¿El Cianuro y el plomo inhiben la actividad de la enzima catalasa? Objetivo: El alumno observará la actividad de la enzima Catalasa utilizando diferentes fuentes biológicas y comprenderá el efecto de la temperatura de algunos inhibidores como el Pb y CN sobre la actividad enzimática de la Catalasa.

Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones químicas; Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan disminuyendo la energía de activación (ΔG‡) de una reacción, de forma que se acelera sustancialmente la tasa de reacción. Las enzimas no alteran el balance energético de las reacciones en que intervienen, ni modifican, por lo tanto, el equilibrio de la reacción, pero consiguen acelerar el proceso incluso millones de veces. La actividad de las enzimas puede ser afectada por otras moléculas. Los inhibidores enzimáticos son moléculas que disminuyen o impiden la actividad de las enzimas

CLASIFICACIÓN TRADICIONAL DE LAS ENZIMASDESHIDROGENASAS.- Catalizan la pérdida de hidrógeno (H+ y e-) de un sustrato teniendo como aceptor una molécula diferente al oxígeno.OXIDASAS.- Catalizan la pérdida de hidrógeno de un sustrato teniendo como aceptor al oxígeno.QUINASAS (CINASAS).- Catalizan la transferencia de grupos fosfato del ATP a otra molécula.TRANSAMINASAS.- Transfieren grupos amino a grupos carbonilo.FOSFATASAS.- Rompen enlaces fosfoéster en presencia de agua.TIOQUINASAS (TIOCINASAS).- Forman enlaces tioéster dependientes de ATP a partir de la coenzima A y ácidos carboxílicos.MUTASAS.- Catalizan rearreglos intramoleculares de grupos funcionales.TRANSALDOLASAS Y TRANSCETOLASAS.- Transfieren grupos de tres y dos carbonos respectivamente.EPIMERASAS.- Catalizan la formación de compuestos con orientaciones espaciales diferentes. Por ejemplo: D L ó L DDESCARBOXILASAS.- Eliminan grupos carboxilo.SINTETASAS.- Forman nuevos compuestos por condensación de dos sustratos.HIDROLASAS.- Rompen enlaces introduciendo una molécula de aguaFOSFORILASAS.- Introducen fosfato inorgánico

NÚMERO DE CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS.El número de clasificación de las enzimas consta de 4 dígitos separados por puntos. A . B . C . DEl primer dígito es la CLASE. Indica el tipo de reacciónEl segundo dígito es la SUBCLASE. Indica el sustratoEl tecer dígito es la SUB SUB CLASE. Indica el cosustrato.El cuarto dígito es el NÚMERO DE ORDEN.La comisión internacional de las enzimas ha clasificado a las enzimas en 6 clases que son:1 OXIDORREDUCTASAS Catalizan reacciones de óxido-reducción2 TRANFERASAS Catalizan reacciones de transferencia de grupos3 HIDROLASAS Catalizan ruptura de enlaces químicos con adición de agua.4 LIASA Catalizan la ruptura de enlaces químicos sin participación de agua (adición a dobles enlaces).5 ISOMERASAS Catalizan reacciones de isomerización.6 LIGASAS O SINTETASAS Catalizan reacciones que consisten en unir dos moléculas.

NOMENCLATURA DE LAS ENZIMASAlgunas enzimas tienen nombres no descriptivos como tripsina, quimotripsina, pepsina, etc. Sin embargo la mayoría de las enzimas se denominan con la terminación –asa- tomando como base el tipo de reacción que catalizan y/o el sustrato que transformanSUSTRATO ENZIMA Almidón (Amylum) Amilasa Lípido Lipasa Lactosa Lactasa

