Avances en El Lab Oratorio
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Asociación Médica Argentina Curso sobre Avances en Bioquímica Clínica
Avances enel laboratorio hematológico, garantía de calidad y
su implicancia en la clínicaDra. Nilda E. Fink
Asignatura Hematología - Departamento de Ciencias Biológicas - Facultad de Ciencias Exactas - Universidad
Nacional de La Plata
FBA-PEEC
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Áreas o métodos de estudio
• Citohematimetría– Cuantitativos– Cualitativos
• Citoquímica• Citogenética• Inmunofenotipificación• Biología molecular• Química hemática
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Citohematimetria
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Autoanalizadores 2-3 partes (1)
nd1999QBS StarBD Bioscience
501999ADVIA 60Bayer
811998Micros 60ABX
28001995Cell-Dyn 1700 y 1700 CS
1101999Cell-Dyn 1200Abbott
Instalados en US
Aparición en US
InstrumentoFabricante
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Autoanalizadores 2-3 partes (2)
nd1995K-4500
1001999KX21Roche
13001994Coulter Onyx, Onyx AL
8001999Coulter Ac-T diffy diff 2
5001996Coulter Ac-T series
Beckman-Coulter
Instalados en US
Aparición en US
InstrumentoFabricante
CAP Today
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Autoanalizadores de alto volumen (1)
>21001991Coulter MAXM
>26001989Coulter STKS
>1001999Coulter HmX
>11001996Coulter GEN-SBeckman-Coulter
5001998ADVIA 120Bayer
181999Pentra 120 Retic
02000Pentra 60c+ABX
>3501997Cell-Dyn 4000
>3001999Cell-Dyn 3700
>7001997Cell-Dyn 3200Abbott
Instalados en US
Aparición en US
InstrumentoFabricante
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Autoanalizadores de alto volumen (2)
nd2000Sysmex XE2180/XL
3501997SysmexSE9500R/SE
ndndSysmex SE9500 Alpha 2
3501994Sysmex SE9500/SE
nd1997Sysmex SF3000-Alpha
1001996Sysmex SF3000-Alpha 3000
Sysmex
Instalados en US
Aparición en US
InstrumentoFabricante
CAP Today
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Determinación de Hb
Absorción a 540 nmHiCNABX
Absorción a 546 nmHiCNAbbott
Absorción a 546 nmHiCN con Hbcelular directa
Bayer
Absorción a 555 nmLSS-meta-HbSysmex
Absorción a 525 nmHiCNBeckman-Coulter
Método de detección:
Método de identificación
Instrumento
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Recuento de leucocitos totales
1-99,9Citometría de flujoBayer
0-99,9Corriente directaSysmex
0,99-99ImpedanciaCoulter-Beckman
0-250Dispersión óptica/ fluorescencia
Abbot
Linealidad 109/LMétodo Instrumento
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Recuento de plaquetas
Exactitud de umbrales fijos en la detección de unparámetro único
0-999Umbral de impedancia fijo
Coulter-Beckman
Recuento inmunoplaquetariomediante óptica/ impedancia
0-2000Recuento inmunoplaquetariomediante óptica/ impedancia fija
Abbott
Discriminación deeventos no
plaquetarios
Linealidad (109/L)
Método para recuento de Plt
Instrumento
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Recuento de plaquetas
Indice óptico y refractario permiten discriminación
0,005-3000OpticoBayer
Umbrales no fijos permiten discriminación
0-999ImpedanciaSysmex
Discriminación de eventos no plaquetarios
Linealidad (109/L)
Método para recuento de Plt
Instrumento
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Recuento diferencial de leucocitos
Dispersión de luz, ángulo dual como para eritrocitos y plaquetas
Canal basófil./lobul: todas menos basofilospierden citoplasma
Dispersión de luz, absorbancia de luz
Canal de tinción de peroxidasa: todas excepto basófilos
Technicon/Miles H*3RTX
PANDA
