Estudios sobre rizogénesis en ‘Guayabo del país’ LB/Programa... · Taller Frutos Nativos,...

Estudios sobre rizogénesis en

‘Guayabo del país’

Taller Frutos Nativos, 2015ANII – FMV 6320 1

Facultad de Agronomía

Ing. Agr. Mag. Beatriz Vignale

(EEFAS)

Ing. Agr. Evelin Pechi Midón

Bach. José Pedro Scaltritti

Participantes

INIA – “Las Brujas”

Ing. Agr. MSc. Danilo Cabrera

Ing. Agr. Dra. Alicia Castillo

Taller Frutos Nativos, 2015ANII – FMV 6320

Bach. José Pedro Scaltritti

Lic. Mag. Susana Rodriguez

Dra. Gabriela Speroni

Ing. Agr. PhD. Pablo Speranza

Ing. Agr. Mag. Silvia Ross

2

Objetivo general

Ajustar metodologías de propagación vegetativa para 'Guayabo del país', a partir del estudio de las bases anatómicas y fisiológicas del proceso de diferenciación

de raíces adventicias en esta especie, identificando marcadores de enraizamiento que permitan desarrollar un protocolo eficiente

Objetivos específicos

Taller Frutos Nativos, 2015

�Evaluar la capacidad de enraizamiento de los materiales preseleccionados

�Identificar las fases del proceso, reconociendo factores promotores o inhibidores y en que fase actúan.

�Desarrollar un protocolo para propagar vegetativamente esta especie demanera eficiente


Evaluación de la capacidad de enraizamiento de los materiales preseleccionados

Factorial 9 x 2

9 genotipos

2 tratamientos:

2500 ppm AIB


CondicionesHR: 90%

T basal: 25ºC

2500 ppm AIB

Sin hormonas

Resultados del ensayo (Anava efecto clon)

Menor enraizamiento


Menor enraizamiento

Mayor enraizamiento

5

Ensayo estaquillado con genotipos contrastantes

Temperatura basal: 25ºC

HR: 90%

Sustrato: perlita

2500 ppm AIB

Genotipos contrastantes (TF y C-74)

Factorial: 2 x 2


Muestreos:

•Cortes anatómicos

•Determinaciones enzimáticas

6

Enraizamiento materiales contrastantes

40,0

50,0

60,0

% e

nrai

zam

ient

o


0,0

10,0

20,0

30,0

C74 TF

% e

nrai

zam

ient

o

C/AUX

S/H

7

Promedio raíces/estaca

1,50

2,00

2,50

nº r

aíce

s/es

taca

C/AUX

8

0,00

0,50

1,00

C74 TF

nº r

aíce

s/es

taca

C/AUX

S/H


Largo de raíces

5,00

6,00

7,00

8,00

Long

itud

prom

edio

(cm

)

C/AUX

9

0,00

1,00

2,00

3,00

4,00

C74 TF

Long

itud

prom

edio

(cm

)

C/AUX

S/H


10Taller Frutos Nativos, 2015ANII – FMV 6320


Planta de estaca con flor, al año

Estaca enraizada y aclimatada

11

Proteína

0,200

0,250

0,300

0,350

0,400

Abs

orba

ncia TF S/H

TF C/AUX

B S/H

B C/AUX

Cuantificación de proteínas totales.


-0,100

-0,050

0,000

0,050

0,100

0,150

0 7 14 19 28 34 39

Tiempo (d)

Abs

orba

ncia

TF C/AUX

C74 S/H

C74 C/AUX

B C/AUX

A S/H

A C/AUX

12

A = TF (no enraiza)B = C-74 (enraiza)

Formación de canales secretores

Caracterización anatómica


Formación de canales secretores

Zona cambial, xilema, floema y floema interno

Presencia de drusas

13


Presencia de esclerénquima TF

Presencia de esclerénquima (27-1)

14

Evaluación de multiplicación y enraizamiento in vitro.

