Folin-Ciocalteau

Los fenoles reaccionan con el reactivo de Folin - Ciocalteau dando un

color azul propio de la reacción con fenoles. El reactivo de Folin - Ciocalteau se

obtiene ya preparado de las casas comerciales (Sigma). Este reactivo contiene

una mezcla de wolframato sódico y molibdato sódico en ácido fosfórico y

reacciona con restos fenólicos presentes en las proteínas (tirosinas) y en

compuestos como ácido gálico y sus derivados, flavonoides, etc.

El ácido fosfomolibdotúngstico (formado por las dos sales en el medio

ácido), de color amarillo, que al ser reducido por los grupos fenólicos da lugar a

un complejo de color azul intenso, es el que medimos a una longitud de 760 nm

(Singleton y Rossi, 1965).

Es un método de medida del contenido en fenoles totales y otros

compuestos que no siendo fenólicos muestran una cierta capacidad de

reacción. Esta reacción es una medida también de la capacidad antioxidante.

Por lo que en muchos trabajos se ha asimilado como un método de

determinación de la capacidad antioxidante

Figura XX. Recta patrón del método Folin-Ciocalteau

Para realizar la recta patrón (Figura XX) añadimos cantidades variables

de ácido gálico 0.25 mM (dilución de 25/100 de ácido gálico 1 mM) a 600 µL de

solución de carbonato sódico al 7.5% y el agua correspondiente para alcanzar

un volumen total de 1.5 mL (Tabla XX). Posteriormente se añade a cada tubo

200 µL de reactivo Folin-Ciocalteau, e incubamos los tubos 50ºC durante 10

minutos. A continuación se mide la absorbancia a 760 nm en el

espectrofotómetro. Na2CO3

Blanco P nº1 P nº2 P nº3 P nº4 P nº5 P nº6Concentración (µg) 0 4.3 8.5 12.8 17.0 21.3 25.51. Volumen µL de Na2CO3

7.5%600 600 600 600 600 600 600

2. Volumen µL de ácido gálico 0.25 mM

0 100 200 300 400 500 600

3. Volumen µL de agua 900 800 700 600 500 400 3004. Volumen µL de reactivo

Folin-Ciocalteau200 200 200 200 200 200 200

Tabla XX. Preparación de la recta patrón del método Folin-Ciocalteau

La medida de los diferentes extractos de té se realiza sustituyendo en el

método el patrón de ácido gálico por un volumen fijo de 10 µL de extracto. Para

los cálculos debemos tener en cuenta el volumen y concentración del extracto

de partida (1 g de té en 100 mL de agua) y el volumen de extracto utilizado. Los

resultados se interpolan en la curva de calibrado 0.25 mM de ácido gálico y se

expresan en µg equivalentes de ácido gálico por gramo de peso fresco (Figura

XX)

0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.60

5

10

15

20

25

30

f(x) = 49.4037898140128 x + 0.201692905891894R² = 0.999651277216996

Figura XX. Recta patrón de ácido gálico expresada en µg equivalentes de

ácido gálico por gramo de peso fresco.