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Tecnologa Mdica
Microbiologa Clnica I
BACILOS GRAMNEGATIVOS NO FERMENTADORES
(BGNNF)
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Caractersticas de los BGNNF
Bacilos o cocobacilos gramnegativos que no fermentan hidratos de carbono.
No forman espora.
Generalmente oxidasa (+)
Mviles e inmviles.
Se designa BGNNF a todos los bacilos gramnegativos que muestran desarrollo
en TSI y que no fermentan azcares (K/K)
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TSI (Triple Sugar Iron Agar)
K/K K/A -- K/A-+ A/A+- A/A++
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Bacilos GRAM (-)
NO FERMENTADORES Pseudomonas
Acinetobacter
Stenotrophomonas
Achromobacter
Alcaligenes
Elizabethkingia
Burkholderia
Shewanella
Myroides
Moraxella
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Medio OF (Hugh y Leifson)
Este medio se diferencia de los medios
para fermentacin de hidratos de carbono
dado que la concentracin de:
- peptona est disminuda del 1% al 0,2% -H. de carbono est aumentada del 0,5% a 1%
el agar est disminudo de 1,5 a 0,25 %
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OF/glucosa
Fermentativo Oxidativo Inerte
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Prueba de oxidasa
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BGNNF
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DIAGNOSTICO
de BGNNF
Aislamiento: Agar sangre
Agar MacConkey
Morfologa : Tincin de Gram
Identificacin presuntiva: TSI
Batera de identificacin primaria:
- Oxidasa
- OF/glucosa
- Movilidad
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Esquema de identificacin de BGNNF
Batera de identificacin secundaria: Agar urea de Christensen
Lisina descarboxilasa
Agar de hidrlisis de esculina
Arginina dihidrolasa de Moeller
Ornitina descarboxilasa
Fenilalanina desaminasa
Hidrlisis de la gelatina
ONPG
Medio OF: fructosa, xilosa, manitol, lactosa, maltosa
Citrato de Simmons
NaCl 6.5%
Desarrollo a 42C
Tipo de flagelacin: Tincin de flagelos
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Factores que predisponen a infecciones por
BGNNF
Neoplasias
Hospitalizacin prolongada
Instrumentacin y ciruga
Tratamientos prolongados con antibiticos,
corticoides, antineoplsicos, radiaciones.
Enfermedades crnicas o metablicas.
Quemaduras, heridas abiertas, lesiones exudativas.
Desnutricin
Edades extremas: prematuros y ancianos
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Los BGNNF son importantes agentes casuales de
infecciones intrahospitalarias
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Familia Pseudomonadaceae
Grupo I de rRNA
Grupo II de rRNA
Grupo III de rRNA
Grupo IV de rRNA
Grupo V de rRNA
-Bacilos Gram negativos
-Aerobios estrictos
-La mayora mviles
con uno o mas flagelos polares
-Oxidan los carbohidratos
-La mayoria son oxidasa positiva
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Gnero Pseudomonas
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Pseudomonas aeruginosa
Bacilo Gram(-) recto o ligeramente curvo.
Aerobio estricto, oxidasa (+)
OF/glucosa: oxida
Mvil, con un flagelo polar.
HABITAT: Se asla de ambiente acuticos,
alcantarillas, piscinas, del suelo.
Ambiente hospitalario
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Pseudomonas aeruginosa tiene tres formas de desplazarse en:
MEDIO LIQUIDO_: Swimming con nico flagelo polar.
SUPERFICIE SOLIDA: Twitching que depende fimbrias o pili tipo IV
Medio SEMI-SOLIDO: Swarming, las clulas se alargan y presentan mltiples flagelos.
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En el ambiente hospitalario
se puede aislar e: - Soluciones terapeticas (colirios)
- Desinfectantes (amonio cuaternario, clorhexidina) - Jabn con hexaclorofeno - Cremas de mano - Lociones - Jarras con agua
Catteres Plantas y flores Termmetros Nebulizadores Humidificadores Cepillos Jeringas Piletas Desages pisos
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Factores de virulencia de Pseudomonas aeruginosa
Alginato Fimbria (tipo IV)
Proteasas: - Las A elastasa -Las B elastasa - proteasa alcalina Hemolisinas: - Fosfolipasa C - Ramnolpido
Exotoxina A Exotoxina S Enterotoxina Leucocidina Piocianina
Siderforos Pioquelina Pioverdina
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Rol del alginato (polmero de acido manurnico y gulurnico)
Obstruye la opsonizacin y fagocitosis.
Neutraliza radicales de oxgeno liberados por PMNs.
