CROMATOGRAFÍA ANALÍTICA EN CROMATOGRAFÍA ANALÍTICA EN PACA FINAPACA FINA

Dividida en:

Cromatografía analítica.

Cromatografía preparativa.

Cromatografía analíticaCromatografía analítica

• Técnica analítica cualitativa que permite la separación de los componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos contrapuestos, retención y desplazamiento.

FundamentosFundamentos

a) Retención: Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase estacionaria, puede ser un sólido o un líquido anclado a un sólido.

b) Desplazamiento: Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase móvil, un líquido o un gas.

Fase estacionariaFase estacionaria

Adsorbente: Sólido poroso de espesor uniforme (0.1a 0.2mm) depositado sobre una placa de vidrio, plástico, o lámina metálica. Contiene centros activos, para la adsorción de moléculaspolares. Debe ser inerte con las sustancias de la mezcla.

Fase móvilFase móvil

Eluyente: Disolvente en el

que los componentes de la mezcla deben ser parcialmente solubles.

¿Qué es el Rf?¿Qué es el Rf?

Rate Factor, es relación entre las distancias recorridas de un componente dado y por el disolvente.

Determinación del Rf

disolventeelporrecorridaciaDis

compuestoelporrecorridaciaDisRf

tan

tan

Elección del eluyente

Los componentes de la mezcla deben presentar un Rf cercano a 0.3-0.5 en el

disolvente.

✖ No debe corresponder a un Rf inferior a 0.2 o mayor a 0.7

Visualización del Cromatograma

• Las placas contienen un indicador fluorescente que permitete la visualización de los compuestos activos a la luz UV.

Procedimiento experimental

Las placas cromatográficas generalmente se comercian como laminas de (20x20cm). Se deben de cortar al tamaño adecuado (normalmente de 6-7cm de altura, y 1.5-3.0cm de ancho.

1. En la superficie del adsorbente, señalar con lápiz tantos puntos como muestras se vaya a aplicar. Estos deben estar a la misma altura dejando espacio suficiente entre ellos.

Procedimiento experimental2. Disolver la muestra a analizar en un disolvente (se recomienda disolventes volátiles), la solución deberá estar entre 1-5%.

3. Depositar una alícuota de la solución en los puntos previamente señalados. Dejar evaporar el disolvente, y repetir la operación 2-3 veces.

Nota: El diámetro de la mancha debe ser lo mas pequeño posible (2-3mm).

Procedimiento experimental

4. Introducir un papel filtro en la cubeta cromatográfica (para saturar el sistema) y añadir el disolvente. El disolvente debe quedar por debajo de la línea en donde se ha depositado la muestra.

5. Introducir la placa en Posición vertical en la cubeta que deberá permanecer tapada y sin moverse durante la elusión.

Procedimiento experimental

6. El disolvente ascenderá por capilaridad. Cuando el frente llegue a poca distancia del borde superior de la placa, sacar la placa y marcar con un lápiz la distancia recorrida por el disolvente.

7. Dejar evaporar el disolvente.

8. Si el compuesto s activo a la luz ultravioleta, visualizar con una lámpara UV.

9. Marcar el contorno de las manchas observadas. En caso contrario utilizar un agente revelador. Para ello se moja la placa o se rocía con un revelador, y se calienta la placa a 100o-150oC en placa eléctrica o con pistola de aire caliente. Para la utilización de reveladores se requiere usar placas de vidrio o aluminio.

9. Determinar el Rf y anotar el disolvente utilizado

AplicacionesAplicacionesa) Monitorización de reacciones.

b) Identificación de un compuesto.

c) Determinación de los componentes de una mezcla.

d) Comprobación de la pureza de un compuesto.

e) Determinación del disolvente apropiado para llevar a cabo una separación mediante cromatografía preparativa (en columna o en placa).

f) Análisis de la fracciones recogidas en una cromatografía en columna

Cromatografía preparativa.Cromatografía preparativa.

Se realiza en placas de gel de sílice de 1-2 mm espesor sobre un soporte de vidrio de 20x20 cm.

Procedimiento experimentalProcedimiento experimental

1. Elección del disolvente.

¿ ?

2.Trazar una línea recta en la superficie del adsorbente aprox a 1.5cm del borde inferior. No usar tinta.

3. Disolver la muestra.

4.Depositar la mezcla. Mediante capilares o pipetas Pasteur.

5. Introducir la placa (verticalmente) en una cubeta con tapa.

6. El disolvente ascenderá por capilaridad.

7. Visualizar los compuestos a la luz UV.

ProcedimientoProcedimiento experimentalexperimental

Procedimiento experimentalProcedimiento experimental

8. Marcar con una cuchilla el contorno del compuesto a aislar.

9. Desprender del soporte de vidrio la gel de sílice con el compuesto adsorbido y transferirlo a un erlenmeyer.

10. Añadir disolvente en el que el compuesto a aislar sea muy soluble. Agitar en una placa de agitación.

11. Filtrar la gel de sílice y eliminar el disolvente a presión reducida.

CROMATOGRAFÍA EN PAPELCROMATOGRAFÍA EN PAPEL

Técnica que permite llevar a cabo la separación de moléculas con carga (iones) trabajando con cantidades mínimas de muestra.

FundamentoFundamento

La sustancia debe tener diferentes coeficientes de reparto en los disolventes de miscibilidad limitada.

FasesFases

Fase estacionaria: Disolvente que permanece fijo en la superficie del papel (que actúa como soporte de la fase estacionaria).

Fase móvil: Mezcla de disolventes parcialmente miscibles entre ellos

Tipos de cromatografía en papel

C. Ascendente (Papel hacia arriba)C. Descendente (Papel invertido)C. RadialC Por zonas y sectores

Desarrollo ExperimentalDesarrollo Experimental

1. Preparar el papel el cual puede estar cortado de forma rectangular, circular etc. Dependiendo que se desee realizar. Es conveniente correr al mismo una cromatografía con estándares para realizar posteriormente un análisis de ambas.

Desarrollo ExperimentalDesarrollo Experimental

2. Trazar una línea recta en la superficie del adsorbente donde se colocaran las muestras.

3. Depositar la mezcla. Mediante capilares o pipetas Pasteur.

Desarrollo ExperimentalDesarrollo Experimental

4. Introducir el papel; verticalmente si es cromatografía ascendente o descendente en el caso de se una cromatografía radial la placa se coloca de forma paralela al fondo de la cámara pero con un algodón en el centro en forma de mecha. Tapar la cubeta.

5. El disolvente ascenderá por capilaridad.

7. Visualizar los compuestos con ayuda de reveladores en caso de no ser coloreados

8. Calcular el Rf

9. Comparar los Rf con la literatura