Multiplicación

15

IntroducciónMedio WPM + PVP

MultiplicaciónMedio WPM + CK

IBA+PG IBA PG SNP CONTROLEnraizamiento


3

4

5

6

BAP 2Ip Z CONTROL

Tasa

mu

ltip

lica

ció

n (

ye

ma

s/e

xp

lan

to)

Efecto de las citoquininas en la proliferación de yemas


0

1

2

3

A B

GenotypeGenotipo

Tasa

mu

ltip

lica

ció

n (

ye

ma

s/e

xp

lan

to)

16

A = C-74 B = 27-1

% Enraizamiento Número de raíces/microestaca Tratamiento de

enraizamiento A B A B

Control 69 ± 19.49 a 15.00 ± 7.07 a 2.17 ± 0.70 a 2.00 ± 0.00 b

PG 60 ± 33.17 a 0 ± 0.00 a 1.68 ± 0.58 a 0 ± 0.00 a

Resultados de enraizamiento in vitro


AIB 58 ± 34.21 a 62.50 ± 3.54 b 1.85 ± 0.74 a 1.00 ± 1.41 ab

SNP 60 ± 23.45 a 5.00 ± 7.07 a 2.24 ± 0.78 a 0.50 ± 0.71 a

AIB + PG 68 ± 23.87 a 20.00 ± 28.25 a 2.02 ± 0.26 a 1.00 ± 1.41 ab

17

18Taller Frutos Nativos, 2015ANII – FMV 6320

Plantas de 2 años Planta de 1 año

Búsqueda de genes asociados a enraizamiento

Identificación de genes de enraizamiento en otras especies

Diseño de primers

“Levantamiento” a partir de ADN de A. sellowiana


Secuencias editadas

Diseño de primers para qRT-PCR

Análisis de la expresión de genes en materiales contrastantes

19

Genes que se estudiaron

TIR

PIN

SHR

SCR

NIA

ACT2

EF2

UBI

TUA

H2B

A partir de secuencias conocidas

(Arabidopsis; Eucalyptus).


Genes que amplificaron bien y quedaron seleccionados

PIN (1,2)

SHR (2)

TIR (2)

H2B

EF2

UBI

Enraizamiento Constitutivos

20

MPM 10 10 10Q-92 Q-92 Q-92B B B

500500

300 300

PRUEBAS EN A. sellowiana

10 Q92 B 10 Q92 BMPM 10 10 10Q-92 Q-92 Q-92B B B

500


1 PIN-1MIX 1 MIX 2 MIX 3

100

EF 2

Tamaño Esperado

102 pb

H2B

200

Tamaño Esperado

145pb

1 PIN-1

300

MIX 1 MIX 2 MIX 3

3 Repeticiones para cada primer y ADN.

21

PRUEBAS EN A. sellowiana

MPM 10 Q-92 B 10 Q-92 B 10 Q-92 B


2 -SHR

500

400

MIX 1 MIX 2 MIX 3

22

Conclusiones

El genotipo es la principal determinante de la capacidad de enraizamiento

El único tratamiento de enraizamiento que tuvo un efecto positivo in vitro fue el

agregado de auxina (AIB)

No se encontró el efecto esperado con el agregado de floroglucinol o de

nitroprusiato de sodio en los clones evaluados


nitroprusiato de sodio en los clones evaluados

Se identificó en A. sellowiana la presencia de genes que en otras especies están

asociados a la diferenciación de raíces adventicias. Actualmente se estudian los

niveles de expresión de estos genes en materiales contrastantes.

23

Muchas gracias


Muchas gracias

24

Estudios sobre rizogénesis en ‘Guayabo del país’ LB/Programa... · Taller Frutos Nativos,...

Documents

Transcript of Estudios sobre rizogénesis en ‘Guayabo del país’ LB/Programa... · Taller Frutos Nativos,...