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ANÁLISIS DE POLEN CORBICULAR RECOLECTADO DURANTE LOS AÑOS 2002 Y 2003 EN LOS COLMENARES DE ESTUDIO ECO- ETOLÓGICO DE OÑATI Y GOIZUETA Isabel Telleria Aseginolaza Mikel Sarasola Bastarrika 0
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ANÁLISIS
DE POLEN CORBICULAR
RECOLECTADO DURANTE LOS AÑOS 2002 Y
2003 EN LOS COLMENARES DE ESTUDIO ECO-
ETOLÓGICO DE OÑATI Y GOIZUETA
Isabel Telleria Aseginolaza
Mikel Sarasola Bastarrika
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ÍNDICE
1.- PRESENTACIÓN: GENERALIDADES DEL ESTUDIO ECO-ETOLÓGICO ................................ 1
2.- DESCRIPCIÓN DEL ENTORNO DE LOS COLMENARES EN ESTUDIO .................................... 4
2.1.- OÑATI-ARANTZAZU ..................................................................................................................... 4
2.2.- GOIZUETA ....................................................................................................................................... 5
3.- EL POLEN .................................................................................................................................. 7
3.1.- RECOLECCIÓN DEL POLEN POR LAS ABEJAS .................................................................... 7
3.2.- MORFOLOGÍA POLÍNICA ........................................................................................................... 8
4.- FLORA APÍCOLA .................................................................................................................................. 9
5.- LA PALINOLOGÍA Y SU ESTUDIO LABORATORIAL ................................................................. 11
5.1.-PALINOTECA DE REFERENCIA ............................................................................................... 11
6.- METODOLOGÍA DE RECOLECCIÓN Y TRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS DE POLEN 13
7.- METODOLOGÍA DEL ANÁLISIS POLÍNICO CORBICULAR .................................................... 15
7.1.- CLASIFICACIÓN Y PESADO DEL POLEN CORBICULAR ............................................... 15
7.2.- ESTUDIO MICROSCÓPICO E IDENTIFICACIÓN POLÍNICA .......................................... 16
7.2.1.- Método acetolítico ................................................................................................................ 18
7.2.2.- Método natural ..................................................................................................................... 19
8.- RESULTADOS ....................................................................................................................................... 20
8.1.- ANALÍTICA CUANTITATIVA ........................................................................................................ 20
8.2.- ANALÍTICA CUALITATIVA ........................................................................................................... 22
8.2.1.- Tablas de resultados ......................................................................................................................... 22
8.2.2.- Porcentajes gráficos .......................................................................................................................... 23
8.2.3.- Relación de Táxones encontrados ................................................................................................. 23
9.- CONCLUSIONES............................................................................................................................... 24
10.- RECURSOS ESTRUCTURALES Y HUMANOS.................................................................... ........ 27
10.- BIBLIOGRAFÍA
ANEXO I : Fotos de pólenes al microscopio .............................................................................................. 31
ANEXO II: Caracterización del polen mediante colorímetro.................................................................. 35
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1.- PRESENTACIÓN. GENERALIDADES DEL ESTUDIO ECO-ETOLÓGICO
El estudio analítico de polen que presentamos a continuación forma parte del
estudio eco-etológico de las poblaciones de abeja local de Oñati y Goizueta que han
realizando técnicos de la asociación de apicultores de Gipuzkoa (GEE) y el
Departamento de Genética Animal de la UPV/EHU.
El objetivo de este estudio eco-etológico es conocer el ciclo biológico de las
poblaciones de abeja de Oñati y Goizueta, y definir, si las hubiera, las características
genético-específicas de adaptación al medio, es decir, definir si existe un ecotipo.
Las líneas de actuación han sido las siguientes:
a) Obtener la curva de producción de 10 a 15 colonias en cada población
mediante pesada periódica de las colmenas a fin de medir la recolecta de
néctar en relación a las distintas floraciones.
b) Establecer la curva de la puesta en relación a las distintas floraciones.
Determinación de la forma y distribución de la cría, mediante medidas
periódicas del área de puesta de las colonias en estudio.
c) Analizar cualitativamente y cuantitativamente el polen recolectado en
relación a las distintas floraciones mediante recolecta semanal.
A fin de conocer si las características eco-etológicas observadas están
determinadas genéticamente, el estudio ha tenido una duración mínima de 2 años. Así,
primero se ha hecho un seguimiento del ciclo anual de la colmena en su lugar de origen,
para contrastarlo después, con el ciclo anual de la misma colmena en un entorno
diferente.
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Así, en total se inició el estudio e el 2002 con 21 colmenas en cada uno de los
dos colmenares en estudio, 6 colmenas de A.m.iberica y 15 colmenas de abeja local
(poblaciones de Arantzazu-Oñati y Goizueta).
En el 2003 hubo que sustituir las colmenas de A.m.iberica que murieron por
otras que se adquirieron de Córdoba. A consecuencia de las duras condiciones
meteorológicas a que han estado sometidos en los colmenares de estudio el número de
colmenas ha ido disminuyendo durante los dos años de estudio.
