Justicia spicigera
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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONALUNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA
Diseño de FármacosM. En C. David Panigua Vega
“Justicia spicigera”
González Ugalde Diana
4FM1
Enero-Julio 2013
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Justicia spicigeraMuitle
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CLASIFICACIÓN
TAXONÓMICA
Justicia spicigeraReino Plantae
Subreino Tracheobionta
División Magnoliophyta
Clase Magnoliopsida
Subclase Asteridae
Familia Acanthaceae
Género Justicia
Especie Justicia spicigera
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GENERALIDADES
Planta endémica mexicana
También es conocida como Justicia ghiesbreghtiana, hierba del limalín, hierba
azul, hierba tinta, mohuite o muicle.
Especie poco estudiada
Tónico sanguíneo, estimulante, antidisentérico, antipirético, antiespasmódico, antiinflamatorio, para aliviar
trastornosmenstruales, anemia, nervios, insomnio, bronquitis,
desordenes intestinales incluyendonáuseas, diarrea y vomito, para tratar el
cáncer, infecciones renales y anemia
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DESCRIPCIÓN
ETNOBOTÁNICATipo Biológico:
• Arbusto (microanerófita)
Diagnosis:
• Arbusto de 1 a 1.5m de
altura, ramificado.
• Hojas son largas y vellosas.
• Flores de 3 a 3.5 cm se encuentran
en la parte apical de la
planta, comúnmente de color
anaranjado, pero algunas veces
rojo pálido en forma de tubos que
terminan rasgándose, formándose
un labio.
• Frutos capsulares ovoides con 2 a
4 semillas.
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DESCRIPCIÓN
ETNOBOTÁNICADistribución y ecología:
• Crece en los Estados de
Chiapas, Nayarit, San Luís
Potosí, Valle de
México, Veracruz, Puebla, Mor
elos, Tlaxcala, Yucatán e
Hidalgo.
• Se encuentra presente en
diversos climas desde
cálido, seco y templados a un
nivel del mar hasta los 3000 m.
• Cultivada en huertos
familiares, crece a orillas de
caminos, y de igual forma
crece en matorrales y
bosques.
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DESCRIPCIÓN
ETNOBOTÁNICATipo Biológico:
Arbusto (microanerófita)
Diagnosis:
• Arbusto de 1 a 1.5m de
altura, ramificado.
• Hojas son largas y vellosas.
• Flores de 3 a 3.5 cm se encuentran
en la parte apical de la
planta, comúnmente de color
anaranjado, pero algunas veces
rojo pálido en forma de tubos que
terminan rasgándose, formándose
un labio.
• Frutos capsulares ovoides con 2 a
4 semillas.
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ESTABLECIMIENTO DE CULTIVO
CELULAR
Desinfestación superficial
Lavadas con una solución jabonosa durante 15 min eliminando el exceso de jabón bajo el chorro de agua.
Inmersión en etanol al 70% durante 1 min, utilizado para romper la tensión
superficial y más accesible a la acción de los agentes desinfectantes.
Desinfección superficial
Sumergir en soluciones de hipoclorito de sodio (NaOCl) a diferentes concentraciones y tiempos.
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ESTABLECIMIENTO DE CULTIVO
CELULAR
En condiciones asépticas
(campana de flujo laminar)
• Tres lavados con agua estéril.
Selección de hojas
• Explantes en porciones de 5 x
5 mm, excluyendo las
porciones básales y apicales.
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ESTABLECIMIENTO DE CULTIVO
CELULAR
Cultivo de explantes foliares
• Sembrados en tubos de cultivo conteniendo 15 ml de medio Mushirage-Skoog (M1) a 50% de su concentración original suplementado con 30 g/L de sacarosa y 2 g/L de phytagel como gelificante, adicionado con 100 mg/L de ácido cítrico, 150 mg/L de ácido ascórbico y con diferentes concentraciones de reguladores de crecimiento vegetal (auxinas y citocininas) de manera individual y sus combinaciones.