Inhibe el complemento.
Limita la difusin de los antibiticos.
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Quorum sensing en P.aeruginosa
Implica la activacin de genes especficos a altas densidades de clulas en respuesta a las seales qumicas liberadas (autoinductor) por Pseudomonas aeruginosa.
Es importante para que se exprese la virulencia.
Los factores de virulencia estn bajo en control de dos sistemas de quorum sensing:
las y rhl Sistema las: Las R :(Factor transcripcional) Autoinductor : N-(3-oxododecanoyl)-L homoserina lactona 3 oxo-C12-HSL 8 (PAI-1) Auntoinductor sintetasa: LasI
Sistema rhl: Rhl R : (Factor transcripcional) Autoinductor : N-butyoyl-1 homoserina lactona C4-HSL(PAI-2)
Auntoinductor sintetasa: RhlI
las : elastasa Las A
elastasa Las B
proteasa alcalina
exotoxina A
rhl: ramnolpidos
piocianina
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Sistemas de secrecin utilizados por
Pseudomonas aeruginosa Sistema de secrecin tipo I - proteasa alcalina
Sistema de secrecin tipo II - elastasa - lipasa - exotoxina A -fosfolipasas - fosfatasa alcalina
Sistema de secrecin tipo III - exotoxina S - exotoxina T - ramnolpidos
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Etapas de la infeccin por P.aeruginosa
Se distinguen tres estados:
1.-Adherencia y colonizacin
-fimbria
-alginato (biofilm)
2.- Invasin local
-elastasas
-proteasa alcalina
-citotoxina (leucocidina)
-fosfolipasa C y ramnolpidos
- sideroforos (pioquelina, pioverdina)
-piocianina
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3.-Enfermedad diseminada sistmica
los factores anteriores contribuyen a
la diseminacin de la infeccin agregndose la accin de toxinas:
- Exotoxina A
- LPS (endotoxina)
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Cuadros clnicos producidos porP.aeruginosa
-INFECCIONES RESPIRATORIAS: Neumona,
Pacientes con fibrosis qustica
- BACTERIEMIA
- INFECCIONES DEL S.N.C.: meningitis, abscesos cerebrales
INFECCION AL OIDO : otitis
INFECCION A OJOS : queratitis
INFECCION DEL TRACTO URINARIO
INFECCIONES A HUESOS: osteomielitis
INFECCIONES GASTROINTESTINALES: gastroenteritis
INFECCIONES DE HERIDAS QUIRURGICAS
INFECCIONES DE QUEMADURAS Y HERIDAS
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Ectima gangrenoso por Pseudomonas aeruginosa
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Ectima gangrenoso
Rev Chil Infect 2011; 28 (6): 592-596
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Heridas por quemadura
Otitis externa
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Endoftalmitis por Pseudomonas aeruginosa
Factores de virulecia:
Exotoxina A ,Proteasas alcalinas,
proteasa IV,
proteasa pequea (PASP)
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Foliculitis por P.aeruginosa La foliculitis por Pseudomonas se presenta con
lesiones foliculares, maculosas y papulopustulosas
localizadas en la zona lateral del tronco, muslos,
huecos axilares y rea suprapbica. Habitualmente,
comienza entre 8-48 h trasla exposicin a una
fuente contaminada. En ocasiones, se puede
acompaar de sntomas generales como fiebre,
malestar general, nuseas y vmitos, dolor ocular,
farngeo, de odos, mamas inflamadas y dolorosas,
y linfadenopatas. La aparicin de estos sntomas
no implica diseminacin de P.aeruginosa.
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Sndrome de la ua verde causado por Pseudomonas aeruginosa
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FIBROSIS QUISTICA
Enfermedad gentica, autosmica recesiva*, causada por una mutacin en el
brazo largo del cromosoma 7. Este gen contiene la informacin para la produccin
de una protena reguladora del intercambio de electrolitos a travs de las
membrana, llamada CFTR, y su anomala produce alteraciones en el transporte de
cloro y sodio en los rganos cubiertos por tejido epitelial.
Afecta diferentes rganos y sistemas, en especial el aparato respiratorio, el pncreas, las glndulas sudorparas y el sistema reproductor
masculino. Crnica y de evolucin progresiva.
* Un trastorno autosmico recesivo significa que deben
estar presentes dos copias de un gen anormal para
que se desarrolle la enfermedad.
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Pseudomonas aeruginosa
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Agar F (King B)
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Agar P (King A)
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Resistencia de P.aeruginosa
a los antibiticos
Alginato restringe la difusin de antibiticos.
Disminuye la permeabilidad a antibiticos.
