Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 ·...
Transcript of Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 ·...
![Page 1: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/1.jpg)
Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació clínica del pacient amb hepatoblastoma
Marina Simon; Mikel Azkargorta; Laura Guerra; Lara Nonell; Manuel López Santamaría; Marta
Garrido; María Vázquez; Diego Plaza; Francisco Hernandez; Marta Mendiola; Marie Annick
Buendia; Félix Elortza; Isabel Ojanguren; Ramon Bartolí; Ramon Planas; Maria-Rosa Sarrias;
Margarita Sala; Carolina Armengol
Childhood Liver Oncology Group (c-LOG)
![Page 2: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/2.jpg)
Introducció: l’Hepatoblastoma
Adaptat de: Darbari et al. Hepatology, 2003
Tumors hepàtics en menors de 20 anys Tumors hepàtics en menors de 5 anys
67% 91%
INCIDÈNCIA ANUAL 1.5 casos/milió infants
31%
![Page 3: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/3.jpg)
Introducció: l’Hepatoblastoma
FACTORS DE RISC 95% esporàdics5% associats a factors genètics
INCIDÈNCIA ANUAL 1.5 casos/milió infants
![Page 4: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/4.jpg)
PRONÒSTIC
Introducció: l’Hepatoblastoma
FACTORS DE RISC 95% esporàdics5% associats a factors genètics
INCIDÈNCIA ANUAL 1.5 casos/milió infants
(Maibach et al, European Journal of Cancer, 2012)
Abreviacions: PRETEXT: Extensió del tumor pre-tractament; AFP: Alfa-fetoproteïna; M: Metastasis; SCU: Cèl·lules petites i indiferenciades
PrognosticStrata
PRETEXT 1/2/3
PRETEXT 4
Age > 5yrs
AFP > 1.2x106
Multi-focal M+ AFP <
100 SCU
1: good + - - - - - - -2: intermediate +/- at least one - - -3: poor +/- +/- +/- +/- +/- at least one
![Page 5: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/5.jpg)
PRONÒSTIC
Introducció: l’Hepatoblastoma
FACTORS DE RISC 95% esporàdics5% associats a factors genètics
INCIDÈNCIA ANUAL 1.5 casos/milió infants
(Maibach et al, European Journal of Cancer, 2012)
Abreviacions: PRETEXT: Extensió del tumor pre-tractament; AFP: Alfa-fetoproteïna; M: Metastasis; SCU: Cèl·lules petites i indiferenciades
PrognosticStrata
PRETEXT 1/2/3
PRETEXT 4
Age > 5yrs
AFP > 1.2x106
Multi-focal M+ AFP <
100 SCU
1: good + - - - - - - -2: intermediate +/- at least one - - -3: poor +/- +/- +/- +/- +/- at least one
Quimioteràpia + CirurgiaTRACTAMENT
![Page 6: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/6.jpg)
PRONÒSTIC
Introducció: l’Hepatoblastoma
FACTORS DE RISC 95% esporàdics5% associats a factors genètics
INCIDÈNCIA ANUAL 1.5 casos/milió infants
(Maibach et al, European Journal of Cancer, 2012)
Abreviacions: PRETEXT: Extensió del tumor pre-tractament; AFP: Alfa-fetoproteïna; M: Metastasis; SCU: Cèl·lules petites i indiferenciades
PrognosticStrata
PRETEXT 1/2/3
PRETEXT 4
Age > 5yrs
AFP > 1.2x106
Multi-focal M+ AFP <
100 SCU
1: good + - - - - - - -2: intermediate +/- at least one - - -3: poor +/- +/- +/- +/- +/- at least one
OS 3 anys > 75% (Maibach et al, European Journal of Cancer, 2012)
SUPERVIVÈNCIA
Quimioteràpia + CirurgiaTRACTAMENT
![Page 7: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/7.jpg)
PRONÒSTIC
Introducció: l’Hepatoblastoma
FACTORS DE RISC 95% esporàdics5% associats a factors genètics
INCIDÈNCIA ANUAL 1.5 casos/milió infants
CARACTERÍSTIQUES MOLECULARS
Activació de la via Wnt/B-Catenina >80% casos(Buendia, Journal of Hepatology, 2014)
Identificació de 2 subclasses pronòstiques: C1 i C2(Cairo-Armengol et al , Cancer Cell 2008)
(Maibach et al, European Journal of Cancer, 2012)
Abreviacions: PRETEXT: Extensió del tumor pre-tractament; AFP: Alfa-fetoproteïna; M: Metastasis; SCU: Cèl·lules petites i indiferenciades
PrognosticStrata
PRETEXT 1/2/3
PRETEXT 4
Age > 5yrs
AFP > 1.2x106
Multi-focal M+ AFP <
100 SCU
1: good + - - - - - - -2: intermediate +/- at least one - - -3: poor +/- +/- +/- +/- +/- at least one
OS 3 anys > 75% (Maibach et al, European Journal of Cancer, 2012)
SUPERVIVÈNCIA
Quimioteràpia + CirurgiaTRACTAMENT
![Page 8: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/8.jpg)
- Definir una signatura pronòstica a nivell proteic, de fàcilincorporació a la pràctica clínica, mitjançant l’estudi proteòmicde les dues subclasses moleculars d’HB.