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2.- DESCRIPCIÓN DEL ENTORNO DE LOS COLMENARES EN ESTUDIO
2.1.- OÑATI-ARANTZAZU
El colmenar de Arantzazu está situado en Gomiztegi, a unos 700 m de altitud,
en el extremo sudoeste de Gipuzkoa. Al sur, está la cuenca de la regata de Arantzazu,
totalmente rodeada por cadenas montañosas. De norte a oeste discurren las cordilleras
de Aloña y Aizkorri (900-1551 m). Cerrando el oeste se encuentran los montes
Bizkarlatza, Aranguren, Elorretako Haitza (1100-1146 m).
El clima es atlántico, generalmente con bajas temperaturas debido a la altitud
en la que se encuentra.
El sustrato es en su mayoría calizo, predominando un paisaje típicamente
kárstico. Así, los suelos son generalmente ricos en bases, pero también hay zonas
pobres en bases (suelos más ácidos) bien porque la roca madre está constituida por
areniscas, o bien causada por una fuerte lixibación.
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Flora predominante del entorno: unos pocos ejemplares de Bardaguera (Salix
atrocinerea), Dientes de león (Taraxacum officinale), Cerezos (Prunus avium),
Endrinos (Prunus spinosa), Espino albar (Crataegus monogyna), Arce menor (Acer
campestre), Tilos (Tilia sp), Biércoles (Erica vagans), Brezos (Erica sp), Brecinas
(Calluna vulgaris), Argomas (Ulex sp), agrupaciones herbaceas,.....
2.2.- GOIZUETA
El segundo colmenar de estudio está ubicado en Goizueta. El territorio abarca
el tercio del término de municipal de Navarra y oeste de Gipuzkoa. Parte de la cabecera
del Añarbe, afluente del Urumea, que discurre entre los macizos de Cinco Villas y
Peñas de Aya.
El relieve, accidentado y abrupto, corresponde a las últimas estribaciones de la
cadena pirenaica.
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La climatología es de tipo atlántico, muy húmeda y templada. Este enclave del
vértice geográfico del golfo de Bizkaia es una de las zonas más lluviosas de Europa,
oscilando los 2700mm./año en el fondo de la cuenca y los más de 3000 mm. calculados
en las cimas de las montañas.
Predominan los suelos silíceos (granitos, esquistos y pizarra) con pendientes
pronunciadas, por lo que los suelos son principalmente de tierra parda lavada y ácida.
Así, son especies acidófilas las dominantes en el territorio.
Flora predominante del entorno: existen un monocultivo de pinos (Pinus sp)
por lo que predomina un gran pinar. No obstante se encuentran ejemplares de Castaños
(Castanea sativa), Cerezos (Prunus avium), Acacias (Robinia pseudoacacia), Espino
albar (Crataegus monogyna Brezos (Erica sp), Argomas (Ulex sp), agrupaciones
herbaceas,.....
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3.- EL POLEN
El polen es un minúsculo polvillo que sirve para la fecundación de las flores, se
encuentra en las anteras de los estambres y las abejas lo recogen para alimentarse.
Por su contenido en hidratos de carbono, proteína, lípidos, sales minerales y
vitaminas, representa una fuente insustituible en la alimentación de las larvas y abejas
jóvenes, siendo indispensable para su crecimiento (Muniategui et al., 1993).
3.1.- RECOLECCIÓN DEL POLEN POR LAS ABEJAS
Las abejas para la recolección del polen utilizan sus piezas bucales, los tres
pares de patas y la capa de pelos que recubre su cuerpo, ya que todos ellos quedan
impregnados de polen cuando la abeja se introduce en una flor. Este polen, después de
humedecido con néctar y secreciones salivares, se dispone en forma de gránulos tras una
serie de movimientos (Root, 1976; Stanley y Linskens, 1974).
Las abejas estudian atentamente las flores, muerden con sus mandíbulas las
anteras y las aproximan hacia su cuerpo para espolvorearse de polen (Baño Breis et al.,
1994). Tras esto, con los cepillos que poseen las abejas en las patas posteriores,
desprenden de su cuerpo el polvillo polínico. Después, por medio del peine rasposo, que
se halla en la base de la tibia, saca el polen del cepillo de la pata opuesta, alternando la
pata derecha y la izquierda; de este modo el polvo floral cuelga en el peine, pero sólo
por un instante, ya que, por una hábil presión de la aurícula, el polen es empujado a
través de una hendidura hacia la parte exterior de la tibia y de ahí hasta la cestilla del
polen. De esta manera, carga tras carga, la pelota aumenta su tamaño, siendo empujada
cada vez más arriba hasta que la cestilla este completamente llena. Es por esta cestilla,
también llamada corbícula, que a la pelota de polen que forma la abeja se le denomina
polen corbicular (Frilli y Sensidoni, 1983; Baño Breis et al, 1993).
De este proceso resultan unos gránulos de 1 a 5 mm y forma redondeada
irregular, cuyo color predominante suele ser el amarillo aunque según las especies hay
pólenes de gran diversidad de colores y tonos: rojo, azul, castaño o verde (Root, 1976).
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El color del polen corbicular viene dado fundamentalmente por su origen botánico, pero
puede estar modificado por el contenido en elementos minerales del néctar utilizado
para aglutinar el polen, por el contenido en agua, por el procedimiento de secado y por
el ataque de hongos entre otros factores (Serra et al., 1985).
