manual de hematologia

Código: I-FQUI-LAC-02

F-CIPLADE-CC-39/REV:00

Fecha de emisión:5/ene/2009

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Instructivo para el procesamiento demuestras del área de Hematología

1.- OBJETIVO

Realizar de manera correcta las diferentes metodologías para el procesamiento de muestrasbiológicas; así como brindar información sobre la utilidad de la realización de las mismas.

2.- ALCANCE

Aplica a todas muestras biológicas referenciadas al área de Hematología

3.- DESCRIPCIÓN DE LA OPERACIÓN

Los datos de los usuarios a quienes les soliciten únicamente Velocidad de Sedimentación Globular,Reticulocitos, Células LE y/o Grupo-Rh deberán:

Ser transcritos en el formato F-FQUI-LAC-72.

Toda muestra deberá: Tener una etiqueta con código de barras y un número asignado según la orden de trabajo. Ser analizada según instructivo I-FQUI-LAC-02.

Los resultados del proceso deberán: Ser transcritos en los formatos F-FQUI-LAC-18, F-FQUI-LAC-20, F-FQUI-LAC-21, F-FQUI-

LAC-72, F-FQUI-LAC-88. Ser capturados en el sistema Syslabs. Ser firmados por el responsable del área de Hematología, o personal asignado a la misma,

en los formatos antes mencionados. Ser entregados al área de recepción debidamente transcritos en los formatos

correspondientes.

Diariamente se deberá: Procesar materiales de control de calidad: Controles e-check en 3 niveles, (L1-bajo, L2-

normal y L3-alto), de acuerdo a la “Guía rápida” del analizador XS-1000i proporcionada porel fabricante; Controles Biorad en 3 niveles (1-bajo, 2-normal y 3-alto) de manera manualcomo muestra sin diferencial.

Actualizar la bitácora de mantenimiento y uso diario del Sysmex XS-1000i (F-FQUI-LAC-54)y la hoja estadística de estudios (F-FQUI-LAC-48).

No se procesarán muestras coaguladas.En caso de ser muestras remitidas, no se aceptarán si han sido recolectadas el día anterior.

Las muestras biológicas (sangre total) procedentes del área de toma de muestras son transportadaspor el personal del laboratorio hacia el área de Hematología.

1.- Procesamiento de control de calidad interno según “Guía rápida” del Sysmex XS-1000i.




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2.- Cada una de las muestras biológicas es procesada según el instructivo I-FQUI-LAC-02.

3.- Los resultados son registrados en los formatos F-FQUI-LAC-20 y F-FQUI-LAC-72.

4.- Los resultados registrados en los formatos F-FQUI-LAC-20 y F-FQUI-LAC-72 son transcritos en elprograma Syslabs de la siguiente manera:

4.1.- Se enciende la computadora (regulador, CPU y monitor)

4.2.- Se abre el icono de “acceso directo a Syslabs” y se procede de la siguiente manera al abrirselas ventanas:

4.2.1.- “Sistema de control para Laboratorios de análisis clínicos” [ACEPTAR]4.2.2.- “Syslabs” [ACEPTAR]

4.3.- Seleccionar el USUARIO [NOMBRE DEL QUÍMICO] o [ESTUDIANTES] según sea el caso.4.4.- Ingresar el PASSWORD del USUARIO [CLAVE DEL QUÍMICO] o [HEMATO]respectivamente. Luego [ACEPTAR] para tener acceso directo al programa Syslabs.4.5.- Seleccionar el ícono [CAPTURA DE ANÁLISIS]4.6.- Al abrirse la ventana de “Resultados”:

4.6.1.- Seleccionar [Por Depto]4.6.2.- Seleccionar Departamento [HEMATOLOGÍA]4.6.3.- Verificar que la fecha corresponda al día del proceso.4.6.4.- Seleccionar [VER ESTUDIOS] para visualizar los datos del usuario (Nombre, Solicitud,Estudio, Estatus de la prueba, Número de muestra).

4.7.- Se abre el ícono “acceso directo a Sconnect” y se procede de la siguiente manera al abrirselas ventanas:

4.7.1.- “Sistema de interfaz para equipo de laboratorio clínico” [ACEPTAR]4.7.2.- “SyslabsConnect” [ACEPTAR]4.7.3.- Seleccionar el USUARIO [NOMBRE DEL QUÍMICO] o [ESTUDIANTES] según sea elcaso.4.7.4.- Ingresar el PASSWORD del USUARIO [CLAVE DEL QUÍMICO] o [HEMATO]respectivamente. Luego [ACEPTAR] para tener acceso a la interfaz.4.7.5.- En la ventana “SyslabsConnect Interfaz autoanalizadores” seleccionar el equipo XS-1000i Sysmex dando un click en [CONECTAR]

4.8.- Reporte de resultados:4.8.1.- Parte de los resultados son transferidos directamente del analizador hematológico alprograma Syslabs mediante la interfase (Fórmula roja, número de plaquetas y número total deLeucocitos)4.8.2.- Después del conteo diferencial de Leucocitos se registran los datos en el formato F-FQUI-LAC-20 y se capturan de forma manual en el programa Syslabs.

5.- La validación se realiza verificando nuevamente los datos ingresados de cada paciente. Si noexistiera ninguna corrección, los formatos F-FQUI-LAC-20 y F-FQUI-LAC-72 son firmados por elquímico responsable de área y enviado a recepción.

6.- Llenar hoja estadística del área de Hematología F-FQUI-LAC-48/REV00 y bitácora diaria de equipoSysmex XS-1000i




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7.- Una vez en recepción los formatos F-FQUI-LAC-20 y F-FQUI-LAC-72 con nombre y firma delresponsable de área, las secretarias proceden a imprimir los resultados transcritos en el programaSyslabs.

*En caso de ser necesario (cambio o preparación de reactivos) actualizar la bitácora de consumo dereactivos F-QUI-LAC-51/REV00 y el formato de control y preservación de reactivos F-QUI-LAC-52/REV00.

MANEJO DEL XS-1000i

¿CÓMO ENCENDER EL EQUIPO SYSMEX XS-1000i?

1. Extensión múltiple y Regulador: Mantener encendidos.2. Monitor: Encender y esperar que se abra automáticamente el programa IPU, posteriormente

escribir en usuario las letras “xs” y pulsar [ACEPTAR].NOTAS: No se requiere contraseña. En caso de no abrirse automáticamente el programadirigirse a [START], luego [ALL PROGRAMS] seguido de [XS] y finalmente [IPU].

3. Impresora.4. Equipo: Esperar que realice el ciclo de inicialización completo.

Análisis automático

1) Haga clic en el botón [L.Trab.] de la barra de íconos o pulse F6:

Se abrirá la siguiente ventana, después hacer clic en el botón [Regist] de la barra de íconos o pulseF9:




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Se abrirá el siguiente cuadro de diálogo y se ingresarán los siguientes datos:1. ID Muestra: Número de muestra.2. Análisis: CBC+DIFF o CBC (en caso de que sólo haya solicitud de Velocidad de

Sedimentación Globular y/o Conteo de Reticulocitos).3. Id. Pacie.: Número de orden.4. Nombre: Primer nombre del usuario.5. Apellidos: Apellidos del usuario.6. F. nac.: Fecha del día.7. Sexo: Hombre o mujer.8. Añadir siguiente: Hacer clic si se va a agregar a más usuarios en la lista de trabajo.9. Aceptar: Hacer clic si ya se ha finalizado la lista de trabajo.

