REVISTA SALUD PUBLICA Y NUTRICIÓN Edición Especial No. 11-2006 II Congreso de Ciencias Farmacéuticas de la Conferencia Hispanoamericana de Facultades de

Farmacia (COHIFFA) y el VIII Congreso Regional de Químicos Fármaco Biólogos

DETECCIÓN DE INTERACCIONES MEDICAMENTOSAS EN EL SERVICIO DE MEDICINA INTERNA DEL HOSPITAL GENERAL REGIONAL DE ORIZABA

VERACRUZ Campos-Garza J. F., Aquino-Arteaga A., Uc-Morales D. N.,

Herrera-Huerta E. V., Velázquez- Hernández F., Hernández-Cruz R.

INTRODUCCIÓN Se ha estimado que el paciente hospitalizado promedio recibe alrededor de

6 a 10 medicamentos simultáneamente. En el caso de las enfermedades crónicas

como diabetes e hipertensión es común encontrar la administración de múltiples

fármacos. Existen otras situaciones terapéuticas donde la administración de

múltiples medicamentos puede constituir una buena práctica médica. La cuestión

es cuantos de estos medicamentos pueden afectar la biodisponibilidad, la

farmacodinamia y la farmacocinética de sus concomitantes. El uso concurrente de

dos medicamentos puede cambiar los efectos de uno o ambos. Los resultados

pueden ser una respuesta mayor de la esperada, una disminución de la

efectividad de uno o ambos medicamentos o una toxicidad no anticipada. Para

asegurar la efectividad y seguridad de una farmacoterapia múltiple, el potencial de

cada medicamento debe ser evaluado[1]

Los pacientes adultos mayores tienen tres características principales que lo

diferencian de otros grupos etáreos: polipatología, polifarmacia y cambios

fisiológicos relacionados con el envejecimiento, que alteran la farmacocinética y

farmacodinámica de los medicamentos. Estos tres factores contribuyen a que la

interacción medicamentosa que puede pasar desapercibida en un paciente joven,

en el adulto mayor se manifieste como una reacción adversa severa, que, en el

mejor de los casos, si es detectada como tal podrá corregirse, pero la mayor parte

de veces es interpretada erróneamente como empeoramiento de la enfermedad,

pobre adherencia al tratamiento o inefectividad de alguno de los fármacos

interactuantes. La interacción farmacológica forma parte de los problemas

relacionados con medicamentos en el paciente que necesita ser estudiado en su

epidemiología así como en las estrategias adecuadas para combatirla. Los

fármacos pueden interaccionar con alimentos, suplementos nutricionales,

productos de la medicina herbaria, con enfermedades (interacciones fármaco-

enfermedad) y, por supuesto, con otro fármaco, es decir, interacción fármaco-

fármaco (drug-drug interactions o DDIs). [2], [3]

OBJETIVO: Detectar las interacciones entre los medicamentos prescritos a los

pacientes del servicio de medicina interna durante el período mayo-diciembre de

2004.

METODOLOGÍA:

Se realizó un estudio retrospectivo, descriptivo, transversal y observacional.

Se recopilaron las farmacoterapias de los pacientes del servicio de medicina

interna del Hospital General Regional de Orizaba (HGRO) en una cedula

descriptiva. Los datos recopilados fueron: nombre del paciente, numero de

afiliación, edad, diagnostico y farmacoterapia. Posteriormente se evaluaron las

interacciones medicamentosas con la ayuda de la herramienta “Interacción de

Fármacos” (Drug Interaction) de la base de datos Micromedex Health Care series

Vol. 126 (2005). Las interacciones se clasificaron como severas, moderadas y

leves. Se documentó el efecto y el mecanismo de la interacción así como el

órgano afectado.

RESULTADOS: Se recopilaron 342 farmacoterapias de las cuales 109 presentaron

interacciones fármaco-fármaco (Tabla 1). En estas farmacoterapias se

encontraron 152 interacciones medicamentosas, de éstas el 26.31% fueron leves,

el 61.18% fueron moderadas y el 12.5% restante fueron severas. Tabla 1. Numero de pacientes que presentaron reacciones medicamentosas

PACIENTES INTERACCIONES PORCENTAJE CON INTERACCIONES 109 31.87

SIN INTERACCIONES 233 68.13 TOTAL 342 100%

El 42.05% de las interacciones fueron de tipo antagonista mientras que el

2.62% resultaron de tipo potenciador. El 40.12% afectó al sistema circulatorio

mientras que las restantes (15.10%) incluyeron a los sistemas nervioso central,

renal, hepático y muscular (Tabla 2). El numero de interacciones y el porcentaje

de pacientes que las manifestaron se muestra en la Tabla 3.

Tabla 3. Número de interacciones Vs. Porcentaje de pacientes

72.48

13.766.42

3.67 3.67

01020304050607080

Porcentaje de

Pacientes

1 2 3 4 5

Numero de Interacciones

CONCLUSIÓN:

Las interacciones mas frecuentemente encontradas fueron Angiotensinas-

Diuréticos y Clopidrogel-Acido Acetil Salicílico cuya severidad fue moderada y

leve, respectivamente. El órgano mas afectado fue el sistema circulatorio. La

identificación y evaluación de estas interacciones hará posible desarrollar una

alerta sobre las interacciones mas frecuentes que existen en el servicio de

medicina interna del Hospital General Regional de Orizaba con el propósito de

prevenir futuras interacciones.

Tabla 2: Frecuencia de interacciones medicamentosas y de la severidad de las mismas en la población en riesgo

INTERACCIÓN FREC* % LEV* MOD* GRAV*

Órgano afectado/Resultado

de la interacción Mecanismo de interacción

1 INHIBIDORES DE ANGIOTENSINAS-DIURETICOS 30 19.737 * Circulación Sistémica

Depleción del volumen vascular

2 CLOPIDROGEL-ACIDO ACETIL SALICILICO 20 13.158 * Sistema Circulatorio Inhibición de la agregación plaquetaria 3 AMINOGLUCOSIDOS-PENICILINAS 17 11.18 * Antagonista Inactivación química de los aminoglicosidos 4 AMINOGLUCOSIDOS-CEFALOSPORINAS 14 9.2105 * Riñón Adición de los efectos tóxicos 5 CAPTOPRIL-ACIDO ACETIL SALICILICO 11 7.24 * Antagonista Disminuye la efectividad del captopril 6 HEPARINA-ACIDO ACETIL SALICILICO 10 6.58 * Sistema Circulatorio Disminución de la actividad plaquetaria 7 ACIDO ACETIL SALICILICO-ENALAPRIL 9 5.92 * Antagonista Inhibición de la síntesis de prostanglandinas 8 FLUOROQUINOLONAS-ANTIDIABETICOS 7 4.6 * Antagonista Disminución del efecto de los antidiabeticos 9 FUROSEMIDA-ACIDO ACETIL SALICILICO 7 4.6 * Antagonista Disminución del efecto de la furosemida

10 FUROSEMIDA-AMIKACINA 4 2.63 * Riñón Toxicidad aditiva 11 GLIBENCLAMIDA-ACIDO ACETIL SALICILICO 4 2.63 * Antagonista Disminución del efecto de la glibenclamida 12 FUROSEMIDA-DIGOXINA 3 1.97 * Potenciador Aumento de la Toxicidad de la digoxina 13 RITONAVIR-ZIDOVUDINE 3 1.97 * Antagonista Disminución de la biodisponibilidad de la Zidovudina 14 RANITIDINA-ITRACONAZOL 2 1.31 * Antagonista Disminución de la absorción del itraconazol 15 INSULINA-ACIDO ACETIL SALICILICO 2 1.31 * SNC Desconocido 16 AINES-ANTIDIURETICOS 1 0.65 * Antagonista Disminución del efecto de los diuréticos

