalato de calcio (200x); D. Corte transversal de la hoja: clulas de epidermis adaxial (1), clulas irregularesdel parnquima en empalizada (2), estiloide de oxalato de calcio (3) (200x); E. Corte transversal de la hoja: epidermisadaxial (1), epidermis abaxial (2), parnquima en empalizada (3), parnquima esponjoso (4), colnquima (5-6),parnquima (7-8), haz vascular (9), floema, (10), xilema (11), epidermis abaxial (12) (100x).

A

E

B C

D

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Figura 3.- Lippia graveolens HBK.

A. Hoja en vista superficial; B. Diafanizado de limbo foliar, clulas epidrmicas y estomas anomocticos, epidermisabaxial y adaxial (200x); C. Corte transversal de hoja, dos tipos de tricomas glandulares pluricelulares (400x); D.Corte transversal de hoja gran cantidad de tricomas: haz (1), envs (2), parnquima en empalizada (3), parnquimaesponjoso (4), tricomas glandulares peltados (5) y capitados (6), nervadura secundaria (7) (50x); E. Corte transversalpor nervio medio, tricomas glandulares de base larga y no glandulares sobre proyecciones (200x).

ED

CB

A

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En el transcorte se observa gran cantidad detricomas glandulares y no glandulares, como losdescriptos en la vista superficial. (Figuras 3, D yE). El nervio medio del limbo foliar est constitui-do por 5 a 6 haces vasculares colaterales abiertos,dispuestos en arco y enclavados en el parnquimaesponjoso (Figura 3, E).

Tagetes lucida Cav.

HojaVista superficialLa hoja de T. lucida en vista superficial presentauna venacin abierta y reticulada de tipo craspe-ddroma (Figura 4, A). En el diafanizado del limbofoliar se observa una hoja hipostomtica, conestomas anisocticos y anomocticos. Las clulasepidrmicas presentan paredes anticlinales gruesasy sinuosas (Figura 4, B). Se observan escasostricomas eglandulares en ambas epidermis.

Corte transversalEn el CT del limbo foliar se observa un mesfilounifacial o equibilateral. Presenta epidermis unistrataen ambas superficies de la hoja, seguida en amboslados por una capa de parnquima en empalizada,cuyas clulas son ms altas hacia la epidermisadaxial que hacia la epidermis abaxial. El parn-quima esponjoso, situado entre ambos parnquimasen empalizadas, presenta grandes cavidadessecretoras (Figura 4, C). El nervio medio del limbofoliar es poco prominente y presenta tres hacesvasculares de tipo colateral abierto, uno ms grandey central, y dos laterales de menor tamao. Los ha-ces presentan casquetes de esclernquima pertene-cientes al floema y una vaina de clulas grandesesclerificadas (Figura 4, D). Debajo de las epider-mis adaxial y abaxial, y reforzando los hacesvasculares encontramos colnquima tipo laminar. Seobservan escasos tricomas eglandulares en ambasepidermis y sobre el nervio central.

TalloCorte transversalEn el CT del tallo se puede observar la formapoligonal, epidermis uniestratificada seguida de unaa dos hileras de colnquima tipo laminar, ms desa-

rrollado en los ngulos; el cilindro vascular presen-ta hasta 24 haces colaterales y de 10 a 12 casquetesde esclernquima, dispuestos en una eustela muycompacta; cercanos a la epidermis se observan con-ductos secretores (Figura 4, E).

En las tablas 1, 2 y 3 se presentan los datos co-rrespondientes a las estructuras identificadas de lastres especies estudiadas.

Tamizaje fitoqumico

La presencia de metabolitos secundarios se evalupor medio de la tcnica de cromatografa en capafina. Los resultados de esas pruebas se presentan enla tabla 4.

AlcaloidesPara la prueba de CCF se utilizaron los estndaresde atropina que present un Rf de 0,85 y el depapaverina, que no dio una banda identificable. Tresde las muestras analizadas presentaron bandas enesa regin, con Rf de 0,88 (hoja de P. alliaceae,hoja de L. graveolens y hoja de T. lucida). El restode bandas no pudieron ser identificadas.

PolifenolesPara la identificacin de los polifenoles se utili-zaron los estndares de quercetina (Rf: 0,61),rutina (Rf: 0,14), hipersido (Rf: 0,34 y cidoclorognico (Rf: 0,29). Las dos muestras anali-zadas de T. lucida (pre-floracin y floracin)presentaron una banda cercana a la regin de larutina. Las hojas de T. lucida en prefloracinpresentaron cido clorognico, y las hojas deP. alliacea presentaron una banda en la regindel hipersido. El resto de bandas no pudieronser identificadas.

