EVALUACIÓN DEL EFECTO LARVICIDA DEL EXTRACTO …
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I EVALUACIÓN DEL EFECTO LARVICIDA DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Citrus latifolia (limón o lima ácida Tahití) SOBRE LARVAS DE CUARTO ESTADIO DE Aedes aegypti EN CONDICIONES DE LABORATORIO MIREYA AVILA TEUTA MICHELL JULIETH RODRIGUEZ BOLAÑOS UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES TECNOLOGÍA EN SANEAMIENTO AMBIENTAL BOGOTÁ D.C. 2020
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I
EVALUACIÓN DEL EFECTO LARVICIDA DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE
Citrus latifolia (limón o lima ácida Tahití) SOBRE LARVAS DE CUARTO ESTADIO
DE Aedes aegypti EN CONDICIONES DE LABORATORIO
MIREYA AVILA TEUTA
MICHELL JULIETH RODRIGUEZ BOLAÑOS
UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS
FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES
TECNOLOGÍA EN SANEAMIENTO AMBIENTAL
BOGOTÁ D.C. 2020
II
EVALUACIÓN DEL EFECTO LARVICIDA DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE
Citrus latifolia (limón o lima ácida Tahití) SOBRE LARVAS DE CUARTO ESTADIO
DE Aedes aegypti EN CONDICIONES DE LABORATORIO
Presentado por:
MIREYA AVILA TEUTA (20162085254)
MICHELL JULIETH RODRIGUEZ BOLAÑOS (20162085948)
PROYECTO DE GRADO EN MODALIDAD DE INVESTIGACIÓN
PRESENTADO COMO REQUISITO PARCIAL PARA OPTAR POR EL TÍTULO
DE TECNÓLOGOS EN SANEAMIENTO AMBIENTAL
DIRECTOR:
DIEGO TOMAS CORRADINE MORA
MÉDICO VETERINARIO – MSc. SALUD PÚBLICA
UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS
FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES
TECNOLOGÍA EN SANEAMIENTO AMBIENTAL
BOGOTÁ D.C. 2020
III
NOTA DE ACEPTACIÓN
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_______________________________
DIRECTOR
_______________________________
JURADO
BOGOTÁ D.C. _________________________
IV
DEDICATORIA Y AGRADECIMIENTOS
Agradezco a mis padres que me enseñaron a ver más allá, a soñar y alzar mi vuelo según
el latir de mi corazón, gracias a ellos y a las personas que en el camino contribuyeron con su
existencia para que esta estación del camino se construyera, es como el atardecer que
esperamos con ansias que salga y que nos marca el momento de volver a disfrutar de la noche,
el comenzar de una nueva ilusión.
También esta noche, Tierra, permaneciste firme.
Y ahora renaces de nuevo a mí alrededor.
Y alientas otra vez en mí
La aspiración de luchar sin descanso
Por una altísima existencia. Fausto
Por Mireya Ávila y Michell Rodríguez
V
TABLA DE CONTENIDO
ÍNDICE DE TABLAS .................................................................................................... VII
ÍNDICE DE FIGURAS .................................................................................................. VIII
RESUMEN ...................................................................................................................... IX
ABSTRACT .................................................................................................................... XI
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................. 1
1. OBJETIVOS ............................................................................................................... 4
1.1. Objetivo general .................................................................................................. 4
1.2. Objetivos específicos ........................................................................................... 4
2. JUSTIFICACIÓN ....................................................................................................... 5
3. MARCO DE REFERENCIA ...................................................................................... 8
3.1 Generalidades del mosquito Aedes aegypti ................................................................... 8
3.1.1 Morfología ......................................................................................................... 9
3.1.2 Clasificación taxonómica ................................................................................. 11
3.1.3. Ciclo biológico ................................................................................................ 11
3.1.4 Hábitos ............................................................................................................. 16
3.1.5. Importancia salud pública ................................................................................ 18
3.1.6. Enfermedades Transmitidas por Aedes aegypti ................................................ 19
3.1.7. Control químico .............................................................................................. 22
3.1.8. Control biológico ............................................................................................ 23
3.2. Generalidades Citrus latifolia (limón o lima ácida Tahití) ...................................... 23
3.2.1. Clasificación botánica ..................................................................................... 24
3.2.2. Descripción botánica ....................................................................................... 25
3.2.3. Composición de la cáscara............................................................................... 25
3.2.4. Aceite esencial de Citrus latifolia .................................................................... 25
3.3 Antecedentes .......................................................................................................... 26
4. METODOLOGÍA ..................................................................................................... 30
4.1. Obtención de larvas de Aedes aegypti ................................................................ 30
4.2. Cría de larvas hasta estadio cuatro (4) de Aedes aegypti en condiciones de
laboratorio. ................................................................................................................... 31
VI
4.3. Producción del extracto etanólico de la cáscara de Citrus latifolia.......................... 31
4.4. Preparación de las concentraciones de extracto etanólico de Citrus latifolia ........... 34
4.5. Bioensayos ............................................................................................................ 35
4.6. Manejo de datos ..................................................................................................... 36
4.6.1. Abbott ............................................................................................................. 36
4.6.2. Probit .............................................................................................................. 37
4.6.3. ANOVA .......................................................................................................... 38
5. RESULTADOS ........................................................................................................ 39
5.1. Eficiencia del extracto etanólico de Citrus latifolia como larvicida a diferentes
concentraciones. ........................................................................................................... 39
5.2. Análisis estadístico ................................................................................................ 42
5.3. Análisis de Probit para el cálculo de las concentraciones letales CL50 y CL 90...... 46
5.4. Análisis de tiempo letal TL 50 y TL 90 a concentración de 500 ppm de Citrus
latifolia ......................................................................................................................... 47
5.5. Análisis de tiempo letal TL 50 y TL 90 a concentración de 700 ppm de Citrus
latifolia ......................................................................................................................... 48
5.6. Análisis ANOVA de un factor ............................................................................... 48
6. DISCUSIÓN DE RESULTADOS ............................................................................. 51
7. CONCLUSIONES .................................................................................................... 55
8. RECOMENDACIONES ........................................................................................... 56
9. BIBLIOGRAFÍA ...................................................................................................... 57
ANEXOS
VII
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla 1. Clasificación taxonómica de Aedes aegypti......................................................... 11
Tabla 2. Clasificación botánica Citrus latifolia ................................................................ 24
Tabla 3. Compuestos presentes en el aceite de Citrus latifolia ......................................... 26
Tabla 4. Porcentajees de mortalidad acumulada de larvas de Aedes aegypti corregida con la
formula abbott ................................................................................................................ 41
Tabla 5. Datos estadísticos mortalidad larvas de Aedes aegypti ....................................... 44
Tabla 6. Análisis estadístico ANOVA de un factor .......................................................... 49
VIII
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1. Mosquito Aedes aegypti ..................................................................................... 8
Figura 2. Aedes aegypti macho (izquierda) y hembra (derecha) ...................................... 10
Figura 3. Morfología Aedes aegypti................................................................................ 10
Figura 4. Ciclo biológico de Aedes aegypti ...................................................................... 12
Figura 5. Huevos Aedes aegypti ...................................................................................... 13
Figura 6. Partes de larva de Aedes aegypti ....................................................................... 14
Figura 7. Pupa de Aedes aegypti ...................................................................................... 15
Figura 8. Morfología Aedes aegypti................................................................................. 16
Figura 9. Hábitos urbanos Aedes aegypti ....................................................................... 17
Figura 10. Citrus latifolia (limón o lima ácida Tahití) .................................................... 24
Figura 11. Diagrama de metodología obtención de larvas Aedes aegypti ......................... 30
Figura 12. Diagrama de metodología crianza de larvas Aedes aegypti ............................ 31
Figura 13. Diagrama de metodología producción del extracto etanólico de la cáscara de
Citrus latifolia ................................................................................................................. 32
Figura 14. Montaje extractor Soxhlet obtención del extracto etanólico de la cáscara de
Citrus latifolia................................................................................................................. 33
Figura 15. Diagrama de metodología obtención del extracto etanólico de la cáscara de
Citrus latifolia…………………………………………………………………………….. 34
Figura 16. Diagrama metodología de preparación de concentraciones del extracto etanólico
de Citrus latifolia…………………………………………………………………………. 35
Figura 17. Ecuación de Abbott ........................................................................................ 37
Figura 18. Resultados de mortalidad a partir de las diferentes concentraciones de
bioensayos ...................................................................................................................... 40
Figura 19. Diagrama de caja y bigotes mortalidad final ................................................... 43
Figura 20. Prueba Probit para la concentración letal CL50 y CL90 ................................. 46
Figura 21. Análisis de tiempo letal TL 50 y TL 90 a concentración de 500 y 700 ppm del
extracto de Citrus latifolia .............................................................................................. 47
Figura 22. Dispersión ANOVA % mortalidad larvas Aedes aegypti ................................. 50
IX
RESUMEN
El dengue es una de las patologías infecciosas con mayor impacto en Colombia, la cual ha
aumentado en zonas urbanas y constituye un evento cuya vigilancia, prevención y control
revisten especial interés en salud pública en el que más de la mitad de la población en el
mundo está en riesgo. Esta y otras enfermedades son producidas por la transmisión del
agente biológico a través de la picadura del mosquito Aedes aegypti, este vector tiene una
facilidad de adaptación en los diferentes ambientes para su reproducción, este mosquito se
evidencia principalmente en lugares con nivel sociocultural bajo, de allí el interés de control
de profesionales en salud pública y el saneamiento básico.
Con el fin de controlar la población de Aedes aegypti en este estudio se propone aprovechar
el alto consumo de Citrus latifolia en Colombia generando grandes cantidades de cáscara
como desecho, la cual puede ser utilizada en la extracción del aceite esencial para la
elaboración del extracto etanólico con efecto larvicida y ser utilizado para disminuir la
población de Aedes aegypti, vector de diferentes enfermedades, siendo una opción efectiva en
el campo de salud pública y manejo de residuos sólidos.
En este estudio se evaluó el efecto larvicida del extracto etanólico de Citrus latifolia (limón
o lima ácida Tahití), para el control biológico de larvas en IV estadio de Aedes aegypti en
condiciones de laboratorio, en donde se obtuvo que el extracto etanólico de Citrus latifolia es
una alternativa favorable debido a que logra una letalidad del 97% en una muestra de 100
individuos a concentración de 700 ppm transcurridas 24 horas de exposición, y a una
concentración de 500 ppm tiene una letalidad del 56% en los individuos expuestos a la
X
sustancia, alcanza el tiempo letal del 50% a las 36.7 horas y el 90% a las 74,4 horas de entrar
en contacto el extracto Citrus latifolia con la muestra de Aedes aegypti. Al realizar el análisis
con unidades Probit se obtuvo que la concentración exacta para llegar a la CL50 de la muestra
en Aedes aegypti es de 513 ppm de la sustancia etanólica, y para lograr la CL90 se debe
someter los individuos a una concentración de 688 ppm, para lograr la efectividad del extracto
etanólico Citrus latifolia como larvicida.