17 BETA BLOQUEADORES-ANTIDIABETICOS 1 0.65 * Antagonista Disminución de la actividad de la insulina 18 CARBAMAZEPINA-ACETAMINOFEN 1 0.65 * Hígado Aumento de la hepatoxicidad del acetaminofen 19 CIPROFLOXACINO-CAFEINA 1 0.65 * SNC Estimulación del SNC 20 DIGOXINA-DIAZEPAM 1 0.65 * Potenciador Aumento del efecto toxico de la digoxina 21 GLIBENCLAMIDA-HIDROCLOROTIAZIDA 1 0.65 * Antagonista Disminución de la concentración de la glibenclamida 22 ITRACONAZOL-RITONAVIR 1 0.65 * Antagonista Disminución de la concentración de itraconazol 23 METFORMINA-ENALAPRIL 1 0.65 * Sistema Muscular Acidosis láctica 24 DIHIDROPIRIDINA-BETA BLOQUEADORES 1 0.65 * Sistema Circulatorio Adición de los efectos tóxicos cardiovasculares

TOTAL 152 99.895 40 93 19

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

[1] Levine R.R. (200). Pharmacology, Drugs Actions and Reactions (Walsh C.T.,

Schwartz R.D. eds) 6 Ed, The Parthenon Publishing Group, New York,

p.305-320.

[2] OSCANOA, T. (2004) Interacción medicamentosa en Geriatría. Lima ,

vol.65, no.2, p.119-126.

[3] Dukes M.N. Meyler´s Side Efects of drugs. (Chalker J.T., Leuwer M.,

Lunde P.K. eds) 14 Ed, Elsevier, Amsterdam.

[4] Baca O. S. y Gonzáles C. M. (2001) Reacciones adversas a los

medicamentos en los servicios de cirugía, ginecobstetrícia, pediatría y

traumatología en un hospital de segundo nivel. Tesis; 125-127.

[5] Micromedex Healthcare Series Vol.126 12/2005

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Farmacia (COHIFFA) y el VIII Congreso Regional de Químicos Fármaco Biólogos

MODELO DE FARMACOVIGILANCIA EN JALISCO

Escutia Gutiérrez R 1, Álvarez Álvarez R.M. 1 Cisneros Madrid E. 1 Cortes Álvarez C.R. 2

Favela Mendoza A.F.2 Instituto Jalisciense de Alivio al Dolor y Cuidados Paliativos.

Avenida Zoquipan #1000-C, colonia Zoquipan, CP 45170. Zapopan , Jalisco. Teléfono: 01(33)35-85-77-94 , Fax: 01(33)35-85-77-95

Email: raymundostereo@yahoo.com ,farmapalia@salud.gob.mx 1.- Secretaria de Salud Jalisco. (SSJ) 2.- Universidad de Guadalajara. (U de G)

INTRODUCCION

La seguridad del paciente, siempre ha sido tema importante en las Instituciones de

Salud. Destaca el uso de los medicamentos, los cuales además de proporcionar

efecto terapéutico pueden producir reacciones adversas que afecten la salud de

los pacientes. El Centro Nacional de Farmacovigilancia en México entró en

actividad desde 1995, mientras que en Jalisco el Centro Estatal se activó en 1998.

Los resultados iniciales en Jalisco fueron muy bajos, debido a la falta de cultura de

reporte entre los profesionales de la salud, observándose en los 15 reportes de

2002 y 6 reportes de 2003. Por lo anterior se determinó realizar actividades que

favorecieran al desarrollo del Programa Estatal de Farmacovigilancia.

Además, después de la reciente publicación de Norma Oficial Mexicana

NOM-220-SSA1-2004, Instalación y operación de la Farmacovigilancia, la cual

entró en vigor a partir de Enero de 2005 se incrementaron las actividades dirigidas

a la protección de riesgos contra la salud, enfocando en este caso, en la

prevención de reacciones adversas a medicamentos, mediante su detección,

notificación y evaluación. 1

OBJETIVOS

• Presentar el Modelo Estatal de Farmacovigilancia en Jalisco, indicando el

proceso que lo originó, sus principales características funcionales y su

impacto positivo en la seguridad de los pacientes.

• Destacar la importancia de la integración del profesional Químico

Farmacobiólogo a actividades dentro del equipo de salud que deriven en

mejora de la atención a los pacientes.

METODOLOGIA

Debido a los bajos resultados del Programa Estatal, se determinó la

creación del Centro Institucional de Farmacovigilancia en febrero de 2004, con el

objetivo de apoyar al Centro Estatal en todas las actividades propias del Programa.

Integrándose así el Modelo de Farmacovigilancia Jalisco caracterizado por lo

siguiente:

• Centro Institucional ubicado en un Instituto de Salud.

• Área de trabajo equipada con libros, computadoras y teléfono.

• Los responsables del Centro son profesionales Químicos

Farmacobiólogos (QFB)

• Procedimiento para la Operación del Centro Institucional de

Farmacovigilancia 2

• Acuerdo con la Universidad de Guadalajara en materia de

capacitación, investigación y servicio social. 3

• Organización de foros, seminarios y conferencias.

• Elaboración de carteles, trípticos y formatos de respuesta a la

notificación.

• Evaluación de las sospechas de reacciones adversas y reporte al

notificador.

• Educación a los pacientes en relación con las reacciones adversas a

medicamentos.

El número de notificaciones es el indicador usado para medir los efectos de la

intervención. Las metas establecidas respecto al número de notificaciones por

año para el estado de Jalisco fueron tomadas directamente del cálculo realizado

para cada entidad federativa por parte del Centro Nacional de

Farmacovigilancia, como se muestra a continuación:

“...Calculado con base a 82 notificaciones por millón de habitantes.

Considerando que la Industria Químico Farmacéutica aporta el 30% de las

notificaciones a nivel nacional, la meta por estado se calculó tomando en cuenta

58 notificaciones por millón de habitantes” 4

RESULTADOS

En 2004 el número de notificaciones aumentó a 51, logrando el 15% de la

meta anual. En 2005 se obtuvieron 146 para el 33.8%, superando ampliamente lo

realizado en 2003 con 6 notificaciones que indican el 2% de la meta anual.5

Además del incremento en el número de notificaciones, el impacto positivo

del Modelo Jalisco, se ve reflejado en el interés de otras Instituciones de Salud en

ser sede de Centros Institucionales de Farmacovigilancia, además de que también

las empresas farmacéuticas han mostrado interés en participar conjuntamente en

las actividades del Programa.

15 6

51

146

0

50

100

150

Número

2002 2003 2004 2005

Año

Notificaciones 2002-2005

Grafica 1. Número de notificaciones del periodo 2002-2005. Se observa el

incremento desde la creación del Centro Institucional de Farmacovigilancia en

2004.

CONCLUSIONES

La Farmacovigilancia en México han tenido un gran apoyo desde la puesta en

vigor de Norma Oficial Mexicana NOM-220-SSA1-2004, y específicamente en

Jalisco mediante el modelo diseñado para hacer eficiente el desarrollo de las

actividades de Farmacovigilancia.

Los principales cambios obtenidos son el impacto positivo sobre la cultura

del reporte por parte de los médicos, que se traduce en beneficio directo a los

pacientes al conocer el comportamiento de los medicamentos y tomar acciones

para evitar problemas de salud.

Las claves del incremento de notificaciones, han sido el trabajo en equipo

entre los Centros de Farmacovigilancia y la participación activa de los Químicos

Farmacobiólogos, los cuales han sido incluidos en el equipo de salud para toma

de decisiones sobre la farmacoterapia de los pacientes.

BIBLIOGRAFÍA 1.- Secretaría de Salud. Norma Oficial Mexicana NOM-220-SSA1-2004,

Instalación y operación de la farmacovigilancia Diario Oficial de la Federación.

15 de Noviembre de 2004.