3.2.- MORFOLOGÍA POLÍNICA
El grano de polen se forma por división meiótica de las células madres de los
sacos polínicos (microesporangios) y constituye la microspora de los espermatófitos. El
grano de polen es el encargado de realizar la fecundación del óvulo (Baño Breis et al.,
1990; Ortiz et al., 1996).
Una vez formados, los granos se liberan normalmente por separado (mónadas),
si bien en algunos grupos (Ericaceae, Empetraceae, Juncaceae) se libera en grupos,
formando tétrades, o bien, se libera el saco polínico entero formando entonces las
polinias (Orchidaceae) (Socorro y Espinar, 1998).
Las células que forman los granos de polen están provistas de una pared muy
compleja denominada esporodermis, la cual por su estructura y composición química es
idéntica a la de las esporas de los Pteridofítos. Esta pared polínica o esporodermis
consta de dos capas concéntricas: en el interior, la íntina, delicada, de composición
celuloso-péctinica, que envuelve de forma continua al protoplasto; en el exterior, la
exina, gruesa, constituida por esporopolenina, siendo ésta una de las sustancias
vegetales conocidas más resistentes a los agentes químicos y degradaciones enzimáticas
(Socorro y Espinar, 1998).
Las características morfológicas del grano de polen tales como polaridad,
tamaño, textura, ornamentación de la exina, número y tipo de aperturas entre otras, es
típico de cada especie vegetal y es la herramienta metodológica que se utiliza para
distinguir un polen de otro.
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4.- FLORA APÍCOLA
Se entiende por flora melífera o flora apícola de una región, al conjunto de las
especies vegetales de las que las abejas obtienen néctar, mielatos, polen u otros
productos útiles para la colmena.
Apis mellifera puede obtener su alimento de gran variedad de plantas, sin
embargo, en su actividad diaria y periódica muestran un alto grado de constancia y son
altamente selectivas (Free,1963) utilizando como fuente de polen, néctar o ambos
solamente algunas de las especies en flor disponibles (Montenegro et al., 1989; Sempe
et al., 1989; Montenegro et al. 1990, 1992a, 1992b).
En cada uno de sus viajes recolectores, visitan mayoritariamente un
determinado tipo de flor (Waddington y Holden, 1979). Parece ser que algunos factores
como: tamaño del grano de polen (Montenegro et al, 1992b), morfología de los órganos
florales, simetría floral, color de la corola (Montenegro et al., 1990) y sobre todo de la
cantidad y calidad del néctar y/o polen (Montenegro et al, 1994a y 1994b), influyen
sobre el atractivo que las distintas especies de flores ejercen sobre las abejas,
dependiendo de ello también el número de visitas que ellas realizan a cada especie floral
(Rollo García, 1986).
La flora aprovechable por las abejas se puede clasificar en función de la
utilidad que para ellas representa en: flora de continuidad y flora convertible. La
primera corresponde a aquellas especies vegetales que constituyen el sustento de las
colonias de abejas y sus recursos de supervivencia en diferentes épocas del año, sin
posibilidades de acumulación, mientras que la flora convertible representa, por su
masiva abundancia, por las especiales características del néctar segregado o del polen
emitido, la oferta que puede llegar a transformarse en excedentes o reservas y por tanto,
en producto cosechable.
En cuanto a la flora de continuidad, se estima que es muy necesaria su
presencia en los aledaños del colmenar como seguro de viabilidad para la colmena. La
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presencia sucesiva de varias especies de este tipo de flora, reviste mucha más
importancia de lo que, a primera vista, pudiera parecer; además de posibilitar el
desarrollo de la colonia, si su presencia es notoria y notable, asegura el mantenimiento
de altos niveles de población en la colmena dispuestos a recolectar una inminente
cosecha de alto interés melífero cuyo origen sea la flora convertible (Robles y
Salvachúa, 2000).
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5.- LA PALINOLOGÍA Y SU ESTUDIO LABORATORIAL
La palinología es la ciencia que estudia el polen y las esporas. En un principio
se desarrolló como auxiliar de la geología, pero poco a poco fue independizándose para
cobrar una entidad propia y ser aplicada a la descripción de plantas, ya que la
morfología del polen es un carácter fijo para cada especie vegetal, fácilmente accesible
para quien lo estudie a través de técnicas de microscopía óptica y electrónica.
El estudio de la palinología aplicado a este proyecto no sólo nos permitirá
identificar el polen corbicular que recogen las abejas dentro del marco de su
comportamiento eco-etológico, sino que también conoceremos mejor las apetencias que
tienen las abejas frente a determinadas especies vegetales, las épocas preferentes de
polinización y el impacto que la polinización tiene sobre la zona de estudio.
En todo estudio de palinología es necesario la realización de una palinoteca de
referencia, en la que se incluyan todos los pólenes de plantas de interés para las abejas
en el acopio de sus colmenas, para así facilitar la identificación posterior por
microscopía.
Para la creación de esta palinoteca y el desarrollo del proyecto, es necesario
hacer una prospección de la flora de interés melífero y polinífero en la zona de estudio,
con el fin de conocer la vegetación circundante a las colmenas en las que se está
analizando su comportamiento eco-etológico.
5.1.-PALINOTECA DE REFERENCIA
El trabajo de la creación de la palinoteca comienza con la clasificación botánica
de las especies recolectadas en la zona de estudio en la que se enmarca el proyecto.
