I. INTRODUCCIÓN.

La sangre es un líquido ligeramente alcalino (pH, 7.4), viscoso, de color rojo brillante a oscuro, que constituye alrededor del 8% del peso corporal. El volumen total desangre de un adulto promedio se aproxima a 5 L y circulaen la totalidad del cuerpo dentro de los confines del sistemacirculatorio. La sangre es un tejido conectivo especializadocompuesto de elementos formes glóbulos rojos (GR;eritrocitos), glóbulos blancos (GB; leucocitos) y plaquetassuspendidos en un componente líquido (la matriz extracelular), que se conoce como plasma.

La sangre es un vehículo ideal para el transporte de materiales.Las principales funciones de la sangre incluyen llevarnutrientes del sistema gastrointestinal a todas las célulasdel cuerpo y desplazar subsecuentemente los productosde desecho de estas células a órganos específicos parasu eliminación. El torrente sanguíneo también transportahasta sus destinos finales muchos otros metabolitos, productoscelulares (p. ej., hormonas y otras moléculas deseñalamiento) y electrólitos. La hemoglobina transporta eloxígeno (O2) dentro de los eritrocitos desde los pulmonespara distribuirla a las células del organismo; también lahemoglobina y el componente líquido del plasma muevenel dióxido de carbono (CO2), como ion bicarbonato, HCO3-y en su forma libre, para eliminarlo por los pulmones.

Asimismo, la sangre contribuye a regular la temperaturacorporal y mantener el equilibrio acido básico osmótico de los líquidos del cuerpo. Por último, la sangre actúa comouna vía para la migración de glóbulos blancos entre losdiversos compartimientos de tejido conectivo del cuerpo. El estado líquido de la sangre requiere la presencia de un mecanismo protector, coagulación, para suspender suflujo en caso de daño del árbol vascular. El proceso de lacoagulación es mediado por plaquetas y factores de origensanguíneo que transforman la sangre de un estado de solotro de gel.

Cuando se extrae sangre del cuerpo y se coloca enun tubo de ensayo, se coagula a menos que el tubo serecubra con un anticoagulante como heparina. Cuandose centrifuga, se asientan los elementos formes en el fondodel tubo como un precipitado rojo (44%), cubierto por unacapa transparente delgada, la capa leucocítica (1 %) y elplasma líquido permanece en la parte superior como elsobrenadante (55%). El precipitado rojo está compuestode glóbulos rojos; la capa leucocítica incluye leucocitos yplaquetas y los elementos formes combinados sedenominanen conjunto hematócrito.

El periodo de vida finito de las células sanguíneas obligaa que se renueven de manera constante para conservar unapoblación circulante fija. Este proceso de formación decélulas sanguíneas a partir de sus precursores establecidos seconoce como hemopoyesis (o también hematopoyesis

II. OBJETIVOS. Analizar y hacer una breve diferencia entre la sangre de

una persona normal, una con infección y una con anemia. Determinar los valores de cada muestra y comparar con

los valores normales descritos en la bibliografía.

III. MARCO TEÓRICO.III.1. SANGRE.

La sangre se integra con un componente líquido (plasma) y elementos formes, constituidos por diversos tipos de células sanguíneas y también por plaquetas.El examen de células sanguíneas circulantes con microscopio de luz se lleva a cabo mediante la distribuciónuniforme de una gota de sangre en un portaobjetos de vidrio(frotis), secando la preparación con aire y utilizando mezclasde colorantes específicos para demostrar las característicasdistintivas de las células. Los métodos actuales derivande la técnica desarrollada a fines del siglo XIX por Romanovsky,quien usó una combinación de azul de metilenoy eosina. Casi todos los laboratorios utilizan hoy en díalas modificaciones de Wright o Giemsa del procedimientooriginal y la identificación de las células sanguíneas se basaen los colores que producen estos colorantes. El azul demetileno tiñe componentes celulares ácidos de color azuly la eosina de color rosa los componentes alcalinos. Otroscomponentes más se tiñen de color azul rojizo por la unióna azures, sustancias que se forman cuando se oxida elazul de metileno.

Una función importante de los eritrocitos, también conocidos como hematíes, es transportar hemoglobina, que a su veztransporta oxígeno desde los pulmones a los tejidos. En algunosanimales inferiores, la hemoglobina circula como una proteína libre en el plasma, no encerrada en los eritrocitos.

