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MICOLOGIA MEDICA
GENERALIDADES
Microbiología 2
Cátedra 2
Facultad de Medicina
UBA
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¿QUE SON LOS HONGOS? DEFINIDOS POR SUS CARACTERISTICAS BIOLOGICAS
SON EUCARIOTAS: las células tienen núcleos verdaderos. (cromosomas rodeados por una membrana nuclear).
PUEDEN SER MULTINUCLEADOS O UNINUCLEADOS.
SE REPRODUCEN POR ESPORAS: sexuales o asexuales, móviles o inmóviles.
SON HETEROTROFOS, SIN CLOROFILA Y SE NUTREN POR ABSORCION.
EL SOMA O CUERPO VEGETATIVO -TALO- PUEDE SER UNICELULAR (LEVADURAS) O MULTECELULAR (HONGOS FILAMENTOSOS) -MICELIO-
EL TALO O MICELIO ESTA CUBIERTO POR UNA PARED DE QUITINA O CELULOSA
LA MICOLOGIA (Gr. mykes=seta + logos=discurso), es por su etimo-
logía, la ciencia que estudia las setas.
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CLASIFICACION GENERAL DE LOS HONGOS X ed. DICCIONARY OF THE FUNGI 2008
LOS ORGANISMOS INCLUIDOS EN LA MICOLOGIA CONSTITUYEN UN GRUPO
HETEROGENEO -POLIFILETICO- QUE COMPARTEN SEMEJANZAS POR
CONVERGENCIA EVOLUTIVA, NO POR UN ANCESTRO COMUN.
REINOS PROTOZOO CHROMISTA FUNGI
FILO Myxomycota Hyphochytriomycota Chytridiomycota
Oomycota Zygomycota
Basydiomycota
Ascomycota
Hongos imperfectos o
mitospóricos
(Deuteromycota)
Se incluyen solamente los filos que
contienen especies de interés médico.
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ARBOL FILOGENETICO DOMINIOS
EL REINO FUNGI ESTA EN LA RAMA FINAL DEL GRUPO DE LOS
EUCARIOTAS Y SE DIFERENCIARON HACE 1000 MILLONES DE AÑOS.
Woese. C. 1998. The Universal Ancestor.
Proceedings of the National Academy of
Sciences 95: 6854-6859
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CARACTERISTICAS GENERALES
DE LOS HONGOS
• REINO FUNGAE
• EUCARIOTAS
• INMOVILES
• HETEROTROFOS ( Materia orgánica preformada)
• ABSORBENTES ( No fagocitosis, despolimerazas)
• RESPIRACION aeróbica estricta
anaerobio facultativo
sexuada
• REPRODUCCION esporos
asexuada
• PARED CELULAR RIGIDA (quitina)
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LA CELULA FUNGICA
ERGOSTEROL
QUITINA
B- GLUCANO
GALACTOMANANO
ESTRUCTURA DE
LA PARED Y
MEMBRANA
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ENVOLTURA CELULAR: membrana y pared
COMPONENTES DE LA PARED CELULAR
• Estructura microfibrilar: quitina o celulosa
• Matriz amorfa: polímeros de glucosa
(glucanos/β(1-6), β(1-3), ά(1-3)); manosa
(mananos) o galactosamina
Proteínas (glucoprot.), melanina
FUNCIONES DE LA PARED CELULAR
• Mantener la forma.
• Evitar shock osmótico.
• Interfase con el medio.
• Propiedades antigénicas.
• Sitio de unión de enzimas
• Pantalla contra la radiación U.V. (melanina)
COMPONENTES DE LA MEMBRANA CEL.
• LIPIDOS: ergosterol, cimosterol
• CARBOHIDRATOS
• PROTEINAS: Estructurales
Funcionales.
FUNCIONES DE LA MEMBRANA CEL.
• Regula el pasaje de sustancias
• Permeabilidad selectiva (permeasas)
• Posee enzimas de la cadena
respiratoria
• Mesosomas (tabiques)
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CONTENIDO CELULAR
CITOPLASMA
• Mitocondrias: ADN autoreplicable.
• Retículo endoplásmico: microvesículas.
• Aparato de Golgi
• Ribosomas (80S): aislados polirriboso-
mas
• Inclusiones: vacuolas lipídicas
NUCLEO
• Uninucleares / Plurinucleares
• Homocariotas / Heterocariotas
• Doble membrana
• Nucleolo
• Numero de cromosomas variable.
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ESTRUCTURAS DE LOS HONGOS TALO O MICELIO: -Unicelular: levaduras (pueden formar seudohifas).