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ESTABLECIMIENTO DE CULTIVO
CELULAR
Condiciones de incubación
• Los cultivos fueron incubados, bajo un
fotoperíodo de 16 h luz blanca fluorescente a
una irradiancia de 50 μmol/m2 s y bajo una
temperatura de 25 ± 2ºC.
NOTA: Se realizarón subcultivos cada 30 días después de la evaluación de respuesta de
explante.
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ESTABLECIMIENTO DE CULTIVO
CELULAR
• Los explantes foliares de J. spicigera formaron callo como
tiempo mínimo de 13 días.
• Los callos formados cubrieron la totalidad del segmento foliar
a los 28 días de cultivo, donde se observó callos con distintas
morfologías.
Resultados:
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Día19: Inducción de callo en
explantes foliares de Justicia spicigera
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Día 28: Inducción de callo en
explantes foliares de Justicia spicigera
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ESTABLECIMIENTO DE CULTIVO
CELULAR
• Los cultivos de callo provenientes del
tratamiento conteniendo ANA 1.0 mg/L + 0.5
mg/L BAP fueron seleccionados por presentar
altos porcentajes de inducción, crecimiento
acelerado y presentar alta friabliadad.
Resultados:
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MANTENIMIENTO DE LAS LÍNEAS
CELULARES
• Las porciones friables de los callos
producidos en los diferentes tratamientos
evaluados, fueron subcultivadas cada 15
días en los 3 primeros subcultivos y evitar la
oxidación y el necrosamiento de los
explantes.
• Los tratamientos con altos porcentajes de
inducción y con callo friable fueron
seleccionados para su proliferación.
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ESTUDIO FITOQUÍMICO
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ESTUDIO FITOQUÍMICO PRELIMINAR
El objetivo de un estudio fitoquímico preliminar es determinar
la presencia o ausencia de los principales grupos de
metabolitos en una especie vegetal, a saber:
alcaloides, antraquinonas y naftoquinonas, esteroides y
triterpenos, flavonoides, taninos, saponinas, cumarinas, lacton
as terpénicas y cardiotónicos.
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ESTUDIO FITOQUÍMICO
Obtención del extracto de callo
• Se tomaron 3g de biomasa fresca de los
callos, se agregaron 50 ml de metanol, por
cada 100 mg de muestra en peso seco.
• 30 minutos en reflujo a 65°C para la
extracción, posteriormente fueron filtradas y
evaporadas.
• Los extractos metanólicos fueron
concentrados, bajo presión reducida, a un
volumen final de 1 ml y almacenados en
frascos ámbar a 4±2°C hasta su análisis.
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ESTUDIO FITOQUÍMICO
Obtención del extracto de hojas de Justicia spicigera
• Hojas inmaduras de J. spicigera fueron cortadas y pesadas (3 g), secadas a 60°C en una estufa.
• Posteriormente, fueron desengrasadas usando hexano durante 24 horas a temperatura ambiente, filtradas y concentradas bajo presión reducida.
• 30 minutos en reflujo a 65°C para la extracción metanólica.
• Filtradas y concentradas a 1ml y almacenadas en frascos ámbar a 4±2°C hasta su análisis.
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ESTUDIO FITOQUÍMICO
Cromatografía en capa fina (CCF)
Cromatoplacas (Merck 5554) usando como estándar solución metanólica, 0.2 mg/mL
Para KAEMPFEROL:
acetato de etilo:metanol:agua(100:15:5) como fase móvil
Para los restantes:
diclorometano:metanol(8:2) como fase móvil
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ESTUDIO FITOQUÍMICO:
Cromatografía en capa fina
El análisis por CCF evidencio la presencia de los metabolitos secundarios:
Quercitina
Quercitina -3-O-glucósilada cafeico
verbascósido
Resultados:
![Page 23: Justicia spicigera](https://reader036.fdocumento.com/reader036/viewer/2022082310/55a4db2f1a28ab19398b4703/html5/thumbnails/23.jpg)
ESTUDIO FITOQUÍMICO
Cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC)
• Cromatógrafo de líquidos con bomba cuaternaria con una columna y un detector de arreglo de fotodiodos.