Cuando está libre en el plasma del ser humano, alrededor del3% se filtra por la membrana capilar hacia el espacio tisularo a través de la membrana glomerular del riñón hacia el filtradoglomerular cada vez que la sangre pasa por los capilares.Luego, la hemoglobina debe permanecer dentro de los eritrocitos para realizar con eficacia sus funciones en losseres humanos.Los eritrocitos tienen otras funciones además del transporte de la hemoglobina. Por ejemplo, contienen una grancantidad de anhidrasa carbónica, una enzima que catalizala reacción reversible entre el dióxido de carbono (CO2) y elagua para formar ácido carbónico (H2CO3

-), aumentando lavelocidad de la reacción varios miles de veces. La rapidez deesta reacción posibilita que el agua de la sangre transporteenormes cantidades de CO, en forma de ion bicarbonato(HCO3

_) desde los tejidos a los pulmones, donde se convierteen CO2y se expulsa a la atmósfera como un productode desecho del organismo. La hemoglobina de las células esun excelente amortiguador acidobásico (igual que la mayoríade las proteínas), de manera que los eritrocitos son responsablesde la mayor parte del poder amortiguador acidobásicode la sangre completa.

III.1.1. PLASMA.El plasma es un líquido amarillento en el cual están suspendidos o disueltos células, plaquetas, compuestos orgánicos y electrólitos.Durante la coagulación, parte de los componentes orgánicos e inorgánicos dejan el plasma para integrarse al coágulo. El líquido restante, que se diferencia del plasma, es de color pajizo y se llama suero.El principal componente del plasma es agua y representa alrededor del 90% de su volumen. Las proteínas forman el 9% y las sales inorgánicas, iones, compuestos nitrogenados, nutrientes y gases el 1 % restante.

III.1.2. ELEMENTOS FORMES.Los elementos formes de la sangre están constituidospor glóbulos rojos, glóbulos blancos y plaquetas.

A. Eritrocitos.Los eritrocitos, las células más numerosas de la sangre, se encargan de transportar el oxígeno y el CO2 a los tejidos del cuerpo y desde ellos. Cada eritrocito (glóbulos rojos) semeja un disco de forma bicóncava de 7.5 μm de diámetro, 2.0 μm

de grosor en su región más ancha y menos de 1 μm de grosor en su centro. Esta forma proporciona a la célula un área de superficie más grande en relación con su volumen e incrementa así su capacidad para el intercambio de gases. Aunque las células precursoras de los eritrocitos dentro de la médula ósea poseen núcleo, durante el desarrollo y maduración las células precursoras o eritrocitos no sólo expulsan su núcleo sino también todos sus organelos antes de penetrar en la circulación. Por consiguiente, los eritrocitos maduros carecen de núcleo. Cuando setiñen con los colorantes de Giemsa o Wright, los eritrocitos tienen un color rosa salmón.

Aunque los eritrocitos no poseen organelos, tienen enzimas solubles en su citosol. Dentro del eritrocito, la enzima anhidrasa carbónica facilita la formación de ácido carbónico a partir del CO2 y agua. Este ácido se disocia para formar bicarbonato (HCO3

-) e hidrógeno (H+). La mayor parte del CO2 se transporta a los pulmones como bicarbonato para exhalarse. La capacidad del bicarbonato para cruzar la membrana celular del eritrocito es mediada por la proteína integral de membrana banda 3, un transportador acoplado de aniones que intercambia bicarbonato intracelular por Cl-

extracelular; este intercambio se conoce como cambio de cloruro. Las enzimas adicionales incluyen las de la vía glucolítica y también enzimas a cargo de la derivación de monofosfato de pentosa para la producción de la molécula de alta energía, fosfato del dinucleótido de adenina y nicotinamida (NADPH) reducido, un agente reductor. La primera no requiere oxígeno y es la vía principal por la cual el eritrocito produce trifosfato de adenosina (ATP), necesario para sus requerimientos energéticos.Los varones tienen más eritrocitos por unidad de volumenen sangre que las mujeres (5 X 106 contra 4.5 X106

por mm3) y los miembros de ambos sexos que viven en grandes altitudes tienen, de manera correspondiente,más glóbulos rojos que los residentes de altitudes másbajas.Los eritrocitos del ser humano tienen un periodo de vida promedio de 120 días; cuando llegan a esta edadmuestran en su superficie un grupo de oligosacáridos.Los macrófagos del bazo, la médula ósea y el hígadodestruyen los glóbulos rojos que llevan estos grupos de azúcar.