En el modo de análisis automático la agitación, aspiración y análisis de las muestras se realizanautomáticamente.

Los volúmenes de muestra necesarios para el análisis se indican a continuación:

Diámetro del tubo de muestras 12 mm 15 mmVolumen de muestra requerido 1.0 – 5 mL 1.0 – 7 mLVolumen de muestra aspirado Aprox. 20 μL Aprox. 20 μL




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2) Haga clic en el botón [AUTOM] de la barra de íconos o pulse F3:

Se abrirá el siguiente cuadro de diálogo:

3) Introduzca el ID Muestra (número inicial de la muestra o poner 1)

4) Introduzca el número de racks (gradillas)

5) Posición de inicio del análisis: seleccione el cuadro combinando la posición del tubo en la quedebe comenzar el análisis (gradilla (rack) 1 ó 2, posiciones 1-10).

6) Especifique el tipo de análisis: CBC o CBC+DIFF.

7) Abra la tapa del alimentador de muestras.

8) Coloque las muestras en el alimentador e introduzca las gradillas en el alimentador comenzandopor el interior.

9) Cierre la tapa del alimentador de muestras.

10) Pulse el botón de inicio del alimentador de muestras para comenzar el análisis.




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VI. Ejemplo del impreso de una muestra normal

(1) Datos de análisis(3) Histograma de hematíes(4) Histograma de plaquetas(5) Dispersograma del diferencial(6) Mensajes interpretativos de leucocitos(7) Mensajes interpretativos de hematíes(8) Mensajes interpretativos de plaquetas

NOTA: Para conocer los detalles sobre el procesamiento de muestras de volúmenes iguales o menores a500 uL en el equipo SYSMEX XS-1000i consultar el manual de operación (Instrucciones de uso) y/o guíarápida proporcionada por la compañía SYSMEX.




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VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR (VSG)

INTRODUCCIÓNLa velocidad con la cual se produce el descenso de estos hematíes se denomina velocidad desedimentación globular (VSG).El Método de Westergren se basa la precipitación de los eritrocitos en un tiempo determinado (1 hora)que se relaciona directamente con la tendencia de los glóbulos rojos hacia la formación de cúmulos(pilas de monedas) así como a la concentración plasmática de proteínas (globulinas y fibrinógeno). Lacapacidad y la velocidad de formar estos cúmulos dependen de la atracción de la superficie de losglóbulos rojos. La velocidad se eleva si las proteínas del grupo de las globulinas esta elevado conrespecto a la albúmina; también una alta proporción de fibrinógeno puede provocar esta elevación.Los principales usos de la medición de la VSG son: para detectar procesos infecciosos e inflamatorios;como control de la evolución de ciertas infecciones crónicas para detectar procesos crónicosinflamatorios ocultos o tumores.La VSG es una prueba inespecífica por lo cual no es una prueba diagnóstica definitiva de ningunaenfermedad o lesión determinada.

PROCEDIMIENTO

Obtención de sangre por punción venosa y colocarlo en tubos con EDTA.

Se coloca la cánula de hematocrito en la jeringa y se aspira 1.5 mL (aprox) de muestra (Figura 1).

Tomar un tubo Wintrobe limpio y rotularlo con el número del usuario (Figura 2).

Llenar el tubo Wintrobe hasta la marca superior (0, 10), para esto se introduce la cánula dehematocrito hasta el fondo y lentamente se deposita la sangre (a medida que se va llenando el tubo,retirar la cánula lentamente) evitando que la formación de burbujas (Figura3).

Se coloca en un portatubos Wintrobe durante una hora.

El resultado se obtiene poniendo la mirada al nivel de la gradilla a la altura del menisco y se lee;posteriormente se le hace una corrección según la tabla del Anexo A donde se contrapone elhematocrito con la velocidad observada y se reporta el resultado en milímetros en una hora.

FIGURA 1.- Cánula para tubos Wintrobe. La cánula se coloca en una jeringanormal que puede ser de 3 mL o de 5 mL.




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BIBLIOGRAFIA

Iovine E. y A. A. Selva. Laboratorio en la clínica. 3ª ed. Panamericana, Buenos Aires, Argentina. 1985.

William R. Platt. Atlas de Hematológica en color. Editorial JIMS, Barcelona.1972

Turallas, J.M. Métodos de recuento celular sanguíneo. Manual de técnicas de laboratorio enhematología. Salvat, Barcelona, España, 1987.

Davidsohn, I., J.B.Henry. Diagnóstico clínico por el laboratorio. 6ª ed., Salvat, Barcelona, España,1978.

Quintana, G.S.; Martínez, M.C. Fisiología de la hemostasia secundaria. Manual de hemostasia ytrombosis. México, Editorial Prado; 1996, pp 23-48.

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FIGURA 2.- Tubos Wintrobe. Los tubos deben estar limpios, y se deben marcarcon el número del usuario.

FIGURA 3.- Llenado de tubos Wintrobe. Se introduce la cánula al fondo del tubo yconforme se deposita la sangre, se va retirando lentamente.




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RECUENTO DE PLAQUETAS (MÉTODO MANUAL)

INTRODUCCIÓN

Las plaquetas son elementos normales de la sangre, muy pequeños, de 2 a 3 micrones, aislados oagrupados entre los hematíes. Son de color azulado o gris azulado y presentan gránulos de colorrojizo, azurófilos, redondeados.Las plaquetas se caracterizan por su extrema adhesividad a las superficies íntimas de los vasossanguíneos lesionados. Asimismo, participan en la formación de tromboplastina y liberan factoresnecesarios para la coagulación normal y otros de los que depende la retracción del coagulo. Laconcentración normal de plaquetas en la sangre es de 150,000 a 450,000 por mm3.Hay aumento del número de plaquetas en las pérdidas agudas significativas de sangre, en la leucemiamieloide crónica, en las fracturas óseas, en estados de asfixia, en la policitemia vera, en laconvalecencia de infecciones agudas y en la esplenomegalia. Hay disminución en la púrpuratrombocitopénica idiopática o en condiciones congénitas, en algunas infecciones virales como lamononucleosis infecciosa y bacterianas como la meningitis meningocócica.

MATERIAL BIOLOGICO:

Sangre obtenida con EDTA

EQUIPO

Pipetas automáticas

Tubos de ensayo

Cámara de Neubauer

Caja de Petri

Gradillas

Guantes

Microscopio

REACTIVOS

Líquido de dilución para el método directo (oxalato de amonio al 1% en agua destilada).

PROCEDIMIENTO

1. Se obtiene sangre por punción venosa con anticoagulante EDTA.

2. Se homogeniza bien la muestra y se realiza una dilución 1:200 (5μL de muestra + 995 μL de

Oxalato de amonio al 1%).




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3. Mezclar y dejar reposar 5 minutos.

4. Cargar la cámara de Neubauer. (Figura 1)

5. Dejar en reposo 15 minutos, dentro de una caja de Petri con papel húmedo para evitar la

desecación.

6. Efectuar el recuento de plaquetas al microscopio (N) en toda la superficie cuadriculada central

(1 mm2). (Figura 2)

7. La cifra obtenida se multiplica por 10 para obtener su número en 1 mm3 y por 200 para

compensar la dilución, o bien directamente por un factor de 2000. El resultado será el número

de plaquetas por mm3.