Palabras clave: Citrus latifolia, mosquito Aedes aegypti, control biológico, aceite esencial,
larvicida.
XI
ABSTRACT
Dengue is one of the infectious diseases with the greatest impact in Colombia, which has
increased in urban areas and constitutes an event whose surveillance, prevention and control
are of special interest in public health in which more than half of the population in the world
is at risk. This and other diseases are produced by the transmission of the biological agent
through the bite of the Aedes aegypti mosquito, this vector has an ease of adaptation in
different environments for its reproduction, this mosquito is mainly evident in places with a
low sociocultural level, of there the interest of control of professionals in public health and
basic sanitation.
In order to control the population of Aedes aegypti, in this study it is proposed to take
advantage of the high consumption of Citrus latifolia in Colombia, which generates large
amounts of husk as waste, which can be used in the extraction of essential oil for the
preparation of the extract. ethanolic with larvicidal effect and be used to decrease the
population of Aedes aegypti, vector of different diseases, being an effective option in the field
of public health and solid waste management.
In this study, the larvicidal effect of the ethanolic extract of Citrus latifolia (lemon or
Tahiti acid lime) was evaluated, for the biological control of larvae in stage IV of Aedes
aegypti under laboratory conditions, where it was obtained that the ethanolic extract of Citrus
latifolia it is a favorable alternative because it achieves a lethality of 97% in a sample of 100
individuals at a concentration of 700 ppm after 24 hours of exposure, and at a concentration
of 500 ppm it has a lethality of 56% in individuals exposed to the substance, reaches the
XII
lethal time of 50% at 36.7 hours and 90% at 74.4 hours after Citrus latifolia extract comes
into contact with the Aedes aegypti sample. When performing the analysis with Probit units,
it was obtained that the exact concentration to reach the LC50 of the sample in Aedes aegypti
is 513 ppm of the ethanolic substance, and to achieve the CL90, individuals must be subjected
to a concentration of 688 ppm, to achieve the effectiveness of the ethanolic extract Citrus
latifolia as a larvicide.
Key words: Citrus latifolia, Aedes aegypti mosquito, biological control, essential oil,
larvicide.
1
INTRODUCCIÓN
El mosquito Aedes aegypti en Colombia vive en climas cálidos hasta los 2.200 m.s.n.m.,
especialmente en los valles de los ríos Magdalena y Cauca, Zona cafetera, Costa Atlántica y
Choco. Los criaderos de Aedes aegypti están situados muy cerca de la casa y su capacidad de
vuelo es muy reducida, por lo que es una especie intra y peridomiciliaria (Conde, 2003). Estos
mosquitos son vectores de varias enfermedades como dengue, fiebre amarilla, encefalitis equina,
zika, chicungunya y filariasis.
El dengue es una de las patologías infecciosas con mayor impacto en Colombia y constituye
un evento cuya vigilancia, prevención y control revisten especial interés en salud pública
(Ministerio de Salud, 2015). La Organización Mundial de la Salud considera que esta
enfermedad ha aumentado considerablemente en zonas urbanas, convirtiéndose en un problema
de salud pública en el que más de la mitad de la población en el mundo está en riesgo. Se
transmite a través de la picadura de un mosquito hembra del género Aedes infectado por alguno
de los cuatro virus del dengue (OMS, 2017); el virus posee 4 serotipos (DENV1, DENV2,
DENV3, DENV4), los cuales están circulando simultáneamente en nuestro país. Los serotipos
no desencadenan inmunidad cruzada, lo cual significa que una persona puede infectarse y
enfermar hasta 4 veces (Ministerio de Salud, 2015).
La epidemiología que presenta se debe principalmente a la intensa transmisión viral con
tendencia creciente, ciclos epidémicos cada vez más cortos, aumento en la frecuencia del dengue
hemorrágico, infestación por Aedes aegypti de más del 90% del territorio nacional situado por
debajo de los 2200 m.s.n.m. su comportamiento cíclico se ha caracterizado por picos epidémicos
2
cada tres o cuatro años relacionado con el reingreso de nuevos serotipos al país. La mortalidad
por dengue es evitable en el 98% de los casos y está estrechamente relacionada con la calidad
en la atención del paciente y la identificación precoz de los casos (Ministerio de Salud, 2015).
La fiebre de chikungunya es un problema de salud pública emergente en la Región de las
Américas. Desde que a finales del año 2013 la OPS/OMS reportó la confirmación de casos
de transmisión autóctona en la subregión del Caribe, hasta la fecha al menos 20 países han
confirmado transmisión (Ministerio de Salud, 2019), el virus del chikungunya es transmitido
por los mismos mosquitos, involucrados en la transmisión del dengue, la enfermedad puede ser
aguda, subaguda y crónica y se caracteriza por fiebre, cefalea, mialgia, artralgia, exantema
maculopapular acompañado por dolor en las articulaciones, la artralgia y la rigidez articular
puede persistir de forma intermitente durante varias semanas a meses. No hay cura para esta
enfermedad y el tratamiento se concentra en aliviar los síntomas. El principal factor de riesgo
para la expansión del chikungunya son los criaderos de mosquitos cerca a los lugares donde
viven las personas, al igual que otras enfermedades vectoriales (Ministerio de Salud, 2014).
Debido a la gran problemática que se ha desencadenado con el vector, distintas comunidades
a nivel mundial han debido aumentar campañas de prevención para disminuir los casos de
incidencia de estas enfermedades. Otra de las soluciones llevadas a cabo es la de implementar
larvicidas con el fin de interrumpir drásticamente el ciclo reproductivo del Aedes aegypti y así
evitar su prolongada reproducción. Es sabido que muchos larvicidas son tóxicos para los seres
humanos, animales y la naturaleza en general, es por eso por lo que se ha logrado producirlos a
base de elementos naturales que no son nocivos y tienen un alto nivel de efectividad.
3
El proyecto que se presenta pretende obtener un extracto natural de Citrus latifolia (limón o
lima ácida Tahití), con el fin de evaluar su efecto larvicida sobre las larvas de cuarto estadio del
mosquito Aedes aegypti, partiendo del potencial del compuesto químico presente en Citrus
latifolia (limón o lima ácida Tahití) el cual es el limoneno, una sustancia natural que se extrae
de los cítricos, es la sustancia que da olor característico a las naranjas y los limones. Pertenece
al grupo de los terpenos, componente tóxico que tiene uso como insecticida, el cual se probará
en este estudio.
4
1. OBJETIVOS
1.1. Objetivo general
● Evaluar el efecto larvicida del extracto etanólico de Citrus latifolia (limón o lima
ácida Tahití), para el control biológico de larvas de cuarto estadio de Aedes aegypti en
condiciones de laboratorio.
1.2. Objetivos específicos
● Evaluar el efecto larvicida del extracto etanólico de Citrus latifolia (limón o lima
ácida Tahití) a concentraciones de 400, 500, 600 y 700 ppm.
● Determinar las concentraciones letales LC 50 y LC 90 del extracto etanólico de Citrus
latifolia (limón o lima ácida Tahití), sobre larvas de Aedes aegypti de cuarto estadio.
● Evaluar los tiempos letales TL 50 y TL 90 del extracto etanólico de Citrus latifolia
(limón o lima ácida Tahití), para larvas de Aedes aegypti de cuarto estadio.
5
2. JUSTIFICACIÓN
El Aedes aegypti tiene su principal importancia en temas de salud pública relacionados a su
reproducción y la forma en la que actualmente ha sobrevivido en diferentes ambientes lo que
señala su fácil adaptación trasladándose a zonas urbanas.
La OMS estimó que más de 2.500 millones de personas están expuestas, por lo que representa
uno de los principales problemas de Salud Pública en el mundo, debido a un aumento de la
población de Aedes aegypti, y a la falta de una vacuna eficaz para prevenir la enfermedad como
el dengue que es en la actualidad la enfermedad viral más importante transmitida por mosquitos.
La amplia distribución del Aedes aegypti en las Américas implica la transmisión de múltiples
serotipos del virus del dengue, resultando en una hiperendemicidad en más de la mitad del
mundo.
En Colombia se había considerado que el mosquito Aedes aegypti no habitaba en alturas
superiores a los 1.500 metros sobre el nivel del mar. Sin embargo, este nivel ha aumentado a los
2.200 msnm debido a la influencia de factores climáticos, geográficos y socioculturales.
El Aedes aegypti inició una dispersión efectuada por el hombre, que lo ha llevado a
constituirse en un mosquito cosmopolita. Su presencia es o fue detectada en la mayor parte
de las áreas tropicales o subtropicales del planeta, comprendidas entre los 45º de latitud norte y
los 35° de latitud sur, en las zonas isotermales intermedias a los 20ºC (Ministerio de Salud –
República de Argentina, 2016).
Es un efectivo vector de diversas arbovirosis, pero su mayor importancia epidemiológica está
ligada a su papel como transmisor de fiebre amarilla y con mayor actualidad, de dengue. El
6
dengue es uno de los principales problemas de salud pública en las Américas, con morbi-
mortalidad creciente en los últimos 30 años, de allí la gran importancia de controlar de manera
eficaz el vector transmisor por vías de control biológico que mitiguen en gran medida el impacto
al ambiente.
La Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que 80 millones de personas se infectan
anualmente, y cerca de 550 mil enfermos necesitan de hospitalización, 20 mil mueren como
consecuencia de dengue, más de 2.500 millones de personas en riesgo de contraer la enfermedad
y más de 100 países tienen transmisión endémica. Se estima que para el año 2085 el cambio
climático pondrá a 3.500 millones de personas en riesgo (Ministerio de Salud – República de
Argentina, 2016).
En la actualidad Colombia está en alerta amarilla epidemiológicamente frente al dengue, un
reciente informe del Instituto Nacional de Salud (INS) reveló que en lo corrido del año ya han
fallecido 18 personas por posible dengue, en cuanto a casos detectados, durante el primer mes
del año 2020 se han presentado 8.624, de los cuales 112 registran gravedad, con signos de alarma
han sido establecidos 4.634 casos y 3.878 sin signos de alarma.
Las diferentes clases de insecticidas sintéticos que se utilizan para controlar los vectores de
estas enfermedades presentan grandes concentraciones de productos químicas, resultando ser
tóxicos para el ambiente, pues contaminan fuentes hídricas e intoxican especies acuáticas y
terrestres. Siendo así, entidades ambientales y centros educativos han realizado un sinnúmero
de investigaciones con extractos botánicos como posibles alternativas en el control de plagas y
enfermedades. Galarza, Aldama, Hipólito, González, Medellín y Bernal (2018) refieren que
los productos naturales de origen vegetal, como los extractos producen una amplia gama de
7
compuestos químicos bioactivos, que son fácilmente biodegradables, con alta especificidad para
su objetivo, menor bioacumulación y poco o a veces no tóxico para los animales.
A través de la presente investigación se buscará mostrar resultados favorables respecto al
potencial uso de un larvicida de origen botánico a partir del Citrus latifolia (limón o lima ácida
Tahití) sobre larvas de estadio 4 del vector Aedes aegypti, se espera que los resultados que se
arrojen al final y durante el proceso de investigación puedan mostrar la eficiencia del uso como
larvicida.
