Importancia de los virus en los alimentos. Métodos de ... · 3) Especificidad de ... tipo de...
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Importancia de los virus en los alimentos. Métodos de detección
viral (Norma ISO 15216)
Sonia Marco Departamento de Bioensayos
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1- Introducción a la virología
2- Virus en alimentación y fuentes de transmisión
3- Técnicas de detección viral (en especial técnica RT-PCR)
4- Procedimiento de análisis indicado en la norma ISO 15216-1 y 15216-2
5- AINIA
6- Departamento de Bioensayos
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INTRODUCCIÓN A LA VIROLOGÍA Generalidades
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> Introducción a la virología: Generalidades
Definición:
“un virus es un parásito intracelular obligatorio que puede ser considerado como un bloque de material genético (ya sea ADN o ARN) capaz de replicarse en forma autónoma (empleando la maquinaria de la célula que hospeda), y que está rodeado por una cubierta de proteína y en ocasiones también por una envoltura membranosa que lo protege del medio y sirve como vehículo para la transmisión del virus de una célula a otra” (Renato Dulbecco, 1975)
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> Introducción a la virología: Generalidades
Características:
Ultramicroscópicos (nanómetros)
Mayoría virus alimentarios de
20-80 nm
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> Introducción a la virología: Generalidades
Características:
1) Parásitos intracelulares estrictos, necesitan la maquinaria biosintética del huésped para su replicación
2) No cultivables en ausencia de células hospedadoras
3) Especificidad de huésped en el proceso de infección y multiplicación
4) ADN/ARN + proteínas (cápside)
+ membrana lipídica (algunos)
5) Organismos muy numerosos
6) Ciclo de replicación característico
(lítico-lisogénico)
7) Hospedadores: plantas, animales,
arqueas, bacterias (bacteriofagos)
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> Introducción a la virología: Generalidades
Estructura:Virion: (partícula viral) Cápside proteica + material genético (estado extracelular)
Cápside: Envoltura proteica que envuelve al ácido nucleico del genoma
Nucleocapside: Cápside + ácido nucleico encapsulado + enzimas (polimerasas, transcriptasas, proteasas, lisozimas)
Capsómeros: Grupos de polipéptidos ubicados sobre la superficie de las partículas virales
Envoltura: Membrana que contiene lípidos o proteínas (glucoproteínas y proteínas de matriz)
DNA/RNA: Material genético (mono y bicatenario)
Protómeros: Unidad estructural de la cápside
Peplómeros: (espículas glicoproteicas)
Glucoproteínas codificadas por el virus ancladas en la envoltura viral
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> Introducción a la virología: Generalidades
Estructura: 4 tipos morfológicos básicos
(a) Helicoidales (desnudo)
(b) Icosaédricos(desnudo)
(c) Envueltos con membrana (estructura helicoidal envuelto)
(d) Bacteriofago
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> Introducción a la virología: Generalidades
Clasificación. Taxonomía: Rango de hospedador (humanos, plantas, bacterias,…), estructura del virión (simetría de la cápside, desnudo o con envoltura), tipo de ácido nucléico (ADN, ARN, circular o lineal, simple o doble)
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> Introducción a la virología: Generalidades
Clasificación. Taxonomía:Virus en humanos
Ejemplo taxonomía
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> Introducción a la virología: Generalidades
Taxonomía: http://www.ictvdb.org/organization.asp
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> Introducción a la virología: Generalidades
Ciclo biológico del virus: Fases
1) Absorción o fijación
2) Penetración o inyección (Desensamblaje y liberación del material genético)
3) Multiplicación o fase eclipse (replicación, transcripción y traducción)
4) Ensamblaje (unión de capsómeros forman la cápsidey se encapsulan ácidos nucléicos)
5) Liberación (salida de viriones)
LLíítico:tico: lisis y muerte celular
LisogLisogééniconico:: DNA recombina con el genoma celular (“un gen más de la célula”). Forma viral “profago” o virus atenuado
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> Introducción a la virología: Generalidades
Ciclo biológico del virus
CICLO LCICLO LÍÍTICO: EXOCITOSISTICO: EXOCITOSIS
Ruptura de la membrana Ruptura de la membrana celular. Muerte celular.celular. Muerte celular.
CICLO LÍTICO: GEMACIÓN
Virus con envoltura. Parte de la membrana celular.
