LEUCOSIS BOVINA ENZOÓTICA

Dr. Raúl Casas Olascoaga

Asociación Nacional de Productores de Leche

15 de julio de 2014 – 10:30 hs

La Leucosis Bovina Enzoótica (LEB) es una enfermedad contagiosa del vacuno causada por un retrovirus denominado Virus de la Leucosis bovina.

Clasificación del Virus de la Leucosis(Leucemia) del Bovino

• Grupo: Grupo IV (ssRNA-RT)

• Familia: Retroviridae

• Subfamilia: Orthoretrovirinae

• Género: Deltaretrovirus

• Especies: Bovine leukemia virus

• El hospedero natural del VLB causante de la LEB es el vacuno (Bos taurus y Bos indicus).

• El vacuno puede infectarse a cualquier edad incluyendo el estado embrionario.

• La mayoría de las infecciones son sub-clínicas pero una proporción de alrededor 30 % a 70% de los vacunos mayores de tres años de edad que se infectan desarrolla linfocitosis permanente y una proporción bastante menor de 0.1-10% desarrolla linfosarcomas (tumores) de magnitud y evolución variable en los órganos internos.

• Los signos clínicos dependen de los órganos afectados.

• A medida que aumenta la edad del animal afectado hay mayor probabilidad de desarrollo de los tumores.

• Los bovinos con linfosarcomas mueren súbitamente o luego de presentar signos clínicos durante semanas o meses con continuo deterioro físico y productivo.

• Si bien varias especies pueden ser infectadas por inoculación experimental del virus, la infección natural solamente ocurre en el vacuno y raramente ha sido demostrada en el búfalo de agua, en capibaras (carpinchos) y en ovinos.

• Las ovejas son muy susceptibles en la inoculación experimental y desarrollan tumores a menor edad que los vacunos.

• Persistente respuesta de anticuerpos ha sido detectada después de la infección experimental en ciervos, cobayos, gatos, perros, ovinos, monos, chimpancés, antílopes, porcinos, caprinos y búfalos.

• Como ocurre con la infección con otros retrovirus, los animales infectados permanecen portadores por vida. En los animales infectados tanto en los animales asintomáticos como los que padecen la enfermedad clínica el VLB permanece integrado en los linfocitos durante toda la vida del animal.

• La LEB causa graves complicaciones para la salud y el bienestar animal y determina pérdidas económicas sustantivas debido a su persistencia durante toda la vida del animal, además de su influencia negativa en el comercio doméstico e internacional.

• La transmisión natural depende de la transferencia de células infectadas, por ejemplo, durante el desarrollo intrauterino del embrión, en el parto, por contacto estrecho, y por vía del calostro o la leche contaminados con el VLB.

• La transmisión artificial ocurre con frecuencia especialmente por jeringas y agujas contaminadas, equipo quirúrgico y guantes contaminados que se usan, por ejemplo, en el examen rectal.

• En las áreas con alta prevalencia de LEB, las moscas picadoras que succionan sangre pueden tener cierto papel en la transmisión del VLB. En la Inseminación artificial la transmisión por vía del semen y la transferencia de embriones se considera de bajo riesgo cuando hay un control de calidad microbiológico calificado y se aplican en la manipulación medidas de bioseguridad eficientes.

• Los terneros nacidos de madres infectadas durante la lactación pueden ser temporalmente serológicamente positivos debido a la ingestión de calostro con anticuerpos específicos maternos.

• Debido a que las propiedades oncogénicas (cancerígenas) del virus fueron reconocidas de inmediato a su descubrimiento se despertó una investigación en la búsqueda de su patogenicidadpara los seres humanos. Así, los estudios fueron hechos mayormente en los trabajadores de las granjas de lechería que consumían leche cruda para ver si eran susceptibles a la leucemia o leucosiscausada por el VLB.

• Varios estudios han sido realizados para investigar si el VLB causa enfermedad en los humanos, especialmente, aquellos que consumen leche cruda de vacas infectadas.

• También, se ha estudiado si hay una correlación con el cáncer que puede presentarse en los carniceros y en trabajadores de la faena del ganado vacuno.

