HEMOGLOBINA, HEMATOCRITO

HEMATOCRITO HEMOGLOBINA.

TIPOS DE HEMOGLOBINAHb Gower I: ( 4 cadenas psilon ) o Hb primitiva embrionaria, la podemos encontrar durante la hematopoyesis en el saco vitelino en la 5ta y 6ta semana de gestacin Hb Gower II: La encontramos en la 4ta y 13 semana de gestacin en el saco vitelino, tiene dos cadenas Z y dos cadenas psilon (Gower I)Hb Portland: se encuentra en la 4 13 semana en el saco vitelino esta formada por dos cadenas Z y dos alfa

Hb Fetal (HbF): (gamma) se forma durante la eritropoyesis del hgado y la medula sea en el feto constituye 90-95% de la produccin total de Hb. A las 34 semanas de gestacin; constituye menos del 2% de HbA.

Constituye de 80-95% de la produccin de Hb de 34-36 semanas de gestacin

Hb. Adulto (HbA): formada por dos cadenas alfa y dos Beta. Es la mas importante aparece a la 9 semana de gestacin; pero la sntesis de cadenas Beta no excede las cadenas gamma (fetal) hasta despus del nacimiento.

La HbA aumenta con la edad y alcanza los valores normales del adulto al final del 1er ao.

DETRMINACION DE HEMOGLOBINA

Fundamento del mtodo Este mtodo consiste en efectuar una dilucin exacta de sangre en una solucin que contiene ferrocianuro de potasio. Que convierte la hemoglobina en Cianametehemoglobina y se compara colorimtricamente con una solucin patrn de Cianametehemoglobina exacta y estable.

DETERMINACION DE HEMOGLOBINA

4- mezclar bien la muestra y esperar 5 minutos para hacer la lectura.

5-Transferir a la cubeta de lectura y leer en el espectrofotmetro a 540nm. ( primero calibrar con agua destilada y blanco de reactivo llevar a cero.)

6- Leer en la curva estndar la concentracin de la muestra desconocida o multiplicar por el factor de calibracin.

CALCULO DE FACTOR DE CALIBRACION UTILIZANDO UN PATRON DE CONCENTRACIN CONOCIDASiempre esperar a que el reactivo este a temperatura ambiente antes de iniciar a trabajar

FACTOR DE CALIBRACION (FC)

FC = CONCENTRACION DE DEL ESTNDAR PROMEDIO DE LECTURAS DEL PATRON

Hb gms./dL. = ABS. DE LA Mx DESC. X EL FC

Curva de calibracin para HbSe toma un Kit. de calibracin con estndar de CC. Normal, de una CC. Alta y otro de una CC baja, y se miden las absorbancia de cada una de ellas o se toma un Standard de CC. conocida y se hacen diluciones mayores y menores que el normal y se miden las absorbancia y se determina un factor que es el promedio de las tres diluciones.

Teniendo que A= . b. C y como b=1 cm=> A/ = C para facilitar el calculo A . (1/ ) = C donde (1/ )= F y es la inversa de la pendiente de la curva tendremos que C= F . A. Dicho en otras palabras la recta se ajusta auna ecuacin del tipo y=ax+b.

Lecturas de absorbanciaConcentracin de Hb

De esta manera controlo: La linealidad del equipo El deterioro que sufre el reactivo

Procesando un estndar todos los das:Controlo el deterioro que puede sufrir el reactivo desde el diaque se lo preparo y se realiz la curva.Controlo el factor humanoCambios en la tensin de la red o desgaste de la lmpara del fotocolormetro

CAUSAS DE ERROR1. Errores de extraccin2. Empleo de anticoagulantes no recomendados3. Coagulacin parcial de la sangre

Errores de la dilucin:1. Empleo de pipetas automticas descalibradas u otras pipetas sucias o hmedas2. No eliminacin del exceso de sangre adherida a las paredes externas del capilar antes de introducirlo en el reactivo3. Dilucin incompleta de la sangre en el reactivo

Errores de la transformacin de la hemoglobina en HiCN:1. Empleo de reactivo de Drabkin mal preparado o vencido2. Lectura antes del tiempo necesario para la completa transformacin de la Hb en HiCN

Errores de la determinacin:1. Empleo de instrumentos no calibrados2. Cubetas sucias o deterioradas3. Soluciones turbias de HiCN

Errores en la conservacin del reactivo:1. Congelacin del reactivo, lo que produce transformacin de K3 Fe(CN) 6 en K4 Fe(CN) 6 y una oxidacin parcial de la Hb.Conservacin del reactivo en botellas de polietileno: se pierden grupos CN con formacin exclusiva de metahemoglobina, en vez de HiCN, con lo que los valores de concentracin de Hbobtenidos son inferiores a los reales.

DETERMINACION DE HEMOGLOBINA POR METODO DE SULFATO DE COBREProcedimiento:Disponer la solucin de sulfato de cobre en un vaso de precipitados de 50 ml.

2. Recoger una gota de la sangre problema.

3. Dejar caer una gota de sangre sobre el sulfato.

TECNICABMStd.R. CMHb5 mL.5 mL.5mL. Sangre-20uL--Estndar ----20uL.Incubar por 3 - 5 min. A T ambienteLeer a 540 nm

DETERMINACION DE HEMOGLOBINASe mide por espectrofotometra de absorbanciaSe lisa el glbulo rojo y se aade solucin de Darrow para obtener cinometahemoglobina, la cual es leda a 540 nm.Factores que alteran su lecturaHiperlipemiaHemlisisHiperleucocitosisIndica cuanta protena existe por unidad de volumen. ndice para diagnosticar anemia.