Hemoglobina.La hemoglobina es una proteína grande compuestade cuatro cadenas polipeptídicas, cada una de lascuales está unida de manera covalente a un grupohem.Los glóbulos rojos contienen hemoglobina, una proteínatetramérica grande (68 000 Da) compuesta de cuatrocadenas polipeptídicas, cada una de las cuales se une demanera covalente a un hem, que contiene hierro. Lahemoglobina es la que proporciona a la célula no teñidasu color amarillo pálido. La molécula de globina de lahemoglobina libera CO2 y el hierro se une al O2 en regionesde concentración alta de oxígeno, como el pulmón. Sinembargo, en regiones bajas en oxígeno, como los tejidos,la hemoglobina libera O2 y une CO2. Esta propiedad de lahemoglobina la convierte en el transporte ideal de los gases.Transporte de colesterol del hígado acélulas corporales respiratorias. La hemoglobina que lleva O2 se conoce comooxihemoglobina y la que transporta CO2 se denominacarbaminohemoglobina (o carbamilhemoglobina).Los tejidos hipóxicos liberan 2,3-difosfoglicérido, un carbohidratoque facilita la liberación de oxígeno del eritrocito.La hemoglobina también une óxido nítrico (NO), unasustancia neurotransmisora que causa dilatación de losvasos sanguíneos y permite que los glóbulos rojos liberenmás oxígeno y capten más CO2 dentro de los tejidos delcuerpo.

Membrana celular del eritrocito.

La membrana celular del eritrocito y el citosqueletosubyacente son sumamente flexibles y pueden soportargrandes fuerzas de deslizamiento.La superficie extracelular del plasmalema del glóbulo rojo tiene cadenas específicas hereditarias de carbohidrato que actúan como antígenos y determinan el grupo sanguíneo de una persona para una transfusión sanguínea. Los más notables de éstos son los antígenos A y B, que son el origen de los cuatro grupos sanguíneos principales A, B, AB Y O. Las personas que carecen del antígeno A o B, o ambos, tienen anticuerpos contra el antígeno que falta en su sangre; si reciben una transfusión con sangre que contiene el antígeno faltante, los eritrocitos del donador son atacados por anticuerpos séricos del receptor y finalmente se lisan.Otro grupo sanguíneo importante, el grupo Rh, se denomina así porque se identificó por primera vez enmonos Rhesus. Este grupo complejo comprende más de dosdocenas de antígenos, aunque muchos son relativamenteraros. Tres de los antígenos Rh (C, D y E) son tan comunesen la población humana tiene uno de ellos en su superficie y, porconsiguiente, se dice que estas personas son Rh+.

Sistema de grupos sanguíneos.

Grupo sanguíneo Antígeno presente Diversos.A Antígeno A -.-.-B Antígeno B -.-.-AB Antígeno A y B Receptor universalO Ni el antígeno A ni

el BDonador universal.

B. Leucocitos. Los leucocitos son glóbulos blancos que se clasifican en doscategorías principales: granulocitos y agranulocitos.

El número de leucocitos (glóbulos blancos) es muchomenor que el de glóbulos rojos; de hecho, en un adulto normal sólo hay 4 500 a 10 000 glóbulos blancos por mm3de sangre. A diferencia de los eritrocitos, los leucocitos nofuncionan dentro del torrente sanguíneo, pero lo utilizancomo un medio para viajar de una región del cuerpo a otra.Cuando los leucocitos llegan a su destino, dejan el torrentesanguíneo y migran entre las células endoteliales de losvasos sanguíneos (diapédesis), penetran en los espaciosde tejido conectivo y llevan a cabo su función. Dentro deltorrente sanguíneo y también en los frotis, los

leucocitosson redondos; en el tejido conectivo son pleomorfos. Por logeneral protegen el cuerpo de sustancias extrañas.Su aumento de glóbulos blancos de denomina leucocitosis y se presenta en infecciones generadas por bacterias y su disminución se denomina leucopenia y está causada por infecciones por virus.En leucémicas generalmente el número de leucocitos aumenta en forma impresionante (30.000 a 200.00 omás).En algunos casos las leucemias se presentan con cifras bajas (2.000 ó 3.000) o normales de leucocitos que enmascaran la leucemia (leucemia aleucémica).En determinadas ocasiones algunos pacientes reaccionan con cifras elevadas de leucocitos (20.000 ó 40.000) que se pueden confundir con leucemia (reacción leucemoide).

