Universidad Andrés BelloFacultad de Ciencias de la SaludDepartamento de Ciencias BiológicasLaboratorio de Biología Celular BIO 035

Trabajo Práctico n° 5“Organización Subcelular”

Introducción

Se cree que la vida en la tierra hace mucho tiempo comenzó debido a una integración espontanea de moléculas, creando lo que actualmente conocemos como la unidad básica, estructural y funcional de todos los seres vivos llamada célula. Los precursores en adoptar este concepto como tal fueron células simples y sencillas conocidas como procariontes (bacterias), gracias a estos se dio paso a formas más complejas de vida como es el caso de las células eucariontas, que a diferencia de las primeras poseen núcleo manteniendo así el material genético aislado de otros compartimientos celulares. Además la célula eucarionta contiene una gran variedad de organelos para realizar funciones específicas por ejemplo mitocondrias (producción de energía), cloroplastos (fotosíntesis), retículo endoplasmatico rugoso (síntesis proteínas) y liso (síntesis de lípidos), lisosomas (digestión celular), peroxisoma (degradación peróxido de hidrogeno) entre otros.

A través del tiempo, la microscopia subcelular dio abasto para la visualización de estructuras en forma más detallada y concisa, pero no para definir su funcionalidad. Debido a esta inquietud se adoptaron técnicas que pudieran permitir el aislamiento de estos componentes celulares, obteniendo así una función específica para cada organelo y comprendiendo como funciona esta gran maquinaria llamada célula.

Una de las técnicas más usadas es el fraccionamiento celular que consiste en dos etapas: homogeneización y fraccionamiento propiamente tal. La homogeneización es la ruptura de la célula en sus componentes más pequeños y el fraccionamiento una serie de centrifugaciones sucesivas obteniéndose una sedimentación de cuerpos celulares, dependiendo de su densidad.(1)

Hipótesis

En el primer precipitado de la centrifugación, no encontraremos solamente núcleos celulares.

Al ser rotas las células, no todos los organelos celulares conservarán intactas sus propiedades bioquímicas originales.(2)

Objetivos

Objetivo general:

Conocer y comprender correctamente el fraccionamiento subcelular a través de las técnicas empleadas en este método tales como la homogeneización y centrifugación.

Descubrir las técnicas de homogeneizado existentes. Entender los principios en los que se basa la técnica de centrifugación. Reconocer el concepto de moléculas marcadoras y comprender su utilidad para la

evaluación del fraccionamiento celular Lograr manipular de manera correcta el objetivo de inmersión del microscopio y además

comprara una muestra fresca de una fijada.

Materiales y métodos

Resultados

Experimento n° 1

P1

P2

Pellet + 1 ml de buffet(fracción nuclear)

Sobrenadante de p1, el cual se vuelve a centrifugar.

S1

P2

Experimento n° 2

Suspensión de núcleos visto a microscopio a 40X

Suspensión de núcleos con azul de tripan visto en el microscopio a 40X

Sobrenadante (fracción microsomal)

Pellet + 1ml buffet (fracción mitocondrial)

Fracción enriquecida en mitocondrias P2 vista en el microscopio a 40X

Fracción enriquecida en mitocondrias P2 más azul de tripán vista en el microscopio a 40X

Experimento n° 3

Rotulado Tubo Succinato 0.1 M

Azul de metileno

Agua microsomal

Vaselina

- Blanco 1 ml 2 gotas 1 mL 2 mL

P1 Fracción nuclear

1ml 2 gotas 1 mL 2 mL

P2 Fracción mitocondrial

1ml 2 gotas 1 mL 2 mL

S1 Fracción microsomal

1ml 2 gotas 1 mL 2 mL

Tubos colocados a un baño termoregulado a 37° C

En el tubo blanco no se presentación cambios.En el tubo P1 se presento una decoloración.En el tubo P2 cambio el color celeste a un celeste verde agua.En el tubo S1 cambio el tono del celeste a uno mas claro.

Discusión

Conclusión

Bibliografía

(1) guia