Interacción Ligando- Proteína. Ejercicios

1.- Si la unión de un ligando a una macromolecula es fuerte, se puede determinar el número de sitios de unión, n, por un método directo de titulación. Tal es el caso de la unión de NADPH a la enzima isocitrato deshidrogenasa aislada de mitocondrias de corazón de bovino, la cuál es registrada por el aumento en la fluorescencia al tener NADPH-Enzima. Los siguiente datos fueron obtenidos al agregar NADPH a una solución de la enzima (masa molar 9x104) de concentración 1,35x10-2 g/L

NADPH agregado (μM) Fluorescencia0,070,140,210,280,350,500,75

2,34,77,09,39,91010

¿Cuál es el número de sitios de unión para NADPH en la enzima? R) n=2

2.- Los siguientes datos fueron obtenidos para la unión de Mn2+ a la enzima fosforilasa (concentración 100 μM)[Mn2+] total (μM) [Mn2+] unido (μM)110190290500750

75125175250300

Determinar el valor de los sitios de unión a la enzima y la constante de asociación. R) n=4 y K= 6757 M-1

3.- La unión de NAD+ a gliceraldehido-3-fosfato de levadura fue estudiada por diálisis en equilibrio obteniendose los siguientes resultados:[NAD+] total (μM) [NAD+] libre (μM)4178132187230285374474

132130394868125211

Si la concentración de la enzima es 71 μM. ¿Qué tipo de unión existe?. R) Cooperación positiva, n=4

4.- La enzima aspartato transcarbasilasa es inhibida por CTP. Mediciones de unión de CTP a la enzima fueron realizadas en diálisis en equilbrio.

Experimento A (enzima 0,27 g/L)[CTP] total (μM) [CTP] libre (μM)0,781,292,354,6311,65

0,240,431,002,568,86

Experimento B (enzima 9,00 g/L)[CTP] total (μM) [CTP] libre (μM)144,9172,0203,7269,5416,0

27,943,065,7122,5260,0

Aspartato transcarbosilasa posee seis subunidades catalíticas y seis subunidades regulatorias con una masa molecular total de 3x105. ¿Qué tipo de unión existe?. R) Cooperación negativa, n=6

5.- Se realizaron análisis de unión del Hormona, a un receptor a concentración 0,57 mM. ¿Qué tipo de unión existe?[Hormona] total (mM)

[Hormona] libre (mM)

0,5700,9701,512,273,435,888,90

0,4660,8001,281,993,094,988,45

6.- Se realizaron análisis de unión del Hormona, a un receptor a concentración 0,40 mM. ¿Qué tipo de unión existe?[Hormona] inicial (mM)

[Hormona] unida (mM)

0,7501,001,251,672,313,756,0810,00

0,0400,1200,2400,3600,4800,6000,6800,720