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VIRUS EN ALIMENTACIÓN Y FUENTES DE TRANSMISIÓN Principales virus
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> Virus en alimentación y fuentes de transmisión
Principales brotes alimentarios (EU)
www.efsa.europa.eu EU summary report on zoonoses, zoonotic agents and food-borne outbreaks, 2014 (EFSA Journal 2015; 13 (12)
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> Virus en alimentación y fuentes de transmisión
Principales brotes alimentarios (EU)
www.efsa.europa.eu EU summary report on zoonoses, zoonotic agents and food-borne outbreaks, 2014 (EFSA Journal 2015; 13 (12)
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> Virus en alimentación y fuentes de transmisión
Principales virus relacionados con el consumo de alimentos
Diarrea leve28 nm (RNA sc)OcasionalmenteAstroviridaeAstrovirus
Gastroenteritis34 nm (RNA sc)Raro, principalmente marisco
CaliciviridaeSapovirus
Gastroenteritis, vómitos34 nm (RNA sc)SíCaliciviridaeNorovirus
Diarrea leve100 nm (DNA dc)
No informado. Aislado en agua y marisco
AdenoviridaeAdenovirus
Diarrea70 nm (RNA dc)Raro, frecuente en agua
ReoviridaeRotavirus
Hepatitis, severa embarazadas
34 nm (RNA sc)Principalmente aguaHepeviridaeHEV
Hepatitis, leve en jóvenes
28 nm (RNA sc)SíPicornaviridaeHAV
Asintomático, dolor muscular, cardiomiopatía, meningitis, parálisis motor SNC
28 nm (RNA sc)Sí, principalmente agua, presente en marisco
PicornaviridaePolio, Coxsackievirus, Echovirusenterovirus
ClínicaGenomaAlimentoFamilia Nombre
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> Virus en alimentación y fuentes de transmisión
Principales virus relacionados con el consumo de alimentos
www.efsa.europa.eu EU summary report on zoonoses, zoonotic agents and food-borne outbreaks, 2014 (EFSA Journal 2015; 13 (12)
Mayor incidencia: Mayor incidencia: NorovirusNorovirus. Tipos de los . Tipos de los alimentosalimentos
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> Virus en alimentación y fuentes de transmisión
Principales virus relacionados con el consumo de alimentos
Mayor Mayor incidencia de incidencia de norovirusnorovirus y y hepatitis Ahepatitis A
Matrices: Matrices: moluscos moluscos bivalvos> bivalvos> frutos rojos> frutos rojos> vegetalesvegetales
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> Virus en alimentación y fuentes de transmisión
Fuentes de transmisión
Fuente de contaminación: heces heces humanas y vhumanas y vóómitos de infectadosmitos de infectados
Grandes cantidades en aguas residuales aguas residuales urbanasurbanas
Mayor resistencia que las bacterias al procesado
Cantidades significativas en aguas vertidas al ambiente: presencia en ríos, lagos y mar. Estabilidad mesesEstabilidad meses
Alimento: ingestiAlimento: ingestióón oraln oral
¡¡contacto directo entre individuos!contacto directo entre individuos!
66.9%66.9%2.2 UFP2.2 UFPRotavirusRotavirus
8888--98%98%4.1x104.1x1011--10103 3
genomas/mlgenomas/mlPoliomavirusPoliomavirus
1.8x101.8x106 6 genomas/mlgenomas/mlNorovirusNorovirus
43.5%43.5%------------------------------------------------------------------------HEVHEV
57.4%57.4%----------------------------------------------------------------------HAVHAV
9090--100%100%3.8x103.8x105 5 genomas/mlgenomas/ml467467--2100 UFP/l2100 UFP/l
EnterovirusEnterovirus
8787--100%100%4.1x104.1x106 6
genomas/100 mlgenomas/100 mlAstrovirusAstrovirus
98%98%101022--10103 3 genomas/mlgenomas/mlAdenovirusAdenovirus
% muestras +% muestras +ConcentraciConcentracióónnVirusVirus
PrevalenciaPrevalencia en aguas residualesen aguas residuales
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> Virus en alimentación y fuentes de transmisión
NOROVIRUS
• Familia Caliciviridae, ARN ss, no segmentados, pequeños (24-27 nm), desnudos, estructura icosaédrica. Virus Norwalk (Ohio).