• Sin embargo, hasta ahora, no hay evidencias de la transmisión del VLB y en general, se considera que no es un riesgo paras los humanos. Nunca ha habido ninguna evidencia de transmisión del VLB a los humanos por ninguna ruta. El Comité Asesor para Patógenos Peligrosos (Advisory Committee forDangerous Pathogens) nunca ha incluido al VLB como agente capaz de infectar a los humanos.

• El retrovirus de la LBE está relacionado con los virus T-Linfotrópico humano tipo 1HTLV-1 y 2.

• El Virus RNA de la Leucosis del Bovino (VLB) se integra en el Acido Desoxiribonucleico (ADN) de los Linfocitos, mayormente de tipo B, como un Acido Dexocinucleico (ADN) intermedio denominado provirus. En el animal infectado cierta proporción de los linfocitos es portador del Virus.

• El VLB para la producción del virion, además de los genes estructurales y enzimáticos, contiene un oncógeno para codificar la denominada proteína TAX y expresar las micro ARN (Acido Ribo Nucleico) cuyas funciones en la acción de este virus aún se desconocen.

• En su huésped natural (el vacuno) la enfermedad representa un porcentaje bajo, alrededor de 5% de los animales infectados, pero la linfo-proliferación es bastante frecuente con un 30 % de animales infectados.

• La información disponible en Uruguay demuestra una prevalencia alta en las cuencas lecheras que alcanza al 70% con una alta prevalencia de animales asíntomáticos.

Características Clínicas y diagnóstico de la LBE.

• Pérdida de apetito (anorexia) y pérdida de peso

• Disminución en la producción de leche

• Debilidad

• Fiebre

• Anormalidad en la respiración

• Protuberancia en la órbita ocular

• Diarrea

• Constipación

• Ganglios linfáticos aumentados de volumen (adenitis) que puede observarse y palparse en los ganglios periféricos o superficiales.

Características Clínicas y diagnóstico de la LBE.

• Desarrollo de tumores en diferentes órganos internos de magnitud variable;

• Causando tumores y trastornos, por ejemplo, digestivos (estómago, masa intestinal), pulmones, corazón , bazo, riñones o en los órganos de la reproducción (útero).

• Lesiones de la piel.

• Parálisis parcial del tren posterior del animal enfermo.

• Signos de alteraciones neurológicas.

• El animal con sintomatología clínica manifiesta rápidamente pierde peso y puede morir súbitamente o luego de una evolución prolongada de la enfermedad.

Detección e identificación del VLB

• El VLB puede ser detectado en el cultivo in vitro de células mono nucleares periféricas de la sangre (Linfocitos B) de animales infectados.

• Por identificación del antígeno del VLB mediante la Reacción en cadena de la Polimerasa, importante enzima no estructural del virus que en la prueba se replica.

• Por observación directa del VLB en microscopio electrónico.

• El VLB provirus (ADN) puede ser identificado en las células mononucleares periféricas o en los tejidos y tumores de animales infectados.

Algunos usos de la prueba de PCR

• Diagnóstico en muestras de especímenes de:

• Terneros jóvenes alimentados con calostro;

• Tumores para diferenciar linfomas infecciosos de los esporádicos;

• Animales sospechosos de infecciones recientes antes de desarrollar anticuerpos;

• Confirmar resultados dudosos obtenidos con la prueba ELISA;

• Muestreo sistemático para demostrar que los animales jóvenes están libres de VLB

Pruebas de diagnóstico serológico

El diagnóstico se basa usualmente en la detección de anticuerpos específicos generados por el organismo animal contra la infección del VLB.

• Los métodos de detección de anticuerpos usados son:Agar Gel Inmuno-Difusión (AGID).Ensayo de ELISA (“Enzyme Linked-Immuno-Sorbent Assay).

• Especímenes o muestras recolectadas para diagnóstico son:Muestras de sangre, suero, leche, tejidos del animal

investigado.Muestras de leche a granel en tanque para analizar el rodeo

lechero de cada tambo o granja.

• Son pruebas sencillas y bastante rápidas pero que requieren cuidadosa y exigente calidad en su ejecución y en los reactivos utilizados.

Identificación del agente. Diagnóstico. Detección del virus.