Importante La reaccin bsica en la produccin estndar de cianametahemoglobina es la conversin de la Hb. En metahemoglobina por el ferrocianuro y la metahemoglobina con cianuro potsico para formar pigmento cianametahemoglobina.Muestras de sangre hemolizadas o con exceso de oxalatos darn valores falsos de Hb. Se recomienda volver a tomar la muestra

Todos los tipos de hemoglobina se transforman en cianametahemoglobina. Por esta razn se le llama a este mtodo, Hemoglobina totalLas concentraciones de las ampollas de Std. de hemoglobina, varan un poco de un lote a otro

VALORES NORMALESAl nacer puede ser normal hasta 18 gr/dL.Infancia 11 13 gr/dL.adultos:Mujeres: 13 15 gr/dL.Hombres: 14 17 gr/dL.

DETERMINACION DE HEMATOCRITO

HEMATOCRITOEs el volumen de eritrocitos expresados en (%) del volumen de sangre.El hematocrito, se puede determinar por centrifugacin de sangre heparinizada en un tubo capilar (tambin conocido como un tubo de microhematocrito) a 3,000rpm durante cincominutos.

El hematocrito es la proporcin de clulas sanguneas en el volumen total de la sangre, es decir, la proporcin entre componentes sanguneos slidos y lquidos. El hematocrito informa sobre la fluidez de la sangre.HEMATOCRITO: es el porcentaje del volumen de la sangre que ocupa la fraccin de los glbulos rojos.

FUNDAMENTOEste examen mide el volumen (cantidad) de glbulos rojos en la sangre, comparado con otros componentes. Los resultados del examen se informan como un porcentaje. Este examen puede ser usado para evaluar o manejar enfermedades como:ENFERMEDAD RENALTERMINALINSUFISCIENCIA CARDIACA

VALORES NORMALESHEMATOCRITO % AL NACER

HASTA 55% INFANCIA

35 38 % ADULTOS: MUJERES38 44 %HOMBRES42 51 %ESTOS VALORES PUEDEN VARIAR SEGUN REFERENCIA BIBLIOGRAFICA O CASA COMERCIALES

VALORES NORMALES DE HEMATOCRITO

SE UTILIZA EL HEMATOCRITO PARA ESTUDIAR:

Casos de deshidratacin Anemia

Materiales y equipo a utilizar

Procedimiento 1.Extraer una muestra de sangre total realizando una puncin con la lanceta sangre con EDTA.

2. Con un tubo capilar tomar sangre inclinar el tubo(con anticoagulante), hasta llenar por ms de la mitad del tubo. Luego taparlo con plastilina.

3.Colocar el tubo capilar en la microcentrifuga

4. Centrifugar 5 minutos a 3,000 rpm.

5.Con un lector de hematocrito, determinar el valor. ( tabla para hematocrito)

Interferencias

Es importante reportar el color del plasma de la siguiente maneraPlasma

Caractersticaa) Plasma ictrico:cuando el color del plasma es amarillo o anaranjado

b) Plasma hemolizado:Cuando el color del plasma es rojizo debido a hemolisis, propia del paciente o muestra mal tomada c) Plasma lipmico Cuando el color del plasma es blanco lechoso debido a ingestin reciente de comida rica en grasa o a exceso de lipoprotenasd) Plasma celeste o azulDebido a la introduccin de sustancias colorantes en el sistema circulatorioe) Si la hemolisis es muy intensaMejor tomar nueva muestra no reportar el Hto.

INDICES HEMATIMETRICOSLa determinacin de hematocrito y hemoglobina permiten determinar los ndices hematimtricos que son de gran valor para :DiagnsticoClasificacin y tratamientos de las anemias

INDICES HEMATIMETRICOS ABSOLUTOS SON :

Clculos: Hemoglobina Corpuscular Media(HbCM):HbCM= Hb X 10 microgramos las dos primeras cifras de eritrocitosPara calcular este valor se divide el valor de la Hb. en gramos por 100 ml. de sangre, entre el numero de eritrocitos en millones por mmc.VALOR NORMAL: AL NACER: 40 picogramos, cifra que desciende rpidamente al nivel propio de la infancia= 27 30 pg.Adultos : 27-32 pg.

Un ndice inferior o superior al valor de HbCM corresponde respectivamente a hipocroma o hipercroma en los glbulos rojos macrocticos la cantidad de Hb. Puede ser mayor de lo normal. El aumento de Hb. Es paralelo al aumento de volumen globular y no refleja una sobresaturacin de Hb.

CONCENTRACION DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (CHbCM)CHbCM= Hb X 100 Hto.la cantidad de Hb. contenida, no en 100ml. de sangre total, sino en el volumen de masa corpuscular en la cual esta contenida, expresada en g% multiplicando x 100 y dividindola por el Hto.valores normales: AL NACER: 45g%NIOS 31- 34 g%ADULTOS: 32 38 g%PUEDE ESTAR AUMENTADA EN CASOS DE ESFEROCITOSIS HEREDITARIA

VOLUMEN GLOBULAR MEDIO (VCM)VCM = Hto. X 10 mmC 2 primeras cifras de los GRVALOR NORMAL: AL NACER: 105 flINFANCIA: 73 - 81 flADULTOS: 82 94 fl (fenolitros)Cuando los glbulos rojos son mayor que lo normal se dice que hay macrocitosis y si coexiste anemia se llama anemia Macroctica

Cuando los glbulos rojos son mas pequeos se dice que hay microctosis y en el caso de existencia de anemia se dice que es anemia microctica .En caso de que exista anemia pero los glbulos rojos sean de tamao normal, la anemia se llama anemia normoctica y los eritrocitos reciben el nombre de normocitos.