8
3. MARCO DE REFERENCIA
3.1 Generalidades del mosquito Aedes aegypti
El mosquito Aedes aegypti es un insecto, de la familia Culicidae en el orden de los dípteros
de metamorfosis completa, es el principal vector del dengue y otros virus como la fiebre amarilla
y virus del Nilo Occidental, es esencialmente doméstico y antropofílico, aunque también existen
formas silvestres. Es un insecto pequeño de color oscuro (castaño oscuro o negro) con rayas
blanco-plateadas en el dorso y patas, el cual mide aproximadamente 5 mm (figura 1). Inicia
su ciclo de vida de forma acuática (huevos) y se desarrolla en forma aérea (adultos) (Rossi y
Almirón, 2004).
Figura 1. Mosquito Aedes aegypti
Fuente: http://www.ceip.edu.uy/documentos/galerias/prensa/1243/pre_aedes_aegypti.pdf
9
3.1.1 Morfología
Aedes aegypti es un mosquito de coloración oscura que presenta franjas plateadas en sus
patas, dorsalmente posee una estructura en forma de lira con manchas plateadas sobre el tórax;
tiene cabeza globular con ojos compuestos, posee dos antenas con dimorfismo sexual, plumosas
en los machos y ligeramente pubescentes en las hembras, lo cual permite diferenciar el macho
de la hembra fácilmente (Ministerio de Salud - República de Argentina, 2016).
En su cabeza posee un par de palpos, largos en el macho y cortos en la hembra, uno a cada
lado de la probóscide larga y delgada dirigida hacia adelante formado por las piezas bucales
(OPS, 2014).
Las partes bucales de los machos no están adaptadas para chupar sangre, procuran
alimentarse del néctar de plantas que contiene carbohidratos es decir son de tipo chupador,
mientras que en las hembras son de tipo picador-chupador como se evidencia en la figura 2 y
figura 3, la probóscide de las hembras permite traspasar la piel para alimentarse de sangre
necesaria para la formación de los huevos. El tamaño de Aedes aegypti varía entre 0,5 y 1 cm
de largo, los machos tienen un menor tamaño con relación a las hembras (Rossi y Almirón,
2004).
10
Figura 2. Aedes aegypti macho (izquierda) y hembra (derecha)
Fuente: https://catalogoinsp.mx/files/tes/55507.pdf
Figura 3. Morfología Aedes aegypti
Fuente: http://www.msal.gob.ar/images/stories/bes/graficos/0000000235cnt-01-directrices-
dengue-2016.pdf
11
3.1.2 Clasificación taxonómica
Tabla 1
Clasificación taxonómica de Aedes aegypti
Clasificación Taxonómica
Reino Animalia
Phyllum Arthrópoda
Orden Díptera
Suborden Nematócera
Familia Culicidae
Subfamilia Culicini
Tribu Aedini
Genero Aedes
Subgénero Stegomya
Especie Aedes aegypti
Fuente: Kenneth, 1977.
La tabla 1 muestra la clasificación taxonómica de Aedes aegypti, en ella se pueden observar
diez (10) categorías taxonómicas con sus respectivas clasificaciones según las características de
la especie (Kenneth, 1977).
3.1.3. Ciclo biológico
El ciclo de vida del mosquito Aedes aegypti es de forma holometábola (metamorfosis
completa), como todos los dípteros, este mosquito pasa por cuatro estados durante su ciclo
biológico: huevo - larva - pupa- adulto (figura 4), la fase larvaria consta de 4 estadios (L1, L2,
L3, L4). Los estados inmaduros (huevo, larva y pupa) son acuáticos, mientras que el adulto
es de vida terrestre.
12
Figura 4. Ciclo biológico de Aedes aegypti
Fuente:
https://repository.javeriana.edu.co/bitstream/handle/10554/8542/tesis51.pdf?sequence=1&isAl
lowed=y
● Huevo:
La hembra hace oviposición cada 4-5 días principalmente en horas del día de baja
luminosidad, o bien lo hacen por la noche. Los huevos (figura 5) tienen forma similar a los
ovoides, tienen menos de 1 mm de longitud, la cubierta del huevo se denomina corion, y es
generalmente de color claro al momento de la puesta, aunque se oscurece después de algunas
horas. Lo hacen individualmente en oviposiciones de 100 a 500 en lugares húmedos, fuera
del medio líquido, los cuales eclosionan cuando el agua los cubre; además, estos huevos resisten
13
la desecación, pudiendo permanecer por meses y aun años en criaderos secos (López, Castro y
Almendárez, 2013).
Figura 5. Huevos Aedes aegypti
Fuente: autores
● Larva:
El estado larvario es esencialmente acuático y dotado de gran movilidad, en su cuerpo se
distinguen tres regiones: cabeza, tórax y abdomen (figura 6). La alimentación se basa en
microorganismos (bacterias, hongos, protozoos) y detritos orgánicos (animales y vegetales) que
se encuentran en el agua, y que la larva puede llevar hacia la boca gracias al movimiento de sus
cepillos bucales (Rossi y Almirón, 2004).
Se dirigen periódicamente a la superficie del agua para respirar, pero cuando están
sumergidas el proceso continúa a través del tegumento. En el extremo posterior del abdomen
poseen un par de espiráculos (orificios respiratorios), situados en el extremo del sifón dorsal;
como el sifón se encuentra dorsalmente, la posición en reposo en el agua es casi vertical y se
14
desplaza en el medio líquido con un movimiento serpenteante característico. (Ministerio de
Salud - República de Argentina, 2016).
La duración del período larval de los mosquitos varía entre ocho y diez días cuando las
condiciones ambientales son favorables, su desarrollo depende de la temperatura, la
disponibilidad de alimento y la densidad de larvas presentes, esta etapa del ciclo de vida es el
de mayor alimentación, crecimiento y vulnerabilidad. Las larvas no pueden resistir
temperaturas inferiores a 10°C o superiores a 45°C, a menos de 13°C se interrumpe su cambio
a estado de pupa (López, Castro y Almendárez, 2013).
A medida que las larvas crecen y se desarrollan deben mudar su exoesqueleto tres veces,
pasando en consecuencia por cuatro estadios larvales. Las larvas de primer estadio (las que
emergen del huevo) son pequeñas, pero a medida que pasan por los sucesivos estadios larvales
van aumentando de tamaño, hasta alcanzar en el cuarto estadio aproximadamente entre 0,5 y 1,5
cm dependiendo de la especie (Rossi y Almirón, 2004). Cuando la larva de cuarto estadio
muda pasa al estado de pupa.
Figura 6. Larva de Aedes aegypti
Fuente: Autores
15
● Pupa:
El estado de pupa (figura 7), es un período de transición en el que ocurren transformaciones
como la formación del adulto y el cambio del hábitat acuático por el terrestre. Durante este
estado el individuo no se alimenta, por lo que los cambios que ocurren son posibles gracias a la
energía acumulada durante el estado larval.
La cabeza y el tórax constituyen una estructura única, llamada cefalotórax, en la que se
destacan las trompetas respiratorias (estructuras tubulares para la respiración). Los
movimientos de la pupa están limitados al abdomen, siendo éstos muy enérgicos y activos,
aunque tienden a permanecer inmóviles, colocando la abertura de las trompetas respiratorias en
contacto con la superficie del agua para respirar (Ministerio de Salud - República de Argentina,
2016). La duración del estado pupal es de alrededor de uno a tres días en condiciones
favorables.
Figura 7. Pupa de Aedes aegypti
Fuente: https://www.mundosano.org/download/bibliografia/Monografia%205.pdf
16
● Adulto:
Este es el último estado del ciclo de vida de Aedes aegypti, cuando está completamente
desarrollado (figura 8), la piel de la pupa se agrieta por el dorso y emerge el adulto. Después
del breve lapso que tarda en endurecerse la cutícula y expandirse las alas, el insecto levanta el
vuelo (Conde, 2003). El mosquito Aedes aegypti puede sobrevivir varios meses en laboratorio
ya, en la naturaleza viven poco tiempo, muchos adultos mueren al momento de pasar de pupa a
adulto o mucho tiempo después.
Figura 8. Morfología Aedes aegypti
Fuente: https://www.mundosano.org/download/bibliografia/Monografia%205.pdf
3.1.4 Hábitos
Es un mosquito antropofílico de hábitat urbano (figura 9), silencioso, de hábitos diurnos, que
reposa habitualmente sobre superficies oscuras y pica principalmente partes expuestas, sin
embargo, no excluye el resto, preferentemente pica durante las últimas horas del atardecer y las
17
primeras del amanecer, también se puede alimentar de sangre de animales como el cerdo y los
bovinos.
Cuando una hembra completa su alimentación (2 a 3 cm3 de sangre) desarrollará y pondrá
huevos dispersos en distintos lugares lo que asegura la viabilidad de la especie. La hembra es
atraída hacia recipientes oscuros o sombreados con paredes duras y lisas, prefiere aguas
relativamente limpias con poco contenido de materia orgánica, sin embargo, a la hora de colocar
sus huevos, utilizará cualquier recipiente que tenga disponible, independientemente del estado
de contaminación del agua. Cuando los mosquitos no están apareándose, buscando alimento
o dispersándose, buscan lugares oscuros y tranquilos para reposar, esta especie se considera
como doméstica por colonizar fácilmente recipientes artificiales contenedores de agua que se
encuentran en el intra y peridomicilio de las viviendas en zonas urbanas tales como floreros,
neumáticos, bebedores de agua para animales e inservibles, sin embargo, Colombia ha
registrado la presencia de Aedes aegypti en zonas rurales (Rios, 2004).
Figura 9. Hábitos urbanos Aedes aegypti
Fuente: https://www.mundosano.org/download/bibliografia/Monografia%205.pdf
18
3.1.5. Importancia salud pública
El Aedes aegypti es considerado un mosquito de importancia en temas de salud pública por
factores como el hábito del mosquito de criarse y alimentarse en el habitad humano y sus
alrededores, al igual que su capacidad de adaptación a ambientes adversos y fácil reproducción.
Esta especie es un vector de enfermedades como dengue, fiebre amarilla, chikunguña, zika,
encefalitis equina y filariasis lo que contribuye al gran impacto en la salud humana.
El papel de Aedes aegypti como transmisor de enfermedades al hombre fue demostrado por
el médico estadounidense Walter Reed en 1901, confirmando la hipótesis planteada por el
médico cubano Carlos Finlay en el sentido de que Aedes aegypti era el vector de la fiebre
amarilla (Olano, 2016). Siendo una de las grandes problemáticas de salud pública mundial,
con alta morbilidad capaz de bloquear las actividades de ciudades y países en picos epidémicos
de esta enfermedad viral.
En la actualidad el dengue es uno de los principales problemas de salud pública en el mundo.
La Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que 80 millones de personas se infectan
anualmente, y cerca de 550 mil enfermos necesitan de hospitalización, 20 mil mueren como
consecuencia de dengue, más de 2.500 millones de personas están en riesgo de contraer la
enfermedad y más de 100 países tienen transmisión endémica. Se estima que para el año 2085
el cambio climático pondrá a 3.500 millones de personas en riesgo. En el año 2008 se observó
una tendencia ascendente de las formas graves de dengue. A finales de 2008 en los países
americanos se han registrado 854,134 casos, con 38,627 dengue y 584 muertes (tasa de letalidad
de 1,5%) (Ministerio de Salud - República de Argentina, 2009).
Durante el presente año, Colombia se declaró en alerta amarilla por los casos de dengue en
ciudades como Cali, Ibagué y Tolima principalmente.
19
3.1.6. Enfermedades Transmitidas por Aedes aegypti
● Fiebre Amarilla:
La fiebre amarilla es una enfermedad vírica aguda, hemorrágica, transmitida por mosquitos
Aedes y Haemagogus infectados (OMS, 2016).
Signos y síntomas: El periodo de incubación es de 3 a 6 días. En varios casos son
asintomáticos, pero cuando hay síntomas, los más frecuentes son fiebre, dolores musculares,
sobre todo de espalda, cefaleas, pérdida de apetito y náuseas o vómitos. En la mayoría de los
casos los síntomas desaparecen en 3 o 4 días. Sin embargo, hay casos en los que se genera una
segunda fase, más tóxica. Vuelve la fiebre elevada y se ven afectados varios órganos,
generalmente el hígado y los riñones, en esta fase se presenta la ictericia (color amarillento de
la piel y los ojos, hecho que ha dado nombre a la enfermedad), el color oscuro de la orina y el
dolor abdominal con vómitos, puede haber hemorragias orales, nasales, oculares o gástricas.
La mitad de los pacientes que entran en la fase tóxica mueren en un plazo de 10 a 14 días (OMS,
2016).
Se puede prevenir con una vacuna muy eficaz, segura y asequible. Una sola dosis es
suficiente para conferir inmunidad y protección de por vida, la vacuna ofrece una inmunidad
efectiva al 99% de las personas vacunadas en un plazo de 30 días (OMS, 2016).
● Dengue:
El dengue es una enfermedad vírica transmitida por mosquitos que se ha propagado
rápidamente en todas las regiones de la OMS en los últimos años. El virus del dengue se
transmite por mosquitos hembra principalmente de la especie Aedes aegypti y en menor grado
de Aedes albopictus (OMS, 2020). La enfermedad está muy extendida en los trópicos, con
20
variaciones locales en el riesgo que dependen en gran medida de las precipitaciones, la
temperatura y la urbanización rápida sin planificar. La única forma de transmisión es cuando
el mosquito Aedes aegypti se alimenta con sangre de una persona enferma de dengue y luego
pica a otras personas sanas, así les transmite esta enfermedad Ministerio de Salud, 2017).
Tras un periodo de incubación del virus que dura entre 4 y 10 días, un mosquito infectado
puede transmitir el agente patógeno durante su periodo de vida. Tras la aparición de los
primeros síntomas, las personas infectadas con el virus pueden transmitir la infección (durante
4 o 5 días; 12 días como máximo) a los mosquitos Aedes (OMS, 2020). Existen 4 serotipos
del virus del dengue, conocidos como DEN-1, 2, 3 y 4; cada uno agrupa variantes genéticas de
aislados (Cortés, Gómez y Ocazionez, 2007).
El dengue se caracteriza por fiebre con temperatura de 40°C, dolor en los huesos y dolor de
cabeza, dolores en las articulaciones, pérdida del apetito y dolor detrás de los ojos. Hay unos
síntomas que son de alarma, como decaimiento mayor, permanencia de fiebre, sangrado en las
encías, en la orina, moretones en la piel y dolor abdominal persistente (Ministerio de Salud,
2017). Entre finales de 2015 y principios de 2016 se aprobó en varios países el uso de la
primera vacuna contra el dengue - Dengvaxia (CYDTDV), de Sanofi Pasteur - en personas de 9
a 45 años residentes en zonas endémicas (OMS, 2020).
● Chikungunya:
El chikungunya es una enfermedad viral transmitida por mosquitos hembra Aedes de la
especie aegypti y albopictus, generalmente se transmite cuando el mosquito pica a una persona
infectada y este pica a personas sanas, la fase aguda tiene un tiempo de duración de 12 días, se
reconoce por un brote en el cuerpo, fiebre, dolor en las articulaciones o artritis severa (Ministerio
21
de Salud, 2017). Otros síntomas y signos frecuentes son dolor de cabeza, náuseas y cansancio,
estos síntomas pueden durar solo días o varias semanas causando una enfermedad aguda,
subaguda o crónica (OMS, 2017).
La enfermedad suele aparecer entre 4 y 8 días después de la picadura. Actualmente no existe
método antivírico para tratar la fiebre del chikungunya, el tratamiento consiste en tratar los
síntomas, con antipiréticos, analgésicos y líquidos (OMS, 2017). Generalmente la enfermedad
se produce una sola vez en la vida, después de padecer la enfermedad, se desarrollan anticuerpos
en las personas ya infectadas (Ministerio de Salud, 2017).
● Zika:
El virus Zika se aisló por primera vez en 1947 en los bosques de Zika (Uganda), en un mono
Rhesus durante un estudio sobre la transmisión de la fiebre amarilla selvática. Aunque la
infección en seres humanos se demostró por estudios serológicos en 1952 (Uganda y Tanzania),
solo hasta 1968 se logró aislar el virus a partir de muestras humanas en Nigeria (Mercosur, s.f.).
El primer gran brote se registró en la Isla de Yap (Estados Federados de Micronesia) en 2007
(OMS, 2018). En abril de 2015 autoridades de salud pública de Brasil detectaron los primeros
casos de virus Zika en el nordeste del país a expensas de la vigilancia de casos sospechosos de
sarampión (Mercosur, s.f.).
La enfermedad febril por virus Zika es transmitida por mosquitos del género Aedes, y sobre
todo de Aedes aegypti en las regiones tropicales (OMS, 2018). El Zika se presenta con cuadro
clínico de fiebre, erupciones cutáneas, cefalea, artralgia, mialgia, malestar general y
conjuntivitis no purulenta que ocurre entre 2 a 12 días después de la picadura del mosquito
vector infectado con un promedio general de 7 días (Mercosur, s.f.). Asimismo, es posible la
22
transmisión sexual, y se están investigando otros modos de transmisión, como las transfusiones
de sangre (OMS, 2018).
Actualmente no existe ninguna vacuna y no existe tratamiento curativo para tratar la
enfermedad, el manejo es sintomático y puede llevarse a cabo en casa, guardando reposo, usando
toldillo y teniendo muy en cuenta la hidratación. Se han encontrado efectos adversos en
embarazos y malformaciones del feto, respecto al desarrollo neuronal, causando microcefalia
en los fetos, por tal razón se recomienda a las personas en zonas del trópico sexualmente activas
asesorarse en métodos de planificación para evitar que se produzcan embarazos con este tipo de
afecciones (Ministerio de Salud, 2017).
3.1.7. Control químico
Es una medida aplicada ampliamente, y consiste en la utilización de productos químicos
(larvicidas e insecticidas) sobre las larvas y los mosquitos de Aedes aegypti, que busca eliminar
o controlar su densidad poblacional, (Ministerio de la Protección Social, 2012). Sin embargo,
de generación en generación estos vectores han ido adquiriendo resistencia siendo un limitante
para su efectivo control. No obstante, los productos químicos utilizados generan
contaminación ambiental en fuentes hídricas, suelo y aire que terminan afectando la salud
humana y animal debido a los residuos generados (Corradine, s.f.).
En Colombia para el control químico de las formas adultas de Aedes spp., en las campañas y
programas de erradicación y control, han sido el DDT y los organofosforados, como el malatión,
el fenitrotión y el pirimifosmetilo. En el control de las formas inmaduras, los larvicidas más
utilizados son los organofosforados, como el temefos, los biolarvicidas, como Bacillus
23
thuringiensis variedad israelensis y recientemente, se han introducido los inhibidores de
crecimiento como el piriproxifen y el diflubenzuron (Padilla, Rojas y Sáenz, 2012).
3.1.8. Control biológico
Es un mecanismo mediante el cual se busca la reducción de las larvas de Aedes aegypti de
forma natural a través de diversas especies de predadores, patógenos, competidores o toxinas de
microorganismos y plantas, estas son alternativas que no afectan el medio ambiente, siempre y
cuando sean especies nativas (Ministerio de la Protección Social, 2012).
Los métodos de control biológico más empleados y que han demostrado su eficacia, son
algunas especies de peces larvívoros (Gambusia affinis, Poecilia sp., y Tilapia spp., entre otros)
y copépodos depredadores (Ministerio de la Protección Social, 2012).
Para que determinadas especies puedan ser consideradas como controladores biológicos,
además de su capacidad larvívora, debe tomarse en cuenta características como el costo de
adquisición de las especies, la disponibilidad local de organismos durante todo el año o facilidad
para su reproducción en cautiverio y resistencia a condiciones ambientales (Galavíz, et al.,
2016).
3.2. Generalidades Citrus latifolia (limón o lima ácida Tahití)
Citrus latifolia conocido como limón Tahití, limón persa, lima de Tahití, es un fruto cítrico
considerado híbrido, de la combinación de dos especies de cítricos (Citrus aurantifolia y Citrus
medica linn), se cultiva en climas tropicales y subtropicales (Galeas, 2015).
Citrus latifolia, tiene forma ovalada de tamaño mediano, con un ápice ligeramente
deprimido, coronado por una cicatriz estilar, su cáscara es tersa color verde desde tonalidades
24
intensas hasta claras. Carece de semillas y su pulpa es de tono verde-amarillo como se observa
en la figura 10. La pulpa es jugosa y presenta un característico sabor ácido (Vanegas, 2002).
Figura 10. Citrus latifolia (limón o lima ácida Tahití)
Fuente: http://blessfruit.com/limon-tahiti/
3.2.1. Clasificación botánica
Tabla 2
Clasificación botánica Citrus latifolia
Clasificación Botánica
Nombre científico Citrus latifolia
Género Citrus
Especie Latifolia
Clase Dicotiledóneas
Subclase Arquiclamídeas
Orden Geraniales
Suborden Geraniineas
Familia Rutaceae
Subfamilia Aurantioideas
Fuente: Galeas, 2015.
25
La tabla 2 muestra la clasificación botánica de Citrus latifolia, en ella se pueden observar
nueve (9) categorías taxonómicas con sus respectivas clasificaciones según las características
de la especie (Galeas, 2015).
3.2.2. Descripción botánica
El árbol de Citrus latifolia tiene una altura máxima de 5m, presenta ramificaciones en varias
direcciones, las ramas tienen pequeñas espinas, este árbol frutal se diferencia de los demás
limoneros por su altura, follaje permanente y producir frutos de mayor diámetro.