-Multicelular o filamentoso: formado por hifas.
HIFA: estructura tubular filamentosa, multinucleada, con septos (tabicada)
o sin septos (cenocítica).
TALO VEGETATIVO: desarrollo, nutrición, fijación, resistencia, sostén del
talo de reproducción.
TALO DE REPRODUCCION: da origen a los elementos de reproducción.
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THALLO VEGETATIVO
FILAMENTOSO LEVADURIFORME
SEUDOMICELIO TABICADO CENOCITICO
HIALINO PIGMENTADO
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ESTRUCTURAS DEL TALO VEGETATIVO
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THALLO DE FRUCTIFICACION
REPRODUCCION
ASEXUADA=ANAMORFA=
IMPERFECTA=MITOSPORICA
REPRODUCCION
SEXUADA=TELEOMORFA=
PERFECTA=MEIOSPORICA
ESPORAS
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• Los núcleos realizan solo mitosis, (no hay unión de núcleos)
• Cada individuo es idéntico al progenitor.
EXTERNOS INTERNOS
REPODUCCION ASEXUADA
ESPOROS ASEXUADOS
CONIDIAS ESPORANGIOSPORO
(ESPORANGIO)
PICNIDIOSPORO
(PICNIDIO)
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• Unión de núcleos con distinta polaridad (-) y (+)
• Plasmogamia, cariogamia, meiosis, mitosis
EXTERNOS INTERNOS
Basidiosporos Cigote Ascos
(Basidiomycota) (Zygomycota) (Ascomycota)
REPRODUCCION SEXUADA
Esporos sexuados
ZIGOSPORO
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ESPORAS EXTERNAS E INTERNAS
ESPOROS ASEXUADOS INTERNOS
ESPOROS SEXUADOS INTERNOS
ESPOROS ASEXUADOS EXTERNOS
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• Desarrollan distinta morfología dependiendo del medio en que se encuentran. (Principal estímulo es la temperatura y los nutrientes.)
• Hongos dimorfos : Histoplasma capsulatum, Paracocidioides brasiliensis, Coccidioides posadasii (Arg.), C.immitis (EE.UU), Blastomyces dermatitidis, Penicillium marneffei, Sporothrix schenckii
Histoplasma capsulatum Fase parasitaria (37°C), Fase saprofítica (28°C),
en los tejidos en el ambiente
DIMORFISMO
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BIOTA NORMAL
• PIEL: Candida sp. (no albicans)
Rhodotorula sp.
Pitirosporum ovale (zonas seborreicas)
Trichosporon sp.
Trichophyton rubrum
• MUCOSAS: Candida albicans (gastrointestinal, vaginal),
Candida glabrata (mucosa vaginal)
Geotricum candidum (tubo digestivo)
Pichia sp.
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CAPACIDAD PATOGENICA
DE LOS HONGOS
• Micetismo: afección causada por la ingestión de hongos, por ejemplo Amanita phalloides, Claviceps pupúrea (llamado cornezuelo del centeno, uno de sus derivados es el LSD), se estudia en toxicología
• Micotoxicosis: patología que deriva de la ingestión de alimentos contaminados con metabolitos tóxicos, por ej.: granos de maíz o de maní contaminados con aflotoxinas, producida por especies de Aspergillus; patulinas por especies del género Penicillium y trichotecenos por especies del género Fusarium.
• Alergia: cuadro producido por acción de hipersensibilidad frente a hongos, por ej.: como ocurre con el género Aspergillus, causando asma y rinitis alérgicas
• Infecciones MICOSIS: se da en hospederos que le permitan al hongo colonizar y/o diseminarse por el organismo.
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Micosis 300 especies asociadas con infecciones en la especie
humana.
• Patógenos primarios: Alta capacidad infectiva
No dependiente de inmunidad
Ejemplos: H. capsulatum, P. brasiliensis, C. posadasi
Distribución en áreas geográficas (endémicos)
• Patógenos oportunistas: Hongos ambientales (poca virulencia)
Pacientes inmunodeprimidos
Cosmopolitas
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CLASIFICACION DE MICOSIS
• Etiología: Candidiasis, Histoplasmosis,etc.
• Estructuras afectadas: onicomicosis (uñas), otomicosis( oído), dermatomicosis, etc.
• Convencionalmente se clasifican según la localización anatómica en:
-Superficiales.
-Cutáneas o mucosas.
-Profundas:-Localizadas (subcutáneas)
-Sistémicas o invasoras.