• Grupo genéticamente diversos: 5 genogrupos GGI-GGV y más de 31 grupos genéticos. GII el más prevalente. Humanos afectados por GI, GII y GIV.
• Clínica: Incubación: 24-48 horas. Gastroenteritis (esporádica y brotes) con náuseas, vómitos, dolor abdominal, diarrea. A veces fiebre. Escasa gravedad (2-3 días). Cesan a las 24-60 h. Susceptibilidad a la enfermedad universal (cualquier edad).
• Identificación: no crece en cultivo celular y gran diversidad.
• Dosis infecciosa: 16-200 partículas virales
• Transmisión: fecal-oral. 12% a 47% del total de gastroenteritis por NoV por consumo de alimentos o bebidas contaminadas y el resto se originan por contacto persona-persona
• Los NoV son estables dentro de un amplio rango de temperaturas, sobreviven a la congelación, la refrigeración y al calentamiento hasta 60ºC durante 30 minutos.
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> Virus en alimentación y fuentes de transmisión
HEPATITIS A
• Familia Picornaviridae, género Hepatovirus, ARN ss, no segmentados, pequeños, desnudos, estructura icosaédrica.
• Presenta 6 genotipos.
• La hepatitis A es una virosis hepática que puede causar morbilidad moderada a grave. Cada año se registran unos 1.4 millones de casos de hepatitis A en el mundo
• Clínica de 1 a varias semanas, fiebre, nausea, malestar, anorexia, dolor cabeza e ictericia. Incubación: 4 semanas (2-6),
• Transmisión: ingesta de alimentos o bebidas contaminadas o por contacto directo con una persona infectada por el virus. La hepatitis A de origen La hepatitis A de origen alimentario representa alrededor del 5% del total de casos de healimentario representa alrededor del 5% del total de casos de hepatitis A.patitis A.
• Excretado heces: 10-14 días antes de los síntomas ¡Problema durante este periodo y asintomáticos!
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> Virus en alimentación y fuentes de transmisión
HEPATITIS E
• Familia Hepeviridae, Género Hepevirus, ARN estable, 4 genotipos, simetría icosaédrica, desnudo, pequeño tamaño (32-34 nm)
• Endémico de zonas tropicales y subtropicales: consumo de agua contaminada.
• Hepatitis algo más severa. Mortalidad del 1% hasta 20% (embarazadas).
• Baja transmisión persona-persona. No secuelas ni cronicidad.
• 50% de hepatitis agudas en países emergentes
• Ubicuo en cerdos: entre 80-100% EUA. 20% en Cataluña. Animales domésticos.
• Países industrializados: no endémica. Casos esporádicos por cepas importadas, prevalencia con casos de personas sin antecedentes de viaje. En la India prevalencia en el ambiente 11% en aguas residuales y 56% en individuos que trabajan en contacto.
• Factor de riesgo: aerosoles de aguas residuales, contacto estrecho con animales infectados (cerdo).
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> Virus en alimentación y fuentes de transmisión
Alimentos implicados
Moluscos bivalvos
• Animales filtradores: aguas desecho aguas costerasconcentran HAV 100 veces en 1 hora persisten 6 semanas
• Depuración: elimina 1 o 2 órdenes de magnitud más bacterias entéricas que virus ¿indicadores fecales relacionados con contenido en virus?• Consumo crudo o poco cocinado• Consumo del alimento completo (tracto digestivo)• NoV, HAV. Hepatitis E, Adenovirus, Astrovirus, Rotavirus
Agua de bebida
• Importancia del origen del agua (brotes en agua de pozo, etc.)• Objetivo: eliminar el 99.99%
• Filtración: reducción de 10 veces• Filtración + desinfección: reducción de 1000 veces. Cloro:
Aumenta con la tªAumenta con el pHDisminuye con la turbidez
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> Virus en alimentación y fuentes de transmisión
Alimentos implicados
Vegetales/frutas no peladas
• Riego con aguas contaminadas, fertilizantes (abono), manipuladores alimentos• Consumo crudo• Elevado contenido de agua• Consumo sin pelar• Pocos brotes con aislamiento en el vegetal: cebolleta,• Pero si hay brotes en frutos rojos: fresas congeladas (3 brotes de HAV), frambuesa…
MAYORIA DE LOS BROTES OCASIONADOS POR UNA INCORRECTA MAYORIA DE LOS BROTES OCASIONADOS POR UNA INCORRECTA MANIPULACIMANIPULACIÓÓN DE LOS ALIMENTOSN DE LOS ALIMENTOS
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TÉCNICAS DE DETECCIÓN VIRALEn especial RT-PCR
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> Técnicas de detección viral
Métodos de detección viral-- Existen distintos mExisten distintos méétodos todos de deteccide deteccióón viral.n viral.