• Cada muestra de extracto concentrado y las soluciones estándar fueron filtradas (0.45 μm, filtro de nylon) antes de ser inyectadas en el equipo de HPLC.
• Para identificar y cuantificar los metabolitos secundarios presentes en las muestras, se utilizaron los datos de los respectivos tiempos de retención y las áreas de los picos de las curvas de calibración.
• Cada muestra fue inyectada tres veces.
• Soluciones stock de los estándares de verbascósido y caféico fueron preparados en metanol. Cada solución stock fue diluida para para obtener una curva patrón.
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ESTUDIO FITOQUÍMICO:
Cromatografía de líquidos
de alta resolución
Tres sistemas analizados:
I. Extracto metanólico de callo
II. Fracción de acetato de etilo
III. Extracto de hoja
Resultados:
![Page 25: Justicia spicigera](https://reader036.fdocumento.com/reader036/viewer/2022082310/55a4db2f1a28ab19398b4703/html5/thumbnails/25.jpg)
”
“ METABOLITOS
SECUNDARIOS
CONCENTRACIÓN (MG/G) PESO SECO
CULTIVO IN VITRO
CALLO
FRACCIÓN
ACETATO DE
ETILO
HOJA
ÁCIDO CAFEICO - 12.10±3.67 -
VERBASCÓSIDO 1.10±0.51 0.65±0.15 -
QUERCITINA 6.1313±1.07 10.03±3.04 0.6401±0.98
QUERCITINA 3-O-GLUCÓSIDO
10.626±0.21 7.54±2.54 0.9306±0.2
KAEMPFEROL - - 0.3801±0.34
KAEMPFEROL 3-O-GLUCÓSIDO
4.6841±1.10 4.6841±1.10 0.5848±1.0
KAEMPFEROL 3-O-RUTINÓSIDO
10.60±0.54 1.74±0.52 0.1769±0.50
CONTENIDO DE METABOLITOS SECUNDARIOS EN EXTRACTOS METANÓLICOS DE
CULTIVOS IN VITRO Y HOJAS DE Justicia spicigera
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”
“
CROMATOGRAMA DE MUESTRAS DE CULTIVO DE CALLO DE Justicia
spicigera PROVENIENTE DE MS CON ANA 1.0 mg/L + 0.5 mg/L BAP
![Page 27: Justicia spicigera](https://reader036.fdocumento.com/reader036/viewer/2022082310/55a4db2f1a28ab19398b4703/html5/thumbnails/27.jpg)
ESTUDIO FITOQUÍMICO
Fracción de acetato de etilo:
ácido cafeíco > quercitina > quercitina 3-O-glucósido > kaempferol
3-O-glucósido > kaempferol 3-O-rutinósido > verbascósido
Muestras metanólicas de callo:
quercitina 3-O-glucósido > kaempferol 3-Orutinósido
Resultados:
![Page 28: Justicia spicigera](https://reader036.fdocumento.com/reader036/viewer/2022082310/55a4db2f1a28ab19398b4703/html5/thumbnails/28.jpg)
ESTUDIO FITOQUÍMICO
Fracción de acetato de etilo:
ácido cafeíco > quercitina > quercitina 3-O-glucósido > kaempferol
3-O-glucósido > kaempferol 3-O-rutinósido > verbascósido
Muestras metanólicas de callo:
quercitina 3-O-glucósido > kaempferol 3-Orutinósido
Resultados:
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TAMIZAJE FITOQUÍMICO
La planta produce metabolitos secundarios del tipo
fenólico, como los taninos, lignanos, flavonoides y algunos
compuestos fenólicos simples.