N x 10 x 200 = plaquetas por mm3

En donde:

N = Recuento de plaquetas al microscopio.

10 = Volumen del área contada.

200 = Factor de dilución.

Figura 1.- Cámara de Neubauer. Se coloca el cubre sobre la cámara y con la pipeta se deja caeruna gota en el borde. Por capilaridad la muestra entra entre el cubre y la cámara de Neubauer




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OBSERVACIONESActualmente, en muchos laboratorios, los recuentos de plaquetas se realizan en forma automatizadaen contadores hematológicos o en contadores específicos, habiéndose logrado un alto nivel deprecisión (incluso en trombocitopenias). El recuento manual suele efectuarse para la comprobación dela cifra de plaquetas en trombocitopenias muy graves y en el caso de plaquetas gigantes en las que elrecuento automático no es fiable. Valores inferiores a 100,000 plaquetas en el método automatizado,no son confiables y deberán verificarse por éste método.

VALORES DE REFERENCIA

La concentración normal de plaquetas en la sangre es de 150,000 a 450,000 por mm3.

BIBLIOGRAFIA

Iovine E. y A. A. Selva. Laboratorio en la clínica. 3ª ed. Panamericana, Buenos Aires, Argentina. 1985.

William R. Platt. Atlas de Hematológica en color. Editorial JIMS, Barcelona.1972



Quintana, G.S.; Martínez, M.C. Fisiología de la hemostasia secundaria. Manual de hemostasia ytrombosis. México, Editorial Prado; 1996, pp 23-48.

Sonnenwirth, A.C., L. Jarett. Métodos y diagnósticos del laboratorio clínico. 8ª ed., Panamericana,Buenos Aires, Argentina. 1983.

Lynch, M.J., S.S. Raphael, L.D. Mellor, P.D. Spare, M.J.H. Inwood. Métodos de laboratorio. 2ª ed.,Interamericana, México, D.F. 1987.

Figura 2.- Cámara de Neubauer. La cuenta de plaquetas se realiza en toda el área central de lacámara.




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RECUENTO DE RETICULOCITOS

INTRODUCCIONEl RNA residual, que ocasiona la basofilia difusa del eritrocito policromático, es precipitado y teñidocon una tinción vital como el azul de metileno o azul de cresil brillante, que le da una imagenfilamentosa reticular fácilmente visible al microscopio. Para ello, se preparan extensiones delgadas yse cuenta el número de eritrocitos que contiene dicho precipitado teñido, los que se consideran comoreticulocitos. Los resultados se informan en porcentaje de reticulocitos (con relación al total deeritrocitos), en cifras absolutas por mm3 de sangre y en índice reticulocitario.

MATERIAL BIOLÓGICO

Sangre obtenida con EDTA.

EQUIPO

Tubos de ensayo

Pipetas Pasteur

Portaobjetos

Gradilla

Baño María a 37 º C

Microscopio

REACTIVOS

Solución de azul de cresil brillante al 1% en citrato de sodio al 3.8%

Aceite para inmersión.

PROCEDIMIENTO

1. Usando la pipeta Pasteur, colocar dos gotas de sangre perfectamente mezclada en un tubo deensayo.

2. Agregar dos gotas del colorante (azul de cresil brillante).

3. Mezclar suavemente e incubar a 37 º C durante 20 minutos.

4. Resuspender los eritrocitos mediante mezclado suave y hacer extensiones delgadas.

5. Cuando el frotis esté seco, leer al microscopio con objetivo de inmersión en aceite (100x). Contar1000 eritrocitos, anotando el número de reticulocitos encontrados durante esa cuenta.




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6. Obtener el porcentaje de reticulocitos mediante la siguiente fórmula:

7. Para obtener la cantidad de reticulocitos por mm3 de sangre (cifras absolutas), se requiere realizar

una cuenta de eritrocitos y posteriormente se calculan usando la siguiente fórmula:

Los resultados se reportan en %, cifras absolutas y el Índice Reticulocitario (IR).

VALORES DE REFERENCIAPorcentual: 0.5 – 2 %

Absolutos: 50 000 – 100 000/mm3

COMENTARIOS

El recuento de reticulocitos es un excelente método indirecto para evaluar la eritropoyesis, ya quecuando hay respuesta eritropoyética, se incrementan; sin embargo, cuando la médula ósea noresponde, los reticulocitos se encontrarán normales o disminuidos. Es de mayor utilidad aún, como uníndice de la magnitud de la eritropoyesis, al realizar una “Corrección de la cuenta de reticulocitos”, esdecir, obtener “indice reticulocitario” (IR) de la siguiente manera:

Hto ideal en Mujeres 38Hto ideal en Hombres 40

Reticulocitos / mm3 = % de reticulocitos x eritrocitos / mm3

100

% de reticulocitos = reticulocitos x 100 1000

IR = % de reticulocitos x Hto real / Hto ideal 1 + 0.1 (por cada 2 unidades

en aumento o disminución con respecto al hematocrito ideal)




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BIBLIOGRAFÍA


Hurtado, R., R. Cárdenas, J. Cortes y J. Labardini. Manual de hematología. Instituto Nacional de laNutrición, México, D.F., 1991.

Iovine, E. y A.A.Selva. El laboratorio en la clínica. 3ª ed., Panamericana, Buenos Aires, Argentina,1985.

Leavell, B., O. Thorup. Hematología clínica. 4a ed., Interamericana, México, D.F., 1978.

Lynch, M.J., S.S. Raphael, L.D. Mellor, P.D. Spare, M.J.H. Inwood. Métodos de laboratorio. 2ª ed.,Interamericana, México, D.F. 1987.

Ruiz Arguelles, G.J. Fundamentos de hematología. Panamericana, México, D.F., 1994.

Sonnenwirth, A.C., L. Jarett. Métodos y diagnósticos del laboratorio clínico. 8ª ed., Panamericana,Buenos Aires, Argentina. 1983.

Williams, M.J., E. Beutler, A.J. Erslev, M.A. Lichtman. Hematology. 4a ed., Mc Graw Hill, New York,USA, 1990.





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TINCIÓN Y OBSERVACIÓN DE FROTIS SANGUÍNEOS

INTRODUCCION

El examen microscópico de un frotis de sangre periférica, sobre un porta o cubreobjetos de vidrio, nospermite obtener una valiosa información acerca de los elementos formes de la sangre, muchos de loscuales no pueden ser evaluados mediante las mediciones cuantitativas realizadas por otros métodos.En general, en un frotis podemos evaluar lo siguiente:

a) Morfología eritrocitaria.b) Concentración y distribución de la hemoglobina.c) Distribución de los eritrocitos.d) Inclusiones y artificios de los eritrocitos.e) Morfología y recuento diferencial de los leucocitos.f) Inclusiones y artificios de los leucocitos.g) Morfología y apreciación cualitativa del número de plaquetas.h) Artificios y agrupación de las plaquetas.

Por lo mencionado anteriormente, se considera que la preparación de un frotis de sangre periférica esuna técnica fundamental en hematología. El químico o el técnico laboratorista debe ser capaz derealizar preparaciones excelentes sin conformarse con resultados mediocres, ya que para observaradecuadamente la morfología sanguínea se necesita tener preparaciones de calidad.

MATERIAL BIOLÓGICO Sangre recolectada en tubos con EDTA como anticoagulante.

EQUIPO

Microscopio.