-- TTéécnicas por tipologcnicas por tipologíía de a de virusvirus
-- Todas las tTodas las téécnicas cnicas presentan limitacionespresentan limitaciones
KitsKits comercialescomerciales
Limitaciones:Limitaciones:
En general no En general no cultivables o difcultivables o difíícilesciles
DifDifíícil obtener cil obtener material de referenciamaterial de referencia
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> Técnicas de detección viral
Métodos de detección viralMicroscopia electrMicroscopia electróónica:nica:
AnAnáálisis directo de forma y lisis directo de forma y tamatamañño. No o. No úútil para todos.til para todos.
CitometrCitometrííaa de flujode flujo
Detecta y cuantifica una a Detecta y cuantifica una a una las cuna las céélulas de una lulas de una muestra. muestra.
Mide propiedades Mide propiedades óópticas: pticas: luz emitida por luz emitida por fluorfluoróócromoscromosy luz dispersada por las y luz dispersada por las partpartíículas del flujo. culas del flujo.
Diferencia las cDiferencia las céélulas por lulas por tamatamañño y complejidad. o y complejidad.
Alta sensibilidad. No Alta sensibilidad. No úútil til para todospara todos
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> Técnicas de detección viral
Métodos de detección viral MMéétodos inmunoltodos inmunolóógicos gicos (ELISA)(ELISA)
Se basa en la reacciSe basa en la reaccióón n antantíígenogeno--anticuerpo. anticuerpo. Generalmente se emplea un Generalmente se emplea un segundo anticuerpo segundo anticuerpo marcado.marcado.
Alta especificidadAlta especificidad..
No aplicable a todos.No aplicable a todos.
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-Se basa en la detección específica de DNA.
--Alta especificidad y sensibilidad.Alta especificidad y sensibilidad.
Métodos de detección viral
PCRPCR
> Técnicas de detección viral
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Norovirus Hepatitis A
-Se basa en la detección específica de ARN.
-Paso: copia de ARN en cADN.
-Se utiliza para la detección de virus.
--Alta especificidad y sensibilidad.Alta especificidad y sensibilidad.
Métodos de detección viral
> Técnicas de detección viral
RTRT--PCRPCR
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PROCEDIMIENTO DE ANÁLISIS INDICADO EN LA NORMA ISO 15216-1 Y 15216-2
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Indicaciones norma ISO 15216
> Procedimiento de análisis indicado en la norma ISO 15216
Parte 1:Parte 1: Método de cuantificación. Determinación de la concentración (copias genoma/g) Hepatitis A y norovirus GI y GII
Parte 2:Parte 2: Método cualitativo. Detección Hepatitis A y norovirus GI y GII
•• Matrices: Matrices:
vegetales de hoja y frutos rojos
moluscos bivalvos
agua embotellada
•• Fases:Fases:
Preparación de la muestra,
Concentración y extracción del ARN viral de alimento
Retrotranscripción para obtener el ADN complementario
Amplificación y detección por sondas fluorescentes del fragmento amplificado (PCR a tiempo real)
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Indicaciones norma ISO 15216
> Procedimiento de análisis indicado en la norma ISO 15216
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Indicaciones norma ISO 15216
> Procedimiento de análisis indicado en la norma ISO 15216
Permite detectar contaminaciones cruzadas entre detectar contaminaciones cruzadas entre muestrasmuestras de la misma tanda durante el proceso de amplificación y detección del ARN
Control negativo de PCR (NTC)
Garantiza la ausencia de contaminaciones cruzadas durante toda la manipulación de las muestras
Control negativo de proceso
ObjetivoControl
Permite la cuantificación de las muestras mediante el uso de ADNdcADNdc obtenido mediante obtenido mediante clonaciclonacióón del fragmento de amplificacin del fragmento de amplificacióónn
Control de cuantificación viral
Se encuentra en distinto tubo donde se estáanalizando la muestra y permite detectar detectar ppéérdidas de eficiencia de extraccirdidas de eficiencia de extraccióón viral de la n viral de la muestra (muestra (mengovirusmengovirus))
