Animales transgénicosAnimales transgénicos

Alumno: José Guadalupe Alumno: José Guadalupe Guerrero MorínGuerrero Morín

Método del fosfato Método del fosfato de calciode calcio

Forma gránulos de Forma gránulos de DNA-fosfato de calcioDNA-fosfato de calcio

Preparación frescaPreparación fresca Aplicable en cultivos Aplicable en cultivos

en suspensión o en en suspensión o en monocapamonocapa

1-2% de eficiencia1-2% de eficiencia El tamaño de partícula El tamaño de partícula

es el factor más es el factor más importanteimportante

PolyplexesPolyplexes Polycationic Polycationic compounds that form compounds that form soluble complexessoluble complexes

Utilizado inicialmente Utilizado inicialmente para introducir DNA para introducir DNA viral en células (DEAE-viral en células (DEAE-dextran)dextran)

Nuevos polyplexesNuevos polyplexes• Poli-L-lisinaPoli-L-lisina• EsperminaEspermina• PoliaminasPoliaminas• Polietileniminas (PEI´s)Polietileniminas (PEI´s)

PolyplexesPolyplexes• Algunos cambian sus propiedades en Algunos cambian sus propiedades en

respuesta a estímulos físicos.respuesta a estímulos físicos. Azobenceno (de Azobenceno (de cis cis a a trans trans con exposición a con exposición a

UV), eficiencia aumentada en un 50%UV), eficiencia aumentada en un 50% N-isopropilacrilamida (sensible a N-isopropilacrilamida (sensible a

temperatura)temperatura)

Complejo laxo, hidrofílico y

soluble

Complejo hidrofóbico y compacto

+-

Expresión Transfección

Temp

corporal

• Protoplastos bacterianosProtoplastos bacterianos Se tratan con cloranfenicol para aumentar las Se tratan con cloranfenicol para aumentar las

copias del plásmidocopias del plásmido Lisozima para eliminar paredLisozima para eliminar pared Inducción de la fusión de células con Inducción de la fusión de células con

polietilenglicolpolietilenglicol Se pueden usar además fantasmas de Se pueden usar además fantasmas de

eritrocitos o esferoplastos (levaduras sin eritrocitos o esferoplastos (levaduras sin pared)pared)

Alta eficiencia y complejidadAlta eficiencia y complejidad

• LipofecciónLipofección Complejos de lípidos catiónicos/neutros con Complejos de lípidos catiónicos/neutros con

DNA tomados por endocitosis no mediada por DNA tomados por endocitosis no mediada por la célula (lipofección). Eficiencia del 90% la célula (lipofección). Eficiencia del 90% (Liposomas o lipoplexes).(Liposomas o lipoplexes).

+

+

+

+

+

+

Partículas

Disparador

Muestra

Formación de poros transitorios y Formación de poros transitorios y permanentes por electroporaciónpermanentes por electroporación

Transitorio

Permanente

Microinyección pronuclearMicroinyección pronuclear

Método de ultrasonidoMétodo de ultrasonido• Exposición a un sonicadorExposición a un sonicador• Formación y colapso de burbujas en el Formación y colapso de burbujas en el

líquido, formando cavidades (cavitación)líquido, formando cavidades (cavitación)

La bacteria invade la célula y se lisa La bacteria invade la célula y se lisa dentro de elladentro de ella• En En SalmonellaSalmonella ocurre en vesículas fagocíticas ocurre en vesículas fagocíticas• En En Listeria monocytogenesListeria monocytogenes y y Shigella flexneri Shigella flexneri

ocurre cuando la bacteria escapa de la vesículaocurre cuando la bacteria escapa de la vesícula• Agrobacterium tumefaciens Agrobacterium tumefaciens utiliza un pili, no utiliza un pili, no

infeccióninfección

Como son invasivos, deben ser atenuadosComo son invasivos, deben ser atenuados• Mutantes auxotróficosMutantes auxotróficos

Salmonella y ShigellaSalmonella y Shigella

• Autólisis inducibleAutólisis inducible Listeria monocytogenesListeria monocytogenes

Utilizado más Utilizado más in vivoin vivo para transferencia de para transferencia de vacunasvacunas

Virus con transgenes insertados en su Virus con transgenes insertados en su genomagenoma• Independientes (helper-independent) Independientes (helper-independent)

• Dependientes (helper-dependent): deleciones Dependientes (helper-dependent): deleciones de genes importantes, necesitan de un virus de genes importantes, necesitan de un virus ayudante o un plásmido (helper) que contenga ayudante o un plásmido (helper) que contenga los genes faltantes. También se puede usar una los genes faltantes. También se puede usar una línea celular complementaria al vector.línea celular complementaria al vector.