• En el año 2013, el Br. Gonzalo Rama expuso su tesis titulada “ Desarrollo y análisis comparativo de una nueva herramienta para el diagnóstico de la Leucosis Bovina Enzoótica ; impacto del descenso de Anticuerpos anti-VLB circulantes en el peri-parto para el diagnóstico serológico” en la demostró un 18% y 27 % más positivos con el método de PCR que con ELISA e IDGA respectivamente y con una especificidad de 94% y sensibilidad de 88%.

• Fueron utilizadas vacas Holando (N=15) preñada , dos meses antes del parto .

Identificación del agente. Diagnóstico. Detección del virus.

• El autor concluye que la inmunodepresión causada por la preñez afecta los títulos de anticuerpos anti-VLB desde el día -20 al +50 con una reducción de entre 40% y 60% con relación a los títulos registrados en el inicio del estudio.

• Por tanto, no se debe extraer la muestra de sangre en este periodo de la preñez para realizar el diagnóstico serológico de LEB para evitar resultados falsos negativos.

• Es una herramienta tecnológica simple y de bajo costo y de alta utilidad para detectar animales positivos en rodeos con presencia de LBE.

• Esta prueba requiere minucioso y exigente medidas higiénicas y de bioseguridad durante su ejecución por la facilidad que existe de contaminación accidental del material genético de las muestras extraídas .

Riesgo de la LBE.

• El virus está presente en las células blancas sanguíneas de los animales infectados y la enfermedad es transmitida a través del contacto físico estrecho y de la transferencia de tejidos conteniendo sangre.

• La transmisión artificial por jeringas y agujas, instrumentos contaminados usados en castración, descornado, descole o por insectos picadores que succionan sangre.

Medidas de control• La enfermedad puede ser controlada por pruebas sistemáticas

y eliminación de reactores y medidas de bioseguridad higiénico-sanitarias.

• Vigilancia estricta y evitar el ingreso de animales portadores al establecimiento libre o en proceso de saneamiento.

• Ver folleto de la SMVU.

• No hay vacunas disponibles.

• En los establecimientos en los que se ha verificado o confirmado la existencia de LEB deberán establecerse medidas de bioseguridad para el movimiento externo de animales a fin de evitar la diseminación del VLB.

• La bioseguridad y biocontención tienen un papel fundamental para prevenir la diseminación de la infección.

Historia

• En Europa el primer país que se consideró libre de la LBE fue Dinamarca mediante pruebas sistemáticas de diagnóstico, eliminación obligatoria de reactores y pago de compensación del animal reactor sacrificado.

• Fue seguida por el Reino Unido que logró erradicar la erradicación de LEB mediante medidas semejantes.

• El Departamento de Agricultura (USDA) de EE.UU. hizo un Estudio de muestreo de los tanques de leche a granel que fueron recolectados en 534 operaciones (Tambos) con 30 o más vacas lecheras. Fueron analizadas con la ELISA para detectar la presencia de anticuerpos contra el VLB.

• Los resultados demostraron que 83.9 por ciento de las operaciones de lechería examinadas de USA eran positivas a la presencia de anticuerpos específicos.

Historia

En su hoja de Hechos sobre la LEB el USDA incluyo la

siguiente constancia:

“La alta prevalencia individual del VLB informada en 1996 sugiere que las pruebas de examen y eliminación de animales seropositivos puede no ser un método costo efectivo.

En su lugar, la prevención de la transmisión por prácticas sanitarias adecuadas sería un método costo efectivo mejor”.

Relación inmunológica y genética Investigaciones importantes han demostrado:

El declinio en la producción de leche en la comparación rodeo lechero infectado y rodeos negativos sería similar.

Tasa de concepción 7% más baja en rodeos lecheros positivos al VLB comparada con la tasa de rodeos libres.

Aumento de la tasa de recorte o eliminación de vacas lecheras en los tambos positivos a VLB.

Mayor susceptibilidad a otras enfermedades infecciosas

por ejemplo, mastitis, diarreas infecciosas , neumonias.

La suceptibilidad de los vacunos a la persistencia de la linfocitosis y acaso el desarrollo de tumores es genéticamente determinado.

Propuesta

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