SALES DE PLOMO

Medios de Contraste para Microscopía Electrónica.

Universidad de Chile

Escuela de Tecnología

médica

Microscopía Electrónica

2014

Integrantes:Rosario Lincopán

Francisco Martell M.

Plomo.

Corresponde a un metal pesado.

Símbolo

Pb

Número atómico

82

Peso atómico

207,2 g/mol

Densidad

11,7 g/mol

Estructura Cristalina.

Punto de fusión

327°C

Punto de ebullición

1749°C

Tipos de Contraste en MET.

Las sales de Plomo se utilizan para la realización de contraste positivo en cortes.

El plomo contrasta: Glicógeno (independiente de la fijación con

glutaraldehído u osmio). Ribosomas (RNA y proteínas). Nucléolos (RNA y proteínas). Membranas (en muestras post-fijadas con OsO₄).El plomo intensifica el contraste de las sales de

Uranilo.

Sales de Plomo utilizadas.

Característica

Acetato de Plomo (II)

Citrato de Plomo Nitrato de Plomo (II)

Molécula

PM 325.29 g/mol 1053,82g/mol 331.21 g/mol

Punto de fusión

75°C - 290°C

Solubilidad en:

Agua y glicerina

Poco soluble en agua

Agua alcalina (con NaOH)

Apariencia Cristales blancos

Polvo cristalino blanco

Cristales blancos

El plomo en la MET.

1958 Watson utiliza por primera vez el contraste con plomo en cortes ultrafinos de tejidos biológicos.

Este contraste se utiliza por contacto en forma de hidróxido de plomo a pH alto.

El problema era que el plomo en contacto con el CO2 del aire precipita, generándose carbonato de plomo.

El plomo en la MET.

En 1963 Reynolds implementa el uso del citrato de plomo a un pH alto (12).

Citrato de Plomo – Reynolds, 1963.Nitrato de Plomo 1,33gCitrato de Sodio 1,76gAgua bidestilada 30 mlNaOH 1N 8 ml

pH = 12,0

Protocolo de Reynolds (1963).

El plomo en la MET.

En 1965 Venable y Coggeshall modifican la técnica de Reynolds, reduciendo la cantidad de plomo y tiempo utilizado.

Citrato de Plomo – Venable & Coggeshall, 1965 Agua bidestilada 10 ml Citrato de Plomo 0,04g NaOH 10N 0,1 ml

NaOH recién preparado y libre de CO2

Interacciones Químicas.

La interacción entre el plomo, y las células y/o tejidos, ha sido ampliamente estudiado llegando a la conclusión que este se relaciona mediante uniones electroestáticas y puentes de hidrógeno.

En solución las sales de plomo se disocian formando: Iones (cationes) bivalentes. Hidróxidos de plomo complejos con carga positiva

(Reynolds). Hidróxidos de plomo complejos con carga negativa

(Karnowsky).

Interacciones Químicas.

A partir de sales de plomo bivalentes, se producen en solución acuosa sales “básicas” de forma Pb(OH)2PbX2.

La sal catiónica resultante de esta disociación presenta mayor afinidad por las estructuras tisulares y/o celulares, que por el quelante (citrato). Estas estructuras corresponden a grupos químicos como cisteínas (SH) o grupos pirofosfatos u ortofosfatos (PO4).

Interacciones Químicas.

El NaOH utilizado en las técnicas mencionadas previamente posee 2 funciones importantes: Aumentar el pH de la solución contrastante,

permitiendo la disolución de las sales de plomo. Capturar las moléculas de CO2 ambientales que

podrían interferir con el proceso de tinción y el almacenaje de las sales de plomo.

Se postula que la unión entre glucosa y plomo no es de carácter iónica, sino por la formación de complejos gluco-plúmbicos unidos a través de puentes de hidrógeno.

Contraste con Sales de Plomo.

Contraste con Sales de Plomo.

Toxicidad del Plomo.

El plomo es una sustancia tóxica que se va acumulando afectando a diversos sistemas del organismo.

El plomo se distribuye por el organismo hasta alcanzar el cerebro, el hígado, los riñones y los huesos y se deposita en dientes y huesos, donde se va acumulando con el paso del tiempo.

No existe un nivel de exposición al plomo que pueda considerarse seguro.

La intoxicación (saturnismo) por plomo es totalmente prevenible.

Daños al organismo.

Irritación local.

Abrasión.

Irritación, rojez y dolor local.

Absorción envenenamiento

Daños al organismo.

VENENO Dolor, espasmos

abdominales, náuseas, vómitos.

“Línea del plomo” en las encías

Irritación de los bronquios, alvéolos.

Absorción al punto de pasar a la sangre.

Dolor en el pecho.

Precauciones en la preparación de soluciones contrastantes.

Utilizar antiparras, guantes y mascarillas con filtro.

Usar campana de extracción de gases.Preparar las soluciones en recipientes de

plástico en lugar de vidrio.Evitar respirar cerca de la solución y el

contacto con el CO2 ambiental (formación de PbCO3).

Eliminación de soluciones.

Eliminar junto a otras soluciones contrastantes en botellas de vidrio, enviar a bioseguridad con rotulo especifico, para su neutralización.

El rotulo debe precisar el reactivo, la concentración de la solución, el laboratorio que envía la solución.

Artefactos de Técnica.

Artefactos de Técnica.

Artefactos de Técnica.

¿Cómo evitarlos? Precauciones en la preparación, almacenamiento,

concentración y pH de la solución.

¿Cómo removerlos? Solución acuosa de acetato de uranilo 2% por 2-8

minutos a temperatura ambiente. Solución acuosa de ácido acético 10% por 1-5 min

Artefactos de Técnica.

Referencias.

Arvid B. Maunsbach, Björn A. Afzelius. Biomedical Electron Microscopy: Illustrated Methods and Interpretations. Chapter 9, pag 207 to 227 (1999)

Reynolds, Edward S., The use of lead citrate at high pH as an electron-opaque stain in electron microscopy. Department of Anatomy, Harvard Medical School, Boston. (1962)

Bozzola, John J. Russell, Lonnie D. Electron Microscopy: Principles and Techniques for Biologists. Jones & Bartlett Publishers. Inc, Canada. Chapter 19 Pag 470 (1999)

Hayat, MA. Principles and Techniques of Electron Microscopy, Biological Applications. Fourth edition. Cambridge University Press ,Pag 356 (2000)

Safety Datasheets.

Contraste glicógeno.

Al MET se observa: Forma alfa: rosetas o agrupaciones de partículas

beta (60 a 250 nm de diámetro)

Forma beta: partículas libres o formadoras de rosetas (20 a 40 nm de diámetro)

Contraste glicógeno.

Contraste glicógeno.