SaponinasSe utiliz el estndar de saponina que dio un Rf de0,78 y una coloracin violeta, el estndar dediosgenina con un Rf de 0,88 y el estigmasterol conun Rf de 0,97. Todas las muestras presentaron ban-das en la regin visible para los tres estndares uti-lizados, a excepcin de T. lucida en floracin, quesolo present una banda correspondiente al estndarde saponina.

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Figura 4.- Tagetes lucida Cav.

A. Hoja vista superficial; B. Diafanizado de limbo foliar clulas epidrmicas, estomas anomocticos y anisocticos (200x);C. Corte transversal de hoja mesfilo isobilateral con cavidades secretoras; D. Corte transversal del limbo a nivel del nerviomedio: epidermis adaxial y colnquima (1), casquete de esclernquima (2) (200x); E. Transcorte de tallo (100x).

A

CB

ED

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Tabla 3.- Morfoanatoma de hoja y tallo de Tagetes lucida Cav. Estructura Caractersticas Resultados

Nervacin Abierta reticulada pinnada, craspeddroma.

Estomas Hipostomtica, estomas anisocticos y anomocticos.

Epidermis Uniestratificada en ambas superficies.

Hoja

Mesfilo Equibilateral, parnquima en empalizada bajo ambas caras y esponjoso central con gran cantidad de cavidades secretoras.

Nervio medio Tres haces vasculares colaterales abiertos.

Indumento Escasos tricomas glandulares unicelulares y no glandulares pluricelulares.

Tallo Estructura primaria Presenta haces colaterales abiertos. Tiene euestela. Colnquima laminar. Conductos secretores.

Tabla 2.- Morfoanatoma de hoja de Lippia graveolens HBK. Estructura Caractersticas Resultados

Nervacin Abierta reticulada simple, craspeddroma.

Estomas Anfistomtica, estomas anomocticos.

Epidermis Uniestrata en ambas caras.

Mesfilo Dorsiventral. Una capa de parnquima clorofliano en empalizada con clulas largas.

Hoja

Nervio medio Haces vasculares: 5 a 6 colaterales abiertos dispuestos en arco.

Indumento Tricomas glandulares con cabeza unicelular y bicelulares, no glandulares largos y cortos sobre proyecciones epidrmicas.

Tabla 1.- Morfoanatoma de hoja y raz de Petiveria alliacea L.

Estructura Caractersticas Resultados

Nervacin Cerrada reticulada, broquiddroma.

Estomas Hoja hipostomtica, estomas del tipo paracticos.

Epidermis Unistrata en ambas caras, clulas epidermis adaxial ms altas con irregularidades.

Mesfilo Dorsiventral. Parnquima en empalizada uni o biestratificado e irregular. Otros: cristales estiloides de oxalato de calcio.

Nervadura central Haces vasculares del tipo colateral abierto.

Hoja

Indumento Tricomas pluricelulares predominando los no glandulares o tectores.

Raz Estructura secundaria Cilindro vascular con estructura anmala, se observa una estructura con xilema compacto central.

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Porcentajes de rendimiento de aceites esenciales yextracto vegetal

Se determinaron los porcentajes de rendimiento tan-to de la extraccin de aceites esenciales como laobtencin del extracto vegetal. Al evaluar los resul-tados de las tres plantas, el mayor porcentaje en laobtencin, tanto de extracto vegetal como de aceiteesencial, lo mostr L. graveolens; en cuanto a lacomparacin de las dos etapas fenolgicas de T. lu-cida, la etapa de floracin fue la que obtuvo el ma-yor rendimiento de estos dos parmetros.

Parmetros de pureza (humedad y cenizas totales)

En la determinacin de cenizas totales, la hoja de P.alliacea mostr los mayores porcentajes de cenizastotales con un promedio de 16,42 %, L. graveolens,12,01 %, raz de P. alliaceae, 11,83 %, T. lucida enfase de prefloracin, 10,58 %, y en fase de flora-cin, 8,62 %. El porcentaje de humedad para todaslas muestras fue menor del 10 %.

Discusin

Los resultados obtenidos en este estudio permitie-ron establecer caracteres farmacobotnicos tiles

para el control de calidad de las especies aromti-cas: P. alliacea, L. graveolens y T. lucida.

