Ingeniería Genética

M.C. Eddy Luz Cab Barrera

Marizza Gándara García Alejandra Guardado Méndez Grupo: 453

Equipo qPCR y PCR

PCRTermocicladoresEs el aparato que permite llevar a cabo de forma

automática y reproducible la sucesión de ciclos de temperatura necesarios para la PCR.

Características principales

Bloque térmico

• Cuyo calentamiento y enfriamiento se produce a gran velocidad

Tubos

• 0.2 ml aunque aún existen para 0.5 ml.

Rango de temperaturas

• 4°C a 110°C, rango habitual 15°C a 95°C

Tapa térmica

• Evitar la evaporación de la muestra, contacta totalmente con la tapa del tubo.

Software

• programación de tiempos y temperaturas

Mastercycler nexus gradien

Mastercycler nexus

Mastercycler nexus eco

Bloque térmico Aluminio

Capacidad de muestras 96 tubos PCR de 0,2 mL, 1 placa PCR de 8 × 12 ó de hasta 77 tubos PCR de 0,5 mL

Rango de temperatura del bloque térmico

4–99 °C

Modos de calentamiento

rápido, estándar, seguro

Rango de temperatura de la tapa

37–110 °C

Bloque con gradiente de temperatura

12 filas - -

Rango del gradiente 1–20 °C - -

Rango de temperatura del gradiente

30–99 °C - -

Dimensiones (An × Pr × Al)

25 × 41,2 × 32,1 cm

Peso 10,9 kg 10,9 kg 10,9 kg

Es la técnica más sensible para la detección de ácidos nucleicos (ADN y RNA). La PCRq es una técnica que combina la amplificación y la detección en un mismo paso al correlacionar, el producto de la PCR de cada uno de los ciclos con una señal de intensidad de fluorescencia.

Alta especificidad

Amplio rango de detección

Rapidez en visualización del

producto

Reacción de cadena polimerasa en tiempo Real PCRq

No requiere electroforesis posterior. Pueden detectar diferencias de una sola copia Alta sensibilidad

Reactivos de la PCR punto final +

un fluoróforo

Termociclador acoplado a sistema

óptico

Equipos PCRq

Fluorómetro Hardware Software

Equipos para Realizar la PCR en tiempo Real Mantener una temperatura uniforme en todas las muestras

• Desnaturalización DNA molde• Alineamiento de oligonucleótidos• Síntesis o elongación

Sistema fluorométrico• Fuente de energía para excitar a los fluoróforos

Lámpara (Tungsteno) Resistencia (diodo emisor de luz) Láser

• Sistema de detección Filtros, multiplicadores y fotodetectores Fluoróforos

Con afinidad por el DNA Sondas específicas para fragmentos de DNA

• Sondas de hidrólisis • Sondas de Hibridación • Sondas de Horquillas

FiltrosEspectro

(nm)

Espectro de

emisión

Fluoróforos 520 nmFAMSYBRGreenDABCYL

550 nmCY-3JOEVIC

580 nm

TAMRA

610 nm

ROX

650 nm

CY-5

Figura. 1. Espectro de emisión de los fluoróforos comúnmente usados en la PCR en tiempo real. En la figura se observan los espectros de emisión de diversos fluoróforos a diferentes longitudes de onda. Las letras A a la E representan las longitudes de onda empleadas por diferentes filtros para detectar el grupo de fluoróforos listados en la parte inferior.

Roche Life ScienceLightCycler 2.0

EL sistema LightCycler 2.0 permite analizar de forma rápida y Reproducible muestras, posibilitando la elección de nuevos parámetros.

Varios formatos de detección Distintos volúmenes de reacción Detección a 6 diferentes longitudes de onda (530-710nm) Tecnología de 16 bits (excelente señal y captación rápida) Gran sensibilidad Señal de detección por fibras de vidrio

Utiliza resistencia

LightCycler ® Nano Real-Time PCR System - Ultra-compacto, silencioso y elegante.

El Instrumento LightCycler ® Nano amplifica de manera rápida y precisa hasta 32 muestras en tiras de 8 tubos, proporcionando la máxima resolución térmica y reproducibilidad acostumbrada por Roche en sus instrumentos de PCR en tiempo real:

Resultados de alta calidad en RT-qPCR, genotipado, y HRM Asegura una Amplificación y unas curvas de fusión precisas y

reproducibles con marcajes y reactivos dedicados. ensayos pre-validados Amplio espectro de marcajes fluorescentes (510-750 nm). software de sencillo (Windows o Mac OS, o trabaje

simplemente conectando una unidad flash USB al equipo

El modelo 7900HT ABI Prism de Applied Biosystems utiliza láser

utilizan una lámpara como fuente de excitación, se en-cuentran los equipos ABIPrism 7000 o el modelo 7500 de Applied Biosystem, los modelos Mx4000 y Mx3000P de Stratagene y el modelo iCycler iQ de Bio-Rad