Contador de células

Jeringa

Tubos vacutainer con EDTA

Portaobjetos

Cubreobjetos

Cronómetro

REACTIVOS Colorante de Wright

Buffer para tinción de Wright (agua destilada).

Metanol.

Aceite de inmersión.




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PROCEDIMIENTO

TECNICA DE FROTIS LONGITUDINAL Y TINCIÓN DE WRIGHT

1 Colocar una gota de sangre de 5 uL aproximadamente a 1 a 2 cm del borde del portaobjetos,colocando éste en posición horizontal sobre la mesa de trabajo (ver figura 1).

2.- Colocar un segundo portaobjetos (extensor) de modo que forme un ángulo de 30° con elportaobjetos horizontal, con su eje mayor paralelo a él. El borde mas bajo del portaobjetosextensor, que debe ser liso y regular, se aplica firmemente sobre la superficie del primero, demanera que la gota de sangre esté por debajo de él (ver figura 2)

3.- El segundo portaobjetos se desliza lentamente hacia la sangre hasta que se produzca elcontacto, después del cual la sangre se desliza uniformemente entre la superficie de contacto deambos portaobjetos (ver figura 3).

4.- El portaobjetos extensor es movido rápida y suavemente en dirección opuesta, manteniendo elcontacto y el ángulo entre los portaobjetos. La extensión formada debe ser uniforme y deaproximadamente la mitad de la longitud de la laminilla. El grosor de la extensión depende de lavelocidad de movimiento del portaobjetos extensor y del ángulo en que se sitúa éste: a mayorángulo mayor grosor, a mayor velocidad, menor grosor (ver figura 4)

5.- Una vez que la sangre se ha extendido, se deja secar. Nunca se debe secar soplando con laboca pues el aire húmedo ocasionaría alteraciones morfológicas.

6.- Rotular el frotis con el número de usuario.

7.- Posteriormente se coloca metanol hasta cubrir completamente el extendido por 2 minutos y sedecanta.

8.- Se cubre completamente con el colorante de Wright (preparación ANEXO B) por 2 minutos,sin decantar se adiciona agua destilada (como buffer) hasta la formación visible de una películade impresión metálica y se deja por 12 min.

9.- Decantar y lavar con agua destilada hasta eliminar los residuos de colorante y se deja secarpara observar al microscopio con el objetivo 100 x.

10.- Se procede hacer el conteo diferencial de leucocitos en el extendido de sangre siguiendo unatrayectoria como la figura 5.

NOTA: La distribución de los leucocitos con esta técnica, no es homogénea, debido a que ladistribución de las células más grandes, como polimorfonucleares y monocitos, tienden aacumularse cerca de los extremos.




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30°30°

Figura 1.- Frotis en portaobjetos (técnica longitudinal). Se coloca una gota de sangresobre el portaobjeto.

Gota de sangredel paciente

Figura 2.- Frotis en portaobjetos (técnica longitudinal). El portaobjetos extensor formaun ángulo de 30° con respecto al portaobjetos con la muestra de sangre.

Figura 3.- Frotis en portaobjetos (técnica longitudinal).Deslizamiento del portaobjetosextensor hacia atrás, hasta que toque la gota de sangre.

Figura 4.- Frotis en portaobjetos (técnica longitudinal). Deslizamiento del portaobjetosextensor hacia el frente.




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BIBLIOGRAFIA

Fundamentos de interpretación clínica de los exámenes de laboratorio. Ruíz-Reyes G. Ed.Panamericana. 1ª. Edición. México. 2004

Química analítica. Skoog D.A., West D.M., Holler F.J., Crouch S.R. Mcgraw-Hill 7ª edición.Interamericana editores. México 2001.

Codex del laboratorio clínico. Fuentes X. Castiñeiras M. J. Ferré M. Elseiver. España. 2003.

Figura 5.- Frotis en portaobjetos, trayectoria para realizar el conteo diferencial deleucocitos




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CÉLULAS DEL LUPUS ERITEMATOSO (LE)PRUEBA DE ZIMMER Y HARGRAVES

INTRODUCCIÓN

La célula LE fue descrita en 1948 por Hargraves y colaboradores. Una sustancia presente en lafracción gammaglobulínica del plasma o del suero de pacientes con lupus eritematoso diseminado, elllamado factor LE, reacciona con la nucleoproteína de los núcleos de los leucocitos. El factor LEparece ser un anticuerpo. La nucleoproteína transformada adquiere propiedades quimiotácticas y atraea los fagocitos, generalmente granulocitos neutrófilos segmentados y a veces monocitos. Rara vez seobserva que otros leucocitos actúen como fagocitos. Estos, con el material nuclear ingerido,constituyen las células LE. El fenómeno, y su formación, requiere la presencia en el suero del factorLE, de leucocitos lesionados y de leucocitos activos normales. El factor LE es el agente que actúa enel leucocito lesionado, el substrato, y lo transforman en burbujas redondas homogéneas. Estas últimasadquieren propiedades quimiotácticas a consecuencia de la transformación química. Los leucocitosnormales ingieren los núcleos transformados.

Morfología. La célula LE contiene dos núcleos. El del fagocito es aplanado y se encuentra en laperiferia de la célula, con una cromatina de estructura bien conservada. La mayor parte de la fraccióncitoplásmica de la célula está invadida por la masa nuclear transformada e ingerida, el substrato, y elcitoplasma forma un estrecho margen en la periferia. En la célula LE plenamente desarrollada falta laestructura normal de cromatina del núcleo ingerido y en su lugar hay una masa redonda, amorfa,homogénea y de color púrpura que varía de tamaño, pero que suele ser más grande que los eritrocitosen la misma preparación. Un fagocito puede englobar más de un núcleo. Es posible que, en algunoscasos, los múltiples núcleos sean segmentados de un granulocito que todavía no se han unido. Latransformación del núcleo es un proceso progresivo y las fases pueden seguirse paso por paso. Laacción quimiotáctica precoz del núcleo en transformación o transformado, puede atraer a variosgranulocitos neutrófilos que lo rodean formando la llamada “roseta”. Este dato no tiene valordiagnóstico.La nucleofagocitosis es un hallazgo bastante frecuente que se distingue esencialmente del fenómenode la célula LE, dado que el fagocito más frecuentemente es un monocito, aunque puede ser ungranulocito. El núcleo fagocitado conserva normal el dibujo de cromatina. Puede presentar cambiosdegenerativos, principalmente picnosis difusa o que aparece a lo largo de los bordes, y vacuolasnucleares. A menudo, la inclusión es más pequeña que una verdadera célula LE; éstas son lasllamadas “células de tarta”.

MATERIAL BIOLÓGICO: Sangre sin anticoagulante

EQUIPO

Tubos de ensayo Portaobjetos Aplicadores de madera Tubo de Wintrobe Microscopio




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REACTIVOS

Colorante de Wright Agua destilada o Buffer para tinción de Wright. Metanol. Aceite de inmersión.

PROCEDIMIENTO

1. Se recolectan 8 mL de sangre venosa en un tubo de ensayo esterilizado y seco, se deja coagular atemperatura ambiente durante unas 2 horas o a 37 °C durante 30 minutos.

2. Se fragmenta el coágulo con varios aplicadores de madera y se retiran los restos del coágulo delsuero sanguíneo. La mezcla restante de suero y células se centrifuga durante 20 minutos a 2500 r.p.m.

