4.5DOCUMENT CONTROL

1. OBJETIVO

Describir los criterios que deben aplicarse para realizar el control de calidad de los Medios de cultivo que se usan en los ensayos Microbiolgicos.

2. ALCANCE

rea de Microbiologa. 3. DEFINICIONES

3.1. ICA: ndice de crecimiento absoluto4. REFERENCIAS

4.1. Organizacin Panamericana de la Salud: Gua tcnica para el estudio, Evaluacin del riesgo microbiolgico de los alimentos vendidos en la va publica en ciudades de Amrica Latina. Edic.Revisada Abril 1994, Pg.32-38.4.2. MERCK Microbiology Manual 12Th Edition.5. RESPONSABILIDAD

5.1. El analista de control microbiolgico es el responsable de la correcta ejecucin del presente instructivo.5.2. La Jefatura de Control de Calidad es responsable de la supervisin del cumplimiento del presente instructivo.6. INSTRUCCIONES

6.1. CONTROL DE MEDIOS SLIDOS

6.1.1. El control de los medios de cultivo slidos se realizar cada vez que ingrese un nuevo lote, y para medios de cultivo en uso, 1 vez cada 2 meses.6.1.2. Obtener cultivos frescos de las cepas deseadas y no deseadas (ver anexo 1).6.1.3. Preparar placas Petri con el medio a ensayar. El medio no debe tener menos de 4 mm de espesor. Secar las placas en posicin invertida.6.1.4. Dividir las placas en cuadrantes. 6.1.5. Empleando los cultivos deseados y no deseados y un asa de siembra en aro, trazar sobre la superficie del medio 5 estras paralelas en cada cuadrante y una estra central, de forma progresiva sin recargar ni torcer el asa (ver anexo 2).6.1.6. Incubar las placas en posicin invertida por el tiempo y temperatura adecuada segn el microorganismo.6.1.7. ndice de Crecimiento Absoluto (ICA) :Asignar un valor de 0.2 (precisin del mtodo) a cada estra. Multiplicar por el nmero de estras en las cuales se observa crecimiento. Por ejemplo, si hay crecimiento en las cinco estras de un mismo cuadrante, el valor es 1; si se produce crecimiento completo en las cinco estras de los cuatro cuadrantes y en la estra central (valor 1), el ndice de crecimiento absoluto (ICA) es igual a 5. 6.1.8. Calcular el ICA con la suma de los valores obtenidos.6.1.9. Evaluar los medios de cultivo slidos segn su productividad y selectividad. Un medio presenta una productividad aceptable cuando el ICA de todas las cepas en un medio de cultivo no selectivo sea por lo menos igual a 3. Para hallar la Selectividad, utilizar medios en los cuales el ICA de las cepas no deseadas en los medios selectivos no sea superior a 2. El ICA de las cepas deseadas no debe ser inferior a 2,5.(Ver Anexo 1).6.1.10. El ndice ecomtrico buscado es el que est mas cerca posible a 5 para los microorganismos deseados y ms cercanos a 0 para los no deseados. Cuando el ICA se encuentra muy cerca de los lmites de aceptabilidad, verificar si no hubo problemas en la preparacin del medio de cultivo, en la ejecucin del ensayo, en la incubacin en el secado de placas, etc.6.1.11. En el caso de Agar tripticasa de soya se evaluar la productividad. 6.1.12. En el caso de que un frasco de un nuevo lote no cumpla con lo especificado en este instructivo, ser considerado como NO CONFORME, se informar inmediatamente al Jefe de Seccin y/o Supervisor para que ste sea inmediatamente devuelto al proveedor .En el caso de que un medio de cultivo en uso no cumpla con lo especificado en este instructivo, ser considerado como NO CONFORME, del mismo modo se informar al Jefe de Seccin y/o Supervisor y ste ser descartado. Se considerar que un medio de cultivo es aceptable CONFORME si cumple con lo especificado en este instructivo.6.2. CONTROL DE MEDIOS LQUIDOS.

6.2.1. Para el caso de medios lquidos, solo se observar crecimiento de los microorganismos por formacin de turbidez en el medio (ver anexo 3).6.2.2. Reportar los resultados en el registro de control de medios (ver anexo 4).

6.2.3. En el caso de que un frasco de un nuevo lote no cumpla con lo especificado en este instructivo, ser considerado como NO CONFORME, se informar inmediatamente al Jefe de Seccin y/o Supervisor para que ste sea inmediatamente devuelto al proveedor .En el caso de que un medio de cultivo en uso no cumpla con lo especificado en este instructivo, ser considerado como NO CONFORME, del mismo modo se informar al Jefe de Seccin y/o Supervisor y ste ser descartado. Se considerar que un medio de cultivo es aceptable CONFORME si cumple con lo especificado en este instructivo.