2.- Secretaria de Salud Jalisco. Procedimiento para la Operación del Centro

Institucional del Centro Institucional de Farmacovigilancia “Palia”. Código DOM-

P93. Octubre 2004.

3.- Organismo Publico Descentralizado Servicios de Salud Jalisco-Universidad de

Guadalajara. Acuerdo Específico de Actividades Académicas, Científicas y

Tecnológicas en Materia de Alivio al Dolor y Cuidados Paliativos. Guadalajara,

Jalisco. Abril 2005

4.- Comisión Federal para la Protección contra Riesgos Sanitarios. Informe

del número de notificaciones recibidas en el Centro Nacional de

Farmacovigilancia de Enero a Diciembre del 2005. SNF/50/0026/06. México D.

F. a 25 de Enero 2006.

5.- Centro Institucional de Farmacovigilancia. Estadísticas de notificaciones de reacciones adversas 2002-2005. Base de datos interna. Enero 2006.

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DETECCCIÓN TEMPRANA DE DIABETES MELLITUS (DM) Y DISLIPIDEMIAS EN HABITANTES DE IXTACZOQUITLAN, MEDIANTE LA PARTICIPACIÓN

CONJUNTA DEL SERVICIO MÉDICO DEL DIF Y LA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS DE ORIZABA.

Velázquez-Hernández, J. F.1; Juárez-Castro, L. M.1 Gutiérrez-Rojas N. H.1,

Herrera-Huerta, E. V.1, Sánchez-Zúñiga I.2, Hernández-Cruz, R.1

1 Facultad de Ciencias Químicas de Orizaba de la Universidad Veracruzana,

México 2 DIF (Desarrollo Integral de la Familia) de Ixtaczoquitlán, Veracruz

INTRODUCCIÓN México ocupa el 9° lugar de DM en el mundo y la prevalencia de esta

enfermedad en el estado de Veracruz es del 16.1% siendo el estado con mayor

prevalencia en la república mexicana, en la encuesta nacional de enfermedades

crónicas no transmisibles, 8.2% de la población de 20 a 69 años padece DM,

68.7% tiene conocimiento de su padecimiento y el 31.3% fue hallazgo de la

encuesta1,2. Las dislipidemias actúan conjuntamente con la DM incrementando la

morbilidad de los pacientes que la padecen. Una actividad importante dentro del

sistema de prevención es la detección temprana de estas enfermedades,

detección que en ocasiones es imposible debido a múltiples causas entre ellas

que las comunidades estén alejadas de los servicios de salud, costumbres y

hábitos de la población y una atención primaria deficiente o incompleta por parte

de los profesionales de la salud, entre otras.

En este estudio participaron de forma conjunta investigadores de la

Facultad de Ciencias Químicas (FCQ) de Orizaba de la Universidad Veracruzana

(UV) y el personal del servicio médico del DIF de Ixtaczoquitlán, Veracruz, quien

tiene una cercana relación con las comunidades más carentes de servicios de

salud. Con el propósito de obtener resultados satisfactorios, la distribución de las

actividades en ambas instituciones para la detección temprana de estas

enfermedades fue un punto estratégico a seguir para mejorar la calidad de vida de

los habitantes de Ixtaczoquitlán.

OBJETIVO Detectar a aquellos habitantes de las comunidades de Ixtaczoquitlán, Ver.,

con valores alterados de glucosa, colesterol y triglicéridos séricos para la

deteccción temprana de DM y dislipidemias.

METODOLOGÍA El tipo de estudio fue prospectivo, descriptivo, transversal y observacional.

Se realizó un acuerdo de colaboración entre el servicio médico del DIF de

Ixtaczoquitlán, Ver. y el Laboratorio de Docencia, Investigación y de Servicios

(LADISER) Clínicos (LC) de la FCQ. Se llevaron a cabo Brigadas de Salud de

forma conjunta con el DIF visitando 32 comunidades del municipio. La toma de

especimenes se realizó a todos los habitantes que de manera voluntaria

solicitaron el servicio y fue llevada a cabo por estudiantes del Servicio Social (SS)

capacitados en LC. Los especímenes se transportaron al LC para su

procesamiento y determinación de las concentraciones de glucosa, colesterol y

triglicéridos en suero sanguíneo por métodos enzimáticos. Los resultados se

entregaron en sobre sellado a los participantes de este estudio por el médico

responsable quien se encargó de la valoración de los resultados, diagnóstico y

emisión de las recomendaciones sobre el cuidado de su salud en entrevista

individualizada.

Cabe destacar que los valores que resultaron por arriba de los rangos

preestablecidos para glucosa3, colesterol y triglicéridos2 se verificaron por

duplicado.

RESULTADOS

El número de habitantes que solicitaron el servicio fue de 306, de los cuáles

el 80% corresponde al género femenino y el 20% restante al género masculino,

con un promedio de edad de 47 años (6-84). El 69% de las mujeres refieren

dedicarse a labores del hogar. Respecto a su afiliación a algún servicio de salud

(Figura 1), 52 personas tienen los servicios del IMSS (16.9%), 56 Seguro Popular

(18.3%), 5 ISSSTE (1.6%), 8 refieren otro servicios (2.6%) y los restantes carecen

de servicios médicos (60.4%).

17%

18%

2%3%

60%

IMSS (52) SEGURO POPULAR (56)ISSSTE (5) OTRO TIPO (8)SIN SERVICIO MÉDICO (185)

Figura 1.- Afiliación a algún centro de salud de la población de estudio.

En cuanto a los resultados de laboratorio, el número de personas con

niveles alterados de: Glucosa ≥126 mg/dL, fue de 81 pacientes (26.47%),

Colesterol ≥ 240 mg/dL, fue de 19 pacientes (6.2%) y Triglicéridos ≥ 200 mg/dL,

fue de 106 pacientes (34.64%) (Figura 2).

Figura 2.- Diagnóstico de la población de estudio.

El médico del DIF entregó los resultados haciendo las observaciones

correspondientes a cada paciente sobre el cuidado de su salud con la finalidad de

mejorar la calidad de vida de los habitantes del municipio de Ixtaczoquitlán, Ver.

Al concluir el período programado de Brigadas de Salud, los habitantes que

inicialmente se habían rehusado a participar en el Programa se mostraron

interesados por la seriedad y profesionalismo por el equipo de trabajo (DIF-LC) de

tal manera que solicitaron el servicio al DIF.

CONCLUSIÓN La exitosa vinculación del Servicio Médico del DIF y LC de la FCQ-Orizaba

de la Universidad Veracruzana contribuyó a la detección temprana de DM y

Dislipidemias en algunas comunidades del Municipio de Ixtaczoquitlan, Ver., lo

cual se verá reflejado en la calidad de vida de sus habitantes.

REFRENCIAS 1,http://www.msd.com.mx/content/patients/diabetes/boletines/bol0605.html

306 Pacientes

6 – 84 Años

Glucosa > 126 mg/dL

81 Pacientes 26.47 %

Colesterol > 240 mg/dL

19 Pacientes 6.2 %

Triglicéridos > 200 mg/dL

106 Pacientes 34.64 %

2 NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-015-SSA2-1994, “PARA LA PREVENCIÓN,

TRATAMIENTO Y CONTROL DE LA DIABETES MELLITUS EN LA ATENCIÓN

PRIMARIA”. 3, Sacks, D.B. Guidelines and Recommendations for Laboratory Análisis in the

Diagnosis and Management of Diabetes Mellitus. Clinical Chemistry 48:436-472,

2002.

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Construcción de un vector plasmídico para expresión de la proteína quimérica F-GFP

1De la Rosa Moreno, E. I., 1Gómez-Treviño, A., 2Mercadé Gil, Elena 1Laboratorio de Biología Molecular, CELAES. Facultad de Ciencias Químicas,

UANL. Av. Pedro de Alba s/n, S. Nicolás de los Garza, NL. México. E-mail:

jegomez@fec.uanl.mx , tel. +52 (81) 8329 4010, fax +52 (81) 83322816. 2Departament de Microbiologia y Parasitologia Sanitàries, Facultat de Farmàcia,

Universitat de Barcelona.