Presenta hojas de color verde, alargadas con forma elíptica, distribuidas alternamente por las
ramas. El tamaño del fruto varía entre 5 y 7 cm de diámetro, pesa aproximadamente 76
gramos, presenta forma ovoide y carece de semillas en su interior, además, durante todo el año
se puede observar presencia de yema floral, su apariencia es pequeña, ovalada y generalmente
de color blanco con tintes violeta, a través de esta brota una flor de aproximadamente 2,5 cm
(Galeas, 2015).
3.2.3. Composición de la cáscara
La cáscara de Citrus latifolia está compuesta por agua en su mayoría, además contiene aceite
esencial y pectina, los cuales representan el 96%.
3.2.4. Aceite esencial de Citrus latifolia
Como se puede observar en la tabla 3, el aceite esencial es una mezcla de compuestos
lipídicos, presentes en vesículas pequeñas ubicadas en diferentes profundidades del flavedo.
El aceite esencial de limón contiene de 85 a 90% de componentes volátiles y de 1 a 15% de no
volátiles, según expresa (Montero, 2009).
26
Tabla 3
Compuestos presentes en el aceite de Citrus latifolia
Compuesto % presente en limón
Metanol 0,20
Isopropanol 0,12
Pineno 0,27
Butil-acetato 1,47
3-Heptanona 0,34
Limoneno 78,84
Occimeno 3,85
Nonanal 0,26
Linalol 0,02
Terpinol 1,30
Valenceno 3,34
Terpineno 0,46
D-Ioneno 0,35
D-Pineno 0,02
Terpinen-4-ol 0,01
p-Cymeno 1,75
Citral 0,10
Fuente: Montero, 2009.
La tabla 3 muestra los compuestos que se encuentran presentes en la especie Citrus latifolia con
su respectivo % de disponibilidad (Montero, 2009).
3.3 Antecedentes
Kishore et al., (2011, citado por Galarza, Aldama, Hipólito, González, Medellín y Bernal,
2018) mencionan que “la potencialidad larvicida derivada de extractos vegetales se atribuye a
la naturaleza química de las plantas, las cuales pueden contener, alcanos, alquenos, alquinos y
aromáticos simples, terpenos, alcaloides, esteroides, isoflavonoides, pterocarpanos y/o lignanos,
lactonas, aceites esenciales y ácidos grasos” (p. 2) al respecto Lacerda et al., (2014 citado por
27
Galarza, et al., 2018, ) mencionan que “el uso de extractos vegetales es un método sustentable”
(p 2).
Los aceites esenciales han sido ampliamente estudiados como una alternativa para controlar
la propagación de los mosquitos, son productos biodegradables no tóxicos; un gran número de
investigadores han demostrado su eficacia contra larvas, adultos e incluso su acción repelente
(Andrade, Sánchez, Nevárez, Camacho y Nogueda, 2017), su utilización favorece la reducción
del impacto negativo que se produce por los productos sintéticos. Siendo así, es indispensable
mencionar algunos extractos de origen vegetal que han sido utilizados para el control de los
mosquitos.
Warikoo, Ray, Sandhu, Samal, Wahab y Kumar (2012) evaluaron la actividad larvicida del
extracto de las hojas de Citrus sinensis contra los cuatro estadios larvales de Aedes aegypti, los
bioensayos dieron como resultado CL50 y CL90 de 446,84 y 1370,96 ppm respectivamente
transcurridas 24 horas de exposición.
Los investigadores Murugan , Mahesh, Kovendan, Amerasan, Subrmaniam, y hwang (2012)
realizaron estudio sobre mortalidad larvicida, pupicida y adulta del extracto de Citrus sinesis
contra Anopheles stephensi , Aedes aegypti y Culex quinquefasciatus, mostrando valores CL50
para las actividades larvicidas y pupicidas contra la especie de mosquitos A. stephensi en
estadios larvales (I, II, III y IV) y pupas fueron 182.24, 227.93, 291.69, 398.00 y 490.84 ppm;
los valores para A. aegypti fueron 204.87, 264.26, 342.45, 436.93 y 497.41 ppm; y los valores
de C. quinquefasciatus fueron 244.70, 324.04, 385.32, 452.78 y 530.97 ppm, respectivamente.
Así mismo, en la investigación realizada por Ankhal, Lalami y Guemmouh (2015), sobre la
actividad larvicida de aceites esenciales de Citrus aurantium y Citrus sinensis contra larvas de
Anopheles labranchiae, obtuvieron como resultado que para alcanzar el 100% de mortalidad es
28
necesario utilizar concentraciones a 160 y 640 ppm respectivamente. Citrus aurantium resultó
más eficiente con una CL50 igual a 22.64 ppm y CL90 de 83.77 ppm, mientras que el de Citrus
sinensis dio como resultado una CL50 de 77.55 ppm y CL90 de 351.36 ppm, el deceso de las
larvas se observó después de las 24 horas de exposición al tratamiento.
Sarma, Khanikor y Mahanta (2017) realizaron la comparación del aceite esencial de la
cáscara y las hojas de Citrus grandis como insecticida contra Aedes aegypti, cuya finalidad fue
demostrar cual era más efectivo. Los resultados mostraron que los aceites esenciales de las
hojas poseen más actividad ovicida CL50 de 9.56 ppm que la cáscara a las 72 horas. Como
larvicida, el aceite esencial de la cáscara de Citrus grandis mostró más efecto con un valor de
CL50 igual a 61.71 ppm, a diferencia de las hojas que presentaron una CL50 a 126.45 ppm.
Como adulticida el aceite extraído de la cáscara mostró actividad moderada con CL50 de 174.96
al contrario del aceite extraído las hojas que no mostro actividad adulticida.
El estudio realizado por Andrade (2019), evaluó y comparo la actividad larvicida de aceites
esenciales de Citrus limon, Citrus sp y Citrus aurantifolia contra larvas en III estadio de Aedes
aegypti, en este estudio se encontró que la actividad larvicida de las tres especies de Citrus vario
significativamente, demostrando ser más eficaz el aceite esencial de Citrus sp con una CL50
igual a 20.26 y CL90 igual a 28.5 ppm, seguido de Citrus limon con una CL50 igual a 40.22 y
CL90 igual a 68.88 ppm, y por ultimo Citrus aurantifolia con una CL50 igual a 69.71 y CL90
igual a 115.3 ppm, con exposición de 24 horas en cada tratamiento.
En la investigación ejecutada por Sarma, Adhikari, Mahanta y Khanikor (2019) evaluaron la
actividad larvicida del aceite esencial de la cáscara y la hoja de Citrus aurantifolia contra Aedes
aegypti, los resultados obtenidos demostraron una CL50 de 128 y 188 ppm respectivamente,
siendo más efectivo el aceite esencial obtenido de la cáscara de Citrus aurantifolia.
29
La universidad Distrital Francisco José de Caldas cuenta con el semillero Zoovector avalado
por la Facultad de Medio Ambiente y Recursos Naturales, donde han realizado investigaciones
en la elaboración de larvicidas a base de extractos naturales. En cuanto a extractos a base de
cítricos encontramos la investigación realizada por Cendales y Castillo (2018) en la cual
realizaron evaluación del efecto larvicida del extracto etanólico natural de la cáscara de naranja
(Citrus sinensis) sobre larvas en cuarto estadio de Aedes aegypti en condiciones de laboratorio,
en esta investigación se evidenció una CL50 a 3856,39 ppm con un límite de confianza entre
3584 y 4086 ppm y la concentración letal CL 90 se halló a 5987 ppm con límites de confianza
entre 5682 y 6390 ppm.
30
4. METODOLOGÍA
La metodología aplicada en el presente estudio se realizó haciendo uso de la revisión
bibliográfica de los parámetros propuestos por la OMS en el año 2005 en la guía para
laboratorios y pruebas de campo de larvicidas para mosquitos.
4.1. Obtención de larvas de Aedes aegypti
La obtención de las larvas se realizó mediante los huevos de Aedes aegypti, los cuales, se
obtuvieron de la cepa Rockefeller del laboratorio de zoonosis de la Facultad del Medio
Ambiente y Recursos Naturales de la Universidad Distrital Francisco José de Caldas sede Bosa
Porvenir, se hizo uso de la metodología presentada en la figura 11.
Figura 11. Diagrama de metodología obtención de larvas Aedes aegypti
Fuente: Autores
Se obtuvieron hembras
adultas Aedes aegypti
nacidas a partir de huevos desecados
Se realizo hematofagia
para oviposición
Se recolectaron huevos en papel filtro
inmersión de papel filtro con
posturas en agua declorinada a 27-
30°C para eclosión de larvas de Aedes aegypti
31
4.2. Cría de larvas hasta estadio cuatro (4) de Aedes aegypti en condiciones de
laboratorio.
La crianza de las larvas de Aedes aegypti se realizó en recipientes de polietileno a los cuales
se les adicionó agua declorinada y posteriormente se depositaron los filtros de papel con las
posturas de la cepa Rockefeller para su eclosión, además, se agregó purina para peces como
alimentación para las larvas, los recipientes se almacenaron en una incubadora con temperatura
entre 27 y 30° C (Pérez, et al., 2013). Ver figura 12.
Figura 12. Diagrama de metodología crianza de larvas Aedes aegypti
Fuente: Autores
4.3. Producción del extracto etanólico de la cáscara de Citrus latifolia
En la figura 13 se observa la metodología utilizada para la producción del extracto etanólico
de la cáscara de Citrus latifolia. Se utilizaron 10 kg de fruta de Citrus latifolia, de los cuales
se obtuvo 1 kg de cáscara, que debió ser picada y secada en el horno a 80°C durante 48 horas.
Posteriormente se pasó por un molino convencional con el fin de disminuir el diámetro de los
Temperatura 27ºC - 30ºC en la
incubadora
Se alimentaron con comida para
peces
1 semana igual a estadio IV de
desarrollo larvas Aedes aegypti
32
fragmentos, resultando 500g de material seco y pulverizado. Este producto se empacó en
bolsas de papel filtro y se depositó en las flautas con el fin de poder realizar la extracción del
aceite esencial mediante el extractor Soxhlet en caliente utilizando etanol al 96% como solvente
(Lamarque, Zygadlo, Labuckas, López, Torres y Maestri,. 2008). En la figura 14 se observa
el montaje del extractor Soxhlet para la obtención del extracto etanólico de la cáscara de Citrus
latifolia.
Figura 13. Diagrama de metodología producción del extracto etanólico de la cáscara de Citrus
latifolia
Fuente: Autores
10 Kg de limón, 1000g de cáscara de
Citrus latifolia
Se quitó la pulpa de la fruta y se
dejó el cascajo y cáscara (se corto
en pedazos)
Se secó en el horno a
Temperatura 80ºC por 48
horas
Se molió en molino
convencional y pesó 500g del
material
Se empacó el material pulverizado Citrus
latifolia en papel filtro
Se introdujo las bolsas
en las flautas
Se adicionó etanol a 96% en balón
volumetrico a la mitad
Se realizó montaje para extracción en caliente con
extractor Soxhlet
Se esperó que el material cambiera la
pigmentación de verde a
blanco
33
Figura 14. Montaje extractor Soxhlet obtención del extracto etanólico de la cáscara de Citrus
latifolia
Fuente: autores
La sustancia obtenida se evaporó y destiló para retirar el etanol al 96% adicionado en el paso
anterior, esta acción se realizó mediante Rotaevaporador IKA RV 10 a baño de maría con
temperatura a 60°C como se indica en la figura 15 (López, Triana, Pérez y Torres, 2005).