3. Se retira la mayor parte del sobrenadante con una pipeta, dejando una columna de 5 mmaproximadamente.

4. Se traslada la capa leucocitaria gris bien visible a un tubo Wintrobe y se centrifuga durante 20minutos a 2500 r.p.m.

5. Se retira cuidadosamente el suero con una pipeta, dejando un estrato de 1 ó 2 mm por enciman dela capa leucocitaria. Con la ayuda de una cánula se toma cuidadosamente la capa leucocitaria pararealizar los extendidos, los cuales se tiñen con el colorante de Wright (ver tinción de frotis sanguíneos,págs. 19 - 21).

6. Se observa la placa en el microscopio con los objetivos de pequeño y de gran aumento (10x y 40xrespectivamente) para localizar áreas que sugieran la presencia de células LE. Estas áreas seexaminan luego con el objetivo de inmersión en aceite (100x).

BIBLIOGRAFIA

Fundamentos de interpretación clínica de los exámenes de laboratorio. Ruíz-Reyes G. Ed.Panamericana. 1ª. Edición. México. 2004

Química analítica. Skoog D.A., West D.M., Holler F.J., Crouch S.R. Mcgraw-Hill 7ª edición.Interamericana editores. México 2001.

Codex del laboratorio clínico. Fuentes X. Castiñeiras M. J. Ferré M. Elseiver. España. 2003.

Iovine, E. y A.A.Selva. El laboratorio en la clínica. 3ª ed., Panamericana, Buenos Aires, Argentina,1985.




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EOSINÓFILOS EN MOCO NASAL(TINCIÓN DE HANSEL)

INTRODUCCIÓN

La dificultad en el diagnóstico diferencial entre el asma bronquial y otros síndromes obstructivos, tantoen el adulto como en el niño, es un problema frecuente y conocido. Desde un punto de vista clínico, aveces es imposible hacer la diferenciación lo que obliga a recurrir a diversos exámenes de laboratorioque permitan comprobar o no la presencia de alergia, requisito indispensable para formular eldiagnóstico definitivo de asma bronquial. Uno de los elementos que es posible estudiar en elLaboratorio es la secreción nasal. Eyermann en 1927 hizo notar que la eosinofilia de la secreción nasalera un hecho frecuente en pacientes hipersensibles. Murray y Anderson demostraron que es posiblediferenciar las rinitis alérgicas de las vasomotoras e infecciosas mediante una tinción especial paraeosinófilos en secreción nasal: en las rinitis alérgicas se encuentra gran cantidad de eosinófilos, losque en cambio están ausentes o en escasa cantidad en los otros tipos de rinitis.En base a estos hechos y considerando que la base patogénica de las rinitis alérgicas y del asmabronquial es semejante, numerosos autores han propuesto usar el estudio de los eosinófilos en lasecreción nasal como un método más para probar el carácter alérgico de un cuadro bronquialobstructivo.

MATERIAL BIOLOGICO: Secreción nasal

EQUIPO: Portaobjetos Hisopos estériles Microscopio

REACTIVOS: Eosina 1/200 (0,30 grs. de eosina en 60 ml. de alcohol metílico). Azul de metileno 1/100 (0,60 grs. de azul de metileno en 60 ml. de alcohol metílico). Agua destilada. Etanol al 95%. Hipoclorito al 1% Aceite de inmersión

La eosina y el azul de metileno deben mantenerse en frascos ámbar y deben ser renovados cada 6meses.

PROCEDIMIENTO:1. Se realiza el extendido del moco nasal en un portaobjetos limpio.2. El extendido se deja secar al aire.3. Se cubre con eosina y se deja 1 minuto.4. Se agrega igual volumen de agua destilada y se deja 1 minuto.5. Se decanta y se cubre con agua destilada hasta remover el exceso de colorante.6. Se cubre con etanol y se decanta inmediatamente.7. Se cubre nuevamente con azul de metileno durante 1 minuto.8. Se agrega igual volumen de agua destilada y se deja 2 minutos.9. Se lava hasta remover el exceso de colorante.




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10. Se agrega etanol, se decanta inmediatamente y se deja secar al aire.11. Se examina al microscopio con lente de inmersión (100x).

OBSERVACIONES:Con esta tinción el moco nasal aparece de aspecto homogéneo y de color azul, las bacterias se tiñenazules y se puede distinguir 3 tipos de células:

1. Células epiteliales nasales, con citoplasma azul pálido abundante y núcleo azul no lobulado.2. Neutrófilos, que tienen núcleos azul lobulado y citoplasma azul pálido y,3. Eosinófilos, que tienen núcleo lobulado azul y citoplasma con gránulos intensamente eosinófilos(rojos) que permiten distinguirlos con facilidad.

RECOMENDACIONES:Si los neutrófilos no se han teñido bien se debe repetir el método desde el punto N° 7. Si los neutrófiloso el moco se han teñido de un azul demasiado intenso se coloca una solución que contenga una gotade hipoclorito al 1% en 30 cc de agua destilada sobre el extendido y se repiten los pasos desde elpunto No. 9 en adelante.

BIBLIOGRAFIA

Cerutl E. Asma bronquial. En Meneghello J. Pediatria. Pag. 63. Intermédica, Buenos Aires, 1972.

Dees S. Asthma. En Kendig E, Disorders of the Respiratory Tract in Children. W. B. Sauders Co. Pag.449.

Tujt L., Mueller II. Allergy in Children. W. B. Saunders, Philadelphia, 1970.Rhyne M. Pruebas cutáneas: conceptos y realidades. Clínicas Pediátricas de N. A., Febrero, 1969,pag. 227.Mansmann H. Tratamiento del niño con asma bronquial. Clínicas pediátricas de N. A. Mayo, 1968, pag.357.

Eyermann C. Nasal manifestations of allergy. Ann. Otolaryng Rhin and Laryng 32: 808, 1927. Citadopor Murray y Anderson, The J. of Allergy, 43: 1, 1969.

Murray A. and Anderson D. The epidemiological relationship of clinical nasal allergy to eosinophils andto goblet cells in the nasal smears. The J. of Allergy, 43; 1, 1969.

Leeks H. and Kravis L. Alergia y eosinófilos. Clínicas Pediátricas de N. A. Febrero, 1969, pag. 125.

Epstein R. Sputum Eosinophilia in Obstructive Lung Disease. Annals of Internal Medicine. 75: 317,1972.

Ferndndez H. Ceruti E., Cassar C. y Diaz. A. Estudio del niño asmático mediante inducción debroncoconstricción con inhalación de acetil colina y polvo de habitación. Presentado en las IDJornadas de Pediatría, Punta Arenas, 1971. En prensa Rev, Chilena de Pediatria.

Sheldom /., Loweell R., and Mathews E. A Manual of Clinical Allergy. Pag. 72. W. B. Saunders Co.,Philadelphia, 1967.

Crawford L. Ann Allergy, 18: 19, 1960.




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CITOLOGÍA DE MOCO NASAL

INTRODUCCIÓN

Como se ha mencionado, la rinitis es la inflamación de la mucosa nasal de cualquier etiología,expresada clínicamente por congestión, estornudos e hipersecreción serosa o mucosa –comosíntomas de respuesta fisiológica normal a la irritación-. Para considerarse patológicos deben apareceral menos de media hora a una hora al día la mayor parte de los días.