Una vez identificadas las especies, se realizan preparaciones a microscopía
óptica con el polen de las especies que se encuentran en flor, con el fin de utilizarlos
como referencia durante la identificación del polen corbicular.
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Para ello se utilizan los métodos desarrollado por Mauricio, (1975) y Gómez-
Ávila (1992).
Con las especies de interés apícola recolectadas en el campo se realizará un
herbario de referencia, de interés tanto para este estudio como para posteriores
aplicaciones.
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6.- METODOLOGÍA DE RECOLECCIÓN Y TRATAMIENTO DE LAS
MUESTRAS DE POLEN
La recogida del polen se ha realizado mediante cazapólenes: las abejas que
retornan a la colmena deben pasar por una rejilla recolectora con perforaciones de 4,5
mm de diámetro, suficiente para dejar pasar el cuerpo de la abeja pero que impide el
paso de las cargas de polen, que caen en un cestillo inferior de recolección. El
rendimiento normal de un cazapolén es del 10 -15%.
El polen recolectado semanalmente se ha secado en un armario de secado por
circulación de aire caliente. Una vez seco el polen se limpia de restos vegetales, restos
de abejas, etc., Para terminar, antes de ser envasados, se han pesado el total de cada
muestra de polen recolectado semanalmente por cada colmena a estudiar.
Se han situado 6 cazapólenes, 3 cazapólenes en cada colmenar, uno para cada
población de abeja a estudiar; poblaciones de Oñati, Goizueta e ibérica. La recogida de
se inició el 14 de marzo del 2002, y se a realizado semanalmente, tanto en Goizueta
como en Oñati, y hasta el 14 de noviembre. En el 2003 se han intercambiado las
colonias experimentales de un entorno a otro y se ha repetido igualmente la recogida del
polen.
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Las colonias que han fallecido debido al los rigores del tiempo y el
debilitamiento producido por la aplicación continua de los cazapólenes, se han
sustituido por otras de la misma población. Al final del estudio, al ser reducido el
número de colonias sobrevivientes a estudiar, se optó por mantener únicamente dos
cazapólenes por cada colmenar de estudio
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7.- METODOLOGÍA DEL ANÁLISIS POLÍNICO CORBICULAR
La finalidad de este análisis polínico, además de la determinación del origen
floral de las pelotas de polen recolectadas, es la de determinar en que proporción se
encuentran los granos de polen de las distintas especies en cada muestra recolectada.
Para llegar a ello, hemos seguido la siguiente metodología:
7.1.- CLASIFICACIÓN Y PESADO DEL POLEN CORBICULAR
El polen corbicular es un gran gránulo de polen que las abejas moldean con sus
patas tras visitar varias flores. Son unas pelotas de 1 a 5mm de forma redondeada
irregular, cuyo color fundamentalmente viene dada por su origen botánico.
La identificación de los gránulos de polen recolectados, se ha realizado
asumiendo que las abejas son monoespecíficas en sus visitas a las flores, es decir, que
en cada viaje visitan solo una especie (Free, 1963) de modo que los cúmulos que
obtienen también en su mayoría son monoespecíficos.
Así, la muestra de polen corbicular obtenida mediante la trampa cazapólenes se
mezcla bien para lograr una buena homogenización, de cada muestra, se extrae 1 g de
polen para su clasificación.
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Las bolitas de polen se separan tomando como referencia principal el color que
presentan, dado principalmente por la especie a la que pertenecen. Estos colores se
contrastan con una tabla internacional de colores (pantone Color Formula Guide) con
fin de proceder a caracterizarlos y darles número correspondiente al color. La
adjudicación de este color es subjetiva ya que depende de cada observador, pero sirve
para una primera identificación.
El color de las cargas de polen es debido fundamentalmente a la especie
botánica de la que proceden y está influenciado por múltiples factores que determinan la
variación de tonalidades dentro de una misma especie: unas debidas a las condiciones
del polen en el momento de recolección por la abeja, como puede ser la presencia de
polvo o esporas de hongos en las flores, etc., y otras a la cantidad de mezcla de néctar y
secreciones salivares utilizadas por la abeja en su formación (Louveaux, 1958-59;
Hodges, 1974).
A la hora de clasificar los acúmulos de polen, además del color también se
tienen en cuenta la forma y textura de las pelotas.
Posteriormente se pesan los distintos grupos de cúmulos corbiculares por
colores, para determinar a través de la biomasa los porcentajes con los que contribuye
cada especie en el total de la muestra de polen colectado con la trampa.
7.2.- ESTUDIO MICROSCÓPICO E IDENTIFICACIÓN POLÍNICA
Una vez que los pólenes corbiculares se separan por colores se realizan las
preparaciones a microscopía óptica, al menos cuatro por cada color.
En primer lugar hay que comprobar al microscopio que cada grupo de color
corresponda a una única especie botánica, si no es así, habrá que volver a realizar la
separación por colores más minuciosamente. Si no es posible la distinción de las
especies por el color, se analizan al microscopio diferentes bolitas de un mismo grupo
para hacer una estimación de la proporción de las diferentes especies presentes en el
mismo grupo.
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A su vez, ocurre también, que una misma especie botánica tenga diferentes
matices de color. Por lo que, en estos casos, habrá que juntar aquellos grupos de una
misma especie que inicialmente habíamos separado.