Control de eficiencia de extracción viral (exógeno)
Permite evaluar eficiencia de amplificacieficiencia de amplificacióónn de la RT-PCR mediante el uso de ARNscARNsc mediante trascripción del ARN in vitro
Control de eficiencia de amplificación
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Indicaciones norma ISO 15216
Toma de muestra y extracciToma de muestra y extraccióón viraln viral
> Procedimiento de análisis indicado en la norma ISO 15216
25 g a trocitos
Utilizar tampón TGBE y pectinasa, 5X PEG/NaCl, PBS, y cloroformo-butanol, en distintas fases
Procesos de centrifugación, agitación y ajuste de pH (a 9,5 luego a 7)
Frutos rojos
300ml -5 litros filtrar (bomba de vacío)
Utilizar tampón TGBE y PBS, en distintas fases
Procesos de centrifugación, agitación y ajuste de pH
25 g a trocitos
Utilizar tampón TGBE, 5X PEG/NaCl, y PBS, en distintas fases
Procesos de centrifugación, agitación y ajuste de pH
10 ejemplares vivos
Se extrae hepatopácreas o sistema digestivo (2g)
Se emplea proteinasa K para romper el tejido
Procesos de centrifugación, agitación, y tratamiento térmico 60ºC
Agua embotelladaVegetales Moluscos bivalvos
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Indicaciones norma ISO 15216
Imagen de la extracción del sistema digestivo de los moluscos
> Procedimiento de análisis indicado en la norma ISO 15216
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Indicaciones norma ISO 15216
ExtracciExtraccióón ARN viraln ARN viral
> Procedimiento de análisis indicado en la norma ISO 15216
MMéétodo comtodo comúúnn para todo tipo de matricespara todo tipo de matricesAlta eficiencia para eliminar inhibidoresAlta eficiencia para eliminar inhibidores
Tiocianato de Tiocianato de guanidinoguanidino++
ssíílicalica
ExtracciExtraccióón a partir de 500 ml elucin a partir de 500 ml elucióón en 100 mln en 100 ml
MMéétodo recomendado: uso de todo recomendado: uso de ssíílicalica magnmagnéética acoplada o no a tica acoplada o no a
equipo automatizadoequipo automatizado::
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Indicaciones norma ISO 15216
Proceso de amplificaciProceso de amplificacióón RTn RT--PCRPCR
Condiciones de amplificaciCondiciones de amplificacióón indicadas en la norma comunes a hepatitis A, n indicadas en la norma comunes a hepatitis A, NorovirusNorovirus GI y GII, y GI y GII, y MengovirusMengovirus (control de la eficacia de extracci(control de la eficacia de extraccióón). n). Excepto Excepto primersprimers especespecííficos por virus.ficos por virus.
> Procedimiento de análisis indicado en la norma ISO 15216
En cada tanda de En cada tanda de muestras se analizarmuestras se analizaráá
ARN extraARN extraíído de las muestrasdo de las muestrasControles negativosControles negativosRecta de calibraciRecta de calibracióón (solo en cuantificacin (solo en cuantificacióón)n)Recta de Recta de mengovirusmengovirus ((eficefic. extracci. extraccióón)n)
ARNscARNsc ((eficefic. amplificaci. amplificacióón)n)
InterpretaciInterpretacióón de resultadosn de resultados
Curvas de Amplificación HAV en Fresas
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Indicaciones norma ISO 15216
InterpretaciInterpretacióón de resultadosn de resultados
> Procedimiento de análisis indicado en la norma ISO 15216
Controles negativosControles negativosADNdcADNdc (curva de calibraci(curva de calibracióón cuando cuantificacin cuando cuantificacióón)n)ARN CE ARN CE MengovirusMengovirus control control MuestrasMuestras
Para interpretar los resultados se debe valorar Para interpretar los resultados se debe valorar previamente la previamente la eficiencia de extraccieficiencia de extraccióón viraln viral((mengovirusmengovirus) y la ) y la eficiencia de amplificacieficiencia de amplificacióónn((ARNscARNsc) y los controles negativos) y los controles negativos
Si estos son correctos: calcular los resultados obtenidosSi estos son correctos: calcular los resultados obtenidos
