IDENTIFICACIÓN DE GENOMAS VIRALES. 94 ºC DESNATURALIZACIÓN DEL ADN 55-60 ºC ADHESIÓN DE LOS...
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IDENTIFICACIÓN DE GENOMAS VIRALES
94 ºC DESNATURALIZACIÓN DEL ADN
55-60 ºC ADHESIÓN DE LOS PRIMERS
5´ 3´
3´5´
3´ 5´
5´ 3´
72 ºC EXTENSIÓN (La Taq. polimerasa agrega nucleótidos)
5´ 3´
5´3´
3´ 5´
5´ 3´
AMPLIFICACIÓN DEL ÁCIDO NUCLEICO - PCR
http://www.youtube.com/watch?v=Kuy4PDb6bdU
http://www.cienciahoy.org.ar/hoy23/reaccion.htm
TERMOCICLADORTERMOCICLADOR
AQUÍ SE REALIZAN LOS 3 PASOS DE AMPLIFICACIÓN DEL DNA:
1.- DESNATURALIZACIÓN DEL DNA2.- PEGADO DE LOS PRIMERS3.- EXTENSIÓN DE LAS CADENAS DE DNA
ESTE PROCESO SE REPITE 30 A 40 VECES
ARMADO DEL GEL DE AGAROSA PARA VISUALIZACIÓN POR ELECTROFORESIS DE LOS PRODUCTOS DE LA PCR http://www.youtube.com/watch?v=SahgDkDSutk
Agregado deBromuro de etidio en el gel
Se cubre el gel con buffer de corrida
Siembra de las muestras
Lectura en el transiluminador
TECNICAS DE BLOTEO o TRANSFERENCIA:Southern blot http://www.nucleomilenio-emba.cl/index.php?option=com_content&view=article&id=43:tecnica-southern-blot&catid=9:tecnicas-moleculares
Northern blot http://www.youtube.com/watch?v=KfHZFyADnNg
Western blot http://www.youtube.com/watch?v=nqspgMGNsrU
Papel absorbente
Membrana de nylon
Papel absorbente
gel
Membrana de nylonHibridación con sondas marcadas (ácidos nucleicos)Agregado de anticuerpos marcados (proteínas)
Las bandas que aparecen corresponden al ácido nucleico o a las proteínas buscadas
http://www.youtube.com/watch?v=zYSPnSwT6LQ