34
Figura 15. Diagrama de metodología obtención del extracto etanólico de la cáscara de Citrus
latifolia
Fuente: Autores
El extracto obtenido de Citrus latifolia se almacenó en un frasco color ámbar a temperatura
de refrigeración para evitar cambios en su composición por alteración de sus principios activos
debido a la influencia de la luz o choques térmicos hasta el momento de su utilización (Parra,
García y Cotes, 2007).
4.4. Preparación de las concentraciones de extracto etanólico de Citrus latifolia
La preparación de las diferentes concentraciones de extracto etanólico de Citrus latifolia
(400, 500, 600 y 700 ppm) se realizó a partir de 1 L de agua declorinada para cada preparación
a la que se adicionó 0.4, 0.5, 0.6 y 0.7 ml del extracto de aceite esencial obtenido a partir de la
cáscara de Citrus latifolia para obtener la concentración requerida. Ver figura 16.
Se evaporó y destiló el etanol de la sustancia
obtenida en el anterior paso mediante la
concentración en un Rotaevaporador IKA RV
10, a baño maría a 60°C, velocidad de rotación
100rpm y presión reducida de 170 mbars.
Extracto o solución o
madre de Citrus latifolia
35
Figura 16. Diagrama metodología de preparación de concentraciones del extracto etanólico de
Citrus latifolia
Fuente: Autores
4.5. Bioensayos
Los bioensayos se hicieron por el método TL 90 / 50 el cual consiste en buscar la letalidad
del 90% de una sustancia tras las primeras 48 horas de haber sometido a los organismos
susceptibles a la sustancia a evaluar y así determinar su toxicidad.
Para este estudio se prepararon concentraciones entre 400 ppm y 700 ppm de Citrus latifolia
(limón o lima ácida Tahití), se sirvió cada extracto diluido en vasos de polipropileno con
capacidad de 200 ml, se utilizaron 500 larvas de IV estadio de Aedes aegypti, que se
distribuyeron 25 larvas para cada una de las 4 repeticiones de los 4 tratamientos experimentales
con su grupo testigo respectivo, al cual se adicionó agua declorinada.
Se dejó el montaje de las cuatro muestras y el testigo dentro de la incubadora a 27° - 30° C,
tanto a las larvas de cada tratamiento experimental como de los testigos se les adicionó alimento
1• Se tomó un balón aforado de 1 Lt
2
• Se introdujo la cantidad de extracto a evaluarpara cada concentración de extracto de Citrus latifolia (0.4, 0.5, 0.6 y
0.7 mL)
3• Se llenó el balón con agua declorinada, hasta el aforo
correspondiente a 1 Lt
36
para peces para garantizar que la mortalidad no se deba a la falta de alimentación o condiciones
no favorables para el desarrollo larvario.
Se realizó lectura de los bioensayos a las 0, 2, 12, 24, 36 y 48 horas, haciendo el conteo de
los individuos muertos, y estos se extrajeron de los recipientes, dejando solamente los
sobrevivientes para continuar con el bioensayo, hasta completar las 48 horas. Luego de las 48
horas los individuos sobrevivientes se desecharon y se realizaron los respectivos cálculos.
4.6. Manejo de datos
Para la verificación en la efectividad del extracto etanólico de la cáscara de limón Citrus
latifolia como larvicida de Aedes aegypti en larvas estadio IV en condiciones de laboratorio, se
trataron los datos obtenidos en los bioensayos con herramientas estadísticas como Abbott, Probit
Excel y ANOVA. Se empezó con Abbott para realizar la corrección de mortalidad con base
a los grupos testigo, es decir, si la mortalidad es causada por el estímulo de los tratamientos y
no por causas externas al experimento o causas naturales (Gómez, 2015).
Luego se trataron los datos con Probit para conocer valores más específicos en tanto a
concentración letal y tiempos letales exactos para obtener porcentajes de mortalidad del 50% y
90% y finalmente el análisis estadístico ANOVA de un factor, para comparar dos hipótesis, la
hipótesis nula (H0) y la hipótesis alterna (H1) y así poder determinar si hubo una diferencia
significativa sobre los promedios de mortalidad de las larvas en estadio IV de Aedes aegypti en
los bioensayos.
4.6.1. Abbott
Abbott es una formula mediante la cual se puede realizar la corrección del porcentaje de
mortalidad acumulada del tratamiento con base en el grupo testigo, figura 17.
37
%MC =% MTratamiento − % MTestigo
100 − % MTestigo
Figura 17. Ecuación de Abbott
Fuente: Gómez, 2015.
Donde;
% MTratamiento: mortalidad acumulada del tratamiento
% MTestigo: mortalidad acumulada del testigo
% MC: mortalidad corregida en porcentaje
4.6.2. Probit
Probit es una herramienta estadística que permite graficar los resultados para tiempo letal
usando los datos obtenidos en los bioensayos, en los que se calcula los tiempos necesarios para
obtener mortalidades altas en concentraciones que no generaron una elevada letalidad, esto, para
tener la certeza del tiempo necesario en cada bioensayo; o para el caso de concentración letal,
interpolar los datos obtenidos y hallar la concentración más cercana, requerida para letalidades
también puntuales. Esta herramienta facilita la obtención de resultados más puntuales o
específicas sin necesidad de realizar más bioensayos.
Se usó para determinar las concentraciones letales LC50 y LC90, de los tratamientos con
extracto etanólico de la cáscara de limón Citrus latifolia utilizados en larvas estadio IV de Aedes
aegypti en laboratorio, se empleó el modelo Probit, del programa IBM SPSS Statistics 20, el
38
cual da una estimación de la concentración letal del 50% y del 90%, para el tiempo de 48 horas
en el que se realizaron las pruebas.
4.6.3. ANOVA
El análisis de varianza de ANOVA de un factor se realizó mediante la comparación de los
promedios entre los tratamientos realizados, por medio de dos hipótesis, una hipótesis nula (H0)
y una hipótesis alternativa (H1) (Vargas, 2007).
Hipótesis nula (H0): Se aprueba cuando no existen diferencias significativas entre los
promedios de mortalidad de los tratamientos aplicados a los especímenes y la hipótesis
alternativa (H1): se aprueba cuando existen diferencias significativas entre las mortalidades,
generadas a partir de los tratamientos a los cuales son expuestos los especímenes, en donde los
promedios de mortalidad de los tratamientos por lo menos un par tienen diferencia significativa.
Si se rechaza la hipótesis alternativa (H1) la concentración de los tratamientos no tendría
alguna significancia en los resultados de las mortalidades, y en caso de que se rechazara la
hipótesis nula (H0), las concentraciones de los tratamientos si inciden o tienen importancia en
el porcentaje de mortalidad de las larvas. Es importante tener en cuenta que la hipótesis
alternativa (H1) no es tenida en cuenta cuando P-valor es decir la significancia es mayor a 0.05;
en cambio es válida cuando el P-valor es menor a 0.05 (Cruz, 2017).
Se calculó el valor de P mediante el software R con el análisis ANOVA de un factor.
39
5. RESULTADOS
5.1. Eficiencia del extracto etanólico de Citrus latifolia como larvicida a diferentes
concentraciones.
Los resultados obtenidos en el bioensayo del extracto etanólico de Citrus latifolia como
larvicida contra Aedes aegypti se registraron en una bitácora durante la realización del
experimento en el laboratorio, allí se plasmó la mortalidad de cada tratamiento anexo 1, a partir
de estos resultados y mediante la fórmula de Abbott se corrigió el porcentaje de mortalidad y se
realizó la curva de mortalidad en función del tiempo según la concentración que se utilizó en
cada tratamiento.
En la figura 18 se evidencia que todas las concentraciones tuvieron una diferencia del 10%
aprox. de mortalidad a excepción de la concentración a 700 ppm que alcanzó la máxima
mortalidad en un 97% a las 24 horas y luego de ello se mantuvo; con respecto a la concentración
a 600 ppm la máxima mortalidad fue de un 68% y se presentó a las 48 horas de exposición de
las larvas al extracto, así mismo, las concentraciones a 500 y 400 ppm la máxima mortalidad
fue de 58 % y 43% respectivamente transcurridas 48 horas de exposición al tratamiento. A
partir de la curva se puede analizar que entre las 12 y 24 horas todas las concentraciones del
extracto etanólico tuvieron la mayor tasa de mortalidad, sin embargo, después de las 24 horas
también se presentaron muertes de las larvas de Aedes aegypti en todos los tratamientos a
excepción del tratamiento a 700 ppm que no registro muertes después de las 24 horas.
40
Figura 18. Resultados de mortalidad a partir de las diferentes concentraciones de bioensayos.
Fuente: Autores
En la tabla 4 se registran los resultados obtenidos en los bioensayos, los cuales se ajustaron
mediante la fórmula de Abbott, corrigiendo los resultados obtenidos durante el experimento
teniendo en cuenta la mortalidad natural, es decir los individuos que tenían condiciones óptimas
para su desarrollo y murieron. Los resultados obtenidos a partir de la corrección con la formula
ya mencionada no presentaron variación significativa debido a la baja mortalidad que se dio en
el bioensayo testigo que corresponde a 1 larva de 100 expuestas al tratamiento, es decir, el 1%;
y del total de larvas empleadas que fueron 500 representa solo el 0,2% de mortalidad.
41
Tabla 4
Porcentajes de mortalidad acumulada de larvas de Aedes aegypti corregida con fórmula
Abbott
Tratamiento
Mortalidad larvas Aedes aegypti (%)
0 horas 2 horas 12
horas
24
horas 36 horas 48 horas
T1- 400PPM 0 0 4 35 41 43
T2-500PPM 0 0 19 42 49 58
T3-600PPM 0 0 41 60 64 68
T4-700PPM 0 0 84 97 97 97
TESTIGO 0 0 1 1 1 1
Fuente: Autores, 2020.
La tabla 4 muestra el porcentaje de moralidad de las larvas de Aedes aegypti de acuerdo con
al tiempo de exposición y la concentración en ppm aplicada a cada tratamiento (Autores, 2020).
Como se puede observar en la tabla 4, la mortalidad en el tratamiento testigo fue del 1%, lo
que demuestra que la mortalidad de las larvas de Aedes aegypti no fue por factores diferentes a
los producidos por el extracto.
En el tratamiento 1 (T1) se expusieron 100 larvas de Aedes aegypti a una concentración de
400 ppm del extracto de Citrus latifolia, se observó una mortalidad promedio acumulada de
43% transcurridas 48 horas, matando 43 larvas de 100 expuestas, se observó mayor mortalidad
a las 24 horas de exposición al tratamiento.
