Coloración ácido resistente
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Coloración Ácido-Resistente(De Ziehl-Neelsen)
Ginel Mesa 09-0470Lab. Microbiología ISección 71
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¿Qué es la tinción de Ziehl-Neelsen?• Es un tintado
bacteriológico especial utilizado para identificar organismos acido-resistentes, en su mayoría mycobacterias. Mycobacterium tuberculosis es el más importante de este grupo, y es responsable de la enfermedad conocida como tuberculosis (TB).
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Fundamento• Ciertos parásitos y bacterias contienen ácidos
grasos de cadena larga en sus paredes celulares que les dan la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos.
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Cont.
• La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua, provoca una nueva solidificación de los ácidos grasos de modo que el colorante ya no puede salir de las bacterias.
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Procedimiento Caliente.• Hacer un frotis de la muestra.• Aplicar fucsina-fenicada. Calentar por 3-5
minutos. –ENJUAGAR CON AGUA.• Decolorar con alcohol-ácido por 7 minutos. –
ENJUAGAR. Si elportaobjetos aún están rosa, aplique una cantidad adicional de alcohol de 1 a 3 minutos.
• Aplicar azul de metileno (1 minuto).–ENJUAGAR.• Ahora coloque una pequeñita gota de aceite de
inmersión y haga la observación al microscopio.
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Procedimiento Frio.1. Hacer un frotis.2. Dejarlo en el puente
de tinción.3. Aplicar fucsina-
fenicada (solución con fenol y mayor concentración de fucsina).
4. Dejar en vasos Coplin durante 20 minutos.
5. Decolorar con alcohol ácido.
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Resultados.Algunos microorganismos ácido-alcohol resistentes
• BAAR: rojo.• Núcleos: azul semiamarillo.
• Mycobacterium: fuertemente ácido-alcohol resistentes.
• Nocardia y Actinomices: débilmente ácido-alcohol resistentes.
• Parásitos coccídeos (Cryptosporidium) de muestras fecales.