Se manejan diversas clasificaciones sin que ninguna se haya aceptado universalmente, por elsolapamiento frecuente entre unos grupos y otros. Esto se debe a la necesidad de agruparenfermedades de etiologías y patogenias diversas (frecuentemente desconocidas), con un espectro desíntomas limitado y reiterativo. Esta situación en la clasificación de las rinitis se traduce en la dificultadde abordaje en la práctica clínica habitual, debido a que es frecuente que coexistan, por ejemplo, unaalteración anatómica, con una enfermedad alérgica y problemas irritativos, facilitando, todo ello, lasobreinfección.

Se clasifican en agudas o crónicas si la duración es menor o mayor a 14 días. Según su etiología, seclasifican en infecciosas y no infecciosas. En función de su patogenia se dividen en tres grupos:inflamatorias, no inflamatorias y estructurales

MATERIAL BIOLOGICO:

Secreción nasal

EQUIPO

Portaobjetos

Hisopos estériles

Microscopio

REACTIVOS: Colorante de Wright Agua destilada o Buffer de colorante de Wright Metanol Aceite de inmersión

PROCEDIMIENTO:

1. Se realizan dos extendidos del moco nasal en portaobjetos limpios (uno por cada fosa nasal).2. El extendido se deja secar al aire.3. Los extendidos se tiñen con el colorante de Wright (ver tinción de frotis sanguíneos, págs. 19

– 21)4. Se observa al microscopio a 100x y se realiza conteo diferencial de

POLIMORFONUCLEARES, MONONUCLEARES y EOSINÓFILOS para obtener el porcentajeen 100 leucocitos.




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RESULTADOS:

Se reporta el conteo en:POLIMORFONUCLEARES____________ en %MONONUCLEARES _________________ en %EOSINOFILOS______________________ en %

NOTA: Reportar otras estructuras de importancia encontradas como son levaduras, hifas entre otros.

BIBLIOGRAFÍA

Mygind N. Nasal Allergy. Ed by Blactwel Scientific Publications, 2 Ed. Oxford, 1982.

Mygind N and Weeke B. Allergic and nonallergic rhinitis. In: Allergy PrincipIes and Practice. Ed by E.Middleton, Ch. E. Reed. and E. F. EIlis. 2 Ed. The Mosby Co. St. Louis, 1983: 1101- II 17.




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TIPIFICACIÓN SANGUÍNEA

INTRODUCCIÓN

Un grupo sanguíneo es una forma de agrupar ciertas características de la sangre que dependen delos antígenos presentes en la superficie de los glóbulos rojos y en el suero de la sangre. Las dosclasificaciones más importantes para describir grupos sanguíneos en humanos son los antígenos ABy el factor Rh. Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reaccióninmunológica que puede desembocar en hemólisis, anemia, fallo renal, shock, o muerte.

Las personas con sangre del tipo A tienen glóbulos rojos que expresan antígenos de tipo A en susuperficie y anticuerpos contra los antígenos B en el suero de su sangre. Las personas con sangre deltipo B tienen la combinación contraria, glóbulos rojos con antígenos de tipo B en su superficie yanticuerpos contra los antígenos A en el suero de su sangre. Los individuos con sangre del tipo O ó 0(cero) no expresan ninguno de los dos antígenos (A o B) en la superficie de sus glóbulos rojos peropueden fabricar anticuerpos contra ambos tipos, mientras que las personas con tipo AB expresanambos antígenos en su superficie y no fabrican ninguno de los dos anticuerpos.

A causa de estas combinaciones, el tipo 0 puede ser transfundido sin ningún problema a cualquierpersona con cualquier tipo AB0 y el tipo AB puede recibir de cualquier tipo AB0. La denominación «O»y «cero» es confusa, y ambas están muy extendidas. El austriaco Karl Landsteiner designó los grupossanguíneos a principios del siglo XX.

Algunas fuentes indican que O podría deberse a la preposición Ohne, que es "sin" en alemán (Sinantígeno). Sin embargo allí se dice Null Blutgruppe, y casi nunca la alternativa O Blutgruppe. Enalemán «O» se dice /o/ y 0 (cero) se dice Null. En inglés «O» se lee /ou/ y a veces el cero se lee /ou/(por ejemplo en un nº de teléfono). Sistema ABO y O blood-group es de uso mayoritario en inglés.Otros idiomas de Europa mantienen la designación «null», en sus variantes zero,cero,nula, etc. EnLatinoamérica es más común «O positivo», evitando la similitud «cero positivo» con el término«seropositivo» -se llama seropositivo al individuo que presenta en sangre anticuerpos que, cuando sele somete a la prueba diagnóstica apropiada, prueban la presencia de un determinado agenteinfeccioso- que mucha gente relaciona con el retrovirus VIH, causante del SIDA (síndrome deinmunodeficiencia adquirida).

MATERIAL BIOLOGICO:

Sangre con EDTA

MATERIAL

Papeleta interna del laboratorio

Portaobjetos

Aplicadores




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REACTIVOS:

Antisuero Anti-A

Antisuero Anti-B

Antisuero Anti-D

PROCEDIMIENTO:

1.- Se toma una papeleta interna del laboratorio para tipificación de grupo-Rh y rotularlo con los datos

del paciente.

2.- Se coloca una gota de sangre en cada uno de los espacios destinados para la reacción de

aglutinación en la papeleta.

2.- Se adiciona una gota de Anti-A, Anti-B, Anti-D respectivamente.

3.- Se mezclan las gotas con un aplicador y se observa la presencia de aglutinación en cada área.

RESULTADOS:Si se observa aglutinación con el Anti-A el paciente es tipo sanguíneo “A”

Si se observa aglutinación con el Anti-B el paciente es tipo sanguíneo “B”

Si se observa aglutinación con el Anti-A y Anti-B el paciente es tipo sanguíneo “AB”

Si NO se observa aglutinación con el Anti-A ni con el Anti-B el paciente es tipo sanguíneo “O”

Si se observa aglutinación con el Anti-D el paciente es factor Rh “POSITIVO”

Si NO se observa aglutinación con el Anti-D el paciente es factor Rh “NEGATIVO” y se procede a

realizar la variante Du.




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MÉTODO DE PRUEBA Du

INTRODUCCIÓN

Du es una variante del antígeno Rho (D). Se encuentra en el locus de caucásicos: Existen dos tipos deDu a) Producido por supresión del gen C en transposición: CDe/Cde, no hereditaria b) Formacongénita Du: CDue/cde. Anticuerpos Rh. El antígeno al ser tipiado con Anti-D, tipean como Rhnegativo o dan reacción débil y tardada. Por lo tanto de rutina, a todo paciente Rho (D) negativo sedebe determinar la variante Du. Si la prueba por variante Du es negativa, el paciente es tipiado comoRho (D) negativa y variante (Du) negativo Si es positiva, el paciente es Rho (D) negativo y variante(Du) positivo. Este último es considerado Rho (D) positivo y por lo tanto si se utiliza como donador nodebe administrarse a recipientes Rho (D) negativo (Du) negativo puesto que dicho recipiente puedeproducir Anti-D. Como recipientes son considerados como Rho (D) negativo. El cuidado especial quedebe hacerse al tipearse por Du es asegurarse que el paciente tiene Test de Coombs. Directo negativoy que no se trate de un paciente que recientemente ha recibido sangre de diferente tipo Rh. Tambiénlas madres Rho (D) negativo y variante (Du) negativo con hijos Rho (D) negativo y variante (Du)positivo pueden causar Enfermedad Hemolítica del Recién Nacido por Rh. Es decir madre Rho (D)negativa y (Du) negativo puede producir anti-D y si el niño es Rh' positivo, puede causar EnfermedadHemolítica del R.N. En cambio madre Rho (D) negativo y variante Du positivo no produce Anti-D, pueses para fines prácticos Rho (D) positivo. Además de los anticuerpos mencionados, existen otrosanticuerpos Rh capaces de producir reacciones transfusionales, Ej. Anti-Cw, AntiG (CE), Anti V, etc.