Para el tratamiento 2 (T2) con concentración a 500 ppm del extracto de Citrus latifolia, se
observa una mortalidad promedio acumulada del 58% transcurridas 48 horas de exposición,
matando 58 larvas de las 100 expuestas, donde se observó una mortalidad moderada, superando
el 50% de las larvas expuestas.
42
En cuanto al tratamiento 3 (T3) con concentración de 600 ppm del extracto de Citrus latifolia,
se observó una mortalidad promedio acumulada de 68% transcurridas 48 horas, sacrificando 68
larvas de las 100 expuestas, en este tratamiento se observó un 10% de aumento en la mortalidad
con respecto al tratamiento T2.
Para el tratamiento 4 (T4) se observó una mortalidad promedio acumulada del 97%
transcurridas 24 horas de exposición, donde se utilizó una concentración de 700 ppm del
extracto de Citrus latifolia, el cual presentó una alta tasa de mortalidad en comparación con los
tratamientos anteriores, demostrando que es la concentración óptima para utilizar como
larvicida.
5.2. Análisis estadístico
Para realizar el análisis estadístico de los resultados obtenidos a través de los bioensayos se
utilizaron herramientas estadísticas como Excel, Probit y Anova.
En la figura 19 se pueden observar que las gráficas correspondientes a los tratamientos a 400,
500 y 600 ppm son simétricas respecto al valor central (mediana) lo cual indica que existe
dispersión ecuanime entre los valores de mortalidad total de las larvas de Aedes aegypti para
cada tratamiento. Sin embargo, la gráfica que representa la concentración a 500 ppm indica
que los datos tienen mayor amplitud, es decir presentan mayor dispersión. Para la
concentración a 700 ppm se observó asimetría sesgada a la derecha lo cual indica que tiene
valores altos de mortalidad total y por el tamaño de la caja presenta menor amplitud, es decir
los datos están más próximos.
43
En cuanto a la gráfica que representa al grupo testigo en la figura 19 se observó asimetría
sesgada a la izquierda, mostrando valores bajos de mortalidad total. Al comparar las gráficas
correspondientes a cada tratamiento se observó que son coherentes y que hay homogeneidad
con los datos, teniendo en cuenta que al utilizar un tratamiento testigo, las réplicas deben ser
similares, lo que garantiza que el bioensayo se realizó bajo unas condiciones uniformes.
De manera general se observó que, al cambiar de tratamiento, se presentaron cambios en los
valores de la variable de mortalidad total y que desde el punto de vista descriptivo se visualiza
que unos tratamientos son más favorables que otros, pues para ellos se detectan mayores valores
de mortalidad total, siendo este un resultado importante para analizar la efectividad del
tratamiento.
Figura 19. Diagrama de caja y bigotes mortalidad final.
Fuente: Software R, 2020.
44
Los datos estadísticos de mortalidad total de las larvas de Aedes aegypti presentados en la
tabla 5 permiten analizar el comportamiento del deceso ocurrido en cada tratamiento expuesto
a las diferentes concentraciones del extracto de Citrus latifolia.
Tabla 5
Datos estadísticos mortalidad larvas de Aedes aegypti
Tratamiento mean sd 0% 25% 50% 75% 100% n
R 1_400 0.43 0.11489125 0.28 0.40 0.44 0.47 0.56 4
R 2_500 0.58 0.25819889 0.28 0.43 0.58 0.73 0.88 4
R 3_600 0.68 0.03265986 0.64 0.67 0.68 0.69 0.72 4
R 4_700 0.97 0.06000000 0.88 0.97 1.00 1.00 1.00 4
Testigo 0.01 0.02000000 0.00 0.00 0.00 0.01 0.04 4
Fuente: Software R, 2020.
La tabla 5 muestra datos estadísticos (media, desviación estándar y los percentiles) de
acuerdo con la concentración en ppm del extracto de Citrus latifolia utilizado (Software R,
2020).
Para la concentración a 400 ppm como se observa en la tabla 5 el percentil 25 corresponde
a 0,40% es decir, el 25% de las réplicas realizadas para esta concentración muestra que la
mortalidad de individuos es menor o igual a 10; la mediana equivale a 0,44%, lo que indica que
el 50% de las réplicas realizadas para esta concentración revela que la mortalidad de individuos
es menor o igual 11 y el percentil 75 corresponde a 0,47%, por lo tanto el 75% de las réplicas
realizadas para esta concentración muestra que la mortalidad de individuos es menor o igual a
11,75.
45
Para la concentración 500 ppm, el percentil 25 corresponde a 0.43, es decir, el 25% de las
réplicas realizadas para esta concentración muestra que la mortalidad de individuos es menor o
igual a 10.75; la mediana equivale a 0.58%, lo que indica que el 50% de las réplicas realizadas
para esta concentración revela que la mortalidad de individuos es menor o igual 14.5 y el
percentil 75 corresponde a 0.73, por lo tanto el 75% de las réplicas realizadas para esta
concentración muestra que la mortalidad de individuos es menor o igual a 18.25.
Para la concentración 600 ppm, el percentil 25 corresponde a 0.67, es decir, el 25% de las
réplicas realizadas para esta concentración muestra que la mortalidad de individuos es menor o
igual a 16.75; la mediana equivale a 0.68, lo que indica que el 50% de las réplicas realizadas
para esta concentración revela que la mortalidad de individuos es menor o igual 17 y el percentil
75 corresponde a 0.69, por lo tanto el 75% de las réplicas realizadas para esta concentración
muestra que la mortalidad de individuos es menor o igual a 17.25.
Para la concentración 700 ppm, el percentil 25 corresponde a 0,97 es decir, el 25% de las
réplicas realizadas para esta concentración muestra que la mortalidad de individuos es menor o
igual a 24.25; la mediana equivale a 1.00, lo que indica que el 50% de las réplicas realizadas
para esta concentración revela que la mortalidad de individuos es menor o igual 25; este valor
coincide con el valor máximo de mortalidad de individuos.
De manera general se observó que a medida que aumenta la concentración del extracto
etanólico de Citrus latifolia aumenta el porcentaje de larvas en IV estadio de Aedes aegypti
muertas.
46
5.3. Análisis de Probit para el cálculo de las concentraciones letales CL50 y CL 90.
Los resultados obtenidos a través del modelo estadístico Probit muestra las concentraciones
letales específicas para conocer la mortalidad del 50% y 90% (CL50 y CL90) del extracto
etanólico Citrus latifolia sobre las larvas de Aedes aegypti en estadio IV, obteniendo como
resultado que CL50 se encuentra a una concentración de 513 ppm y CL90 se encuentra a una
concentración de 688 ppm, es decir que a las concentraciones ya mencionadas transcurridas las
48 horas se espera la mortalidad del 50 y el 90% de las larvas en el estadio IV de la muestra
como se aprecia en la figura 20.
Figura 20. Prueba Probit para la concentración letal CL50 y CL90
Fuente: Autores
47
5.4. Análisis de tiempo letal TL 50 y TL 90 a concentración de 500 ppm de Citrus latifolia
El tiempo letal TL obtenido en la concentración letal media de 500 ppm es efectiva
transcurridas 36.7 horas, es decir que pasado este tiempo se espera que aproximadamente el
50% del total de larvas en estadio IV se encuentren muertas, a partir de ello se estima que se
produzca una letalidad del 90% a las 74.4 horas de realizar el bioensayo, como se muestra en la
figura 21.
Es decir, que para que se produzca una letalidad a una concentración de 500 ppm (CL50 Y
CL90) se debe exponer las larvas a una toxicidad aguda de 3 días de exposición, aunque no es
un tiempo de exposición muy prolongado, se continuó con los bioensayos aumentando la
concentración de extracto etanólico de Citrus latifolia.
Figura 21. Análisis de tiempo letal TL 50 y TL 90 a concentración de 500 y 700 ppm del
extracto de Citrus latifolia
Fuente: Autores
7,14
12,85
36,7
74,4
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80
MO
RT
AL
IDA
D (
%)
TIEMPO (Horas)
TIEMPO LETAL 50 Y 90 DEL EXTRACTO DE Citrus
latifolia
T4 - 700 ppm
T2 - 500 ppm
48
5.5. Análisis de tiempo letal TL 50 y TL 90 a concentración de 700 ppm de Citrus latifolia
El tiempo letal TL50 a una concentración etanólica de Citrus latifolia de 700 ppm alcanza
una mortalidad del 50% después de exponer 7.14 horas las larvas en estadio IV, como se muestra
en la figura 21, también se puede observar que la concentración ya mencionada puede alcanzar
una letalidad del 90% de los individuos transcurridas 12 horas de exponer los individuos.
Esta concentración es la más efectiva, puesto que no solo es la primera en dar resultados de
tiempo al exponer el organismo a el extracto para evaluar su letalidad, sino que también es la
concentración exacta para alcanzar la mortalidad de todas las larvas de Aedes aegypti en estadio
IV.
5.6. Análisis ANOVA de un factor
Para la realización del análisis estadístico ANOVA, se utilizó el software R, mediante el cual
se compararon dos hipótesis; la hipótesis nula (H0) y la hipótesis alternativa (H1), de tal manera
que se pudiera demostrar si hubo diferencia significativa en los promedios de mortalidad
acumulada en cada uno de los tratamientos empleados durante la investigación.
En consecuencia, la hipótesis nula (H0) se deniega cuando el valor de P-valor es ˂ 0,05; por
consiguiente, significa que las concentraciones de los tratamientos si inciden en el % de
mortalidad de las larvas en estadio IV de Aedes aegypti. No obstante, si en la hipótesis
alternativa (H1) el valor de P-valor es ˃0,05 se rechaza, lo que significa que las concentraciones
del extracto de Citrus latifolia no inciden en el % de mortalidad (Guisande, Barreiro, Maneiro,
Riveiro, Vergara, y Vaamonde, 2006).
49
Tabla 6.
Análisis estadístico ANOVA de un factor
Df Sum Sq Mean Sq F value Pr(˃F)
Tratamiento 4 1.9957 0.4989 29.37 0.000000614
Residuals 15 0.2548 0.0170
Fuente: Software R, 2020.
La tabla 6 muestra los resultados del análisis estadístico realizado mediante el software, se
observan los grados de libertad, suma de cuadrados, cuadrados medios, valor estadístico F y P-
valor (Software R, 2020).
El valor P se calculó mediante el software R con el análisis estadístico ANOVA para un
factor, en la tabla 6 se observa que P-valor = 0,000000614, evidenciando que su nivel de
significancia es menor a 0.05, de acuerdo al nivel de significancia obtenido, la hipótesis nula
(H0) es rechazada, siendo así, se demuestra que sí hubo diferencia significativa en los promedios
del porcentaje de mortalidad acumulada de las larvas de Aedes aegypti utilizando las diferentes
concentraciones del extracto etanólico de Citrus latifolia como larvicida.
50
Diagrama de dispersión ANOVA de un factor software R
Figura 22. Dispersión ANOVA % mortalidad larvas Aedes aegypti
Fuente: Software R
El porcentaje de mortalidad de las larvas en IV estadio de Aedes aegypti aumenta a mayor
concentración del extracto etanólico de Citrus latifolia como se puede observar en la figura 22.