Los glóbulos blancos se clasifican en dos grupos:- Granulocitos, que tienen gránulos específicos en

sucitoplasma.- Agranulocitos, que carecen de gránulos específicos.

Tanto los granulocitos como los agranulocitos poseen gránulos inespecíficos (azurófilos), que hoy en día se sabeque son lisosomas.

Existen tres tipos de granulocitos, que se diferenciansegún sea el color de sus gránulos específicos después deutilizar tinciones de tipo Romanovsky:

- Neutrófilos.40 – 70 %En las infecciones bacterianas generalmente hay neutrofilia con desviación izquierda.

- Eosinófilos.1 – 3 % En las parasitosis por helmintos hay eosinofilia.

- Basófilos.0 - 1 %

Hay dos tipos de agranulocitos:

- Linfocitos.20 – 40 % En infecciones virales hay linfocitosis.

- Monocitos.2 – 8 %.

C. Plaquetas.Las plaquetas (trombocitos) son fragmentos celulares pequeños, en forma de disco y sin núcleo, derivados de megacariocitos de la médula ósea.Las plaquetas tienen alrededor de 2 a 4 μm de diámetro en frotis sanguíneos.

El plasmalema de las plaquetas tiene múltiples moléculas receptoras y también un glucocáliz relativamentegrueso (15 a 20 nm). Existen entre 150000 Y 400000plaquetas por mm3 de sangre, cada una de ellas con unperiodo de vida menor de 14 días.

Función de las plaquetasLas plaquetas limitan una hemorragia al adherirse al recubrimiento endotelial del vaso sanguíneo en casode lesión.Cuando se altera el recubrimiento endotelial de un vaso sanguíneo, las plaquetas entran en contacto con lacolágena subendotelial, se activan, liberan el contenidode sus gránulos, se adhieren a la región dañada de la pareddel vaso (adherencia plaquetaria) y se agregan unasa otras (agregación plaquetaria). Las interacciones defactores tisulares, factores de origen sanguíneo y factoresderivados de las plaquetas crean un coágulo sanguíneo. Aunque los mecanismos deagregación y adherencia plaquetarias y de la coagulación dela sangre están más allá del objetivo de la histología, algunasde sus características sobresalientes son las siguientes:1. En condiciones normales, el endotelio intacto

produceprostaciclinas y NO, que inhiben la agregación plaquetaria.También bloquean la coagulación por lapresencia de trombomodulina y molécula parecidaa heparina en su plasmalemaluminal. Estas dosmoléculas vinculadas con la membrana inactivan factoresde coagulación específicos.

2. Las células endoteliales lesionadas liberan factor devon Willebrand y tromboplastina tisular y cesanla producción y expresión de los inhibidores de lacoagulación y agregación plaquetaria. También liberanendotelina, un vasoconstrictor potente que reducela pérdida de sangre.

3. Las plaquetas se adhieren ávidamente a la colágenasubendotelial, en especial en presencia del factor devon Willebrand, liberan el contenido de sus gránulosy se adhieren unas a otras. Estos tres fenómenos seconocen en conjunto como activación plaquetaria.

4. La liberación de parte de sus contenidos granulares,en especial difosfato de adenosina (ADP) y trombospondina,torna "pegajosas" a las plaquetas y dalugar a que se adhieran las plaquetas circulantes a lasplaquetas unidas a colágena y se des granulen.

5. El ácido araquidónico, formado en el plasmalema deplaquetas activadas, se convierte en tromboxano A2,un vasoconstrictor y activador de plaquetas potente.

6. Las plaquetas agregadas actúan como un tapón quebloquea la hemorragia. Además, expresan factor 3plaquetario en su plasmalema, que proporciona elfosfolípido de superficie necesario para el ensambleapropiado de factores de la coagulación (en especialde trombina).