En hojas de muitle alantoina (compuesto nitrogenado derivado
de las purinas), flavonoides como la Kaempferitrina y su bis-
ramnósido Kaempferol, y terpenoides como el β-glucosil-O-
sitosterol, y la criptoxantina
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METABOLITOS SECUNDARIOS
COMPUESTOS
NITROGENADOS
Alantoína
COMPUESTOS FENÓLICOS
Tanoninos
Lignanos
FLAVONOIDES
Kaempferitrina
Kaempferol
TERPENOIDES
β-glucosil-O-sitosterol
Criptoxantina
![Page 31: Justicia spicigera](https://reader036.fdocumento.com/reader036/viewer/2022082310/55a4db2f1a28ab19398b4703/html5/thumbnails/31.jpg)
Alantoína
Estimulador de la proliferación
celular y reconstrucción de
tejido
![Page 32: Justicia spicigera](https://reader036.fdocumento.com/reader036/viewer/2022082310/55a4db2f1a28ab19398b4703/html5/thumbnails/32.jpg)
Kaempferol
Ayuda a prevenir el daño
oxidativo de las células,
lípidos y ADN, además de
prevenir la
Arteriosclerosis. Agente
quimiopreventivo.
![Page 33: Justicia spicigera](https://reader036.fdocumento.com/reader036/viewer/2022082310/55a4db2f1a28ab19398b4703/html5/thumbnails/33.jpg)
β-sitosterol
Agente capaz de
disminuir los niveles de
colesterol, así como en el
tratamiento de la
hiperplasia prostática
benigna.
![Page 34: Justicia spicigera](https://reader036.fdocumento.com/reader036/viewer/2022082310/55a4db2f1a28ab19398b4703/html5/thumbnails/34.jpg)
ESTUDIOS FARMACOLÓGICOS
TIPO DE COMPUESTO LÍNEA CELULAR EFECTO
KAEMPFEROL
MIA PACA-2 Y PANC-1
INHIBICIÓN DE PROLIFERACIÓN DE
CÉLULAS 79% A 45.7%
REDUCCIÓN DE LA 3H-TIMIDINA
OSTEOCLASTOSINHIBICIÓN DE RESORCIÓN ÓSEA,
APOPTOSIS CELULAR
MUSCULO LISO VASCULAR
DE RATAS
APOPTOSIS , FRAGMENTACION DE
ADN
LN229, U87MG, T98GDISMINUCIÓN DE LA EXPRESIÓN BCL2
APOPTOSIS EN CÉLULAS GLIOMA.
Β-SITOSTEROL DTHREDUCCIÓN DE EDEMA INDUCIDO
POR OXAZOLONA
Estudios farmacológicos de Kaempferol y β-sitosterol en diversas líneas celulares
![Page 35: Justicia spicigera](https://reader036.fdocumento.com/reader036/viewer/2022082310/55a4db2f1a28ab19398b4703/html5/thumbnails/35.jpg)
ESTUDIOS FARMACOLÓGICOS
Estudios farmacológicos llevados a cabo sobre Justicia spicigera
EXTRACTO DE LA
PLANTA
ACTIVIDAD
BIOLÓGICAMODELO BIOLÓGICO
TALLO Y HOJAS, ETANÓLICO
ANTIBACTERIANAStaphylococus aureus
Bacillus subtilis
HOJAS, ETANÓLICO ANTI-PROTOZOARIA Giardia duodenalis
PLANTA, METANÓLICO ANTI-INFLAMATORIAEDEMA INDUCIDO POR
CARRAGENO EN RATAS
![Page 36: Justicia spicigera](https://reader036.fdocumento.com/reader036/viewer/2022082310/55a4db2f1a28ab19398b4703/html5/thumbnails/36.jpg)
REFERENCIAS
http://tesiuami.izt.uam.mx/uam/aspuam/presentatesis.php?rec
no=15366&docs=UAMI15366.pdf
http://www.relaquim.com/archive/2012/p2012402-75.pdf
http://hortuscamden.com/plants/view/justicia_spicigera_schltdl