Volumen por impedancia eléctrica (V), conductividad con sonda electromagnética (C), dispersión de luz (S) (Tecnología CVS)
Sin tinciónCoulterSTKS
Dispersión de luz a 1-3º, 7-11º, 70-110º y 70-110º despolarizada (separación por MAPSS)
Sin tinciónAbbott Cell-Dyn 3500
Principios de mediciónTinciónInstrumento
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Recuento diferencial de leucocitos
DCCanal de basófilos: todas las otras células sin núcleo
DCCanal para eosinófilos: todas las demás células sin núcleo
Impedancia eléctrica (DC), corriente alterna de alta frecuencia (RF) (Tecnología RF/DC)
Canal para linfocitos, monocitos y granulocitos sin tinción
SismexSE9000
Principios de mediciónTinciónInstrumento
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1200 fL
Monocitos
Diagramas de dispersión de leucocitos
Den
sid
ad c
elu
lar Aglutinación de
plaquetas
GB, PLT, GR fantasmas, NRBC, etc. GRAN
inmaduro
Blastos
Desvío a la izquierda
1200 fLTamaño celular
Ruido
Granulocitos
Linfocitos
GR fantasmas
Den
sid
ad c
elu
lar
Tamaño celular
Diagnóstico diferencial de GB
(Sysmex SE9000)
Detección de inmadurez celular
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Rangos de estudio (1)
35-210 g/l
0,75-7,5 x 1012/l
0,15-0,65 l/l
55-120 ft
Depende del instrumento
15-800 x 109/l
0,1-99,0 x 109/l
0,1-99,0 x 109/l
0,1-20,0 x 109/l
0,1-1,0 x 109/l
Hemoglobina
Eritrocitos
Hematocrito
VCM
RDW
Plaquetas
Leucocitos (total)
Neutrófilos
Eosinófilos
Basófilos
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Rangos de estudio (2)
0,1-20,0 x 109/l
0,1-99,0 x 109/l
5-750 x 109/l
5,5-12,5 ft
Depende del instrumento
0,1-10 x 109/l
0,1-10 x 109/l
0,1-10 x 109/l
0,1-10 x 109/l
0,1-10 x 109/l
Monocitos
Linfocitos
Reticulocitos
VPM
PDW
Células T
Células B
Células NK
Células CD4Células CD8
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-+--++-Citom. de flujo
++++++-Retic.
+++++++RDL
+++++++Con-tador
Inter-ferencia
Edad de la
muestra
Exacti-tud
Com-parabi-lidad
Carry-over
Preci-sión
Dilu-ción
Aspectos del desempeño a ser evaluados
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Muestras anormales y sustancias que interfieren (1)
Hemólisis in vitroMicrocoágulosAglutininas fríasParaproteínasHiperbilirrubinemiaLipemiaUremiaHiperosmolaridad
Contadores hematológicos• Hemoglobinas S y C• Eritrocitos microcíticos• Corpúsculos de Heinz• Corpúsculos de Howell-Jolly• Parásitos• Fragmentos de eritrocitos• Hiperleucocitosis• Linfocitos atípicos• Leucocitos inmaduros• Plaquetas gigantes• Eritrocitos nucleados
Sustancias que interfierenMuestras anormales
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Muestras anormales y sustancias que interfieren (2)
Marcadores celulares• Antibióticos • Agentes citotóxicos• Moduladores inmunes• Corticoesteroides
Drogas fluorescentesContadores de reticulocitos• Cuerpos de Howell-Jolly• Parásitos• Plaquetas gigantes• Eritrocitos nucleados
Sustancias que interfierenMuestras anormales
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0%
25%
50%
75%
100%
1995 2001 2008
ManualesAutomatizados
Mejoramiento del parque instrumental en el país
14
34
49
(n=729) (n=1052) (n=1000) FBA-PEEC
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Límites de aceptabilidadHb
Hto
Sysmec KX211241
SEAC H10, HR240
Roche Cobas239
Medonic CA570, Mimer, Oden, Thor, F820, SF3000
233
Melet Schloesing MS9232
Hycell Celly, Hemacell229
Coulter ACT8, Gen=S, Onyx S, S5, S7, SR, serie S, ST, 2-3, 4-6, STKS, serie T 540, 890
215
Citocom CT 500214
Bayer Advia 60213
Bitex Twincell, Minicell 16, Mega, Abacus209
ABX Micross, Pentra, Pentra Retic206
Abbott Cell Dyn 1400, 1600, 1700, 3200, 3500
201
AutoanalizadorCód.