7. Como parte de la compleja cascada de reaccionesque incluye los diversos factores de coagulación,tanto la tromboplastina tisular como la tromboplastinaplaquetaria actúan en la protrombina circulante y laconvierten en trombina. Esta última es una enzimaque facilita la agregación plaquetaria. En presenciade calcio (Ca2+) también convierte el fibrinógenoen fibrina.

IV. MATERIALES Y PROCEDIMIENTO.

PRACTICA N° COMPARACIÓN DE VALORES HEMATOLÓGICAS DE SANGRE NORMAL, CON INFECCIÓN Y CON ANEMIA.Materiales. Ligadura. Algodón. Alcohol. Aguja descartable N° 21 x ½. Anticoagulante (heparina). Sangre de las tres personas (normal, con infección y

anemia). Tubos de ensayo. Laminas porta objetos. Colorante. Gotero. Microscopio. Aceite de inmersión. Pipeta de Solì Centrifugadora. Cámara de NUEUBAUER.

Procedimiento.

Se procede a preparar el material necesario para la obtención de muestra de sangre.

Se coloca heparina al tubo de ensayo para evitar la coagulación

Se toma la muestra de sangre del alumno voluntario. Se hace el frotis en tres láminas uno de la persona

normal, otro de la persona con infección y otra con la sangre de la persona con anemia.

Se deja secar la sangre del frotis luego se procede a colorear con Giemsa, se deja reposar por 8 minutos y luego se lava a chorro con agua se deja secar y se lleva al microscopio para su observación correspondiente y conteo respectivo.

Para el conteo de glóbulos rojos se coloca sangre en una pipeta de Salí junto Y agitar por 3 minutos y finalmente se procede al conteor realizado por el docente, el mismo procedimiento se sigue para el conteo de glóbulos blancos y plaquetas.

Homogeneizar perfectamente la sangre haciendo girar el tubo

Utilizando la pipeta Pasteur se llena de sangre el tubo de Wintrobe exactamente hasta 10, no deben quedar burbujas de aire en el tubo

Centrífuga a 3600 rev x min. Durante 30 min. Leer en la línea de separación de la columna de glóbulos

rojos sabiendo que cada raya tiene 1%

Para determinar los grupos sanguíneos se colocó tres gotas de sangre en cada lámina, a la que se le agregaba un antígeno anti A, anti B y anti Rh, finalmente se observa y se determina el grupo sanguíneo.

REULTADOS.

N° Valor hematológico Sangre normal

Sangre con infección

Sangre con anemia

1 Numero de glóbulos rojos mil/mm3

4 770 000 4037 000 3750 000

2 Numero glóbulos blancos miles/mm3

10 700 13 800 13 600

3 Hematocrito (%) 47 48 414 Hemoglobina (g/dl) 15.6 16 12.35 Velocidad de

sedimentación8 40 64

6 Constantes corpuscularesVCM 0,

000098530, 0001189 0, 0001043

Hb CM 0, 00003270

0,00003606 0,00003588

CHbCM 33,2 % 33, 3 % 32,4 %Formula leucocitaria (%)Neutrófilos 47, 2 % 54, 5 % 65, 21 %Linfocitos 47.2 45, 45% 30, 43%

Monocitos 5,5% 4,34%Basófilos -.-.- -.-.- -.-.-Eosinofilos.GRUPOS SANGUINEO

ABO O B ORh + + +

V. CONCLUSIONES. Las constantes hematológicas de determinadas en

laboratorio daban una diferencia muy marcada sobre todo entre la persona normal y los otros dos tipos de personas siendo aún más marcada en la persona que padece de anemia.

Se hizo una comparación de los valores obtenidos en cada procedimiento.

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS.1. Guyton & Hall. TRATADO DE FISIOLOGÍA MÉDICA.

Duodécima edición. Barcelona (España). Editorial: ELSEVIER SOUNDERS. 2012.

2. LESLIE P. GARTNER, JAMES L. HIATT. TEXTO ATLAS DE HISTOLOGIA. Segunda edición. Santiago(chile). Editorial: McGRAW-T-IILL INTERAMERICANA EDITORES, S.A. de C.V. 2010. p. 213 -229.