Introducción: En los últimos años ha sido posible clonar las proteínas

fusogénicas de algunos virus, lo cual ha permitido estudiar no sólo su

mecanismo de acción, sino los efectos de su expresión tanto in vivo como in

vitro. La glicoproteína F de SV 5, por su probada capacidad fusogénica, se

postula como una nueva herramienta en el diseño de terapias que involucran

genes citotóxicos para la eliminación de células de origen tumoral1. Una manera

de facilitar el estudio de una proteína en particular es a través de la expresión

conjunta del gen de la proteína de interés junto a otro que permita evidenciar la

presencia de la primera de manera inequívoca. A estos genes cuyo producto de

expresión es fácilmente cuantificable se les denomina genes reporteros y

pueden incorporarse en ambos extremos de la proteína en estudio, ya sea para

una expresión individual y simultánea, o bien, generando un polipéptido híbrido

denominado proteína quimérica. Los genes reporteros no deben interferir con la

actividad celular normal, ni deben codificar para productos parecidos a los

propios de las células blanco; de manera que es posible llevar a cabo un rastreo

de la proteína en estudio gracias a que en el producto de expresión completo es

inevitable contar con el péptido codificado en el gen reportero. La medusa del

noroeste del Océano Pacífico Aequorea victoria produce una Proteína Verde

Fluorescente o GFP (del inglés Green Fluoresence Protein). La GFP es capaz

de producir fluorescencia al ser expuesta a luz ultra violeta2,3 (Fig. 2).

Objetivos: Obtener el cDNA de la glicoproteína F del paramyxovirus SV 5 para

su clonaje en un vector plasmídico. Construir un vector plasmídico que

contenga la secuencia codificante para la proteína quimérica F-Cycle 3 GFP.

Confirmar la correcta orientación de los insertos en el vector generado.

Materiales y Métodos: Para la generación del inserto por PCR se emplearon

los primers FGFP1 y FGFP2 y se desarrolló el proceso según las condiciones

que se presentan en la tabla 1-A, los volúmenes y concentraciones de DNA

molde, primers, sales, dNTP´s y DNA polimerasa se resumen en la sección B

de esta misma tabla.

Tabla 1. Condiciones para la amplificación del cDNA de la proteína fusogénica F del paramyxovirus SV5 mediante Reacción en Cadena de la Polimerasa a partir del plásmido pGEM-SV5F. A) Secuencia de primers, condiciones de amplificación y tamaño en Kb del

CondicionesA) Primer Secuencia Primers Ciclos

94 ºC/ 2 min 94 ºC/45 s

FGFP1 5’-gcgatgggtactataattc-3’ 54 ºC/45 s

72 ºC/ 2 min

35 ciclos

FGFP2 5’-gtcttgttccaagagttg-3’

FGFP1 y FGFP2

(amplifica 1,7 Kb)

72 ºC/10 min 94 ºC/ 2 min 94 ºC/45 s

SV5Fup 5´- atgggtactataattcaatttctg -3´ 56 ºC/45 s

72 ºC/ 2 min

35 ciclos

GFP

Reverse 5´-gggtaagctttccgtatgtagc-3´

SV5F y GFP

Reverse (amplifica

1,8 Kb) 72 ºC/10 min 94 ºC/ 2 min 94 ºC/45 s

T7 5´-taatacgactcactataggg-3´ 56 ºC/45 s

72 ºC/ 2 min

35 ciclos

GFP Reverse 5´-gggtaagctttccgtatgtagc-3´

T7 y GFP Reverse (amplifica

1,9 Kb) 72 ºC/10 min

B) Reactivo Volumen (µl)

DNA molde* 1,0 Buffer 10x 5,0 dNTP´s⊥ 1,0 Primer up† 1,0 Primer down† 1,0 MgCl2

‡ 2,0 H2O 39,0

Taq polimerasa

1 U

* ≈ 0,5 µg/µl; ⊥50 mM; † 50 nM; ‡ 25mM

producto esperado. B) Volúmenes y concentraciones de reactivos empleados en el proceso de PCR.

Una vez generado el inserto F se realizó la clonación del mismo en el vector

plasmídico pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO (InvitrogenTM Life Technologies). Para

esto se mezclaron de 1 a 4 µl del producto de amplificación por PCR con 1 µl

del vector, se adicionó 1 µl de solución salina (NaCl 1,2 M y MgCl2 0,06 M), y

se llevó a un volumen total de 6 µl con agua, finalmente se incubó la mezcla por

espacio de 20 minutos a temperatura ambiente (25 ºC).

Al finalizar el periodo se procedió conforme al método Inoue para preparación

y transformación de E. coli ultracompetentes con la finalidad de amplificar el

vector y obtener un stock del mismo4. Para esto se empleó el volumen total de

la mezcla de ligación poniéndolo en contacto con una alícuota de 50 µl de

células conservadas a - 80 ºC. Se incubó en baño de hielo durante 30 minutos

agitando ocasionalmente, se expuso la mezcla a choque térmico en baño de

agua a 42 ºC durante 90 segundos para posteriormente incubar de nuevo en

hielo por espacio de 2 minutos. A continuación se añadieron 250 µl de medio

LB permitiendo la recuperación de las células a 37 ºC durante una hora con

agitación constante a 200 rpm. Una vez finalizado este proceso se inocularon

placas selectivas de agar LB conteniendo 75 µg/L de ampicilina. Finalmente las

placas se incubaron a 37 ºC durante 16 a 24 horas.

Las clonas recombinantes generadas fueron nuevamente inoculadas en el

medio selectivo de manera ordenada. Cada una de las clonas fue inoculada en

5 ml caldo LB conteniendo 75 µg/L de ampicilina e incubadas a 37 ºC con

agitación constante (200 rpm) durante 16 a 24 horas. Al término de este tiempo

se colectaron las células mediante centrifugación a 14000 rpm por 1 minuto y se

procedió con la extracción de DNA plasmídico mediante la técnica de lisis

alcalina. Una vez obtenido el DNA este mismo fue analizado mediante

electroforesis en gel de agarosa al 0,8 % para corroborar la presencia de una

banda indicativa de la presencia de un plásmido de 8,0 kb aproximadamente.

De las clonas analizadas se seleccionó un 50 % del total con la finalidad de

ser analizadas mediante PCR para, en un primer paso evidenciar la presencia

de un inserto de 1,7 Kb; correspondiente al cDNA de la proteína fusogénica del

paramyxovirus SV 5. En este proceso de amplificación se emplearon los

primers FGFP1 y FGFP2 (Tabla 1).

Las cepas recombinantes portadoras del inserto fueron designadas con una

clave alfanumérica (GFPFn) para su identificación y paso seguido el plásmido

correspondiente a cada una de ellas se incubó con la enzima de restricción

Hind III en buffer II (Q-BIOgene) en baño de agua a 37 ºC durante una noche.

Lo anterior proporciona un patrón de bandas de 0.5, 0.6, 0.7 y 6.0 Kb; cuyos

tamaños deben corresponder con el análisis de restricción de la secuencia

completa del plásmido pcDNA3.1/CT-GFP conteniendo al inserto F-SV5.

Como prueba confirmatoria de la correcta orientación del inserto se llevaron a

cabo análisis mediante PCR multiple. Para ello se utilizaron una pareja de

primers (T7 y GFP reverse), combinación para la cual debe generarse una

banda de 1,9 Kb; correspondiente a la distancia que hay entre el promotor T7 y

la secuencia especifica de la Cycle 3 GFP. Por otro lado, se siguió esta misma

estrategia con otra pareja de primers (SV5F up y GFP reverse) que amplifica

desde el triplete de inicio (ATG) de la secuencia que codifica para la proteína

fusogénica del paramyxovirus SV 5 hasta la secuencia especifica de la Cycle 3

GFP, esperando un tamaño de banda de 1,8 Kb.

