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Control de Calidad en Pruebas de ELISA Lic. Valentina Bastidas D.
TÉCNICA DE ELISA
DEFINICIÓN
Ensayo Inmunoabsorbente Ligado a Enzimas Enzime-Linked ImmunoSorbent Assay
E L I S A
TIPOS DE ELISA:
ELISA SANDWICH
ELISA DIRECTO
ELISA INDIRECTO
ELISA COMPETITIVO
Control de Calidad en Pruebas de ELISA Lic. Valentina Bastidas D.
ELISA SANDWICH
Pozo sensibilizado
Antígenos
Anticuerpo secundario - Enzima
Sustrato
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ELISA DIRECTO
Pozo sensibilizado
Antígenos
Anticuerpo - Enzima
Sustrato
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ELISA INDIRECTO
Pozo sensibilizado
Anticuerpos primarios
Anticuerpo secundario - Enzima
Sustrato
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ELISA COMPETITIVO
Prueba Positiva
Prueba Negativa
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ELEMENTOS DEL ELISA
FASE SÓLIDA ENZIMA SUSTRATO SOL DE PARADA
Poliestireno Polivinilo Estructura íntegra Fracción purificada
Peroxidasa Fosfatasa alcalina β-Galactosidasa Ureasa PG
TMB NAPFB ONPG BP IS
Citrato sódico Cloruro de magnesio Fosfato sódico Hidróxido de sodio Gelatina
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VENTAJAS DEL ELISA
Alta sensibilidad
Alta especificidad
Baja toxicidad
Procedimientos sencillos
Diversidad de pruebas
Bajos costos
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REQUERIMIENTOS DEL ELISA
Aire acondicionado, centrífuga…
Nevera ………………………………… Congelador a -20 °C
Estufa calibrada
Espectofotómetro, Medidor de Ph
Pipetas semi - automatizadas o automatizadas con rango de medición entre 0,1 µL hasta 1 mL
Puntas nuevas para medición
Agua destilada o desionizada
Alcohol isopropílico 75 %
Profesional capacitado
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CONTROL DE CALIDAD EN LA TÉCNICA DE ELISA
CALIDAD SINONIMO DE EXCELENCIA
CONTROL DE CALIDAD ES SUPERVISAR EL CUMPLIMIENTO DE LOS PATRONES DE
EXCELENCIA Y LOGRAR QUE ESTOS SE MANTENGA EN EL TIEMPO
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CONTROL DE CALIDAD EN LA TÉCNICA DE ELISA
CONTROL DE CALIDAD INTERLABORATORIO
CONTROL DE CALIDAD EXTERNO
CONTROL DE CALIDAD INTRALABORATORIO
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CONTROL DE CALIDAD INTRALABORATORIO
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD
COVENIN- ISO 9001:2000
ISO/IEC 17025:1999
ISO 15189:2003
Control de Calidad en Pruebas de ELISA Lic. Valentina Bastidas D.
CONTROL DE CALIDAD INTRALABORATORIO
LO QUE NO ESTA ESCRITO NO EXISTE !!!
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CONTROL DE CALIDAD INTRALABORATORIO
ACTUAR PLANIFICAR
HACER SUPERVISAR
Evaluación Nuevas ideas
Poner en práctica
Concretadas
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RECOMENDACIONES PARA EL PROCESAMIENTO DE ELISA
Control de Temperatura:
Nevera Estufa Ambiente
Mesón de trabajo desinfectado
Leer cuidadosamente instrucciones y recomendaciones del kit.
Atención a las actualizaciones de la técnica y su interpretación.
Pipetas y tubos de ensayo completamente limpios
Puntas para pipetas destinadas a los reactivos deben ser nuevas
RACKS
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Dejar atemperar los reactivos:
Placa de reacción
Diluentes, Buffer
Sustrato, Solución Stop
Enzimas o Conjugados
30’ antes
Descartar presencia de turbidez o contaminación en los reactivos
10’ antes
LUZ
Preparación de la cámara húmeda 15’ anticipados
RECOMENDACIONES PARA EL PROCESAMIENTO DE ELISA
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CONCENTRACIÓN TOTAL
Uso de guantes. Limpieza constante de guantes y pipetas.
Uso de propipetas.
Control del pH del agua destilada.
Limpia obtención de la muestra.
Paciente en ayuno
Homogenización de muestras y reactivos antes de su uso.
Conservación de muestras a – 20 °C
Actualizar diariamente la hoja de reporte de calibración, controles y ensayos de pacientes
RECOMENDACIONES PARA EL PROCESAMIENTO DE ELISA
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FALLO EN EL CONTROL DE CALIDAD DE LA TECNICA DE ELISA
Pozos de reacción
Solución de lavado
Posible contaminación de reactivos
Posible contaminación de las puntas
Fallo en el pipeteo
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RECOMENDACIONES FINALES
LO QUE NO ESTA ESCRITO NO EXISTE !!! CONFIANZA CONCENTRACION SED DE CONOCIMIENTOS BUEN EQUIPO DE TRABAJO