R. Arenas 1993
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CLASIFICACION DE LAS MICOSIS EN
MEDICINA HUMANA
MICOSIS SUPERFICIALES:
Capa córnea de piel y faneras (pelos, uñas): Dermatofitos.
Mucosas: Candida
MICOSIS PROFUNDAS:
Subcutáneas (traumatismo):
Esporotricosis, micetoma, cromoblastomicosis
Sistémicas (inhalación):
endémicas (Histoplasmosis, Coccidioidomicosis y otras)
cosmopolita (Criptococosis)
Oportunistas
Criptococosis, Candidiasis, Aspergilosis, Mucormicosis y otras.
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PRINCIPALES AGENTES DE MICOSIS HUMANAS
REINO DIVISION ESPECIES
CHROMISTA Pytium insidiosum.
Prototheca sp.
Chlorella.
FUNGAE ASCOMYCOTINA Candida spp.
Pneumocystis spp.
Geotrichum spp.
Aspergillus spp.
Scedosporium spp.
Fusarium spp.
Acremonium.
Cladophialophora spp.
Cladosporium spp.
Exophiala janselmei.
Sporothrix spp.
Histoplasma spp.
Coccidioides spp.
Paracoccidioides brasiliensis.
Blastomyces dermatitidis.
Dermatofitos.
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REINO DIVISION ESPECIES
FUNGAE BASIDIOMYCOTINA Cryptococcus spp.
Filobasidiella spp.
Rhodotorula
Trichosporon spp.
Malssezia furfur
ZYGOMYCOTINA Absidia
(órden Mucorales) Lichtheimia
Ryzopus
Mucor
Apophysomyces
Saksenaea
Cokeromyces
(órden entomophthorales) Conidiobolus incongruus.
Basidiobolus ranarum.
Delacroixia coronata.
PRINCIPALES AGENTES DE MICOSIS HUMANAS
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DIAGNOSTICO MICOLOGICO • CLINICO (SIGNOS Y SINTOMAS)
• EPIDEMIOLOGICO (EDAD, SEXO, AREA ENDEMICA, TRABAJO, CONTACTO CON PROBABLES FUENTES DE INFECCION, HABITOS)
• IMÁGENES RX, TAC, RMN
• HISTOPATOLOGICOS
• MICROBIOLOGICO
• INMUNOLOGICOS
• BIOLOGIA MOLECULAR
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Diagnóstico micológico
Estudio clínico
Toma y transporte de muestra
Procedimiento general del diagnóstico
Examen microscópico
directo
Cultivo Métodos independiente del
cultivo
Identificación a nivel de especie y sensibilidad ( cuando corresponda)
MATERIALES: piel y faneras, secreciones
mucosas, hemocultivos, LCR, orina, MO, esputo
y secreciones bronquiales, escarificación
cutánea, biopsias, suero, etc.
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Examen microscópico directo
En fresco
Esputo
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Examen microscópico directo
En fresco
KOH
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Examen microscópico directo
En fresco
Tinta china (Cryptococcus)
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Examen microscópico directo
En fresco
Blanco de calcoflúor
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Examen microscópico directo
Tinciones
Giemsa
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Examen microscópico directo
Tinciones
Grocott
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Examen microscópico directo
Tinciones
Kinyoun
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Métodos basados en el Cultivo
Generales
SDA
Enriquecidos
BHI
Selectivos
DTM
Diferencial
ChromAGAR
Especializados
Agar girasol
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Métodos basados en el cultivo
Hongos filamentosos
Aspecto macroscópico
Hongos levaduriformes
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Métodos basados en el cultivo
Aspecto microscópico
Disociación con Azul
de lactofenol
Hongos filamentosos
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Métodos basados en el cultivo
Hongos filamentosos Microcultivo
( micelio estéril)
Agar agua (28ºC)
Aspecto microscópico
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Métodos basados en el cultivo
Hongos levaduriformes
Cryptococcus spp
Candida spp
Trichosporon
Saccharomyces
etc.
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ESPECIES DE Candida DE
IMPORTANCIA MEDICA
EXISTEN MAS DE 150 ESPECIES DE CANDIDA IDENTIFICADAS. SOLO 9 SE CONSIDERAN PATOGENAS EN HUMANOS.
• Candida albicans (B)
• Candida guillermondi
• Candida krusei (A)
• Candida glabrata (C)
• Candida parapsilosis
• Candida tropicalis (E)
• Candida pseudotropicalis
• Candida lusitaniae
• Candida dubliniensis
• (D) indeterminada
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Métodos independientes del cultivo
Examen microscópico
Detección de antígeno
Detección de anticuerpos
Detección de componentes no antigénicos: (galactomananos, B-D-glucanos)
Criptocococcis
Neumocistosis
Criptocococcis
Candidiasis
Aspergillosis
Aspergillosis
Candidiasis
Paracoccidioidis
Coccidioides
Histoplasma, etc.
