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Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc
Diagnóstico Diagnóstico VirológicoVirológico
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Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc
ImportanciaImportancia Determinar una intervención Determinar una intervención terapéuticaterapéutica Definir el Definir el pronósticopronóstico en la evolución de en la evolución de
un paciente un paciente Indicar la necesidad de una Indicar la necesidad de una vacunaciónvacunación Adoptar medidas de salud pública en una Adoptar medidas de salud pública en una
comunidad: comunidad: epidemiologíaepidemiología.. Tendencia: Sensibilidad y RapidezTendencia: Sensibilidad y Rapidez
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Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc
Métodos de DiagnósticoMétodos de Diagnóstico
DirectosDirectos: : presencia de presencia de virusvirus en muestras clínicas en muestras clínicas Agente infeccioso:Agente infeccioso: aislamiento viral aislamiento viral PPartículaartícula viral: viral: microscopía electrónica microscopía electrónica AAntígenos virales:ntígenos virales: inmunomarcación inmunomarcación GGenomas virales: biología molecularenomas virales: biología molecular
IndirectosIndirectos: : resrespuesta de puesta de anticuerposanticuerpos específicos específicos antivirales en el suero del pacienteantivirales en el suero del paciente
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Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc
Tipo de MuestrasTipo de Muestras Virus respiratorios: Virus respiratorios: aspirado nasofaríngeoaspirado nasofaríngeo
Lesiones Cutáneas: Lesiones Cutáneas: raspado e hisopadoraspado e hisopado
Sangre: Sangre: aislamiento viralaislamiento viral
Suero: Suero: búsqueda de anticuerpos (serología)búsqueda de anticuerpos (serología)
Materia Fecal: Materia Fecal: enterovirusenterovirus
Orina: Orina: aislamiento de CMVaislamiento de CMV
LCR: LCR: enterovirus y parotiditisenterovirus y parotiditis
Muestras oculares: Muestras oculares: hisopadohisopado
Tejidos: Tejidos: aislamiento viral o inmunohistoquímicaaislamiento viral o inmunohistoquímica
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Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc
Transporte y Transporte y conservaciónconservación
AislamientoAislamiento Inmediatamente (inactivación Inmediatamente (inactivación
y contaminación)y contaminación) No congelarNo congelar
ConservaciónConservación Temp amb: horasTemp amb: horas 4ºC: 1-2 días4ºC: 1-2 días -20ºC: meses-20ºC: meses -70ºC: años-70ºC: años
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Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc
Métodos Métodos DirectosDirectos
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Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc
1- Aislamiento Viral1- Aislamiento Viral Huevos, Animales o CélulasHuevos, Animales o Células Tipos de cultivos celularesTipos de cultivos celulares
Primario: directamente del tejido humano o Primario: directamente del tejido humano o animal; 1-2 subpasajesanimal; 1-2 subpasajes
Diploide: derivado del tejido fetal o de RN; Diploide: derivado del tejido fetal o de RN; 20-50 subpasajes20-50 subpasajes
Hetroploide: extraídas de tejido tumoral o Hetroploide: extraídas de tejido tumoral o tranformado; infinitos subpasajestranformado; infinitos subpasajes
Variación en suceptibilidadVariación en suceptibilidad Es indispensable el Diagnóstico presuntivoEs indispensable el Diagnóstico presuntivo
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Inoculación e incubación (ATB)Inoculación e incubación (ATB) Decontaminar muestras no estérilesDecontaminar muestras no estériles Inocular en tubos de cultivo:Inocular en tubos de cultivo: de la muestra de la muestra
en medio con ATBen medio con ATB 1 hr a 37º para permitir la adsorción1 hr a 37º para permitir la adsorción Añadir medio de cultivo y cambiarlo cada 2-Añadir medio de cultivo y cambiarlo cada 2-
3 días.3 días.