Usa proteínas de unión para unir Usa proteínas de unión para unir DNA al espermatozoideDNA al espermatozoide

QueratinocitosvaríasisiPolibreno

Tejidos, órganos, cels madre

NosisiPistola génica

MuchosNoSisiElectroporación

BSC-1, CV-1, COS

SiNosiDEAE-Dextran

Cultivos en susp.Células madre

NoSisiFosfato de calcio

Cultivos en susp.Células madre

VaríaSisiLipofección

Tipos celulares

ToxicidadTransitoriaEstableMétodo

Expresión

Industria alimenticiaIndustria alimenticia• Huevos bajos en colesterolHuevos bajos en colesterol• Leche baja en grasas, alta en Leche baja en grasas, alta en

lactoferrina y proteinas (Herman)lactoferrina y proteinas (Herman)• Animales con genes antimicrobianosAnimales con genes antimicrobianos

BiorreactoresBiorreactores• Animales productores de proteínas Animales productores de proteínas

importantesimportantes Producción de tela de araña a partir de Producción de tela de araña a partir de

cabras (silk-milk goats)cabras (silk-milk goats) Producción de ATIII (factor anticoagulante Producción de ATIII (factor anticoagulante

humano) a partir de cabrashumano) a partir de cabras Huevos productores de proteínas, como Huevos productores de proteínas, como

lisozima, vacunas atenuadas y anticuerposlisozima, vacunas atenuadas y anticuerpos

Modificar mosquitos para prevenir malariaModificar mosquitos para prevenir malaria• Transferencia de un gen efector que previene al Transferencia de un gen efector que previene al

parásito de pasar el intestino medio, parásito de pasar el intestino medio, bloqueando su ciclo vital.bloqueando su ciclo vital.

• Anticuerpo que bloquea la entrada del parásito Anticuerpo que bloquea la entrada del parásito a la glándula salival del mosquitoa la glándula salival del mosquito

La liberación de los mosquitos al ambiente La liberación de los mosquitos al ambiente reducirá la población de mosquitos reducirá la población de mosquitos capaces de transmitir la malariacapaces de transmitir la malaria

Método usado para entender la Método usado para entender la función génicafunción génica

Altera loci endógenos, resultando Altera loci endógenos, resultando alelos no funcionalesalelos no funcionales

Utiliza la recombinación homóloga Utiliza la recombinación homóloga Vectores de localización o de Vectores de localización o de

domiciliación: plásmidos domiciliación: plásmidos especializados que promueven la especializados que promueven la recombinación homólogarecombinación homóloga

Se lineariza en la región homóloga

Inserción de todo el vector

Se lineariza fuera de la secuencia homóloga

Ocurre un entrecruzamiento

Knock out

Ko/Ko+/+

Ko/ko y +/+

Cruza con un +/+ blanco

+/+ +/+

+/Ko+/Ko

x

+/+ +/Ko+/Ko Ko/Ko

Conocer las causas de diversos desórdenes Conocer las causas de diversos desórdenes genéticosgenéticos• Diabetes tipo IDiabetes tipo I• Fibrosis quísticaFibrosis quística• Distrofia muscularDistrofia muscular• Síndrome de DownSíndrome de Down

““Breast cancer mouse”: usado para probar Breast cancer mouse”: usado para probar diversas drogas y terapias contra el cáncer de diversas drogas y terapias contra el cáncer de mamamama

ANDi, mono rhesus con una inserción de la GFPANDi, mono rhesus con una inserción de la GFP

Mejora de xenotransplantesMejora de xenotransplantes• La mayoría de los mamíferos contienen un La mayoría de los mamíferos contienen un

carbohidrato en su superficie celular, sintetizado carbohidrato en su superficie celular, sintetizado por la enzima alfa(1,3) galactosidasa que por la enzima alfa(1,3) galactosidasa que ocasiona rechazo de xenotransplantes en ocasiona rechazo de xenotransplantes en humanos.humanos.

ConclusionesConclusiones

La transgénesis animal tiene La transgénesis animal tiene infinidad de aplicaciones, en campos infinidad de aplicaciones, en campos como la ganadería, medicina, como la ganadería, medicina, industria textil y farmacéutica, etc.industria textil y farmacéutica, etc.

BibliografíaBibliografía

S.B. Primrose y P.M. Twymann, S.B. Primrose y P.M. Twymann, Principles of Gene Manipulation and Principles of Gene Manipulation and GenomicsGenomics, 7ª ed, Blackwell Publishing, 2006, 7ª ed, Blackwell Publishing, 2006

Klug, William S. Klug, William S. et al.et al. , , Conceptos de GenéticaConceptos de Genética, 8ª ed, Pearson , 8ª ed, Pearson Prentice Hall, 2006Prentice Hall, 2006

Thieman, William J. y Michael A. Palladino, Thieman, William J. y Michael A. Palladino, Introduction to Introduction to biotechnology,biotechnology, Pearson Prentice Hall, 2004 Pearson Prentice Hall, 2004

Sambrook, Joseph y David W. Russell,Sambrook, Joseph y David W. Russell, Molecular Cloning: A Molecular Cloning: A Laboratory Manual Volume 3,Laboratory Manual Volume 3, 3ª ed, Cold Spring Harbor Laboratory 3ª ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001Press, 2001