Esta problema a la hora de separar los pólenes por colores se acentúa cuando la
muestra de polen presenta un mal estado de conservación.
Los granos de polen se identifican a través de microscopio óptico
comparándolos con los pólenes de las preparaciones de la palinoteca de referencia
realizada y utilizando claves morfológicas (Heusser,1971; Erdtman, 1986).
Los métodos aplicados en la preparación de los pólenes para su posterior estudio
microscópico se adaptarán a la dificultad, a la exigencia y a la especificación en la
determinación de las especies a medida que se desarrolle el proyecto.
Para el análisis polínico del polen corbicular se utilizan dos tipos de métodos:
polen acetolizado y polen al natural. El primero consiste en someter la muestra de
polen corbicular a un proceso denominado acetolisis desarrollado por Erdman (1969) y
ligeramente modificado por Hideux (1972). Este método en esencia consiste en la
destrucción de todo material excepto la capa externa del polen o exina.
Esta es la técnica comúnmente utilizada por los palinólogos, ya que permite
observar el tamaño, la forma y la exina del grano con toda claridad, así como conservar
la preparación microscópica indefinidamente. La ventaja de este método es que la
técnica está perfectamente homologada y los atlas polinológicos están confeccionados
con polen acetolizado. El inconveniente es que la técnica es más laboriosa y requiere
más tiempo que al natural.
En el montaje al natural existen diferentes metodologías desarrolladas por
varios autores como las descritas por Mauricio (1930 sec. Mauricio, 1979); Loveaux,
Mauricio y Vorwhol (1978) modificado por Sainz et al., (1980); Terradillos, Simal y
Huidobro, (1989); Baño Breis, (1990). Este método es más sencillo de realizar, pero su
durabilidad es menor y es más difícil la determinación al no poderse hacer
comparándose con ciertas publicaciones ya que estas están confeccionadas con polen
acetolizado.
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Estos dos métodos sirven tanto para la elaboración de la palinoteca como para
la identificación del polen corbicular.
En cuanto ala observación microscópica, se emplea casi exclusivamente el
microscopio óptico, ya que se trata de identificar el tipo polínico más que un estudio
profundo de la estructura y ornamentación de su esporodermis.
7.2.1.- Método acetolítico
Como se ha apuntado mediante este proceso se elimina el contenido celular
vivo del grano de polen, de modo que se favorece notablemente la visualización
microscópica detallada de la exina.
Se utiliza el método acetolítico propuesto inicialmente por Erdtman en 1969.
Se suspende el material polinífero en ácido acético glacial, se centrífuga a 2500 r.p.m y
se decanta. Al sedimento se le añaden 5ml de mezcla acetolítica (una parte de ácido
sulfúrica y nueve partes de anhídrido acético puro). En una campana de gases, esta
mezcla se calienta al baño Maria hasta ebullición, procurando agitarla con una varilla de
vidrio. De dos a cuatro minutos después de alcanzar la temperatura de ebullición del
agua, se detiene el calentamiento y durante cinco minutos se centrífuga. Posteriormente
se decanta y se le añaden 5ml de ácido acético glacial para eliminar los restos de mezcla
acetolítica. Tras un nuevo filtrado y decantado, se lava la muestra dos o tres veces. A
continuación, (con el fin de evitar el desarrollo de microorganismos) se añade a los
granos acetolizados 12 gotas de mezcla de glicerina y agua destilada a partes iguales, se
agita y se deja en reposo durante 15 minutos. Se centrífuga y finalmente se decantan los
tubos.
Para montar las preparaciones sobre un portaobjetos se transfiere un poco de
sedimento polínico y sobre una placa calefactora se deja que se evapore el agua de la
muestra. Posteriormente se la añade una gota de glicerogelatina y se coloca el
cubreobjetos. Las preparaciones hay que mantenerlas boca abajo durante al menos 24
horas y posteriormente sellarlas con laca de uñas para su conservación indefinida.
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7.2.2.- Método natural
Se utiliza el método desarrollado por Mauricio, (1975). Este consiste en
colocar la muestra sobre un portaobjetos y disolverlo con alcohol etílico de 96º
disgregando el material con ayuda de una aguja de disección. Posteriormente se deja
secar y luego se agrega una gota de fucsina básica la cual tiñe de forma diferencial la
exina de los granos de polen. Nuevamente se deja secar y posteriormente se coloca
encima un trocito de glicerogelatina que se derrite sobre una placa calefactora. Es
importante que la glicerogelatina no hierva, pues esto podría causar rotura de granos de
polen. Después se cubre la muestra con un cubreobjetos, se presiona levemente para
evitar formación de burbujas y se deja secar 24 horas boca abajo. Se limpia el porta y se
sella la preparación con laca de uñas.
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8.- RESULTADOS DE LOS ANÁLISIS POLÍNICOS
8.1.- ANALÍTICA CUANTITATIVA
En las siguientes 2 tablas y 4 gráficas reflejamos la cantidad de polen en gramos
recolectado mediante cazapólenes en cada colmena durante los años 2002 y 2003 en los
colmenares de estudio de Goizueta y Oñati (Arantzazu).