Resultados: En el proceso de transformación utilizando las construcciones del

apartado anterior se obtuvo un total de 82 colonias en el medio selectivo

utilizado. Se analizó al 50 % del total de clonas obtenidas mediante extracción y

purificación de DNA plasmídico. Se seleccionaron solo aquellas que

presentaran una banda de alrededor de 8,0 Kb para continuar con las pruebas

confirmatorias de la inserción y correcta orientación del cDNA de la proteína

fusogénica F del paramyxovirus SV5 (Fig. 3).

Figura 3. Gel de agarosa al 0,8 %, revelado con bromuro de etidio (2 µg/ml) que muestra los resultados de la extracción de DNA plasmídico realizada a 40 de las clonas recombinantes obtenidas. Las muestras se presentan en orden según la clave asignada para su identificación. M corresponde al marcador de peso molecular en Kb.

Nuevamente se seleccionó al 50 % de estas cepas para continuar con el

análisis de la orientación del inserto. En una primera aproximación se confirmó

la presencia del cDNA de la proteína fusogénica F del paramyxovirus SV5

mediante PCR utilizando los primers FGFP1 y FGFP2. En la figura 4 se puede

observar el fragmento amplificado de 1,7 Kb que corresponde al tamaño

esperado.

Figura 4. Gel de agarosa al 0,8 %, revelado con bromuro de etidio (2 µg/ml) que muestra los resultados de la electroforesis de las PCR realizada a clonas recombinantes seleccionadas para comprobar la presencia del cDNA de la proteína F. M corresponde al marcador de peso molecular en Kb. C representa al plásmido utilizado como control negativo.

Una vez confirmada la presencia del inserto F en las cepas seleccionadas,

estas mismas se sometieron a digestión con la el enzima de restricción Hind III

para mostrar un patrón de bandas correspondiente con el esperado, esto es

0.5, 0.6, 0.7 y 6.0 Kb aproximadamente. El patrón de bandas obtenido de dos

de las cepas elegidas se muestra en la figura 5 (Carriles 1 y 2).

Como última etapa se realizó una PCR múltiple utilizando los primers T7, SV5

up y GFP reverse. Para ello se empleó como DNA molde plásmido de la

extracción correspondiente a las cepas que hubieran revelado el patrón de

bandas esperado en el análisis de restricción con la enzima Hind III. En la figura

5 (Carriles 4 y 5) se presentan los resultados obtenidos de la amplificación del

fragmento desde el promotor T7 hasta una región especifica de GFP (1,9 Kb) y

el fragmento amplificado desde SV5Fup hasta la misma secuencia de GFP (1,8

Kb).

Figura 5. Gel de agarosa al 2 % revelado con bromuro de etidio (2 µg/ml) que muestra los resultados de: a) Restricción enzimática con Hind III en el análisis de orientación del fragmento F (carriles 1 y 2), y b) Fragmentos amplificados por PCR utilizando los primers T7, SV5F y GFP reverse (carriles 4 y 5). M1 y M2 corresponden a los marcadores de peso molecular en Kb. El carril 3 corresponde al plásmido utilizado como control negativo.

Conclusiones: Se obtuvo el cDNA de la glicoproteína fusogénica F del

paramyxovirus SV5 mediante Reacción en Cadena de la Polimerasa. Se

construyó un vector plasmídico mediante unión de los cDNA de la glicoproteína

fusogénica F del paramyxovirus SV5 y el de la proteína verde fluorescente en

un vector plasmídico denominado pGFP-SV5-F. El cDNA de la glicoproteína

fusogénica F del paramyxovirus SV5 se haya dispuesto hacia el extremo 5´ de

la secuencia codificante para la proteína F-GFP.

Bibliografía 1 Gómez-Treviño A, Castel S, López-Iglesias C, Cortadellas N, Comas-Riu J, MercadéE. (2003). Effects of adenovirus-mediated SV5 fusogenic glycoprotein expression on tumor cells. Journal of Gene Medicine. 5(6):483-92.

2 Chalfie, M., Tu, Y., Euskirchen, G., Ward, W. and Prasher, D., (1994). Green fluorescent protein as a marker for gene expression. Science; 263: 802-5.

3 Inouye, S. and Tsuji, F.I. 1994. Aequorea green fluorescent protein. Expression of the gene and fluorescence characteristics of the recombinant protein. FEBS Lett. 341(2−3): 277−280. 4 Sambrook, J. and Russell, D. Molecular cloning. A laboratory manual. Vol. 1-3. 2001. 3rd Ed. Cold Spring Harbor. Lab. Press. U.S.A.

REVISTA SALUD PUBLICA Y NUTRICIÓN Edición Especial No. 11-2006 II Congreso de Ciencias Farmacéuticas de la Conferencia Hispanoamericana de Facultades de

Farmacia (COHIFFA) y el VIII Congreso Regional de Químicos Fármaco Biólogos “UTILIZACION DE EXTRACTOS REPELENTES DE INSECTOS EN EL DISEÑO

DE UN PARCHE COMO FORMA FARMACEUTICA”

Autores: Farfán-Tavera M. G., Gómez-Treviño J. A., Sánchez-Ramírez, M. N.,

Ramírez, K.

Laboratorio de Biología Molecular, Centro de Laboratorios Especializados,

Facultad de Ciencias Químicas, UANL, Av. Pedro del Alba s/n, San Nicolás de los

Garza, N.L., México,

e-mail jegomez@fcq.uanl.mx, Tel. +52 (81) 8329 4010, Fax +52 (81) 8332 2816. INTRODUCCION:

Las infecciones parasitarias transmitidas por mosquitos afectan a más de

3,000 millones de personas a nivel mundial y constituyen una enorme carga para

la salud y la economía. Algunas parasitosis demandan atención porque sin

tratamiento pueden alcanzar índices de morbilidad y mortalidad muy altos (Tabla

1). Se necesitan todavía fármacos, insecticidas, vacuna y métodos, todos ellos

prácticos, económicos, eficaces e innocuos para el huésped (Goodman-Gilman,

2001).

Tabla 1: Enfermedades transmitidas por picaduras de mosquitos.

Enfermedad Vector Agente causal Importancia

Paludismo o

Malaria.

Anopheles sp

en México existen 3

especies de mosquitos

A. quadrimaculatus, A.

pseudopunctipennis y

A. albimanu).

Plasmodium vivax,

P. malariae, P.

falciparum, P. ovale,

de los cuales el de

mayor peligro es el

falciparum.

120 millones de casos clínicos y

1.2 millones de muertes/año en

91 países (OMS, 2002).

Dengue. Aedes aegypti Flavivirus (ser. Pandemia de 1998: 1.2 millones

Dengue 1, 2 ,3 y 4). de afectados. Con 100 países

endémicos: 2.5 billones de

afectados/año (OMS, 2002).

Fiebre del

Nilo.

Culex pipiens Flavivirus. En 2003 se detectaron 9,858

casos en EEUU, con 262

muertes. En México no se

diagnostica (Secretaría de

Salud, 2005).

Los insectos actúan como vectores o portadores de microorganismos,

principalmente de dos formas. La primera es por transmisión mecánica, los

insectos portan en sus partes externas, tales como patas o alas, los agentes

infecciosos. Cuando los insectos hospedan en su organismo algún virus, bacteria

o protozoario, pueden propagar enfermedades por un segundo medio, sus

picaduras (OMS, 2002). Debido a la picadura de los mosquitos se producen

reacciones en el cuerpo como prurito, escozor, irritación y enrojecimiento de la

zona afectada, se presenta un proceso de inflamación que puede llegar a casos

extremos de alergia, intensa reacción inflamatoria local e inclusive en casos

severos anafilaxis.