ENZIMASLas enzimas son proteínas complejas que producen un cambio químico específico en todas las partes del cuerpo. Por ejemplo, pueden ayudar a descomponer los alimentos que consumimos para que el cuerpo los pueda usar. La coagulación de la sangre es otro ejemplo del trabajo de las enzimas. Las enzimas son necesarias para todas las funciones corporales. Se encuentran en cada órgano y célula del cuerpo, como en: La sangreLos líquidos intestinalesLa boca (saliva)El estómago (jugo gástrico)ESPECIFICIDAD:Que se define como la presencia que presentan las enzimas hacia ciertos sustrato.son específicas: Por la forma del sitio activo.Por los residuos del sitio activo Por el medio electrónico del sitio activo.DESNATURALIZACIÓN PROTEICA: Proceso o serie de procesos en el que se altera la disposición espacial de las cadenas polipeptídicas dentro de la molécula, transformándose la estructura típica de la proteína nativa en otra más desordenada. La desnaturalización puede ser causado por temperatura, pH, agentes reductoresu oxidantes, etc.CATALASALa catalasa es una enzima perteneciente a la categoría de las oxidorreductasas que cataliza la descomposición del peróxido de hidrógeno (H202) en oxígeno y agua. Esta enzima utiliza como cofactor al grupo hemo y al manganeso.2 H2O2 ↔ 2 H2O + O2El peróxido de hidrógeno es un residuo del metabolismo celular de muchos organismos vivos y tiene entre otras una función protectora contra microorganismos patógenos, principalmente anaerobios, pero dada su toxicidad debe transformarse rápidamente

MATERIAL12 tubos de ensaye

NaCN al 5%

Pb(NO3)2 al 5%

H2O2Papa

ManzanaHigado de pollo

pinzas

DISCUSIÓN:• En todos los tubos se presentaron los mismos resultados, éstos fueron

acordes a los esperados, pues la temperatura, el plomo y el cianuro son inhibidores enzimáticos, por lo que no permitieron que la enzima catalasa degradara el peróxido de hidrogeno.

• el burbujeo confirmaba la reacción.

Conclusión

El cianuro, la temperatura y el Plomo, son buenos inhibidores de la enzima catalasa, pues no se llevo a cabo la reacción que degrada el peróxido de hidrógeno

Cuestionario

1. Defina el pI de una proteína Es el grado de PH necesario para que la carga neta de una proteína sea igual a 0, a ese PH pierde su solubilidad puesto que se vuelve incapaz de desplazarse en un campo eléctrico, por tanto precipita. 2. Escriba la ecuación de Henderson Hasselbach

3. ¿Porqué el alcohol actúa como agente precipitante para la gelatina? La polaridad del disolvente disminuye cuando se le añaden sustancias menos polares que el agua como etanol o la acetona. Con ello disminuye el grado de hidratación de los grupos ionicos superficiales de la molécula proteica, provocando la agregación y precipitación. Los disolventes orgánicos interaccionan con el interior hidrofóbico de las proteínas, y desorganizan la estructura terciaria, provocando su desnaturalización y precipitación.

1º Cortar en 4 trozos delgados: la manzana, la papa y el hígado de pollo en forma rectangular (procurando que todos sean del mismo tamaño ) y colocarlos en el papel absorbente Nota: No se debe manipular con los dedos directamente ni con pinzas

2º Preparar una serie de tubos como lo muestran las tablas:

Contenido Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4Tejido (Manzana)

Sin hervir Hervido Sin hervir Sin hervir

NaCN 5 % ------------ ---------- 5 gotas -----------Pb(NO3)2 5% ----------- --------- --------- 5 gotasH2 O2 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL

Contenido Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4Tejido (papa) Sin hervir Hervido Sin hervir Sin hervirNaCN 5 % ------------ ---------- 5 gotas -----------Pb(NO3)2 5% ----------- --------- --------- 5 gotasH2 O2 2 mL 2 mL 2 mL 2 mLContenido Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4Tejido (Hígado de pollo)

Sin hervir Hervido Sin hervir Sin hervir

NaCN 5 % ------------ ---------- 5 gotas -----------Pb(NO3)2 5% ----------- --------- --------- 5 gotasH2 O2 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL

NOTA: En el tubo 2 debe ser colocando agua destilada hasta cubrir el tejido y luego introducirlo al baño María (agua hirviendo) durante 5 min. Después de hervir vaciar el agua que tiene el tubo y agregar lo que se indica en la tabla.

3º Por último se mezclan bien los tubos, y se marca con cruces del 1 al 5 según aparece la intensidad de burbujeo en cada tubo.

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 xxx 0 0 0

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 xxx 0 0 0

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 xxx 0 0 0

Resultado de los tubos con tejido de manzana

Resultado de los tubos con tejido de hígado de pollo

Resultado de los tubos con tejido de papa