FBA-PEEC
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Límites de aceptabilidad
GR
Sysmec KX211241
SEAC H10, HR240
Roche Cobas239
Medonic CA570, Mimer, Oden, Thor, F820, SF3000
233
Melet Schloesing MS9232
Hycell Celly, Hemacell229
Coulter ACT8, Gen=S, Onyx S, S5, S7, SR, serie S, ST, 2-3, 4-6, STKS, serie T 540, 890
215
Citocom CT 500214
Bayer Advia 60213
Bitex Twincell, Minicell 16, Mega, Abacus209
ABX Micross, Pentra, Pentra Retic206
Abbott Cell Dyn 1400, 1600, 1700, 3200, 3500
201
AutoanalizadorCód.
FBA-PEEC
![Page 23: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/23.jpg)
Límites de aceptabilidadGB
Plt
Sysmec KX211241
SEAC H10, HR240
Roche Cobas239
Medonic CA570, Mimer, Oden, Thor, F820, SF3000
233
Melet Schloesing MS9232
Hycell Celly, Hemacell229
Coulter ACT8, Gen=S, Onyx S, S5, S7, SR, serie S, ST, 2-3, 4-6, STKS, serie T 540, 890
215
Citocom CT 500214
Bayer Advia 60213
Bitex Twincell, Minicell 16, Mega, Abacus209
ABX Micross, Pentra, Pentra Retic206
Abbott Cell Dyn 1400, 1600, 1700, 3200, 3500
201
AutoanalizadorCód.
FBA-PEEC
![Page 24: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/24.jpg)
4372,274372,2CHCM
4502,75.54502,7HCM
3,542,52,35.53.542,52,3VCM
145713,422147520PLQ
119014,61179215RGB
6704,454876,5RGR
5404,17,55706,1Hto
5564,17,55776,2Hb
DRPA tentativo
% de aceptación
Especificaciones deseables de
la calidad
DRP para el 80% de los laboratorios
DRP para el 60% de los laboratorios
% de aceptación
DRPAAnalito
PEEC-H
Ricós et al (2008)PEEC-H (Encuesta 63)
![Page 25: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/25.jpg)
Nuevos parámetros y su implicancia
![Page 26: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/26.jpg)
Parámetros hematológicos (1)
• Directos (determinados)– Recuento de eritrocitos– Volumen de eritrocitos– Recuento de plaquetas– Volumen de plaquetas– Hemoglobina– Recuento de leucocitos– Volumen de leucocitos
![Page 27: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/27.jpg)
Parámetros hematológicos (2)
• Indirectos (calculados)– Hematocrito
– Indices eritrocitarios: VCM, HCM, CHCM
– ADE (RDW)
– ADH (HDW)
– VPM
– Histograma leucocitario, eritrocitario, plaquetario
– Linfocitos (relativo y absoluto)
– Mononucleares (relativo y absoluto)
– Granulocitos (relativo y absoluto)
![Page 28: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/28.jpg)
ADE (RDW)
• Indica la variabilidad en el tamaño del eritrocito
• Intervalo de referencia
• Como coeficiente de variación (CV): 12,8+1,2%
• Como desviación estándar (DE): 42,4+3,5 fL
![Page 29: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/29.jpg)
Clasificación de anemias basada en VCM y RDW
Anemia aplásica
Pre-leucemia
Enfermedad crónica (90%)
Normal entre 6 semanas de edad y el adulto
Hemoglobinopatía no anémica
Quimioterapia
Leucemia linfocítica crónica (LLC)
Leucemia mielocítica crónica (LMC)
Hemorragia
Esferocitosis hereditaria
Enfermedad crónica (10%)
Infantes normales entre 6 semanas y 2-5 años de edad
Talasemia heterocigota
RDW normal (homogéneo)
VCM alto (macrocítica)
VCM normal (normocítica
VCM bajo (microcítica)
J Emer Med 1991; 9:71-4
![Page 30: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/30.jpg)
Recien nacidos normales
Enfermedad hemolítica del recién nacido
Deficiencia de folato
Deficiencia de vitamina B12
Anemia hemolítica inmune
Aglutininas frías
Leucemia linfocítica crónica con altos recuentos linfocitarios
Deficiencia precoz de hierro o de folato o B12
Deficiencia mixta
Hemoglobinopatía anémica
Mielofibrosis
Anemia sideroblástica adquirida
Deficiencia de hierro
Talasemia homocigota
Fragmentación de GR
Anemia sideroblástica hereditaria
RDW alto (heterogéneo)
VCM alto (macrocítica)
VCM normal (normocítica
VCM bajo (microcítica)
Clasificación de anemias basada en VCM y RDW
J Emer Med 1991; 9:71-4
![Page 31: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/31.jpg)
Fórmulas para diferenciar anemias microcíticas
VCM – RBC (5 x Hb) – 3,4VCM2 x (RDW/100) x HbVCM/RBCVCM<72RDWVCM2 x MCHRDW/RBCEcuaciones discriminantes lineales de Fisher