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Indicaciones norma ISO 15216
ExpresiExpresióón de resultadosn de resultados
> Procedimiento de análisis indicado en la norma ISO 15216
DetecciónCuantificación Matrices
Detectado en 300 ml o 5 litros
No detectado en 300 ml o 5 litros
LODt= 20 copias genoma en 300 ml o 5 litros
X copias genoma/ml
<LOQ (se detecta amplificado fuera de la curva)
Agua embotellada
Detectado genoma viral en 25 g
No detectado genoma viralen 25 g
LODt= 20 copias genoma en 25 g
X copias genoma/g
<LOQ (se detecta amplificado fuera de la curva)
Vegetales y frutos rojos
Detectado genoma viral en 2 g tejido digestivo
No detectado genoma viral en 2g tejido digestivo
LODt= X copias genoma en 2 g de tejido digestivo
X copias genoma/g tejido digestivo
<LOQ (se detecta amplificado fuera de la curva)
Moluscos bivalvos
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Indicaciones norma ISO 15216
> Procedimiento de análisis indicado en la norma ISO 15216
2. Extracci2. Extracci óón ARNn ARN
1. Extracci1. Extracci óón viraln viral
3. RT3. RT--PCRPCR
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> Resumen y conclusiones
Alta Alta prevalenciaprevalencia de virus en el medio ambiente: impacto en la de virus en el medio ambiente: impacto en la salud psalud púública. blica.
NoVNoV y HAV son los principales virus transmitidos vy HAV son los principales virus transmitidos víía a alimentariaalimentaria. . Principales alimentos: aguas, moluscos bivalvos, frutos rojos y Principales alimentos: aguas, moluscos bivalvos, frutos rojos y vegetales. Hepatitis E tiene mayor vegetales. Hepatitis E tiene mayor prevalenciaprevalencia de la esperada con de la esperada con casos aislados.casos aislados.
Necesidad de estandarizar y optimizar las tNecesidad de estandarizar y optimizar las téécnicas moleculares y cnicas moleculares y mejorar los programas de vigilancia epidemiolmejorar los programas de vigilancia epidemiolóógica para valorar la gica para valorar la incidencia y disminuir la diseminaciincidencia y disminuir la diseminacióón de enfermedades vn de enfermedades vííricasricas
En la mayorEn la mayoríía de brotes asociados a alimentos, el origen ha sido a de brotes asociados a alimentos, el origen ha sido los manipuladores de alimentos, mlos manipuladores de alimentos, máás que al procesado industrials que al procesado industrial
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AINIA¿qué es AINIA?
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> ¿Qué es AINIA?
AINIA es una asociación privada con fines no lucrativos, de ámbito nacional, formada por empresas del sector agroalimentario y afines.
http://ainia.es/presentacion/castellano/
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> ¿Qué es AINIA?
-Ayuda a las empresas a competir con nuevos productos y mejores procesos, mediante proyectos de investigación y asistencia técnica.
-Pone nuevas tecnologías al servicio de la calidad y seguridad de los alimentos, dando el soporte analítico necesario.
-Descubre nuevas vías para situar a la industria al máximo nivel internacional.
RESPUESTA A LOS RETOS DE LA EMPRESARESPUESTA A LOS RETOS DE LA EMPRESA
APORTANDO VALORAPORTANDO VALOR
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> ¿Qué es AINIA?
ORGANIZACIÓN: DEPARTAMENTOS
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> ¿Qué es AINIA?
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> ¿Qué es AINIA? > 13.000 m2 de instalaciones
www.ainia.es 50
> ¿Qué es AINIA? > 13.000 m2 de instalaciones
PLANTAS PILOTOPLANTAS PILOTO
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> ¿Qué es AINIA? > 13.000 m2 de instalaciones
LABORATORIOSLABORATORIOSPLANTAS PILOTOPLANTAS PILOTO
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DEPARTAMENTO DE BIOENSAYOSLíneas de investigación
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Diagnóstico y estrategias antimicrobianas(seguridad alimentaria)
Nutrición, salud y bienestar.
Bioproducción, biosíntesis y biocatálisis.