Tinta china. Cryptococcus sp.
Grocott. Pj.
Inmunodifusión (doble dif.) cuali y cuantitativa
Contrainmunoelectroforesis
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Diagnóstico Micológico
Serología
• MUESTRA: Suero
•
• Antígeno:
• - Látex o Elisa para C.neoformans,
• - Elisa (Galactomananos) y/o Colorimétrico
• (13)-- D-glucanos para Aspergillus spp
• - Elisa y radioinmunoensayo para H.capsulatum
• Anticuerpo:
• - Inmunodifusión, CIE y Fijación de Complemento
• (H.capsulatum, P.brasiliensis, C.immitis, • Aspergillus fumigatus, A.niger, A.flavus)
•
•
•
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Serología para Aspergillus flavus,
A. fumigatus y A. niger
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Diagnóstico Micológico
ESCARIFICACION DE ULCERAS O PAPULAS
• TOMA DE MUESTRA
• Asepsia- Descostrar-Bisturí- Raspar fondo
• 2 portaobjetos y material en SF estéril (1 ml)
• EX. MICROSCÓPICO
• Fresco o Tinta china.
• Giemsa (hongos y citológico: Herpes - Mollusco)
• Ziehl Neelsen o Kinyoun (BAAR, Nocardia spp.)
• CULTIVO e IDENTIFICACION
• 2 SAB y 2 BHI- (28 y 35ºC)
• 1 L.Jensen (30ºC Micobacterium marinum)
•
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Diagnóstico Micológico
BIOPSIAS y PIEZAS QUIRURGICAS • MUESTRAS:
• Sacar en SF (Micología) y en formol 10%(A.Patológ)
• - Bx.pólipos nasales o conjuntiva (Rhinosporidium)
• - Bx.micetomas: “granos”
• - Bx.nódulos (feohifomicosis y cromomicosis)
• - Zigomicetes (informar rápidamente)
• EX.MICROSCÓPICO:
• Si se piensa en Zigomicetes, NO MACERAR
• preparar improntas para:
• Fresco- Giemsa - ZN - Gram- KY. •
•
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HEMOCULTIVOS- MEDULA OSEA
• Técnica de elección:
• “Lisis Centrifugación”
• Es la técnica de elección para Hemocultivo cuando se sospecha hongos filamentosos (H.capsulatum, Fusarium spp) pues significativamente la recuperación y el tiempo de aislamiento (de 3 semanas a 1-2 semanas).
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Diagnóstico Micológico
HEMOCULTIVOS- MEDULA OSEA • TOMA DE MUESTRA:
• -Lisis centrifugación c/saponina 5%(cc.final 0.5%)/Isolator
• -Métodos automatizados, bifásicos o clásico (para Levaduras)
• EXAMEN MICROSCOPICO:
• Sólo en Medula ósea del sedimento de la Lisis-centrifugación.
• CULTIVO:
• LC: Sembrar el sedimento en 4-6 tubos en SAB y BHI.
• Incubar a 28 y 35ºC por 3 semanas.
• En pacientes con “Alimentación parenteral lipidica” agregar
• medios especiales para fungemias por Malassezia sp.
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Diagnóstico Micológico
Líquido cefalorraquídeo
• MUESTRA: LCR >3ml. Centrifugar
•
• EX.MICROSCÓPICO: Tinta China del Sedimento
• CULTIVO: SAB-BHI a 28 y 37 ºC del Sedimento
•
• SEROLOGIA: del Sobrenadante
• - Latex o Elisa para C.neoformans (Ag)
• - Elisa y radioinmunoensayo para H.capsulatum (Ag)
• - CIE y Fijación de Complemento (Ac) para
• H.capsulatum, P.brasiliensis y C.immitis
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Sensibilidad antifúngica
• La sensibilidad antifungica NO debe realizarse de rutina.
• Es mas importante identificar las levaduras y los hongos filamentosos
a nivel de género y especie, por las resistencias intrínsecas.
• Se justifica una prueba de sensibilidad cuando el paciente no
responde al tratamiento, por la resistencia secundaria.
• Se debe guardar la cepa para posibles estudios posteriores de sensibilidad.
• Métodos: - difusión en disco
• - CIM por E-test, macro y micrométodo
• -Metodos comerciales
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fin