Hidrlisis de antibiticos (ej. betalactamasas)
Sistemas de bomba de eflujo
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Estudio de susceptibilidad antibiticos a 85 cepas de Pseudomonas aeruginosa
aisladas de pacientes del Hospital de Talca.
Daniela Prez Leal.,Memoria para optar al grado de Licenciado en Tecnologa Mdica.2009
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Pseudomonas oryzihabitans Tambien denominada Flavimonas oryzihabitans
-Bacilo Gram negativo, aerobio no fermentador.
-Movil por un flagelo polar.
-Oxidasa negativa
-Catalasa positiva
-Oxida la glucosa
Crece bien en agar MacConkey y agar Cetrimida (despues de 24 a 48 de incubacion las colonias se tornan arrugadas de color
amarillo).
No producen hemolisis en agar sangre de caballo al 5%.
Crece entre 18C a 42 C.
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Agar Cetrimida
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Grupo II rRNA Incluye la familia Burkholderiacee que comprende los gneros:
Burkholderia Lautropia Pandoraea Ralstonia Cupriavidus
Las principales especies son: Burkholderia mallei Burkholderia pseudomallei Complejo Burkholderia cepacia
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Burkholderia mallei
OF glucosa= oxidativo
Oxidasa (+)
Inmvil.
Parsito obligado de animales.
Agente causal del Muermo.
Antimicrobianos de eleccin:
Cotrimoxazol asociado a:
- fluorquinolonas, ceftazidima .
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Burkholderia pseudomallei
Oxidasa (+)
Mvil
OF/glucosa= oxidativo
Agente causal de Melioidosis
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Complejo Burkholderia cepacia
Oxidasa : w (+) OF/glucosa: oxidativo
Descarboxilasa de lisina: (+)
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Grupo III rRNA
Los miembros de este grupo pertenecen a la familia Comamonadaceae
Comprende los siguientes gneros:
Comamonas
Delftia
Acidovorax
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Grupo IV
La familia Caulobacteraceae incluye
el gnero Brevudimonas
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Grupo V rRNA
La familia Xanthomonadaceae
Comprende los gneros:
Stenotrophomonas.
Xanthomonas
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Caractersticas de Stenotrophomonas maltophilia
Bacilo mvil con flagelos polares
Oxidasa (-)
Dnasa (+)
Descarboxilasa de lisina (+)
Susceptible a : sulfametoxazol-trimetoprim
OF/glucosa: (-) o dbilmente (+) a las 24 hrs.
ANTIBITICOS DE ELECCIN:
Cotrimoxazol, Minociclina, Levofloxacino, Ciprofloxacino.
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Shewanella putrefaciens
Oxidasa (+), mvil con flagelos polares OF/glucosa = oxidativo
produce H2S en TSI y KIA
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Grupo oxidasa negativo
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Acinetobacter (del griego akinetos: inmovil)
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Gnero Acinetobacter (del griego akinetos: inmovil)
Las especies de este gnero son:
Cocobacilos Gram negativos, aerobios estrictos,
inmviles, catalasa (+),oxidasa(-).
En 1986 Bouvet y Grimont hicieron una clasificacin que distingua 12 grupos diferentes (genomaespecies) sobre las base de
caractersticas de hibridacin DNA-DNA y nutricionales.
En 1989 Tjernberg y Ursing describieron
tres grupos DNA adicionales, numerados del 13 al 15.
Bouvet y Jeanjean describieron 5 grupos que numeraron del 13 al 17.
Actualmente el gnero contiene 33 genoespecies.
Slo 21 de ellas han sido denominadas y 12 recuperadas de
muestras clnicas.
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Complejo Acinetobacter baumannii-calcoaceticus
Acinetobacter calcoaceticus genoespecie 1
Acinetobacter baumannii genoespecie 2
Acinetobacter pitti geneoespecie 3
Acinetobacter nosocomialis genoespecie 13
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Especies de importancia clnica
que se aislan de brotes nosocomiales:
Acinetobacter baumannii
Acinetobacter gen.sp. 3
Acinetobacter gen.sp.13 TU
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HABITAT
Hospitales y pacientes hospitalizados (Aislamientos multiresistentes) A.baumannii , gen. sp 3 ,gen.sp13 TU
Piel (humanos, animales), Animales (Aislamientos sensibles) A.johnsonii, A.lwoffii
Suelo, medio ambiente y agua. (Aislamientos sensibles) A.calcoaceticus, A. johnsonii
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Infecciones por Acinetobacter
Neumona
Bacteriemia
Meningitis
Infeccin del Tracto Urinario (ITU) Endocarditis aguda
Peritonitis
Conjuntivitis
Queratitis
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Factores de riesgo
Hospitalizacin prolongada
Edad avanzada
Enfermedad de base: Enf. pulmonar crnica, Neoplasias, Diabetes.