RECOLECTA DE POLEN SEMANAL EN GRAMOS (2002)
GOIZUETA 2002 OÑATI 2002 Colmena Colmena Colmena Colmena Colmena Colmena Fecha O1 (g) I3 (g) G8 (g) O7 (g) I4 (g) G4 (g) lll-21 65 15 35 270 50 25 lll-28 30 10 25 250 75 20 lV-04 30 15 5 190 70 65 lV-11 20 10 1 90 30 40 lV-18 5 5 1 50 5 25 lV-25 145 125 25 380 170 210 V-2 40 115 35 220 190 160 V-9 V-16 520 545 20 720 240 390 V-23 95 85 5 550 330 2 V-30 60 35 1 145 60 55 Vl-6 70 45 1 580 300 150 Vl-13 200 105 5 1010 240 155 Vl-20 560 630 5 970 600 140 G6 Vl-27 330 440 390 255 470 200 Vll-4 165 220 570 140 290 155 Vll-10 200 300 610 280 480 215 Vll-18 120 105 180 550 510 290 Vll-25 410 540 290 320 400 70 Vlll-1 390 310 370 370 370 55 Vlll-8 200 215 360 420 420 270 Vlll-15 205 130 340 45 35 35 Vlll-22 540 530 540 410 690 630 Vlll-29 245 15 20 15 20 20 lX-5 100 10 75 230 205 200 lX-12 85 40 65 105 180 85 lX-19 50 60 45 150 5 65 lX-26 5 10 15 35 5 35 X-3 5 15 15 55 30 55 X-10 5 10 5 50 60 40 X-17 10 20 5
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RECOLECTA DE POLEN SEMANAL EN GRAMOS (2003) GOIZUETA 2003 OÑATI 2003 Colmena Colmena Colmena Colmena Colmena Colmena Fecha K3 (g) O7 (g) G4 (g) O1 (g) K2 (g) G6 (g) lV-3 410 20 20 1 60 1 lV-10 105 1 1 1 50 1 lV-17 530 25 40 105 5 lV-24 375 10 15 80 5 V-1 390 10 15 60 1 V-8 540 20 20 40 1 V-15 Colmena V-22 590 105 95 G3 (g) 15 1 V-29 155 105 115 240 115 1 Vl-5 105 50 145 160 260 Vl-12 175 85 230 280 280 Vl-19 310 55 265 155 145 Vl-26 145 55 180 125 180 Vll-3 175 55 165 80 80 Vll-10 70 10 25 90 135 Vll-17 40 15 25 40 80 Vll-24 25 1 10 60 30 Vll-30 45 30 Vlll-4 Vlll-13 210 15 60 125 60 Vlll-21 65 1 15 70 40 Vlll-27 65 25 40 55 lX-4 15 5 10 10 lX-11 15 5 40 25 lX-18 75 30 55 70 lX-25 40 20 35 25 X-2 30 15 30 20 X-9 15 5 1 1 X-16 65 20 5 15 X-23 10 2 1 1
21
8.2.- ANALÍTICA CUALITATIVA
8.2.1.- Tablas de resultados
En las siguientes tablas de resultados se presentan las especies botánicas
identificadas y las proporciones de cada uno en las muestras de polen corbicular
analizados . La explicación de los términos utilizados es la siguiente:
- Fecha: intervalo de días (una semana) en la que se ha recolectado la muestra
de polen.
- Colmenas: clave de la colonia de abejas que ha realizado la recolección del
polen.
O: población originaria de Oñati.
G: población originaria de Goizueta
I: población Ibérica (originaria de Aragón)
K: población Ibérica (originaria de Córdoba). Traídas el 2003 para
sustituir a las Ibéricas fallecidas.
- Muestra total: el total del polen recolectado (en gramos) mediante el
cazapolen durante la semana.
- Muestra analizada: la muestra de polen en miligramos analizado.
- Especies detectadas:
- mg: peso en miligramos de las bolitas de polen de la
especie botánica en la muestra analizada.
- %: porcentaje de la especie botánica respecto al total de
la muestra analizada.
- Total: Suma de las muestras y media de los porcentajes correspondientes a
cada semana.
22
8.2.2.- Porcentajes gráficos
A continuación se presentan gráficamente las medias de los porcentajes de polen
recolectados por las tres colmenas en cada época del año.
23
9.- CONCLUSIONES
La abeja es responsable del 70-80% de la polinización entomófila de nuestros
ecosistemas. Esta polinización no tendría efectividad si la abeja encargada de la
recolección del polen trabajase aleatoriamente de flor en flor sin tener en cuenta su
origen botánico.
Del estudio del polen corbicular recogido por estas abejas situadas en los
colmenares de Oñati- Goizueta, podemos decir que la pecoreadora de polen trabaja con
fidelidad sobre una determinada especie, favoreciendo así la polinización cruzada de la
flora del entorno natural donde se ubican las colmenas. Esto se demuestra ya que en la
práctica totalidad de pelotas de polen analizadas, los granos de polen que la forman
tienen un mismo origen botánico.
Las cantidades de polen totales recogidas de cada especie botánica, demuestran
también, que hasta que no finaliza la floración de esa especie parte de las abejas siguen
trabajando sobre ella.
En la tabla de resultados se observa que hay floraciones con un mayor porcentaje
de recogida a lo largo del calendario apícola. Se ha observado que en Goizueta a lo
largo del año las mayores floraciones productoras de polen han sido: Salix sp., Quercus
sp., Crataegus monogyna, Ligustrum vulgare, Rubus sp., Castanea sativa, Erica sp.,
Ulex Gallii, Hedera helix.