MATERIAL BIOLOGICO:

Sangre con EDTA del usuario

Sangre con EDTA Rh positivo (control)

EQUIPO

Tubos de ensayo

Pipetas de transferencia

Gradilla

Baño María a 37°C

REACTIVOS:

Anti-Rh0 (Anti-D)

Solución salina

Suero antiglobulina humana (Suero de Coombs).




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PROCEDIMIENTO:

1. Preparar una suspensión de glóbulos rojos al 2% con solución salina 0.9% (20 μL + 980 μL).2. Colocar dos gotas de la suspensión celular en un tubo de ensayo.3. Agregue una gota de Suero ORTHO Anti-Rh0 (Anti-D).4. Incubar a 37°C por 15 minutos.5. Sacar el tubo del baño maría y lavar las células tres veces con solución salina (en cada lavado se

centrifuga por 3 minutos a 1500 rev/min). Decantar completamente después del último lavado.6. Añadir dos gotas de Suero antihumano ORTHO* al tubo. Mezclar y centrifugar por un minuto a

1000 rpm.7. Resuspender el botón celular mediante ligera agitación del tubo y observar presencia de

aglutinación.8. Interpretación de los resultados:

a) Ausencia de aglutinación: Rh negativo, es decir, Rh0 (D) negativo.b) Presencia de aglutinación: esto indicará que la célula tiene una débil o modificada forma del

facto Rh0 (D) y deberá identificarse como “Du”.

NOTA: Todos estos especímenes de sangre Du positivos deberán verificarse con la Prueba deCoombs Directa sobre la célula para eliminar cualquier posibilidad de que la célula no estéespecíficamente cubierta. En el caso de una prueba de Coombs positiva directa, que siga delprocedimiento Du, deberá tomarse en cuenta, que el espécimen de sangre deberá ser consideradocomo Rh negativo.

BIBLIOGRAFIA

1) Huestis, WD, Bobe Jr. Bush, S. "Practieal Blood Transfusión", 2nd Edition, Little Browin andCo.1976.

2) Owen A. C. Bowe, W.G.N., thompson N.J., "The Diagnosis of Bleeding Desorden" 2nd Edition, LittleBrowerandCo. 1978.

3) Race R.R. Sanger R. "Blood Groups in man", 2nd Edition, Blachwell suetigic Publications, 1975.




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FRAGILIDAD OSMÓTICA DE LOS ERITROCITOS

INTRODUCCIÓN

El objetivo de esta prueba es valorar la fragilidad osmótica eritrocitaria que se altera en variosprocedimientos hemolíticos. Existen padecimientos que se manifiestan por un aumento en laresistencia a la fragilidad osmótica y otros en los cuales disminuye. Esto es una expresión de laalteración de la membrana. Cuando se incuban eritrocitos en un medio hipotónico se favorece un fenómeno de ósmosis haciael eritrocito. Este fenómeno va a depender de la capacidad de regulación de la membrana eritrocítica.La disminución de esta función llevaría a un estado de hemólisis.

CONSIDERACIONES: Todo material que se use debe ser estéril. Puede usarse como testigocualquier tipo de sangre normal. No deberán ser testigos personas con anemia hipocrómica, ya que enestos se encuentra disminuida la fragilidad osmótica.

MATERIAL BIOLOGICO.

2 tubos con EDTA de sangre del paciente. 2 tubos con EDTA de sangre del testigo.

MATERIAL.

Tubos de ensaye de 13 x 100 estériles. Pipetas.

REACTIVOS.

SOLUCIÓN STOCK

NaCl.......................................... 180gFosfato de Sodio-dibásico......... 27.35gFosfato de Sodio monobásico....4.86gAgua Destilada................c.b.p...2,000 ml

Esta solución se conserva por varios meses en un frasco bien cerrado.

SOLUCIÓN DE TRABAJO

Se hace a partir de la solución Stock, diluyendo 1:10 con agua destilada. El PH de esta solucióndeberá ser de 7.4. Conviene prepararla semanalmente.




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TECNICA.

1. Incubar uno de los tubos del paciente y testigo por 24 horas a 37 °C.2. Con la sangre restante hacer la prueba de fragilidad osmótica de 30 minutos usando tubos de

13 x 100 estériles de la siguiente manera:

PACIENTE

TUBO CONCENTRACIÓN BUFFER H20 SANGRE1 0.90 4.50mL 0.50mL 0.05mL2 0.85 4.25mL 0.75mL 0.05mL3 0.80 4.00mL 1.00mL 0.05mL4 0.75 3.75mL 1.25mL 0.05mL5 0.70 3.50mL 1.50mL 0.05mL6 0.65 3.25mL 1.75mL 0.05mL7 0.60 3.00mL 2.00mL 0.05mL8 0.55 2.75mL 2.25mL 0.05mL9 0.50 2.50mL 2.50mL 0.05mL10 0.45 2.25mL 2.75mL 0.05mL11 0.40 2.00mL 3.00mL 0.05mL12 0.35 1.75mL 3.25mL 0.05mL13 0.30 1.50mL 3.50mL 0.05mL14 0.20 1.00mL 4.00mL 0.05mL15 0.10 0.50mL 4.50mL 0.05mL16 0.00 0.00mL 5.00mL 0.05mL

Hacer lo mismo con un testigo normal.

3. Mezclar bien las soluciones antes de agregar la sangre y al agregar esta, mezclar por inversiónusando papel parafilm.

4. Incubar 30 minutos a temperatura ambiente.5. Centrifugar 5 minutos a 3,000 r.p.m.6. Leer la absorbancia del sobrenadante a 546 nm frente a blanco de agua. Hacer diluciones de

1:2 o más en el caso de no poder leer directamente.7. Para la fragilidad osmótica de 24 horas se procede de igual manera.8. Correr un testigo normal simultáneamente al problema.9. Graficar en papel milimétrico: Abscisas Concentración de Cloruro de Sodio y Ordenadas % de

hemólisis.

CÁLCULOS (nota: tomar en cuenta las diluciones realizadas).

% de Hemólisis = D.O de cada tubo (del 1 al 15)/ D.O del tubo 16 X 100




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VALORES DE REFERENCIA.

En condiciones normales es de esperarse que el 50 % de hemólisis se produzca con unaconcentración de Cloruro de Sodio de 0.445 a 0.40 % a los 30´ y a una concentración de 0.465 a 0.59% a las 24 horas, si se obtiene el 50 % de hemólisis o más a concentraciones elevadas se consideraque hay fragilidad aumentada. Situación contraria puede suscitarse en talasemias y hepatopatías.

INTERPRETACIÓN.

El aumento de la fragilidad osmótica se observa en la esferocitosis hereditaria haciéndose másevidente el fenómeno después de la incubación. También se observa aumento en la fragilidadosmótica en la enfermedad hemolítica autoinmune. El aumento de la resistencia osmótica escaracterístico de las talasemias, en el déficit de hierro y en cualquier situación en la que se encuentraun aumento en la superficie de los eritrocitos como sucede en las enfermedades hepáticas.