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Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc
Detección de los efectos de los virusDetección de los efectos de los virus Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y
cultivocultivo
Tipo de ACPWikipwdia
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Detección de los efectos de los virusDetección de los efectos de los virus Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y
cultivocultivo HemadsorciónHemadsorción
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Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc
Detección de los efectos de los virusDetección de los efectos de los virus Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y
cultivocultivo HemadsorciónHemadsorción HemaglutinaciónHemaglutinación
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Detección de los efectos de los virus Detección de los efectos de los virus ((Dx presuntivo: debe confirmarse)Dx presuntivo: debe confirmarse)
Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivoAcción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo HemadsorciónHemadsorción HemaglutinaciónHemaglutinación InterferenciaInterferencia
IdentificaciónIdentificación InmunofuoresenciaInmunofuoresencia ImunoperoxidasaImunoperoxidasa
Cuantificación de virusCuantificación de virus Titulación de punto finalTitulación de punto final Plaqueo bajo agarosaPlaqueo bajo agarosa
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2- Microscopía 2- Microscopía ElectrónicaElectrónica
MétodosMétodos InmunoelectromicroscopíaInmunoelectromicroscopía Coloración negativaColoración negativa
VentajasVentajas Rápido Rápido (pocas muestras)(pocas muestras)
DesventajasDesventajas Costo del MECosto del ME Baja SensibilidadBaja Sensibilidad
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3- Inmunoflourescencia 3- Inmunoflourescencia TécnicaTécnica
DirectaDirecta IndirectaIndirecta
VentajasVentajas Muestra estableMuestra estable Muy SensibleMuy Sensible Muy EspecíficaMuy Específica RápidoRápido
DesventajasDesventajas Costo del MFCosto del MF Observador experimentadoObservador experimentado
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Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc
4- Aglutinación4- Aglutinación
VentajasVentajas SencilloSencillo RápidoRápido No requiere No requiere
equipamientoequipamiento
DesventajasDesventajas Poco especificaPoco especifica
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Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc
5- Enzimoinmunoensayo 5- Enzimoinmunoensayo (EIA)(EIA)
VentajasVentajas Muy SensibleMuy Sensible No se necesita observador experimentadoNo se necesita observador experimentado Gran numero de muestras simultáneamenteGran numero de muestras simultáneamente AutomatizableAutomatizable
DesventajasDesventajas Falsos Positivos (necesita confirmación)Falsos Positivos (necesita confirmación)
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ELISAELISA
EnzymeEnzymeLinkedLinkedImmuno-Immuno-SorbentSorbentAssayAssay
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ELISA CompetitivoELISA Competitivo
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ELISA captura IgMELISA captura IgM
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Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc
Tests Rápidos en un solo Tests Rápidos en un solo pasopaso
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Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc
5- Radioinmunoensayo 5- Radioinmunoensayo (RIA)(RIA)
Fundamento idéntico a ELISAFundamento idéntico a ELISA VentajasVentajas
Similar al ELISASimilar al ELISA
DesventajasDesventajas Reactivos InestablesReactivos Inestables Residuos RadiactivosResiduos Radiactivos Relativamente mas CostosoRelativamente mas Costoso
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Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc
Métodos Métodos IndirectosIndirectos
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Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc
Métodos IndirectosMétodos Indirectos Detección de IgMDetección de IgM
Infección agudaInfección aguda Infección congénitaInfección congénita FR: f+FR: f+ ↑ ↑ IgG: f-IgG: f- IgM CapturaIgM Captura
Detección de IgGDetección de IgG SeroconversiónSeroconversión Recién NacidosRecién Nacidos AvidezAvidez
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Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc
TécnicasTécnicas
Aglutinación de Aglutinación de partículaspartículas
IFI IFI EIAEIA
ELISAELISA LIALIA
RIARIA Western BlottWestern Blott
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Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc
Western BlotWestern Blot Muy especificaMuy especifica Método confirmatorioMétodo confirmatorio
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Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc
Western BlotWestern Blot
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Bioq. Alejandro KucBioq. Alejandro Kuc