- Identificar vies de senyalització implicades en l’agressivitattumoral.
Objectius
![Page 9: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/9.jpg)
Extracció ProteïnesHomogenització FastPrep + ultracentrifugació
2D- DIGE + MS/MS Label Free(Digestió Trips, LC-MS/MS, MASCOT)
Dades clíniques i patològiques
Dades proteòmiques
Anàlisi bioinformàticaIngenuity Pathway Analysis Software
Validació(n=129HB)
Western Blot (WB)Immunohistoquímica (IHC )
16 HB + 8 NT
Mètodes
Identificació biomarcadors pronòstic i vies de senyalització
![Page 10: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/10.jpg)
Sèrie 1Estudi Proteòmic
(n=16)
Sèrie 2Estudi IHQ
(n=129)Edat, mesos (mediana, [rang]) 29 [12-204] 13 [0.26-159]Sèrum AFP, ng/mL (rang) 448-1.708.400 107-7.627.330Quimioteràpia pre-operatòria (S/N/NA) 15/1/0 109/15/5Estadi tumoral
Estadi PRETEXT (I-II/III-IV/NA) 7/9 53/52/24Metàstasis al diagnòstic (S/N/NA) 5/11/0 17/101/11Multifocalitat (S/N/NA) 7/9/0 62/52/15
HistologiaHB: Epitelial/Mixt/NA 13/3/0 74/49/6
Component Epitelial majoritari: Fetal/No-fetal 10/6/0 83/35/11
Classificació clínica (Good/Intermediate/Poor) [% Poor] 6/5/5 [31%] 28/62/20 [18%]Classificació signatura 16-gens (subtipus molecular C1/C2) 11/5 -Seguiment, mesos (mitjana) 45.7 78.3Morts per càncer [%] 6 [37.5%] 10 [9%]
Abreviacions: IHQ, Immunohistoquimica; NA, no disponible
Pacients N=145 HB
![Page 11: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/11.jpg)
Resultats: Seleccio i validació de biomarcadors (BM)
Validació per Western Blot (WB)Sèrie 1 (n=15)
Proteïnesdiferencialment
expressadesC2 vs C1(n=230)
P-val ≤0,01FC ≥±3
Selecció de 8 biomarcadors
![Page 12: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/12.jpg)
Resultats: Definició cut-offs d’expressió proteica (WB)
![Page 13: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/13.jpg)
Mitjana expressió NL
BM Cut-off Puntuació
1 > NL x 2 + 1
2 > NL x 2 + 1
3 < NL / 2 + 1
Resultats: Definició cut-offs d’expressió proteica (WB)
![Page 14: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/14.jpg)
Mitjana expressió NL
+0 +3 +2
BM Cut-off Puntuació
1 > NL x 2 + 1
2 > NL x 2 + 1
3 < NL / 2 + 1
Resultats: Definició cut-offs d’expressió proteica (WB)
Puntuació
![Page 15: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/15.jpg)
+0 +3 +2
0 BM (n=4; 0% events)
1 or 2 BM (n=9; 33% events)
3 BM (n=2; 100% events)
Time of survival (months)
P=0.0027
0.5
Even
tFre
e Su
rviv
al
1.0
Resultats: Definició cut-offs d’expressió proteica (WB)
![Page 16: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/16.jpg)
Resultats: Validació dels 3 biomarcadors (IHQ)
% de cèl·lulespositives
Score %
0 0
<5% 1
5-19% 2
20-39% 3
40-59% 4
60-79% 5
80-100% 6
Intensitattinció
Scoreintensitat
Baix 1
Moderat 2
Alt 3
Puntuació global = Score % x Score intensitat (rang: 0-18)
![Page 17: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/17.jpg)
Resultats: Definició de cut-offs (IHQ)
Criteri 2 x màx NL 2 x màx NL Mín NL/2
Cut-off > 12 > 12 = 0
Puntuació + 1 +1 +1