England & Fraser, 1973Green & King, 1989Mentzler, 1973Lafferty et al., 1996Bessman & Feinstein, 1979Shine & Lal, 1977Ricerca et al., 1987Eldibany et al., 1999
FórmulaInvestigadores
Am J Clin Pathol 1999; 111:678-82
![Page 32: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/32.jpg)
ADH (HDW)• Indica la variabilidad en la concentración de
Hb en los glóbulos rojos
• Intervalo de referencia: 2,4+0,2 g/dl
HDW reticulocitos• Indica la variabilidad en la concentración de
Hb en reticulocitos
• Intervalo de referencia: 2,8 – 4,0 g/dl
![Page 33: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/33.jpg)
Histogramas para el valor medio del volumen eritrocitario(VCM) y concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM)
![Page 34: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/34.jpg)
Valores de ADE (RDW) para diferenciar anemias hipocrómicas
Am J Hematol 2002; 69:31-3
DBT ADFe BT Normal
![Page 35: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/35.jpg)
Curvas ROC para discriminación de anemias (ADFe y APC)
Am J Clin Pathol 2001; 115:112-8
Ferremia
![Page 36: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/36.jpg)
VPM
• Valores informados: 7,7+0,27 fl• Diagnóstico de trombocitopenia• Factor de riesgo de enfermedad trombótica• Aumenta en trombocitopenia de consumo• Aumenta bajo estímulo trombopoyético• No está relacionado con la edad de la Plt• Variaciones fisiológicas de VPM• Macrotrombocitopenia• Agrandamiento in vitro
![Page 37: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/37.jpg)
ADP (PDW)
• Valores informados: 58,9+3,24%
• Correlacionado con alto número de plaquetas y con VPM
• Aumentado en trombocitosis en SMP
![Page 38: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/38.jpg)
•Plaquetocrito (Ptc)
Valores informados: 0,19+0,01%
•Componente plaquetario medio (CPM)
Valores informados: 28,6+0,52 g/dl
•Ancho de la distribución del componente plaquetario (ADCP)
Valores informados: 5,00+0,09%
![Page 39: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/39.jpg)
Características morfológicas y citoquímicasde leucemias agudas
-++--Blastos grandes y polimórficos, blebscitoplasmáticos, GPlb (+) llbilla (+) peroxplaq (+)
LA linaje megacariocíticoM7
-+--->30% megaloblastos eritroides y blastos mieloides. Eritroblastos multinucleados
EritroleucemiaM6
++-+++<80% monoblastos, <20% componente granulocítico
Leucemia monocíticaM5b
++-+++>80% monoblastos, <20% componente granulocítico
Leucemia monoblásticaM5a
--+++>30% blastos, >20% promonocitos y monocitos, >20% de componente granulocítico
Leucemia mielomonocíticaM4
----->30% promielocitos hipergranulares anormales. Auer (+)
Leucemia promielocítica hipergranular
M3
--+++30-90% blastos, >10% promielocitos y mielocitos, <20% células monocíticas
Leucemia mieloblástica con diferenciación parcial
M2
---+>3%Indiferenicada >90% de blastos <10% promielocitos o monocitos
Leucemia mieloblástica aguda sin maduración
M1
----->30% mieloblastos con ausencia de diferenciación mieloide CD13(+) CD33 (+)
Leucemia mieloblástica aguda con mínima diferenciación mieloide
M0
LisozimaPASNASDASBBMPO
CitoquímicaMorfologíaDiagnóstico clínicoTipif. FAB
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Citometría de flujo
![Page 41: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/41.jpg)
Anticuerpos monoclonales (CD) utilizados en el estudio fenotípico de una leucemia aguda
Receptor interleucina-2 (cadena β)
Mieloide
Célula progenitora multipotente
Megacariocítico, glicoproteína IIb/IIIa
Megacariocítico, glicoproteína Ib
Antígeno leucocitario común
Megacariocito, glicoproteína IIIa
Monocito
Estirpe-asociadoCD
CD25
CD33
CD34
CD41
CD42
CD45
CD61
CD68
T (receptor E)
T
T
B (cALLa)
Mieloide/monocítico
Mieloide
Monocítico/mieloide
B
B
CD2
CD3
CD7
CD10
CD11b
CD13
CD14
CD19
CD22
Estirpe-asociado
CD
![Page 42: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/42.jpg)
MYELOBLAST PROMYELOCYTE MYELOCYTE METAMYELOCYTBAND/
NEUTROPHIL
103
102
101
CD34
HLA-DR CD117
CD13