La inducción del comportamiento de búsqueda de hospederos es mediada

por estímulos físicos y químicos. Los estímulos físicos (visuales) como por

ejemplo contraste e intensidad de luces, movimiento, son el activador del vuelo.

Mientras que a distancias cortas, las señales químicas ayuda a los mosquitos a

identificar el flujo de olor (estímulos químicos) que los orientan hacia el hospedero.

Los estímulos químicos provocan la respuesta anemotáctica (orientación en contra

del viento siguiendo un gradiente de olor) de búsqueda del hospedero y

desencadenan la estimulación final para que se lleven a cabo el piquete y la

alimentación. Las hembras pican porque requieren de las proteínas sanguíneas

para poder ovopositar (Torres-Estrada, 2003).

Por lo tanto, hoy en día, reducir o eliminar la exposición a los vectores tiene

una mayor importancia en salud pública como nunca antes. En este proyecto de

investigación se plantea el diseño, formulación, elaboración y evaluación de

parches de liberación prolongada con compuestos de efecto repelente a

mosquitos. Todo ello para obstaculizar la habilidad de los mosquitos para

identificar el flujo de olor que los orientan hacia el blanco de la picadura. Los

trabajos de experimentación tienen como objetivo el desarrollo de una forma

farmacéutica que brinde protección contra la picadura de mosquitos (Aedes

aegypti,) teniendo como resultado la disminución del riesgo de contraer

enfermedades transmitidas por estos vectores.

OBJETIVOS PARTICULARES

▫ Formular la mezcla de efecto repelente.

▫ Evaluar la efectividad de la formulación.

▫ Seleccionar los materiales adecuados para el diseño de la base y el soporte de

la mezcla.

▫ Evaluar la resistencia de la pieza ensamblada.

▫ Implementar elegancia del producto.

METODOLOGIA 1. Selección de Materiales.

Se llevará a cabo la selección de materiales para el diseño y ensamblaje del

dispositivo y el soporte eligiendo los más apropiados en base a las ventajas que

estos ofrezcan y de acuerdo a su compatibilidad con la formulación. Entre éstos se

cuentan:

▫ Soportes, Adhesivos, Textiles

2. Formulación.

Se implementará la formulación siguiendo las indicaciones de Banker y

Rhodes (Modern Pharmaceutics, 2002), incorporando como principios activos

los extractos rectificados que contengan:

▫ Citronella, Limoneno, Eugenol.

3. Diseño y Ensamblaje del Parche Externo.

El diseño y ensamblaje del parche externo se llevará a cabo de acuerdo a

los resultados de la selección de los materiales para ello designados. Se

tomarán en cuenta aspectos como:

▫ Compatibilidad con la formulación. Tamaño y formas manejables.

4. Evaluaciones.

▫ Estabilidad de Formulación (Física: formación de grumos,

separación de los componentes, exudado del principio

activo, etc.).

▫ Resistencia del Producto Ensamblado a Temperatura y Humedad

(El producto será sometido a pruebas de resistencia en

ambientes con distintas temperaturas y presencia de

humedad).

▫ Resistencia al Efecto del Movimiento (El producto se someterá a

la acción del movimiento y se registrarán datos de

deformidad del producto).

▫ Evaluación de la Liberación del Principio Activo (Se determinará la

liberación del principio activo de manera indirecta por CG

y/o HPLC en las distintas condiciones indicadas

anteriormente).

▫ Pruebas de Efecto Repelente en Campo y Laboratorio (Se

evaluará el porcentaje de repelencia mediante la

innovación de un olfatómetro recomendado por la AMCA

(American Mosquito Controller Association). Para las

pruebas de campo con el producto terminado se pretende

emplear una muestra de voluntarios que sea susceptible a

la agresión por mosquitos.

5. Elegancia del Producto.

Se implementará la elegancia del producto (Modern Pharmaceutics, 2002),

adicionando características que aporten originalidad al producto, tale como:

• Adición de Aroma y Color. Diseñar Formas Atractivas.

RESULTADOS: 1.-Selección de Materiales.

Se llevó a cabo la selección de materiales para el diseño y ensamblaje del

dispositivo y el soporte eligiendo los siguientes en base a su compatibilidad con la

formulación:

▫ Soportes: Papel con adhesivo y plástico con adhesivo.

▫ Textiles: De fomey, plástico, telas de algodón, tela sintética.

2.-Formulación.

Se elaboró la formulación siguiendo las indicaciones de Banker y Rhodes

(Modern Pharmaceutics, 2002), usando como materias primas:

▫ Carbopol 10% en EOH al 70%

▫ Glicerina 5%

▫ Citronela 5%, Limoneno 5% y Eugenol 5%

3.-Diseño y Ensamblaje del Parche Externo.

Se usaron los materiales elegidos en el primer punto:

▫ Compatibilidad con la formulación.

Característica a observar Temp. 25ºC Temp. 35ºC Temp. 40ºC

Resistencia del ensamblado (modo visual) + + +

Olor (pérdida) - + +

Degradación de los materiales - - -

Daño a la tela donde está sujeto el parche - - -

+ ocurre cambio a la temperatura indicada

- no ocurre cambio a la

temperatura indicada

Diámetro del dispositivo=3cm Altura del dispositivo=0.5cm

4.-Evaluaciones.

AAddhheessiivvoo ddoobbllee ccaarraa

SSooppoorrttee ddee ppaappeell

AAddhheessiivvoo ddeell

ssooppoorrttee

DDiissppoossiittiivvoo ccoonn eell pprriinncciippiioo aaccttiivvoo

LLáámmiinnaa ddeeccoorraattiivvaa

AAddhheessiivvoo ddoobbllee ccaarraa

▫ Se ha implementado la técnica para extraer y cuantificar la

Liberación del Principio Activo por HPLC usando fase

móvil= MeOH:H2O (80:20) con flujo=0.8mL/min y detector

de UV

▫ Se comenzaron las Pruebas de Efecto Repelente en Laboratorio

con ayuda del olfatómetro recomendado por la American

Mosquito Controller Association y una muestra de

mosquitos Aedes aegypti.

0102030405060708090

100

% Mosquitos repelidos

1 2 3 4 5 6 7 8

Tiempo (hrs)

Comparación de % Repelencia

Citronela

Limoneno

Citronela + Limoneno

5.-Elegancia del Producto.

Se ha comenzado a probar la adición de otros aromas (canela, menta) y

colorantes (amarillo 6, azul 1 y rojo 40) para hacer atractiva la presentación.

Las formas decorativas que se han diseñado hasta ahora son: ovalada (que

cubre todo el gel), balón (la cual puede contener mayor cantidad de la fórmula)

y flor.

CONCLUSIONES: 1.-El uso combinado de aceites esenciales de citronela y limoneno presentan alto

índice de repelencia contra mosquitos Aedes aegypti en pruebas de laboratorio.

2.-El tiempo de duración del efecto repelente de la formulación con los aceites

esenciales de citronela y limoneno es mayor a 8 horas.

3.-Con el uso de Cromatografía de Líquidos de Alta Resolución (HPLC) se

obtienen resultados válidos para la identificación y cuantificación de los principios

activos.

BIBLIOGRAIA: 1. Banker, G. and Rhodes, C.- “Modern Pharmaceutics”.- Editorial Marcel and

Dekker.- 4th.- 2002.- NY.- pág. 1-838. 2. Do-Hyoung, Kim et al. “Repellent Activity of Constituents Identified in

Foeniculum vulgare Fruit against Aedes aegypti (Diptera: Culicidae)”.- 2002.- Journal of Agricultural and Food Chemistry.- Vol. 50, pág. 6993-6996.