Laboratorio de control analítico
> Líneas de investigación Dpto. Bioensayos
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�Líneas de investigación Dpto. Bioensayos
Diagnóstico de contaminación microbiológica
Desarrollo de modelos predictivos, estimación cuantitativa de riesgos
Listeria monocytogenes in sliced mortadella at 5ºC
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
0 5 10 15 20 25 30
time(days)
Log(u
fc/g
) data
fit
Servicios de asistencia técnica:Estudios de alteraciónEstudios de vida útil
Diagnóstico de contaminación en planta
Desarrollo de biosensores
Detección rápida de microorganismos patógenos
0
1000
1500
2000
2500
3000
3500
4000
4500
5000
5
7
90
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
rate
(lo
g (
cfu
/g)/
days
Aditive (ppm)
temperature
Response Surface for Listeria monocytogenes at different levels of preservative and temperatures
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�Líneas de investigación Dpto. Bioensayos
Estrategias antimicrobianas
Materiales antimicrobianos
Servicios de asistencia técnica:Evaluación de materiales antimicrobianos
Evaluación de eficacia antibiofilmsEvaluación de eficacia biocida mediante técnicas microbiológicas
BiofilmsTecnologías de
inactivaciónInhibidores
noveles
Estrategias antimicrobianas de inactivación o inhibición basadas en materiales activos, compuestos inhibidores o tecnologías de inactivación (térmicas, UV, etc.)
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�Líneas de investigación Dpto. Bioensayos
Nutrición y salud: Evaluación de la absorción intestinal
Digestor dinámico
Bioensayocelular Análisis
Reproducción de lascélulas intestinalescon la línea celular
Caco-2
EvaluacióncompuestoAnálisis de
biomarcadores
Simulación de la digestión
gastrointestinal
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�Líneas de investigación Dpto. Bioensayos
Nutrición, salud y bienestar: funcionalidad• Funcionalidad de ingredientes, extractos, probióticos…• Biodisponibilidad de compuestos o ingredientes.• Monitorización del efecto de compuestos sobre la
microbiota intestinal, identificación y selección de microbiota de interés, desarrollo de modelos de flora intestinal
• Eficacia biológica y seguridad de cosméticos.• Bioaccesibilidad (cultivo celular + digestor dinámico)
Desarrollo de bioensayos a medida� Inmunomodulación, regulación de la obesidad, neuroprotección,
metabolismo del colesterol, resistencia a la insulina, anti-inflamatorios, saciantes, probióticos…
Evaluación de biomarcadores� Tipos de biomarcadores: estrés, muerte celular, regulación
tejido adiposo, proliferación celular, absorción de colesterol….
� Técnicas de evaluación: moleculares, espectrofluorimetría, citometría de flujo.
Bioensayos celulares
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�Líneas de investigación Dpto. Bioensayos
Bioproducción, biosíntesis y biocatálisis• Producción de microorganismos, starters industriales y probióticos.• Obtención de compuestos de alto valor añadido (C.A.V.A.) a partir de microorganismos
seleccionados.• Biotransformaciones de productos mediante el empleo de microorganismos seleccionados.
Microorganismo: aislados naturales / cepas de referenciaCondiciones de cultivo: medios de cultivo sintéticos / bajo coste; condiciones de T, t,
aireación, pH… Cinéticas de crecimiento.
ALIMENTACIÓN AGRO COSMÉTICA ENVASE
Desarrollo de bionutrientes y biofertizantes.
Bioestimulantes, biodefensivos y bioelicitores.
Estudios de escalado para la bioproducciónde principios activos u otros ingredientes para cosméticos, a partir de
microorganismos seleccionados.
Producción de bioplásticos a partir
de efluentes orgánicos
Mejora de procesos fermentativos
tradicionales (vinos, cervezas, aceitunas y encurtidos, lácteos,
zumos…)
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�Líneas de investigación Dpto. Bioensayos
Control analíticoLaboratorio acreditado por ISO 17025 para la mayoría de los análisis
Delegación española del comité ISO/CEN en microbiología de alimentos
I+D:Puesta a punto de nuevos métodos de análisis.
Análisis:Patógenos alimentarios (técnicas rápidas y métodos ISO)Bacterias alterantes e indicadoras, mohos y levaduras.Virus (norovirus, hepatitis A)AlérgenosAnálisis de superficiesIdentificación de microorganismos (Maldi-tof, rep-PCR)
Datos de interés:Funcionamiento 365 días/año.Servicios de alerta 24 horas.Más de 100.000 ensayos/año.
www.ainia.es 60
Muchas gracias por su atención
Sonia Marco 610780484
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