CD33CD11b
CD15
CD64
CD65
CD54
CD10
CD16
CD35
CD13
Cambios fenotípicos diferenciación mieloide
![Page 43: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/43.jpg)
MONOBLAST PROMONOCYTE MONOCYTE
CD34
CD117
CD64
CD45
CD11b
CD14
HLA-DR
CD36
CD11c
Cambios fenotípicos diferenciación monocitoide
![Page 44: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/44.jpg)
Clasificación inmunológica de las leucemias agudas
-
-
-
-
-
-/+
+
+
+
-
-
-
+
+
+
-
-
-
+/-
+
+
-
-
-
-
-
-
CD10
CD19
CD22
CD3
CD5
CD8
CD13
CD33
aMPO
LMALLA-TLLA-BAnticuerpo monoclonal
![Page 45: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/45.jpg)
LMA: Clasificación de la OMS
LMA secundaria a MDS relacionada a terapia• Radiación/ relacionada al agente alquilante
• Relacionada al inhibidor de topoisomerasa II
• Todas las otras
LMA con displasia multilinaje/infidelidad Evolución a partir de mielodisplasia (MDS)
• Sin antecedentes de MDS pero displasia en al menos 50% de las células en dos o más linajes
LMA con anormalidades genéticas• LMA con t(8;21) o inv(16)
• LMA con eosinofilia e inv(16) o t(16;16)
• LMA con anormalidades11q23
• LPA con t(15;17) y variantes
![Page 46: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/46.jpg)
Leucemias y alteración genética
TEL/AML1
E2A/PBX1
TAL 1(SCL)/TCRδPML/RARa
LLA de linaje B
LLA de células pre-B
LLA de células T
LMA M3
GenesEnfermedad
![Page 47: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/47.jpg)
Expresión génica de médula ósea en pacientes con leucemia (microarray)
FLT3
![Page 48: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/48.jpg)
Ploteo en escala multidimensional
de perfiles de expresión de pacientes con
ALL
![Page 49: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/49.jpg)
Epigenética• Ejecución fenotípica del programa de
desarrollo
• Describe información adicional solapada con el genoma que contribuye a establecer y mantener estados transcripcionales heredables y de identidad celular
• Cambios no ligados a secuencias en la cromatina que conduce a cambios en la expresión génica y que son propagados por mitosos o meiosis
•
![Page 50: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/50.jpg)
Epigenética• Un genoma simple puede modificarse para
producir multiples epigenomas• Loa alelos de genes que contienen estas
marcas epigenéticas se denominan epialelos
• En Drosofila, control génico epigenético. en genes homeobox , en clusters regulados por grupo trithorax (trxG) y grupo Polycomb (PcC) que regulan la transcripcion por mecanismos de remodelacion de cromatina
![Page 51: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/51.jpg)
Nucleosoma
• Unidad básica de cromatina , octámero de histona (1 tetramero H3 H4 y dos dimerosH2A H2B alrededor de DNA ( 147 pares de bases) enrrolladas en superhelices de 1.75 giros. Se unen a DNA linker y a H1
• Importa para accesibilidad, reparación, replicación y transcripción génica
![Page 52: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/52.jpg)
Cambios epigenéticos
• Metilación de DNA
• Metilación de histonas
• Acetilación de histonas
![Page 53: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/53.jpg)
Unión de proteinas
Polycomb a cromatina
![Page 54: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/54.jpg)
Esquema de cambios epigenéticosen el establecimiento de cancer
![Page 55: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/55.jpg)
miRNA
• microRN es un RNA de aprox 22 nt no codificante que regula la expresión génica de una forma secuencia específica viainhibición de traducción o de degradación de mRNA
• Rol de miRNA en la epigenética del cáncer
![Page 56: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/56.jpg)
Estado del hierro: nuevos parámetros
• Receptor de transferrina
• Hepcidina
• Ferroportina
• Hefestina
![Page 57: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/57.jpg)
Hepcidina
![Page 58: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/58.jpg)
EFECTOS SOBRE EL METABOLISMO DEL Fe
• Inhibe la absorción por el intestino.