![Page 18: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/18.jpg)
Resultats: Definició de la signatura proteica
Biomarcador 1 2 3
Criteri 2 x màx NL 2 x màx NL Mín NL/2
Cut-off > 12 > 12 = 0
Puntuació + 1 +1 +1
Suma = signatura[0-1-2-3]
![Page 19: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/19.jpg)
Resultats: Efecte de la signatura en la supervivència
![Page 20: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/20.jpg)
Resultats: Efecte de la signatura en la supervivència
Even
tFre
e Su
rviv
al0
0.5
1
0 50 100 150
P=0.018
0 BM (n=43, 5% events)
1 or 2 BM (n=81, 25% events)
3 BM (n=5, 40% events)
Time of survival (months)
![Page 21: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/21.jpg)
PrognosticStrata
PRETEXT 1/2/3
PRETEXT 4
Age > 5yrs
AFP > 1.2x106
Multi-focal M+ AFP <
100 SCU
1: good + - - - - - - -2: intermediate +/- at least one - - -3: poor +/- +/- +/- +/- +/- at least one
Resultats: Signatura 3 proteïnes i classificació clínica
N=110
![Page 22: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/22.jpg)
Resultats: Signatura 3 proteïnes i classificació clínica
N=110 N=62 intermediate
![Page 23: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/23.jpg)
Resultats: Anàlisi de vies de senyalització
P-value:* <0.005 ** <0.0005 *** <0.00005Ac
tivat
ion
z-sc
ore
![Page 24: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/24.jpg)
Resultats: Anàlisi de vies de senyalització
P-value:* <0.005 ** <0.0005 *** <0.00005
PI3K/Akt pathway HIPPO pathway
(Ser
473)
![Page 25: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/25.jpg)
• A partir de l’estudi proteòmic de 145 HBs hem identificat ivalidat una signatura pronòstica de 3 proteïnes que milloral’actual estratificació clínica.
• L’anàlisi de vies de senyalització de les dades proteòmiques amés, ha permès identificar les vies PI3K/Akt, Hippo i EIF2desregulades en l’Hepatoblastoma.
Conclusions
![Page 26: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/26.jpg)
Childhood Liver Oncology GroupCarolina ArmengolLaura RoyoMargarita SalaRamon Planas
Grupo Español para el Estudio de los Tumores de Hígado (GEETHI)Carolina ArmengolMª Elena MateosCristina BeléndezMarta GarridoDiego PlazaPurificación GarcíaManuel López Santamaría
Hospital Vall d’Hebron (Barcelona)Marta GarridoJoan Carles FerreresAlexandra NavarroConstantino Sábado
SIOPEL groupMargaret ChildsRudolf Maibach
Institut Pasteur (Paris)Marie Annick Buendia
Hôpital de Bicêtre (Paris)Monique Fabre
CIC bioGUNE (Bilbao)Mikel AzkargortaFelix Elortza
Hong Kong UniversityIrene OL Ng
University of Gdansk (Poland)Piotr CzaudernaMaciej Murawski
IMIM (Barcelona)Lara Nonell
Agraïments
Innate Immunity GroupMaria Rosa SarriasLucía SanjurjoGemma Aran
![Page 27: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/27.jpg)
![Page 28: Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora … · 2016-02-19 · Aplicació d’una signatura pronòstica de 3 proteïnes per la millora de l’estratificació](https://reader031.fdocumento.com/reader031/viewer/2022011818/5e8ce6aaec9b376e740bcddf/html5/thumbnails/28.jpg)