Las caractersticas botnicas encontradas en P.alliacea coinciden con las descripciones realizadaspor otros autores para la familia Phytolaccaceae yel gnero Petiveria (Cceres, 2006; Di Stasi yHiruma-Lima, 2002; Rzedowski y de Rzedowski,2000). El olor aliceo y la propiedad lacrimgenade esta especie se debe a que, tanto la raz como lahoja cuentan con un alto contenido de derivados delaminocido cistena, compuesto sulfurado comopetivericina, tiosulfinato, petiveriina, etc., pero enespecial, se atribuye a la sulfina (Cceres, 2006).Estas caractersticas le confieren actividad anti-fngica y antibacteriana y los compuestos poli-sulfurados son los ms activos (Lpez y Prez, 2010;Muoz, 2011).

Los caracteres micromorfolgicos observadosen el CT del limbo foliar como, mesfilo bifacial,epidermis unistrata y la presencia de colnquimaen la nervadura central, es propia de la familiaPhytolaccacea; sin embargo, Duarte y Lopes(2005), informaron para la especie, colnquimaangular; en nuestro estudio el colnquima adya-cente a la epidermis abaxial es de tipo lagunar y eladyacente a la epidermis adaxial es de tipo lami-nar. Cceres (2006) informa para esta especie,solo colnquima laminar. La presencia de grandes

Tabla 4.- Cromatografa en capa fina para confirmar la presencia de metabolitos secundarios de inters

H: hoja; R: raz.

P. alliacea L. graveolens T. lucida (prefloracin)

T. lucida (floracin)

Rf de la droga vegetal evaluada Estndares utilizados

Metabolitos H R H H H Rf

Alcaloides 0,88 0,33 0,51 0,67 0,88

0,88 0,94

ND ND

Atropina Papaverina

0,85 ND

Polifenoles 0,33 0,42 0,45 0,93

0,18 0,29 0,43 0,93

0,18 0,45 0,93

Rutina Ac. clorognico Hipersido Quercitin

0,14 0,29 0,34 0,61

Saponinas 0,74 0,85 0,97

0,76 0,87

0,970

0,76 0,91 0,97

0,76 0,90 0,97

0,78 Saponina Diosgenina Stigmasterol

0,78 0,88 0,97

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cristales estiloides de oxalato de calcio ha sido in-formada por otros investigadores (Cceres, 2006;Metcalfe y Chalk, 1972), lo cual coincide con esteestudio, no as con los informes de Duarte y Lopes(2005), quienes expresaron pequeos cristales pris-mticos, adems, informaron un mximo de cincohaces vasculares en arco en CT del nervio medio,mientras que en este estudio se encontraron hastaseis, al igual que lo expresado por Metcalfe y Chalk(1972). Se encontraron tricomas pluricelulares detipo no glandular o tectores, que adems de tenerun valor en la identificacin de las especies, ga-rantizan proteccin ante los insectos, incluso deestar relacionados en la regulacin de la tempera-tura y la hidrofugacin (Duarte y Lopes, 2005;Martnez y col., 2004).

En este estudio, al igual que lo sostenido porDuarte y Lpes (2005), se encontr una hojahipostomtica con estomas de tipo paractico; no seencontraron los estomas anisocticos informados porCceres (2006). En el CT del limbo foliar se obser-v un parnquima en empalizada irregular con unao dos capas de clulas cortas.

Para L. graveolens, la descripcin botnica rea-lizada coincide con lo observado por Cceres (2009)y Pll (2005). Las observaciones del cambio de co-lor de la droga vegetal al secarse, as como volversefrgil y conservar su olor caracterstico, correspon-de a lo evaluado por Nuez y col. (2007) que des-cribieron a la familia Verbenaceae.

Tambin para otras especies del gnero se ha des-crito la presencia de mesfilo bifacial y colnquimaasociado a ambas epidermis en la zona del nerviomedio, as como haces vasculares colaterales abier-tos dispuestos en forma de arco (Milaneze-Gutierrey col., 2003); sin embargo, la presencia de uno atres haces accesorios puede considerarse importan-te, ya que otras especies de Verbenaceae, presentandiferente distribucin y cantidad de haces acceso-rios. Las hojas anfistomticas son caractersticas dela familia (Bonzani y Col., 1997). Los tricomastectores cumplen funciones de defensa, mientras quelos glandulares colaboran en la secrecin de sustan-cias de inters, como aceites esenciales, entre otras(Bonzani y col., 1997; Molina, 2008). La variabili-dad de tricomas encontrados en L. graveolens, tan-to glandulares como no glandulares, son caracters-ticos de la familia (Bonzani y col., 1997; Martnez-Natarn y col., 2011; Metcalfe y Chalk, 1972).Cceres (2006), describe los tricomas glandulares