• Inhibe la liberación por los macrófagos.
![Page 59: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/59.jpg)
El Fe y la inmunidad innata
• La resistencia a las infecciones bacterianas depende de la concentración del Fe.
• La depleción de Fe limita el crecimiento bacteriano y la generación de resistencia (biofilm).
![Page 60: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/60.jpg)
Síntesis de hepcidina
• Infecciones (lipopolisacáridos)
• Procesos inflamatorios (citoquinas)
• Sobrecarga de Fe
• Anemia
• Hipoxia
Inducida por: Suprimida por:
![Page 61: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/61.jpg)
Variaciones en los niveles de hepcidina y patologías asociadas
↑ hepcidina → ↓ absorción y sideremia, ↑ de la captación por los macrófagos→ anemia inflamatoria
↓hepcidina→ ↑ absorción y ↑ liberación por los macrófagos → hemocromatosis
![Page 62: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/62.jpg)
Weiss, G. et al. N Eng J Med 2005; 352:1011-23
ANEMIA DE ENFERME-DAD CRÓNICA
Patogénesis
![Page 63: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/63.jpg)
Expectativas a futuro
• Derivados de la hepcidina pueden llegar a usarse en tratamientos terapéuticos para la hemocromatosis.
• Se está buscando algún antagonista de la hepcidina para utilizar como tratamiento enla anemia de procesos crónicos.
![Page 64: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/64.jpg)
Aspectos considerados en el sistema de calidad en hematología
• Preanalítica
Toma de muestras
Almacenamiento
Identificación
Integridad
![Page 65: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/65.jpg)
Aspectos considerados en el sistema de calidad en hematología
• Analítica
Imprecisión
Sesgo
Control de calidad interno
Evaluación externa de calidad
• Post-analítica
Criterios de revisión
Calidad del informe
![Page 66: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/66.jpg)
Recomendaciones para el tiempo de almacenamiento máximo aceptable
(h) en sangre anticoagulada c/ EDTA
Prueba Temperatura ambiente Refrigerado (18 – 22 ºC) (2 – 6 ºC)
Extendido de sangre 2 – 8 12– 24
Rto. completo de sangre 6 24
Recuento diferencial 6 24
Reticulocitos 6 72
![Page 67: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/67.jpg)
Tipos de error Terminología
Sesgo
Precisión Error aleatorio Desviación
estándar
Exactitud Error total Incertidumbre
Error sistemático
Características del desempeño
Expresión de características del desempeño analítico
(bias)Veracidad
![Page 68: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/68.jpg)
Procedimiento de referencia primario de medición
Unidad SI (definición)
Calibrador primario
Procedimiento de medición del fabricante
Procedimiento de medidas de rutina del usuario final
Resultado
Cadena jerárquica de calibración y trazabilidad metrológica
Calibrador de trabajo del fabricante
Procedimiento de referencia secundario de medición
Procedimiento de medición seleccionado del fabricante
Calibrador secundario
Productos calibrador del fabricante
Resultado de la muestra
![Page 69: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/69.jpg)
Procedimiento de referencia primaria de la medidaCalibrador de trabajo del
fabricante
Determinación de la prueba en instrumentos standard
Procedimiento de medidas de rutinadel usuario final
Método de referencia ICSH para la enumeración de RBC y WBC
Sangre humana fresca
Productos calibrador del fabricante
CBC automatizado
Resultado
Contador seleccionado
Muestras de rutina
Sangre entera con EDTA
Recuento de
Cadena de trazabilidad en la calibración del recuento de glóbulos rojos