Tratamiento con antibiticos de amplio espectro
Tratamiento con corticosteroides
Instrumentalizaciones: Ventilacin mecnica, Broncoscopio, Catter.
Ciruga mayor
Pacientes quemados
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Acinetobacter Colonizacin / infeccin
Piel Tracto digestivo Faringe
Ciruga Catter ITU Endgena Ventilacin mecnica
Broncoscopa
ITU
NEUMONIA
SEPTICEMIA
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Rev Chil Infect 2005; 22 (4): 298-320
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Factores de virulencia
Polisacrido capsular
Adherencia( fimbrias y polisacrido capsular)
Enzimas
Produccin de Slime
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Acinetobacter baumannii multiresistente
(AB-MR): Solo preservan susceptibilidad a: carbapenmicos, amikacina ,
sulbactam y minociclina.
Acinetobacter baumannii pan-resistente
(AB-PR): Son resistente a los carbapenmicos y son susceptible a
polimixinas como colistin.
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Mecanismos de resistencia:
Enzimas inactivadoras de antibiticos Amplia variedad de betalactamasas que le confiere resistencia a penicilinas, cefalosporinas,y
carbapenemes.
Limitacin del acceso a las dianas bacterianas
Mutaciones que alteran las dianas o las funciones celulares.
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Esquemas de tratamiento
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Estudio de susceptibilidad a antibiticos en 25 cepas de
Acinetobacter baumannii aisladas de pacientes del
hospital de Talca
Paula Bravo Nuez, Memoria para optar al Grado de Licenciado en Tecnologa Mdica, 2010
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Gnero Achromobacter
A.xylosoxidans
A.piechaudii
A.denitrificans
A.xylosoxidans es resistente a cefalosporinas,aminoglicosidos
fluorquinolonas.
Oxidasa positiva
O F/ glucosa: oxida lentamente
Movil. Flagelacin pertrica
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Gnero Alcaligenes
Bacilos gramnegativos, oxidasa positivo,
Mviles con flagelacin pertrica.
Se desarrollan en agar MacConkey
Alcaligenes faecalis OF/glucosa: inerte
NaCl 6.5% (+)
Urea: negativo
endoftalmitis
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Alcaligenes faecalis
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Gnero Elizabethkingia (Chryseobacterium)
Bacilos gramnegativos inmviles
oxidasa positiva.
Indol (+)
Producen colonias pigmentadas amarillas
en agar sangre.
Se desarrollan poco o nada en agar MacConkey.
OF/glucosa: oxida
La especie ms importante es: E.meningoseptica
agente causal de meningitis neonatal, con alta mortalidad.
En adultos puede provocar neumona.
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Weeksella virosa
Bacilo Gram negativo
Inmovil
No sacaroltico
Oxidasa (+)
Catalasa (+)
No crece en agar
MacConkey
Rev. chil. infectol. vol.28 no.5 Santiago oct. 2011
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Myroides Se conocen 2 especies: M.odoratus y M.odoratimimus M.odoratus ( Flavobacterium odoratum)
Bacilo Gram , aerobio, Inmvil.
Colonia pigmentada de color amarllo. Olor frutal.
Oxidasa (+)
Dnasa (+)
Ureasa (+)
HABITAT: suelo y agua.
Patologa: celulitis, fascitis necrotizante,infeccin tracto urinario
infeccin de heridia quirrgica,ventricuitis, endocarditis.
Producen metalobetalactamasas de origen cromosomal
Capaces de hidrolizar: penicilinas, cefalosporinas,
carbapenem, aztreonam.
Presentan susceptibilidad a:
Ciprofloxacino y Sulfametoxazol Trimetoprim
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Gnero Moraxella
Cocos o cocobacilos gramnegativos, oxidasa (+), inmviles, no tienen accin sobre hidratos de carbono.
No se desarrollan en agar MacConkey.
Las especies ms importante son:
M.catarrhalis M.lacunata, M.osloensis ,M.nonliquefaciens.
M.lacunata produce : conjuntivitis, queratitis, sinusitis crnica, endocarditis.
Para su cultivo requiere de medios especiales enriquecidos con suero de conejo.
Sensible a penicilina G, .
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ESQUEMA DE
IDENTIFICACION DE BACILOS
GRAM NEGATIVOS NO
FERMENTADORES
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Muchas gracias
por su atencin