ÁREA DE SALUD HUMANA

TERAPIA GÉNETICA

DOCENTE: DR. HECTOR

VELEPUCHA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LOJA

Carrera de Medicina

MODULO IV

TERAPIA GENICA

Tratamiento de enfermedades mediante la transferencia de material genético a células

EX VIVO IN SITU

MECANISMOS DE TRANSFERENCIA VIRALES

VECTOR VIRAL

RETROVIRUS

ADENOVIRUS VIRUS ADENOSOCIADOS

HERPES VIRUSSIMPLE

VECTORES RETROVIRALES1. Remplazar genes virales gag, pol, env genes

terapéuticos. Solo LTR se conserva2. Purificados3. transferidos al paciente

VECTORES RETROVIRALESV

EN

TAJA

S • Producción alta• No afecta a

célula• Alta eficacia

DES

VEN

TAJ

AS • Material

genético limitado

• Trabaja células en mitosis

• Mutagénesis insercional

VECTORES ADENOVIRALES

• ADN doble cadena y lineal

• 36 Kb• capside icosaedrica• Vértices barras

interacción con receptores celulares

• Replicación viral

• cambiado por genes terapéuticos

Evadir sistema inmune del huésped

Encapsulado dentro de partículas adenovirales defectuosas

Genoma viral cortado en Reg. E1 y E3

VECTORES ADENOVIRALESV

EN

TAJA

S • No necesita células en mitosis

• No existe mutagénesis insercional

DE

SV

EN

TAJA

S • Material genético limitado

• Corta duración• Respuesta

inmune

VIRUS ADENOASOCIADOS

• Pertenecen a la familia Parvoviridae

• ADN cadena simple• No son patógenos• Virus dependientes

(adenovirus o herpes virus)

No son patógenosInfectan células en /o no95% genoma removido

Pequeño tamañoCorta expresión

VEN

TA

JAS

DES

VEN

TA

JAS

VIRUS HERPES SIMPLE

Genoma de 153 KB

Posee ADN de doble cadena

Es neutrópico.

No afecta fisiología neuronal

Grande capacidad para material génico

1. Fosfato de calcio

2. Microinyecciones

3. Electroporación

4. Liposomas

5. ADN plasmidico desnudo

6. Inyección balística de ADN

7. Transferncia por ondas de choque

METODOS DE TRASFERNCIA NO VIRALES

Fosfato de calcio.• Precipitaciones de ADN

plasmidico que interacciona con iones de calcio, luego ClNa se añade buffer de fosfato.

Microinyeccion.• Material genético es

introducido con pipeta hacia el núcleo celular

Electroporación• Se aplica voltaje se forman

poros y penetra suspención de ADN y células

LIPOSOMAS

ADN PLASMIDICO DESNUDO• Se inyecta ADN plasmídico directamente al tejido• Mejor respuesta en músculo estriado.• Factores modificadores edad y especie.

Liposomas Cationicos

Cargados +

Co-lípidos los

estabilizan

Se unen ADN

Liposomas ph-

sensitivos

Cargado -

pH los destabilizaADN es captado por

centro acuoso

INYECCIÓN BALISTICA DE ADN• ADN plasmídico fijado a micropartículas,

se liberan a presión bombardeando a la célula

TRANSFERENCIA POR ONDAS DE CHOQUE• Ondas de choque (litotriptor) aumenta

permeabilidad de célula eucariota

NUEVAS TÉCNICAS

Cromosomas humanos artificiales

Utilizados como

vectores para

secuencias de ADN

Vectores mitocondria

les

Utilizar como

vectores para tratar

enf. Hereditaria

s y fenotipicas

Estrategias para terapia génica

CORRECCIÓN DE MUTACIONES• Enfermedades con perdida de función de gen introduce clon de gen

normal• Enfermedades autosómicas recesivas (Distrofia muscular, Fibrosis quística,

Hiprcolestorolemia)

DESTRUCCIÓN DE CELULAS ESPECÍFICAS• Tratamiento de cáncer destrucción de células cancerosas

DirectaGen toxina o

enzima

IndirectaEstimula Sist.

inmunitario

CORRECIONES DE

MUTACIONES

Recombinación génica

Ribozimas Destrucción mARN

Terapia antisentido

Bloqueo de la transcripción

Enfermedades susceptibles a terapia

génica

HEREDITARIAS

RECESIVAS: Transferencia de

un gen

DOMINANTES:

Bloqueo o recombinación

NEOPLASICAS

Destrucción celular

específica

INFECCIOSAS

Bloqueo terapia antisentido o

ribozimas

MULTIFACTORIALES

F. Angiogénicos infarto

Gen interleukina 1 c. sinoviales