Procedimiento de medida establecido por el fabricante
RBC
![Page 70: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/70.jpg)
Metas analíticas (CV%) basadas en la variación biológica intraindividuo
1,21,32,16,73,91,10,80,85,47,010,9
HemoglobinaHematocritoRecuento de glóbulos rojosRecuento de glóbulos blancosRecuento de plaquetasVolumen corpuscular medioHemoglobina corpuscular mediaConcentración corpuscular media de hemoglobinaRecuento de linfocitosRecuento de monocitosRecuento de granulocitos
MetaAnalito
s/ C. Fraser
![Page 71: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/71.jpg)
Metas de imprecisión basadas en varios modelos
16.4
–
3.3 – 3.9
3.2
_
_
_
_
___
5.2 – 7.7
0.8 – 1.7
0.8 – 1.5
0.1 – 0.6
1.3 – 3.3
5.0 – 11.6
4.9 – 7.0
4.8 – 8.2
4.2 – 13.1
3.6 – 12.7
1.4 – 10.0
1.6 – 2.7
0.5 – 1.3
0.6 – 1.2
0.2 – 0.6
1.9 – 3.2
1.7 – 2.9
2.2 – 3.8
4.5 – 10.0
10.1 – 18.5
20.9 – 27.7
1.0 – 13.9
Leucocitos (x 109/1)
Eritrocitos (x 1012/1)
Hemoglobina (g/dl)
Volumen corpuscular medio (fL)
Plaquetas (x 109/1)
Neutrófilos (x 109/1)
Linfocitos (x 109/1)
Monocitos (x 109/1)
Eosinófilos (x 109/1)
Basófilos (x 109/1)
Reticulocitos (x 109/1)
Opinión clínica CV%
Variabilidad biol. intra CV%
0.05
Estado del arte CV%ª
Parámetros
ª Datos del grupo de estudio en Hematología de la Sociedad Italiana de Laboratorio Clínico, s/ M. Buttarello
![Page 72: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/72.jpg)
Desviación analítica deseable (%)<Doble
CVa
Población de pacientes
<0.25
grupo
bio
Estado del arte
Parámetros
12 – 14
2.0 – 3.4
2.0 – 3.0
0.5 – 1.0
4.0 – 5.0
14 – 22
6.0 – 14
9.0 – 20
8.0 – 20
7.5 – 25
–
4.9 – 5.1
1.2 – 2.5
1.2 – 2.2
0.7 – 0.8
2.7 – 3.8
6.5 – 7.5
3.0 – 4.7
3.5 – 5.3
7.1 – 13.9
8.8
–
6
2.3
2.6
0.9
3.3
7.5
5.6
6
16
10.4
7.9
6.6
1.6
1.5
2.2
6.5
5
12
26
29
42
–
Leucocitos (109/1)
Eritrocitos (1012/1)
Hemoglobina (g/dl)
Volumen corpuscular medio (fL)
Plaquetas (109/1)
Neutrófilos (109/1)
Linfocitos (109/1)
Monocitos (109/1)
Eosinófilos (109/1)
Basófilos (109/1)
Reticulocitos (109/1)
ª Los dos valores para cada fila son indicativos de dos niveles de decisión diferentes, s/ M. Buttarello
![Page 73: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/73.jpg)
• Gracias por su atención
![Page 74: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/74.jpg)
El laboratorio en las emergencias hematológicas
• Síndrome de hiperviscosidad
• Hemólisis aguda
• Trombocitopenia
• Neutropenia
![Page 75: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/75.jpg)
Hiperviscosidad
Proteína plasm./albúmina - Electroforesis
Rto. GR/ hematocrito
Rto. trombocitos
Rto. GB
Diferencial
Mieloma múltiple
M. Waldenstroem
Policitemia vera
Trombocitemia esencial
Leucemia aguda
LaboratorioEnfermedad
![Page 76: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/76.jpg)
Hemolisis aguda
Hb
GR
Hto.
LHD
Hemólisis autoinmune
Infección por transfusión
Intoxicación
LaboratorioEnfermedad
![Page 77: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/77.jpg)
Trombocitopenia
Rto. trombocitos/sangreRto. trombocitos/dímero D
Parámetros de hemólisis Sangre/Rto. trombocitosFragmentocitosRto. trombocitos
ITP autoinmuneTrombocitopenia-Reumatología-Medicamentos-Infección agregada-Infección (DIC)Púrpura TTSUHHIT
LaboratorioEnfermedad
![Page 78: Avances en El Lab Oratorio](https://reader034.fdocumento.com/reader034/viewer/2022050817/5571f8b449795991698dec4f/html5/thumbnails/78.jpg)
Neutropenia
Rto. diferencial GB
Rto. absoluto neutrófilos/ANC
Corpúsculos Howell-Jolly
Medicamentos
Enfermedad reumatol.
Quimioterapia
Esplenectomía
LaboratorioEnfermedad