En Oñati, las floraciones dominantes son: Ulex europaeus, Taraxacum officinale,
Crataegus monogyna, Trifolium sp., Rubus sp., Plantago sp., Calluna vulgaris, Erica
vagans, Ulex Gallii, Hedera helix.
Los porcentajes de peso menores en recogida de polen de otras especies no son
menos importantes, ya que el impacto de polinización sobre cada especie botánica es
efectiva puesto que son floraciones no tan masivas como las de otras especies con
24
mayores porcentajes de recogida (Laurus nobilis, Narcissus, Asphodelus albus, Sinapis
alba, Juglans regia, Jasione montana, Silene vulgaris...)
Hay que añadir sobre este punto, que los orígenes botánicos clasificados en este
trabajo no son los únicos sobre los que ha trabajado la abeja en la zona de los
colmenares situados en Oñati y Goizueta, ya que habrá pólenes (siempre en pequeña
cantidad) que hayan sido incluidos en otros grupos al tener igual color o que al coger el
porcentaje de muestra del lote, por probabilidad, no se hayan incluido en el análisis.
También hay que tener en cuenta que las abejas no solo polinizan las plantas con
la recogida del polen corbicular sino que en la pecorea de néctar la polinización también
es efectiva. Así que en este trabajo el impacto de la polinización resultante del acopio de
néctar no está reflejada, puesto que hay especies botánicas que son principalmente, o
únicamente, nectaríferas produciendo un polen menos atractivo para las abejas. Por
ejemplo: la acacia, el tilo, el arce, el acebo,....
Al contrario, se ha comprobado que hay especies botánicas que no son
frecuentadas por su nectar pero sí por su polen: los Ulex, los Quercus, Plantago sp.,...
También hay especies botánicas muy frecuentadas por las abejas tanto por su
néctar como por su polen: los brezos, el castaño, el espino, las zarzas, los frutales,...
El comportamiento ecoetológico respecto a la recogida del polen de las distintas
poblaciones de abeja estudiados, se está procesando informáticamente junto a otros
parámetros, para demostrar si las diferencias que se observan en esta analítica
corresponden o no a un comportamiento especifico de la abeja local.
Sobre la metodología de separación del polen por color, en la mayoría de los
casos, la diferencia de coloración del polen nos indica un distinto origen botánico. Esto
se complica en cierta manera, cuando especies distintas pueden tener colores muy
similares o una misma especie presenta tonalidades distintas. Debido a este factor es
necesario a la hora de separar los pólenes por color, y siempre antes de su pesaje,
25
analizar microscopicamente estos lotes de color para que esta clasificación por color
vaya paralela a su clasificación botánica, ya que debido también a factores de
conservación del polen estos colores pueden ser variables.
La conservación del polen es muy importante a la hora de la clasificación por
color, por que cuanto mejor sea el estado del polen, la separación será mas fácil y fiable.
La mala conservación del polen dificulta mucho el trabajo y es por tanto necesario que
el método de secado sea el correcto ya que los pólenes húmedos o excesivamente secos
tienen distintas tonalidades de lo esperado.
En el estado del polen también hay que incluir factores ambiéntales mientras el
polen se encuentra en el caza-pólenes. El polen recién recolectado por las abejas ese
mismo día, siempre será de mejor calidad para su posterior estudio que un polen que
lleva en el caza- pólenes unos días recolectado.
Respecto a la identificación microscópica de los pólenes es de gran importancia
tener una palinoteca de referencia de las floraciones de la zona de estudio.
Se ha utilizado principalmente el método natural en la preparación de los portas
puesto que en el trabajo de diferenciación de los pólenes por color el seguimiento
microscópico ha sido constante, y hubiese sido inviable por el ritmo de trabajo aplicar
el método de acetolizar los pólenes para la preparación de los portas en todas las
muestras realizadas en este proyecto. No obstante, cara a la identificación polínica si
que se han acetolizado pólenes.
26
10 - RECURSOS ESTRUCTURALES Y HUMANOS
Este estudio analítico promovido por la Asociación de Apicultores de
Gipuzkoa (G.E.E.), ha sido diseñado y desarrollado por los siguientes técnicos:
- Isabel Telleria Aseginolaza: Licenciada en Veterinaria, apicultora y responsable
del laboratorio apícola de Eltso-Ultzama.
- Mikel Sarasola Bastarrika: Licenciado en Biología y participante del proyecto de
recuperación de la abeja local.
El análisis polínico se ha llevado a cabo en el Laboratorio de Analítica
Apícola de la Casa Ezkurdi ubicado en Eltso-Ultzama (Navarra).
27
10.- BIBLIOGRAFÍA AIZPURUA, M. (1987) Zarautz inguruko erleen polen-ekarpenaren azterketa.
AIZPURU, I. (2000) “Claves ilustradas de la FLORA DEL PAÍS VASCO y
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28
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29
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Rustique.
SÁINZ LAÍN, C.; GÓMEZ FERRERAS, C. (2000) “ Mieles Españolas”. Mundi-
Prensa.