El tratamiento que tuvo menor homogeneidad fue la concentración a 500 ppm, es decir, hay
mayor dispersión entre los datos obtenidos a partir de los bioensayos, contrario con lo observado
en las concentraciones a 600 ppm y 700 ppm los datos presentaron menor dispersión y mayor
porcentaje de mortalidad presentando un 68% y 97% respectivamente, asimismo, son las
concentraciones que mostraron resultados óptimos en cuanto al porcentaje de mortalidad de las
larvas en cuarto estadio de Aedes aegypti.
51
6. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
La utilización de herramientas estadísticas como Probit, ANOVA y la formula Abbott en esta
investigación otorgó la posibilidad de realizar análisis, mediante los cuales se compararon los
resultados obtenidos en los bioensayos, con lo enunciado en la teoría sobre el efecto larvicida
del extracto etanólico del género Citrus sobre las larvas en IV estadio de Aedes aegypti.
Colombia debido a la presencia de zonas con temperaturas mayores a 25°C tiene un alto
consumo de Citrus latifolia para la preparación de refrescos entre otros productos, generando
grandes cantidades de cáscara como desecho, está puede ser utilizada para la extracción
etanólica del aceite esencial con efecto larvicida y ser usado para disminuir la población de
Aedes aegypti vector de diferentes enfermedades, siendo una opción efectiva en el campo de la
salud pública y manejo de residuos sólidos.
La utilización de productos orgánicos con efecto larvicida como el extracto etanólico de
Citrus latifolia, es una alternativa viable para contrarrestar el aumento en la población del
mosquito Aedes aegypti en las regiones endémicas del país, al respecto, Vera et al., (2014)
mencionan que la actividad larvicida del género Citrus se debe a componentes como el
limoneno, de acuerdo Montero (2009) alude que el aceite de Citrus latifolia contiene 78,84%
de limoneno, así mismo, Andrade, et al., (2017) indican que el limoneno es el terpeno más
abundante de este género y posee efecto tóxico sobre las larvas de Aedes aegypti.
En Salud Pública algunos plaguicidas y larvicidas son aplicados en fuentes de
almacenamiento de agua para consumo, estas sustancias deben tener baja toxicidad para otras
especies y no pueden modificar de forma significativa el sabor, el olor o el color del agua. Las
52
Guías para la calidad del agua potable de la OMS incluyen recomendaciones sobre el uso de
plaguicidas en el agua potable y establece que estos productos se deben aplicar en el nivel de
concentración más bajo posible (OMS, 2020). Sin embargo, no establece un rango de
concentración para determinar la efectividad de la actividad larvicida de los extractos naturales
(OMS, 2020). En la investigación realizada por Cendales y Castillo (2018), los resultados
del extracto de Citrus sinesis arrojaron una CL50 igual a 3856,39 y una CL90 igual a 5987 ppm,
mientras que los resultados obtenidos en el presente estudio presentaron una CL50 igual a 513
y CL90 de 688 ppm, se puede inferir que el extracto etanólico de Citrus latifolia cumple con las
condiciones establecidas por la OMS al ser efectivo con una menor concentración. Al respecto
Komalamisra, Trongtokit, Rongsriyam y Apiwathnasorn (2005) consideran que un larvicida
natural es efectivo si la CL50 está dentro del siguiente rango (100 ppm <LC50 <750 ppm).
Con relación a la investigación de Warikoo, Ray, Sandhu, Samal, Wahab y Kumar (2012)
donde evaluaron la actividad larvicida del extracto de las hojas de Citrus sinensis contra los
cuatro estadios larvales de Aedes aegypti, los bioensayos mostraron una CL50 y CL90 de 446,84
y 1370,96 ppm respectivamente transcurridas 24 horas de exposición. Y la investigación
realizada por Ankhal, Lalami y Guemmouh (2015), sobre la actividad larvicida de aceites
esenciales de Citrus aurantium y Citrus sinensis contra larvas de Anopheles labranchiae. los
resultados obtenidos revelaron que Citrus aurantium resultó más eficiente con una CL50 igual
a 22.64 ppm y CL90 de 83.77 ppm, mientras que el de Citrus sinensis dio como resultado una
CL50 de 77.55 ppm y CL90 igual a 351.36 ppm después de 24 horas de exposición. Al evaluar
estos resultados con los obtenidos para el extracto de Citrus latifolia en el cuarto estadio larval
de Aedes aegypti, se plantea la hipótesis que este mosquito requiere de una concentración letal
mayor de los extractos del género Citrus por su capacidad de resistencia y adaptación a
53
larvicidas Galavíz, et al., (2016). Contrario a lo que sucede con la especie Anopheles
labranchiae siendo está más sensible, por ende, requiere menor concentración de extractos de
Citrus.
Los resultados obtenidos en el presente estudio determinaron la CL50 y CL90 que son
necesarias para obtener el deceso del 50 y 90% de las larvas de Aedes aegypti expuestas al
extracto de Citrus latifolia, determinando que es necesaria una concentración a 513 ppm para
que muera el 50% de los individuos expuestos al tratamiento, de igual manera se estableció que
a 688 ppm murió el 90% de las larvas de Aedes aegypti, y a 700 ppm murió el 97% en una
muestra de 100 individuos. Al respecto, Morales, Gómez, Rovira y Abrahams (2007)
obtuvieron mortalidad del 100% de las larvas expuestas a 150 ppm de extracto etanólico de
Citrus paradisi, lo que demuestra la actividad larvicida que posee el género Citrus sobre las
larvas de Aedes aegypti, (Andrade, Sánchez, Nevárez, Camacho y Nogueda, 2017).
Así mismo, Sarma, Adhikari, Mahanta y Khanikor (2019) evaluaron la actividad larvicida
del aceite esencial de la cáscara y la hoja de Citrus aurantifolia contra Aedes aegypti, dando
como resultado una CL50 de 128 y 188 ppm respectivamente, siendo de acción tóxica más
rápida el aceite esencial de la cáscara. De acuerdo con los resultados de la CL50 obtenidos en
el extracto de Citrus latifolia que corresponde a 513 ppm, la variación en el resultado de las
concentraciones letales de cada investigación se puede producir debido a varios factores, al
respecto Leyva, et al., (2009) mencionan que la potencialidad de los aceites esenciales en la
actividad inhibidora de la oviposición, reguladora del crecimiento larvicida e insecticida contra
Aedes aegypti varía según la especie vegetal, su origen, su composición y los mecanismos de
acción contra plagas. Así mismo, se infiere que las metodologías utilizadas en la extracción
del aceite esencial también interfieren en los resultados obtenidos, puesto que para Citrus
54
aurantifolia aplicaron el método de destilación hidroeléctrica con el aparato de Clevenge,
mientras que para la extracción del aceite esencial de Citrus latifolia se utilizó el método de
extracción caliente con extractor Soxhlet, y esto puede generar cambios en las características y
concentración de los compuestos activos extraídos.
Cabe resaltar que dentro de la literatura consultada, no se encontraron estudios sobre el efecto
del extracto etanólico de Citrus latifolia en mosquitos, por lo cual la variación de los resultados
obtenidos en los estudios con los géneros de Citrus mencionados anteriormente se puede atribuir
a las metodologías de extracción y a la cantidad del compuesto limoneno en las especies, al cual
se le concede la toxicidad.
Este estudio en comparación con los antes descritos, tiene una letalidad óptima, basándose
en variables de tiempo y concentración, por ello se propone el extracto etanólico de Citrus
latifolia como un agente capaz de controlar la población de Aedes aegypti, así mismo,
contrarrestar los efectos que ha producido este vector en la salud de la población colombiana
principalmente en las comunidades más vulnerables del trópico.
55
7. CONCLUSIONES
● El extracto etanólico de Citrus latifolia demostró tener propiedades larvicidas contra
el mosquito Aedes aegypti, demostrando letalidad en todas sus concentraciones y
presentando aumento a medida que se aumenta la concentración del extracto.
● El extracto etanólico de Citrus latifolia es una alternativa favorable debido a que logra
una letalidad del 97% en una muestra de 100 individuos a concentración de 700 ppm
transcurridas 24 horas de exposición.
● A partir de los resultados obtenidos en laboratorio, se realizó análisis estadístico con
el modelo Probit para determinar las concentraciones con mayor letalidad CL50 y CL90,
donde se encontró que la dosis letal media corresponde a 513 ppm y la dosis letal noventa
es de 688 ppm del extracto de Citrus latifolia.
● Se debe exponer la muestra de Aedes aegypti a 7.14 horas para alcanzar una letalidad
del 50% y 12 horas para alcanzar el 90% de mortalidad en los individuos a una
concentración de 700 ppm.
● La exposición de Aedes aegypti a concentración de 500 ppm alcanza el tiempo letal
del 50% a las 36.7 horas y el 90% a las 74,4 horas de tener contacto con el extracto
Citrus latifolia.
● Citrus latifolia es una alternativa efectiva en el campo de la salud pública y manejo
de residuos sólidos.
56
8. RECOMENDACIONES
● Realizar el estudio de la evaluación del efecto larvicida del extracto etanólico de
Citrus latifolia (limón o lima ácida Tahití), para el control biológico de IV estadio
larvario de Aedes aegypti en condiciones de campo, para determinar el comportamiento
y la viabilidad, para el control del vector y sus reservorios.
● Realizar la evaluación del efecto insecticida del extracto etanólico de Citrus latifolia
(limón o lima ácida Tahití), para el control biológico en adultos de Aedes aegypti
● Emplear métodos distintos de extracción del aceite esencial de la cáscara de Citrus
latifolia, así como los solventes usados para obtener resultados comparables, debido a
que los distintos procesos de extracción pueden variar las propiedades físicas o químicas
del producto final de extracción.
● Extraer aceite esencial de las diferentes partes de la planta Citrus latifolia (pulpa,
semillas, hojas, flores, tallos) y comparar los resultados obtenidos entre sí, pues las
concentraciones del componente activo (limoneno) varía en cada parte de esta especie
vegetal.
● Se recomienda evaluar el efecto larvicida en otras especies del género Citrus
limonum, para hacer un análisis mayor de reacción tóxica en el IV estadio larvario de
Aedes aegypti.
57
9. BIBLIOGRAFÍA
● Alcántara, J. (2014). Extracción de aceites esenciales de la cáscara de limón persa.
(Tesis de pregrado). Recuperado de:
https://tesis.ipn.mx/bitstream/handle/123456789/19571/JAEL.pdf?sequence=1&isAllo
wed=y
● Andrade, D. (2019). Avaliação da atividade larvicida de óleos essenciais de espécies
de Citrus frente às larvas de Aedes aegypti. (Tesis de maestría). Recuperado de:
https://tedebc.ufma.br/jspui/bitstream/tede/2997/2/DionneySousa.pdf
● Andrade, S., Sánchez, L., Nevárez, G., Camacho, A., y Nogueda, B. (2017). Aceites
esenciales y sus componentes como una alternativa en el control de mosquitos vectores
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