con cabeza bicelular y pie unicelular, con cabezaunicelular y pie bicelular observados en este estu-dio; sin embargo, no describe los tricomas peltados,que s son descritos por Martnez-Natarn y col.(2011), quienes adems, mencionan el efecto de losfactores ambientales sobre la densidad de lostricomas. Concluyeron que la densidad de tricomasaumenta con la humedad del lugar de crecimientode L. graveolens.

Para T. lucida, la descripcin botnica corres-ponde a lo descrito por otros autores (Cceres, 2009;Garca Snchez y col., 2012; Pll, 2005), la identi-ficacin organolptica, tanto en su etapa de follajecomo floracin, se caracteriza porque el aroma desus hojas es fuertemente anisado, hecho que ha oca-sionado que en muchas poblaciones rurales, dondees ampliamente utilizado, se lo conozca comoanisillo (Garca Snchez y col., 2012).En la etapa de floracin la hoja tiene una gran can-tidad de glndulas oleosas, que coincide con lo en-contrado por Visintin y Bernardello (2005), quie-nes describieron a la familia Asteraceae, y en espe-cfico al gnero Tagetes.

La descripcin micromorfolgica de la materiafresca indica que tiene una epidermis uniestratificadaen ambas superficies de la hoja, tal y como Metcalfey Chalk (1950) y Mercado y col. (2006), sealaronpara la familia Asteraceae, aunque no se considerade valor diagnstico debido a que puede variar encondiciones ambientales (Miln y col., 2006). Asi-mismo, estos autores describieron que la familiaAsteraceae comnmente tiene hojas con mesfilodel tipo dorsiventral. Sin embargo, en este estudioT. lucida present un mesfilo tipo isobilateral, quesegn los autores mencionados es comn encontrarloen hojas erguidas o pendulares y est relacionadocon condiciones ambientales. Nuestros resultadoscoinciden con lo informado por Garca-Snchez ycol. (2012) quienes tambin informaron el mesfilobifacial y cavidades secretoras, tanto en el mesfilocomo en la nervadura central.

En nuestro estudio, la nervadura central presentade uno a tres haces vasculares, lo cual difiere de lomencionado por Garca Snchez y col. (2012) quie-nes mencionan que la nervadura central tiene doshaces vasculares. Sin embargo, la presencia deesclernquima y una vaina esclerosada s es informa-da por ellos. La nervadura central poco prominenteha sido descrita en otras especies de Asteraceae(Zambare y col., 2010). Para T. lucida, el indumento

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est formado por escasos tricomas de tipo no glandu-lar, que para este estudio fueron ms abundantes enla cara adaxial, contrario a lo informado por GarcaSnchez y col. (2012); estos autores informan soloestomas de tipo anomoctico, y en este estudio seencontraron adems, anisocticos.

En cuanto al tamizaje fitoqumico de las tres es-pecies en estudio, en la cromatografa en capa fina,se confirma que los alcaloides encontrados para L.graveolens, la hoja de P. alliacea y la hoja de T.lucida en follaje corresponden a atropina, al com-pararlos con el Rf del estndar utilizado,

En la cromatografa en capa fina, los Rf encon-trados para L. graveolens, P. alliacea y T. lucida enfollaje pueden compararse con los tres estndaresutilizados, la saponina, la diosgenina y el stigmas-terol; en consecuencia, se confirma que las tres plan-tas tienen estos tipos de saponinas (Martnez Pilar ycol., 2003; Cceres, 2006, Teleguario, 2008).

El porcentaje de humedad de las tres especiesevaluadas se encontraba dentro de los rangos acep-tables especificados por la OMS (

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Garrido y col.

Agradecimientos

A la Facultad de Agronoma, especialmente al inge-niero agrnomo Vicente Martnez y a su equipo detrabajo y al Departamento de Ecologa, por la valio-sa ayuda brindada para la realizacin de la fase bot-nica experimental. Al Laboratorio de Bioensayos, alDepartamento de Citohistologa y al Laboratorio deInvestigacin de Productos Naturales (LIPRONAT),de la Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia porsu colaboracin y supervisin en la fase fitoqumicay la interpretacin de los resultados.

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