BIBLIOGRAFIA.

Beutler, E.: Osmotic fragility. En “Hematology” por Williams Beutler – Erslev Rundles. Mc Graw-HillCompany, 2° Edi. P. 1609-1610. 1977.




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ANEXO A




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ANEXO B

PREPARACIÓN DEL COLORANTE DE WRIGHT

1. Se pesan 2.2 gramos de colorante de Wright en la balanza analítica.

2. El colorante en polvo pesado se transfiere a un matraz y se afora con metanol hasta unvolumen final de 1 litro.

3. Agitar hasta su completa homogenización.

4. Posteriormente se guarda en un frasco rotulado con el nombre del colorante y fecha deelaboración.

5. El colorante deberá ser filtrado previo al uso.




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ANEXO C

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente.2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x ó 10x.4. Para realizar el enfoque:

a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillomacrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya quese corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno deellos o ambos.

b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de lapreparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar elmicrométrico hasta obtener un enfoque fino.

Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente conmover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió porcompleto la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desdeel paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil queocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precaucionesanteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con elobjetivo de inmersión.

Empleo del objetivo de inmersión: . Bajar totalmente la platina.

a. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica lazona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.

b. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y elde x40.

c. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.d. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.e. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la

gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a lalente.

f. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo deinmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgode accidente es muy grande.

g. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puedevolver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, sidesea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso3.

h. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca elobjetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar lapreparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posiciónde observación.




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i. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel suave. Comprobartambién que el objetivo 40x está perfectamente limpio.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición deobservación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de lamisma y dejarlo cubierto con su funda.

2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda paraevitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debeguardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.

3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente conun papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.

4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo

con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquiercaso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado asecarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) oxilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes enexceso se pueden dañar las lentes y su sujeción.

6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina,revólver y condensador).

7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a lapreparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivoagarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.

8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido,secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en alcohol-acetona.

9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión.




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4.- DOCUMENTOS DE REFERENCIA

Código(cuando aplique) Nombre del documento Lugar de almacenamiento

N/A NOM-007-SSA3-2011 Para la organización yfuncionamiento de los laboratorios clínicos

LACSC

N/A

NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002 Protecciónambiental - Salud ambiental - Residuos peligrososbiológico infecciosos - Clasificación y especificacionesde manejo.

LACSC

MGC-CIPLADE-CC-01 Manual de Gestión de la Calidad Página Web del SGCP-FQUI-LAC-04 Procedimiento para el análisis de muestra LACSCN/A Guía rápida. Analizador SYSMEX serie XS LACSCN/A Manual del analizador HEMATOLOGÍA XS-1000i LACSC

Identificación(código)

Nombre delregistro

Lugar dealmacenamiento

Responsable de suprotección

Tiempode

retención

Disposiciónde los

registros

F-FQUI-LAC-20 Hematología Área de trabajo Responsable de área 1 año Archivomuerto

F-FQUI-LAC-72 Parámetroshematológicos Área de trabajo Responsable de área 1 año Archivo

muerto

F-QUI-LAC-88 Fragilidad osmóticaeritrocitaria Área de trabajo Responsable de área 1 año Archivo

muerto

F-FQUI-LAC-21 Citología Área de trabajo Responsable de área 1 año Archivomuerto

F-FQUI-LAC-48 Hoja estadística deestudios Área de trabajo Responsable de área 1 año Archivo

muerto

F-FQUI-LAC-54

Bitácora demantenimiento y

uso diario delSysmex XS-1000i

Área de trabajo Responsable de área 1 año Archivomuerto

F-FQUI-LAC-18Pruebas dehemostasia

primariaÁrea de trabajo Responsable de área 1 año Archivo

muerto

F-FQUI-LAC-19

Formato para elregistro diario de latemperatura de la

estufa


F-FQUI-LAC-24

Formato para elregistro diario de latemperatura de la

refrigerador


F-FQUI-LAC-40Formato para el

registro diario de latemperatura de la


5.- CONTROL DE REGISTROS




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congelador´

6.- GLOSARIO6.1 .- SIGLASUADY: Universidad Autónoma de YucatánLACSC: Laboratorio de Análisis Clínicos de Servicio a la Comunidad

6.2 .- DEFINICIONESMuestra biológica. Parte anatómica o fracción órganos o tejido, excreciones o secreciones obtenidas de un serhumano o animal vivo o muerto para su análisis.Usuario. Cualquier persona que acuda al laboratorio para solicitar algún análisis clínicoFormato de Trabajo. Término que engloba a todos los formatos utilizados para reportar los resultados de susanálisis.

7.- CONTROL DE REVISIONES

NIVEL DEREVISIÓN

SECCIÓNY/O PÁGINA DESCRIPCIÓN DE LA MODIFICACIÓN Y MEJORA FECHA DE

MODIFICACIÓN

01 20Descripción de la tinción de frotis con el colorante deWright 18 de Febrero 2009

02 2 y 3Modificaciones en el diagrama y actividades

28 de Mayo 2009

03 1, 24 y 38Modificación del orden de las políticas, cambio en lostiempos de centrifugación en el análisis de células LEy creación del Anexo C

14 de Octubre de2009

044

9, 19 y 278, 15, 24,

26, 29-31 y34

Adición de la lista de trabajo.Modificación de la técnica.Ortografía. 23 de Abril de 2010

052

3 – 8

221 – 40

Cambio de responsable de área.Se eliminó Directorio y Prefacio.Cambio en el diagrama de procesamiento.Redacción de actividades y manejo del Sysmexadecuado al nuevo Software del laboratorio(Syslabs).Cambio de figura 5.Ortografía y redacción.

14 de Marzo de2011

06 1 Cambio de responsable de área. 5 de Septiembre de2011

0729 Se agregó técnica para la prueba de Fragilidad

osmótica de los eritrocitos.Cambio al nuevo formato para instructivos.

2 de Noviembre de2012

08 38 Cambio de responsable sanitario 9 de Julio de 2013




Revisión: 10

Página: 38 de 38


Nota: La sección 7 será utilizada a partir de la primera modificación a este documento. La revisión 00, semantendrá en blanco.

NIVEL DEREVISIÓN

SECCIÓNY/O PÁGINA DESCRIPCIÓN DE LA MODIFICACIÓN Y MEJORA FECHA DE

MODIFICACIÓN

091

3

23 – 2438

Modificación de la descripción de la operación en elapartado referente a los resultados del proceso.Se agregó la descripción detallada del encendido delequipo Sysmex XS-1000iOrtografía y redacciónCambio de Director

15 de Agosto de2013

10

1

36

38

Se agregan actividades a la “Descripción de laoperación”.Se adicionaron la Guía rápida del analizadorSYSMEX serie XS y Manual del analizadorHEMATOLOGÍA XS-1000i a los documentos dereferenciaCambio de Responsable Sanitario.

12 de Noviembrede 2013

Elaboró

QFB. Isis Noemí Àvila Calderón. EBCResponsable área de Hematología

Revisó

M. en C. Gabriel Ángel Montero LaraResponsable sanitario

Aprobó

Dra. Zulema Osiris Cantillo CiauDirectora de la Facultad de Química

Las firmas avalan la responsabilidad de las personas que: elaboran el documento, revisan su adecuacióny aprueban para su implementación dentro del Sistema de Gestión de la Calidad de la UniversidadAutónoma de Yucatán.

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