30
ANEXO 1
CARACTERIZACIÓN DEL POLEN MEDIANTE COLORÍMETRO
31
CARACTERIZACIÓN DEL POLEN MEDIANTE COLORIMETRO
La mayor parte de la información bibliográfica de la que se dispone sobre la
clasificación del polen corbicular por el color, trata de unas tablas o “pantone” de
colores donde los diferentes autores dan su propias claves identificativas de color-origen
floral.
Estas tablas de color nos han orientado y ayudado en nuestro proyecto pero
considerándolas insuficientes, subjetivas y atendiendo a que en algunas ocasiones no
coinciden exactamente los datos entre distintos autores nos preguntábamos si no habría
algún medio de medir el color del polen con mas objetividad. En colaboración con la
Universidad Publica de Navarra tuvimos la oportunidad de realizar un estudio sobre el
color del polen nunca antes realizado mediante un colorímetro.
Este colorímetro, CR-200 de MINOLTA, convierte todos los colores
comprendidos dentro del rango de percepción humana en códigos numéricos comunes
con la finalidad de que se pueda decir exactamente con que color se está tratando.
Esta medición de color se codifica en tres parámetros: L*: Es claridad e intensidad
y croma son expresados por a* y b* conjuntamente. Cuando los colores están
codificados es posible expresar pequeñas diferencias con las que se podrían diferenciar.
Este punto es importante resaltar en nuestro proyecto ya que la mayoría del polen
corbicular estudiado se encuentra en la gama de los amarillos- naranjas.
La medición del color del polen corbicular por este método se considera pionera
ya que no tenemos constancia de que se haya realizado anteriormente.
Para realizar el estudio se tomaron lotes de distintos pólenes identificados
previamente.
32
Para la medición del polen con el colorímetro, la primera tarea fue la de encontrar
el mejor modo de estas mediciones para que fuesen uniformes y fiables. Finalmente,
tras consultarlo con Begoña Hernández, profesora de física en la U.P.N.A. especialista
en temas de óptica se vio que el método que daba los mejores resultados es el de moler
el polen y colocarlo en un recipiente de tal manera que quedara enrasado, ligeramente
comprimido y con la superficie exterior lisa. De esta forma lo que se pretendió es evitar
que las características superficiales de las bolitas de polen modificasen la reflexión del
haz de luz y con ellos se distorsionaran los valores medidos. Además, de esta forma se
consigue diluir en toda la masa las posibles contaminaciones con restos de polen de
otras flores que hubiera sobre la superficie de estos gránulos.
Las mediciones se realizaron colocando el polen molido en una cajita de cartulina
de color blanco de sección cuadrada de dos cm de lado. Esta dimensión se tomó
teniendo en cuenta que el orificio por el que se proyecta el haz de luz del colorímetro es
una circunferencia de 1,1 cm de diámetro; se buscó una solución de compromiso entre
tener una superficie lo más reducida posible para que la cantidad de muestra necesaria
fuera igualmente pequeña y el tener una superficie de muestra suficientemente extensa
para dar cierto margen a la colocación del aparato sobre la muestra de forma que todo el
haz de luz cayera sobre el polen.
La profundidad de esta cajita debía ser suficiente para no interferir en el color de
polen con la superficie del color de fondo. En un principio se consideró necesario
disponer de una profundidad de 5 mm., pero posteriormente, las mediciones hechas con
una profundidad de 3 mm. por no disponer de una cantidad de muestra suficiente, no
han arrojado peores resultados.
En lo referente al número de mediciones de cada muestra se decidió realizar tres
repeticiones y cinco mediciones dentro de cada repetición: es decir, se colocaba la
muestra del polen molido, ligeramente compacto y con la superficie exterior lisa en la
cajita de cartulina y se tomaban 5 mediciones, moviendo la posición del colorímetro
pero sin modificar las condiciones superficiales de la muestra.
33
Para el tratamiento de los datos se realizó en primer lugar la media de cada
repetición y posteriormente la media de estas tres repeticiones. Para la estimación de
intervalos de confianza para la media se tuvo en cuenta únicamente la variabilidad entre
repeticiones y no la de dentro de cada repetición, ya que en general estas medidas eran
mucho más uniformes, como se ha comentado anteriormente. Por tanto, el intervalo
estimado significa que en el 95% de los casos, la media de las cinco mediciones
tomadas sobre la superficie de la muestra estará dentro de esos valores.
En cuanto a los resultados finales creemos que en general son bastante aceptables
en cuanto a su precisión, aunque en algunos casos la variabilidad es mayor. De cara a
distinguir entre distintas especies no suele haber coincidencias de valores, sobre todo si
tenemos en cuenta las tres ordenadas conjuntamente, a pesar de predominar las
tonalidades amarillentas-naranjas.
Con este método lo que se pretende es poder clasificar el color del polen
objetivamente mediante unas coordenadas numéricas y que éstas pudiesen ser fiables
cara a una posterior clasificación.
En este estudio se analizaron 20 polenes de orígenes botánicos distintos, de los
que aquí apuntamos algunos:
II G24 = Asphodelus albus, III G1 = Rubus sp., III G21 = Gramineaceae, V G22 =
Erica vagans, III G11 = Salix caprea, IV G16 = Castanea sativa, II G25 = Ulex sp., IV
G18 = Ligustrum sp., G1 23 = Salix atrocinerea…
34
ANEXO 2
FOTOS DE PÓLENES AL MICROSCOPIO
35