3. Espinoza-Gómez, F. et al.- “Transmisión interepidémica del dengue en la Ciudad de Colima, México”.- 2003.- Salud Pública.- Vol. 45.- pág. 365-370.

4. Goodman and Gilman, et al.- “Las Bases Farmacológicas de la Terapéutica”.- Editorial McGraw-Hill.- 10ª edición.- 2001.- pág. 1073-1088.

5. Ken, K. et al.- “Citronella as an Insect Repellent in Food Packaning”.- 2005.- Journal of Agricultural and Food Chemistry.- Vol. 53, pág. 4633-4636.

6. Koul, O. et al.- “Antifeedant Effects of the Limonoids from Entandrophragma candolei (Meliaceae) on the Gram Pod Borer, Helicoverpa armigera (Lepidoptera: Noctuidae)”.- 2003.- Journal of Agricultural and Food Chemistry.- Vol. 51, pág. 7271-7275.

7. Mazzafera, P..- “Efeito alelopático do extrato alcoólico do cravo-da-índia e eugenol”.- 2003.- Revista Brasil Bot..- Vol. 26.- pág. 231-238.

8. Oyama-Okubo, N. et al.- “Emisión Mechanism of Floral Scent in Petunia axillaris”.- 2005.- Journal Biosci. Biotechnol. Biochem..- Vol. 69.- pág. 773-777.

9. Pérez-Pacheco, R. et al.- “ Toxicidad de aceites, esencias y extractos vegetales en larvas de mosquitos Culex quinquefasciatus Say (Díptera: Culicidae)”.- 2004.- Acta Zoológica Mexicana.- Vol. 20.- pág. 141-152.

10. Rojas, E. et al.- “Protección personal con un repelente natural contra Lutzomyia youngi, vector de Leishmaniasis cutánea urbana en Venezuela”.- 1990.- Revista Talleres.- Vol. 6.- pág. 161.

11. Rojas, E..- “Extracción y Rendimiento de aceite esencial de hojas de Citrus medica con uso para la protección personal contra mosquitos transmisores”.- 1999.- Revista Talleres.- Vol. 6.- pág. 164-178.

12. Torres-Estrada, José Luis et al.- “Señales físico químicas involucradas en la búsqueda de hospederos y en la inducción de picadura por mosquitos”.- 2003.- Salud pública de México.- Vol. 45, no. 6.- pág. 497-505.

13. Xiuli, Z. el al.- “Sensitive Liquid Chromatographic Assay for the Simultaneus Determination of Ibuprofen and its Prodrug, Ibuprofen Eugenol Ester, in Rat Plasma”.- 2005.- Yokugaku Zasshi.- Journal of The Pharmaceutical Society of Japan.- Vol. 125.- pág. 733-737.

REVISTA SALUD PUBLICA Y NUTRICIÓN Edición Especial No. 11-2006 II Congreso de Ciencias Farmacéuticas de la Conferencia Hispanoamericana de Facultades de

Farmacia (COHIFFA) y el VIII Congreso Regional de Químicos Fármaco Biólogos ESTUDIO FARMACOEPIDEMIOLÓGICO EN EL USO DE ANTIINFLAMATORIOS NO ESTEROIDES Y EL RIESGO DE PRESENTAR REACCIONES ADVERSAS EN EL SISTEMA GASTROINTESTINAL EN PACIENTES DEL HOSPITAL GENERAL DE ZONA NO. 01 “DR. ABRAHAM AZAR FARAH” DEL INSTITUTO MEXICANO DEL SEGURO SOCIAL, CAMPECHE Autor: Sarmiento Solís, D.; Uc Encalada, M. Universidad Autónoma de Campeche. Facultad de Ciencias Químico Biológicas. Centro de Información de Medicamentos. Av. Agustín Melgar S/N entre Juan de la Barrera y calle 20 col. Buena Vista CP. 24030, tel.01 9818119800 ext. 73005 y fax 73099. qfbdiasar@yahoo.com.mx, mirnaruc@mail.uacam.mx OBJETIVOS

Identificar las reacciones adversas a medicamentos (RAMs) que afectan al tracto

gastrointestinal provocadas por los antiinflamatorios no esteroides (AINEs).

1. Conocer la incidencia de las RAMs gastrointestinales provocadas por los AINEs.

2. Identificar el medicamento perteneciente al grupo de los AINE que provoca más

reacciones adversas en el tracto gastrointestinal.

3. Establecer los riesgos relativos (RR) y atribuibles (RA) que representa el uso de

estos medicamentos para desarrollar reacciones adversas en el tracto

gastrointestinal.

4. Identificar factores de riesgo que condicionan al paciente a presentar la RAM.

ANTECEDENTES

Los AINEs son medicamentos muy prescritos, aproximadamente el 20% de

las personas mayores de 65 años los toman. Todos los AINEs pueden causar

graves efectos gastrointestinales y el riesgo aumenta con la dosis, pero varía entre

un AINE y otro. Se considera que hasta el 50% de los pacientes experimentan

nausea o dispepsia. Úlceras endoscópicamente detectables se han documentado

en el 40% de los pacientes que toman AINEs habitualmente, sin embargo, más del

85% de las mismas no tendrán manifestaciones clínicas. Lamentablemente, la

presencia de síntomas dispépsicos se correlacionan de forma insatisfactoria con

las complicaciones severas (hemorragia digestiva, perforación y muerte). El riesgo

individual de desarrollar complicaciones graves es bajo, pero dado su extenso uso,

constituye un grave problema médico y social. (1,2)

METODOLOGÍA

Se empleó un estudio de cohorte cerrado y retrospectivo, en pacientes

hospitalizados de ambos géneros y todas las edades, en el HGZ 01 “Dr Abraham

Azar Farah” del Instituto Mexicano del Seguro Social del estado de Campeche.

Comprendió del mes de mayo a noviembre del 2005.

Se comparó a un grupo o “cohorte” de pacientes expuestos a estos

medicamentos con otro grupo de no expuestos. Se analizó el desenlace: la

presencia de alguna reacción adversa, en la primera cohorte, y de algún evento

gastrointestinal, en la segunda. Se obtuvieron los datos necesarios de la entrevista

a los pacientes y de su historia clínica, en la cual se incluían las pruebas de

laboratorio, estudios de endoscopía, exploración física, antecedentes patológicos,

etc., así como el diagnóstico establecido por el médico.

Para determinar el tamaño de muestra en cada una de las cohortes se utilizó el

programa estadístico Epidat 3.1. La cohorte de expuestos fue de 169 pacientes y

la de no expuestos de 32.

Los resultados se analizaron en el programa Epidat 3.1 mediante tablas de

contingencia 2x2. Al utilizar este programa permitió estimar en forma directa

medidas de frecuencia (incidencia acumulada), medidas de asociación o

comparación (riesgo relativo y riesgo atribuible), y la Ji-cuadrada (χ2). Las RAMs

se clasificaron dependiendo de su severidad y se analizaron en base al algoritmo

estandarizado de Naranjo para la evaluación de la causalidad.

RESULTADOS

Las RAMs presentadas en los pacientes expuestos fueron en un 37.93% (11)

sangrados de tubo digestivo alto (STDA), 34.48% (10) ardor gástrico, 24.13% (7)

gastritis y 3.44% (1) úlcera péptica.

De los 169 pacientes expuestos a los AINEs, 29 presentaron RAM; y de los 32

pacientes no expuestos, 11 presentaron manifestaciones clínicas relacionadas con

el tracto gastrointestinal. La incidencia acumulada de la cohorte de expuestos es

del 17% y la cohorte de los no expuestos presentó una incidencia acumulada del

34%.

Se presentaron RAMs con severidades moderadas en un 42% (12) de los casos,

graves en un 38% (11), leves en un 17% (5) y un caso de muerte relacionada con

el medicamento (3%), en la cual, la reacción fue un STDA.