7. REGISTRO

7.1. Registro de Control de Medios de Cultivo

8. ANEXOS

8.1. ANEXO 1 : Diagrama del Mtodo Ecomtrico

8.2. ANEXO 2 : Esquema de trazo de estras en placa

8.3. ANEXO 3 : Cepas deseadas y no deseadas segn el medio de cultivo a evaluar

8.4. ANEXO 4 : Registro de Control de Medios de Cultivo F-CC-I-027-001ANEXO 01

Diagrama del Mtodo Ecomtrico

ANEXO 02

Esquema de trazo de estras en placa

ANEXO 03

Cepas deseadas y no deseadas segn el medio de cultivo a evaluarEVALUACION MICROBIOLOGICA

MEDIO DE CULTIVOCEPA DESEADACEPA NO DESEADACARACTERISTICAS DE CEPAS DESEADAST./TIEMPO

Agar XLDSalmonella entericaStaphylococcus aureusColonias incoloras con o sin centro negro30-35C/24h

Agar V.BrillanteSalmonella entericaStaphylococcus aureusColonias rosas, medio rojo30-35C/24h

Agar TBXEscherichia coliStaphylococcus aureusColon.celeste30-35C/24h

Agar R2AS. aureus-----------Buen crecimiento30-35C/24h

E.coli

P. aeruginosa

Agar Mc. ConkeyEscherichia coliStaphylococcus aureusColonias rojas/rosadas con precipitado rosado30-35C/24h

Agar Manitol SalStaphylococcus aureusEscherichia coliColonias amarillas redondas30-35C/24h

Agar tripticasa de soyaS. aureus-----------Buen crecimiento30-35C/24h

E.coli

P. aeruginosa

Agar CetrimideP. aeruginosaEscherichia coliPigmento Azul / verdoso30-35C/24h

Caldo Tripticasa soyaS. aureus-----------Turbidez30-35C/24h

E.coli

P. aeruginosa

Caldo RappaportSalmonella enterica------------Turbidez30-35C/24h

Caldo MacConkeyEscherichia coli------------Turbidez30-35C/24h

Agua Peptonada TamponadaSalmonella enterica------------Turbidez30-35C/24h

Caldo Presencia AusenciaEscherichia coli------------Turbidez con viraje de medio a color amarillo30-35C/24h

ANEXO 04

4 1

5

3

2

_1151783429.ppt

METODO ECOMETRICO

CEPA DESEADA

CEPA NO DESEADA

35C por 24 hr

35C por 24 hr

Medio de cultivo de prueba

Medio de cultivo de prueba

4 mmde espesor

Incubar a T y tiempo adecuado

Caldo BHI

Caldo BHI

Hoja1

EVALUACION MICROBIOLOGICA : CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO SOLIDOS

MEDIO DE CULTIVOCEPA DESEADACEPA NO DESEADACARACTERISTICAS

SS AgarSalmonella choleraesuisStaphylococcus aureusColonias incoloras con centro negrro

Hektoen enterico AgarSalmonella choleraesuisStaphylococcus aureusColonias verde azulada con centro negro

XLD AgarSalmonella choleraesuisStaphylococcus aureusColonias incoloras con centro negro

Bismuto Sulfito AgarSalmonella choleraesuisStaphylococcus aureusColonias negras con brillo metlico

Verde Brillante ModificadoSalmonella choleraesuisStaphylococcus aureusColonias rojas, medio rojo brillante

Verde BrillanteSalmonella choleraesuisStaphylococcus aureusColonias rosas, medio rojo

EMBEscherichia coliBacillus cereusColonias violeta c/s brillo metlico

EndoEscherichia coliStaphylococcus aureusColonias rojas c/s brillo metlico

Endo lesEscherichia coliStaphylococcus aureusColonias rojas c/s brillo metlico a negro

EMB levineEscherichia coliStaphylococcus aureusCon centro oscuro brillo metlico verdoso

Mc. ConkeyEscherichia coliStaphylococcus aureusColonias rojas con precipitado, medio rojo

VRBA (Violeta Cristal rojo neutro bilis)Escherichia coliStaphylococcus aureusColonias rojas con precipitado, medio rojo

KF para estreptococosEnterococcus faecalisEscherichia coliColonias rojas con halo amarillo

MYP (Manitol yema de huevo polimixina)Bacillus cereusEscherichia coliColonias rosas con precipitado blanco.

OGYE e AgarAspergillus nigerEscherichia coliBuen crecimiento

Baird ParkerStaphylococcus aureusEscherichia coliColonias negras con halo claro

TCBSVibrio choleraeEscherichia coliColonias amarillas planas

Oxford Agar selectivo para ListeriaListeria monocytogenaEscherichia coliColonias con halo negro

Palcam Agar selectivo para ListeriaListeria monocytogenaEscherichia coliColonias verde grisacea con halo negro

TributirinaStaphylococcus aureusEscherichia coliHalo claro

Plate Count AgarSalmonella choleraesuisStaphylococcus aureusBuen crecimiento

Escherichia coliBacillus cereus

Hoja2

EVALUACION

Tipo de MedioICAProductividadSelectividadCepa deseadaCepa no deseada

No selectivo> = 3Aceptable++

Selectivo< = 2Aceptable+

> = 2.5Aceptable+

Hoja3