De acuerdo a la causalidad, un 55% (16) fueron probables, 38% (11) probadas,

7% (2) posibles y ninguna dudosa.

El diclofenaco, con el 24.13% de los casos (7), y el naproxeno, con el 20.68% (6),

fueron los medicamentos que provocaron más reacciones.

Figura 1. Duración de la exposición a los AINEs involucrados en las RAMs

12

9

32 2 1

02468

101214

Menos de 1año

2-5 años 6-9 años 10-13 años 14-17 años 18-20 años

Figura 2. Desenlace según género

64

13

76

820

6 9 50

1020304050607080

Expuestos No expuestos Expuestos No expuestos

Femenino Masculino

No presentaron evento

Presentaron evento

De acuerdo a la enfermedad por la cual se prescribió el medicamento, en un 39%

(11) fue debido a dolor lumbar (postoperación, hernia discal, traumatismos) y en

un 22% (6) el motivo fue artritis reumatoide, seguida de cefalea en un 10% (3) y

osteoartritis degenerativa con el 7% (2).

El intervalo de tiempo de

dosificación en donde se

presentaron la mayoría de

las RAMs fue desde menos

de un año hasta los 5 años

de dosificación (Figura 1).

Cuadro 1. Reacción adversa de acuerdo al tiempo de exposición. Duración de la exposición

Ardor gástrico Gastritis Úlcera péptica STDA

Menos de 1 año 8 0 0 4 2-5 años 2 3 0 4 6-9 años 0 1 0 2

10-13 años 0 1 1 0 14-17 años 0 2 0 0 18-20 años 0 0 0 1

En la cohorte de pacientes expuestos a los AINEs, el 28.99% ingería alcohol, y en

el grupo de no expuestos, el 46.87%. El 56.21% de los pacientes expuestos y el

43.75% de los no expuestos consumía café. Dentro del grupo de expuestos el

14.20% fumaba y de los no expuestos el 9.37% presentaba este hábito.

En el grupo de

expuestos a los AINEs,

de las 29 RAMs que se

presentaron, el 68.96%

(20) de los pacientes

Figura 3. Edades de pacientes expuestos y no expuestos que presentaron algún evento

1

3

1

67

2

9

001

01

6

2

01

0

2

4

6

8

10

20-29 30-39 40-49 50-59 60-69 70-79 80-89 90 omás

ExpuestosNo expuestos

eran mujeres. Dentro de la

cohorte de no expuestos a

los medicamentos, los

pacientes que presentaron

algún evento en el tracto

gastrointestinal, el 54.54%

(6) eran mujeres (Figura 2).

Los pacientes con edades entre 50-59 años presentaron el 20.68% (6) de las

RAMs; los de 60-69 años, el 24.13% (7) y los de 80-89 años, el 31.03% (9).

(Figura 3).

Cuadro 2. Frecuencias de los tipos de RAMs de acuerdo a las edades Edad (años)

Ardor gástrico Gastritis Úlcera péptica STDA

≤ 44 4 1 0 0 45-54 2 1 0 0 55-64 2 0 0 2 ≥ 65 2 5 1 9

El 9.46% de los pacientes expuestos y el 12.5% de lo no expuestos utilizaron

antiulcerosos.

Cuadro 3. Análisis estadístico de las variables Variable RR (IC 95%) RA (IC 95%) χ2calcula-

da Valor

p χ2tabla (valor p

0.05) Exposición a los AINEs 0.49 (0.27-0.89) 0.17 (0.34-0.00) 3.98 0.04 3.841 Género Hombres 0.44 (0.21-0.91) 0.13 (0.24-0.02) 430 0.03 3.841 Mujeres 2.24 (1.08-4.65) 0.13 (0.02-0.24) 430 0.03 3.841 Edad (años) ≤ 44 0.95 (0.12-7.10) 0.00 (0.25-0.24) 0.29 0.58 3.841 45-54 0.60 (0.07-4.65) 0.08 (0.45-0.29) 0.05 0.81 3.841 55-64 0.20 (0.07-0.59) 0.59 (1.04-0.14) 3.95 0.04 3.841 ≥ 65 0.55 (0.26-1.18) 0.17 (0.44-0.08) 1.23 0.26 3.841 Medicamentos antiulcerosos en la cohorte de expuestos

1.99 (0.88-4.49) 0.15(0.07-0.38) 1.49 0.22 3.841

Duración de la exposición a los AINEs (años) Menos o igual a 5 0.35 (0.18-0.68) 0.25 (0.48-0.03) 6.60 0.01 3.841

6-13 1.86 (0.81-4.24) 0.13 (0.08-0.36) 1.15 0.28 3.841 14-20 6.38 (4.48-9.08) 0.84 (0.78-0.89) 9.40 0.00 3.841 Alcohol 0.48 (0.18-1.27) 0.17(0.43-0.08) 1.13 0.28 3.841 Café 0.58 (0.23-1.51) 0.11(0.36-0.13) 0.47 0.49 3.841 Tabaco 0.50 (0.07-3.12) 0.16(0.72-0.38) 0.00 0.93 3.841

RR=riesgo relativo, RA=riesgo atribuible, IC=intervalo de confianza, χ2=Ji-cuadrada CONCLUSIONES

Las RAMs digestivas más frecuentes fueron los STDA.(3) La incidencia de

aparición de reacciones adversas en el tracto gastrointestinal debido a los AINEs,

es de un 17%. Los AINEs involucrados en la mayoría de las RAMs fueron el

diclofenaco, perteneciente al grupo de los ácidos heteroarilacéticos y el

naproxeno, de los ácidos arilpropiónicos. (4) Se obtuvo que los pacientes expuestos

a los AINEs tienen un riesgo menor de presentar alguna afección del tracto

gastrointestinal, pero cuando se presentan son de severidades moderadas a

graves. El riesgo de presentar alguna RAM es mayor en: mujeres, pacientes

mayores de 55 años de edad y en exposiciones a los AINEs menores de 5 años,

en la cual se incrementa la frecuencia de aparición, y después de los 14 años de

consumo, en la cual aumenta la gravedad de las reacciones(5,6).

La influencia del alcohol, café y tabaco no proporcionó alguna relación

significativa en la aparición de las lesiones gástricas.

BIBLIOGRAFÍA

1. Baos Vicente, V. Los efectos adversos más frecuentes de los 20 principios activos más consumidos en el SNS durante 2000. Información terapéutica del Sistema Nacional de Salud 2001; 25 (6): 161-168.

2. Drug and Therapeutics Bulletin. ¿Son el rofecoxib y el celecoxib AINE más inocuos? Medicamentos y Terapéutica, versión en español, 2001; (20) 2: 1-7.

3. Almond, S. Presentación de las reacciones adversas a los medicamentos como urgencias médicas. Medicamentos y Terapéutica, versión en español, 2001; (20) 2: 32-36.

4. Jiménez, López G.; Debesa García, F. et al. Comportamiento de las reacciones adversas a los analgésicos y antiinflamatorios no esteroideos notificadas por el Sistema Cubano de Farmacovigilancia en el 2001. Revista Cubana de Farmacia 2003; (37) 3. En red. Disponible en: http://www.bvs.sld.cu/revistas/far/vol37_3_03/far05303.htm

5. Hierro González, A.; Jiménez Sánchez, N. Sangrado digestivo alto. Comportamiento clínico en un grupo de pacientes. Revista cubana de medicina, 2003; (42). En red. Disponible en: http://www.bvs.sld.cu/revistas/med/vol42_4_03/med02403.htm

6. MacDonald, T. M.; Morant, S. V.; et al. Asociación entre toxicidad del tracto gastrointestinal superior y el uso continuado de AINEs: estudios de cohorte. BMJ Edición Latinoamericana, 1998; (6):111-117.